Thiết kế và tổng hợp các acid hydroxamic mang khung quinazolin hướng tác dụng kháng tế bào ung thư.Thiết kế và tổng hợp các acid hydroxamic mang khung quinazolin hướng tác dụng kháng tế bào ung thư.Thiết kế và tổng hợp các acid hydroxamic mang khung quinazolin hướng tác dụng kháng tế bào ung thư.Thiết kế và tổng hợp các acid hydroxamic mang khung quinazolin hướng tác dụng kháng tế bào ung thư.Thiết kế và tổng hợp các acid hydroxamic mang khung quinazolin hướng tác dụng kháng tế bào ung thư.Thiết kế và tổng hợp các acid hydroxamic mang khung quinazolin hướng tác dụng kháng tế bào ung thư.Phụ lục II BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐOÀN THANH HIẾU THIẾT KẾ VÀ TỔNG HỢP CÁC ACID HYDROXAMIC MANG KHUNG QUINAZOLIN HƯỚNG TÁC DỤNG KHÁNG TẾ BÀO UNG THƯ Chuyên ngành Hóa.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐOÀN THANH HIẾU THIẾT KẾ VÀ TỔNG HỢP CÁC ACID HYDROXAMIC MANG KHUNG QUINAZOLIN HƯỚNG TÁC DỤNG KHÁNG TẾ BÀO UNG THƯ Chuyên ngành: Hóa dược Mã số: 62720403 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC Hà Nội, năm 2023 Cơng trình hồn thành tại: Trường Đại học Dược Hà Nội Người hướng dẫn KH: PGS TS Phạm Thế Hải GS TS Sang-Bae Han Phản biện 1: …………………………………………………… …………………………………………………… Phản biện 2: …………………………………………………… …………………………………………………… Phản biện 3: …………………………………………………… …………………………………………………… Luận án bảo vệ trước Hội đồng đánh giá luận án cấp Trường họp tại: ……………………………………………………………… ……………………………………………………………………… Vào hồi ………… ……… Ngày …… tháng …… năm 20 Có thể tìm hiểu luận án tại: Thư viện Quốc gia Việt Nam Thư viện trường ĐH Dược HN I MỞ ĐẦU Tính cấp thiết luận án Thiết kế cấu trúc dựa mục tiêu phân tử trở thành hướng chủ yếu nghiên cứu thuốc điều trị ung thư Enzym histon deacetylase (HDAC) mục tiêu phân tử quan trọng, nhiều hợp chất phát nghiên cứu hoạt tính ức chế HDAC, bật nhóm dẫn chất acid hydroxamic với bốn thuốc cấp phép điều trị Dẫn chất hydroxamic có khung cấu trúc chung gồm ba phần: (1) nhóm gắn kẽm acid hydroxamic, (2) cầu nối mạch hydrocarbon thân dầu, (3) nhóm nhận diện bề mặt cấu trúc vịng thơm giàu electron Khung quinazolin giàu điện tử phù hợp với vai trị nhóm nhận diện bề mặt Cấu trúc có mặt nhiều hợp chất mang hoạt tính đa dạng ứng dụng thiết kế kháng sinh mới, thuốc chống viêm, giảm đau, thuốc tác động lên hệ thần kinh tế bào ung thư theo chế khác Tuy nhiên, tác dụng ức chế HDAC chưa có nhiều nghiên cứu khảo sát Luận án “Thiết kế tổng hợp acid hydroxamic mang khung quinazolin hướng tác dụng kháng tế bào ung thư” thực nhằm tìm kiếm chất ức chế HDAC có hoạt tính kháng tế bào ung thư Mục tiêu luận án (1) Thiết kế tổng hợp khoảng 50 acid hydroxamic mang khung quinazolin hướng ức chế enzym HDAC tác dụng kháng tế bào ung thư (2) Đánh giá tác dụng ức chế enzym HDAC tác dụng kháng tế bào ung thư chất tổng hợp Những đóng góp luận án Về thiết kế cấu trúc, tổng hợp hóa học khẳng định cấu trúc: Đã thiết kế tổng hợp 55 dẫn chất acid hydroxamic mang khung quinazolin hướng ức chế HDAC kháng tế bào ung thư, dẫn chất chưa cơng bố tài liệu trước Về đánh giá tác dụng sinh học: Tất dẫn chất đánh giá tác dụng ức chế HDAC theo phương pháp huỳnh quang; tác dụng kháng tế bào ung thư ba dòng tế bào SW620, PC3 NCI-H23 theo phương pháp SRB Kết quả, 55 chất có khả ức chế HDAC, số chất có tác dụng tương đương mạnh SAHA, 54/55 chất có hoạt tính ức chế tế bào đáng kể, 50/55 chất gây độc ba dòng tế bào mạnh SAHA, hai chất IVb IVc có độc tính tế bào mạnh (gấp 30 lần SAHA) Phân tích liên quan cấu trúc – tác dụng sử dụng kết docking phân tử chất với HDAC khẳng định cấu trúc tốt cho hoạt tính: khung quinazolin quinazolin-4(3H)on, mang nhóm kích thước nhỏ vị trí 2, và/hoặc cho phần nhận diện bề mặt; cấu trúc benzamid, cinnamamid heptanamid cho phần cầu nối Kết dự đốn số thơng số dược động học – độc tính vài chất có hoạt tính bật cho thấy VIIIc chất có tiềm cho nghiên cứu để phát triển thành thuốc Về phương pháp nghiên cứu: Việc sử dụng linh hoạt kỹ thuật docking phân tử giai đoạn thiết kế cấu trúc bàn luận liên quan cấu trúc – tác dụng thực luận án công cụ hữu hiệu gắn kết sở lý thuyết với kết thực nghiệm, giúp luận án đạt mục tiêu đề tìm kiếm cấu trúc tiềm Bố cục luận án Luận án có 149 trang, bố cục gồm phần: Đặt vấn đề (1 trang); Tổng quan (41 trang); Nguyên liệu, trang thiết bị, nội dung phương pháp nghiên cứu (12 trang); Kết nghiên cứu (50 trang); Bàn luận (43 trang); Kết luận kiến nghị (2 trang); Danh mục cơng trình cơng bố liên quan đến luận án (1 trang) Luận án có 179 tài liệu tham khảo (15 trang), 292 phụ lục (177 trang) II NỘI DUNG LUẬN ÁN Chương TỔNG QUAN Chương Tổng quan trình bày về: - Histon deacetylase (HDAC) chất ức chế histon deacetylase (HDACi): HDAC vai trò ung thư; Cấu trúc chung HDACi, chất ức chế chọn lọc HDAC nhóm I HDAC6 - Quinazolin dẫn chất: Cấu trúc, hoạt tính sinh học, phương pháp tổng hợp quinazolin dẫn chất - Protein docking ứng dụng thiết kế thuốc Chương 2: NGUYÊN LIỆU, TRANG THIẾT BỊ, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu, trang thiết bị Cấu trúc chất dự kiến, cấu trúc tinh thể tia X HDAC2, HDAC6 Các ngun liệu, hóa chất, dung mơi có xuất xứ từ Đức, Trung Quốc Các dụng cụ thí nghiệm thơng thường dùng tổng hợp hữu Máy tính, phần mềm, ứng dụng tin sinh học Các máy đo nhiệt độ nóng chảy, phổ hồng ngoại, phổ khối, phổ cộng hưởng từ hạt nhân, máy đo độ hấp thụ huỳnh quang, tủ nuôi cấy, máy điện di Dịch chiết HDAC (HeLa), dòng tế bào ung thư người 2.2 Nội dung phương pháp nghiên cứu - Thiết kế cấu trúc: Thiết kế cấu trúc acid hydroxamic mang khung quinazolin hướng ức chế HDAC kháng tế bào ung thư dựa vào cấu trúc chất dẫn đường, sử dụng quinazolin làm hợp phần cho phần nhận diện bề mặt Dự đoán tương tác chất dự kiến với mơ hình cấu trúc trung tâm hoạt động enzym HDAC2 phương pháp docking protein - Tổng hợp xác định cấu trúc: Tổng hợp acid hydroxamic mang khung quinazolin có cấu trúc thiết kế dự đoán có tương tác tốt với HDAC2, sử dụng phản ứng tổng hợp hữu Tinh chế Khẳng định cấu trúc dẫn chất tổng hợp dựa phân tích liệu phổ hồng ngoại (IR), phổ khối lượng (MS) phổ cộng hưởng từ hạt nhân (1H-NMR, 13C-NMR) - Đánh giá hoạt tính sinh học: Đánh giá tác dụng ức chế HDAC tổng chiết từ tế bào HeLa chất tổng hợp phương pháp định lượng huỳnh quang, tác dụng kháng ung thư số dòng tế bào ung thư người phương pháp SRB Phân tích liên quan cấu trúc – tác dụng dẫn chất, sử dụng kết docking phân tử Dự đốn đặc tính dược động học – độc tính số chất có tác dụng sinh học bật số công cụ tin sinh học Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Kết thiết kế cấu trúc, dự đoán tương tác, tổng hợp hóa học khẳng định cấu trúc Khung cấu trúc dự kiến chất kết thiết kế cấu trúc dãy chất theo nhóm (gồm bước) thể Hình 3.1 Hình 3.1 Kết thiết kế cấu trúc dẫn chất Bảng 3.1 Năng lượng liên kết dự đoán chất với HDAC2 Dãy chất Ia-h IIa-d IIIa-d IVa-i Năng lượng liên kết (kcal/mol) -27,25 ÷ -20,19 -25,19 ÷ -18,99 -19,59 ÷ -18,90 -24,45 ÷ -16,87 Dãy chất Va-i VIa-c VIIa-i VIIIa-i SAHA Năng lượng liên kết (kcal/mol) -24,29 ÷ -17,31 -20,52 ÷ -17,43 -20,37 ÷ -18,08 -23,85 ÷ -18,13 -19,58 Kết dự đoán khả tương tác với HDAC2 cho thấy hầu hết cấu trúc dự kiến có tương tác tốt với enzym (năng lượng liên kết thấp tương đương SAHA, Bảng 3.1) Đây sở để luận án tổng hợp dẫn chất theo cấu trúc thiết kế, tinh chế thử tác dụng sinh học dẫn chất mơ hình in vitro Kết tổng hợp hóa học Các dẫn chất tổng hợp theo qui trình sau: Dãy chất Ia-h Dãy chất IIa-d Dãy chất IIIa-d Dãy chất IVa-i Va-i Dãy chất VIa-c Dãy chất VIIa-i Dãy chất VIIIa-i Luận án tổng hợp 55 chất, thể chất rắn (Phụ lục 1) Phụ lục Tóm tắt kết tổng hợp hóa học dẫn chất Dãy chất Ia-h IIa-d IIIa-d IVa-i Va-i VIa-c VIIa-i VIIIa-i Hiệu suất (%) 62 ÷ 75 66 ÷ 73 65 ÷ 69 59 ÷ 73 56 ÷ 72 62 ÷ 67 65 ÷ 78 65 ÷ 77 Màu Trắng/Vàng Vàng Vàng Trắng/Vàng Trắng/Vàng Trắng Vàng Vàng tnc (℃) 171 ÷ 225 184 ÷ 232 201 ÷ 227 172 ÷ 212 174 ÷ 215 185 ÷ 219 185 ÷ 221 187 ÷ 224 Kết phân tích liệu phổ Các kết phân tích liệu phổ để khẳng định cấu trúc dẫn chất trình bày Chương Bàn luận 3.2 Kết thử tác dụng ức chế enzym, độc tính tế bào dự đốn số thơng số dược động học – độc tính Các kết thử hoạt tính sinh học dự đốn thơng số dược động học – độc tính (ADMET) dẫn chất trình bày Chương Bàn luận Chương BÀN LUẬN 4.1 Bàn luận tổng hợp hóa học khẳng định cấu trúc 4.1.1 Tổng hợp hóa học Phản ứng Niementowski ngưng tụ tạo vịng quinazolin-4(3H)on: Là phản ứng qui trình tổng hợp chất dãy I, IIIV, VII-VIII, dựa phản ứng Niementowski (Sơ đồ 4.1) Giai đoạn đầu ngưng tụ loại phân tử nước dẫn chất acid 2aminobenzoic formamid, xảy nhiệt độ thấp nhờ xúc tác acid, tạo chất trung gian imin Nhờ nhiệt độ cao, cặp điện tử tự nguyên tử N formamid ban đầu công vào carbon nhóm chức carboxylic, trao đổi proton loại phân tử nước hỗ biến keto-enol tạo vòng quinazolin-4(3H)-on Formamid chất tham gia đồng thời dung môi Giai đoạn tạo liên kết amid cần nhiệt độ cao, nhiên, nhiệt độ cao phân hủy sản phẩm, giảm hiệu suất Vì phản ứng thực 120130 ℃, xảy hoàn toàn – giờ, cho hiệu suất cao (85-96 %) Sản phẩm dẫn chất quinazolin-4(3H)-on bị kết tủa rót hỗn hợp phản ứng vào nước lạnh, NaHCO3 thêm vào để tạo muối acid 2-aminobenzoic dư tan nước, giúp loại bỏ tạp dễ dàng Sơ đồ 4.1 Cơ chế phản ứng Niementowski ngưng tụ tạo vòng quinazolin-4(3H)-on Phản ứng tạo vòng 2-methylquinazolin-4(3H)-on qua trung gian benzoxazinon: Là phản ứng qui trình tổng hợp dãy II VI Phản ứng one-pot gồm giai đoạn Giai đoạn 1: Ngưng tụ loại nước quinazolin-4(3H)-4-on anhydrid acetic, tạo trung gian 2methyl-4H-benzo[d][1,3]oxazin-4-on Anhydrid acetic tác nhân đồng thời xúc tác, phản ứng xảy hoàn toàn sau đun hồi lưu - Giai đoạn 2: Amoni acetat thêm vào hỗn hợp phản ứng (giai đoạn 1) với lượng dư (khoảng đương lượng so với acid anthranilic ban đầu) để tạo liên kết amid thay cho liên kết este nhân oxazin-4-on, tạo khung quinazolin-4(3H)-on Nhiệt độ cần trì 80 – 100 ℃ Theo dõi tiến trình để kết thúc phản ứng thời điểm phù hợp (khoảng giờ) NaHCO3 thêm vào hỗn hợp sản phẩm để loại bỏ tạp acid acetic sinh phản ứng Sơ đồ 4.2 Cơ chế phản ứng tạo vòng 2-methylquinazolin-4(3H)-on qua trung gian benzoxazinon Phản ứng N-alkyl hóa khung quinazolin-4(3H)-on: Để tổng hợp ester trung gian dãy chất I-VI, theo chế nhân (Sơ đồ 4.3) Tác nhân alkyl hóa alkyl-, allyl- hay benzyl- halogenid Quinazolin4(3H)-on có tính nhân yếu, cần hoạt hóa base yếu Theo tài liệu tham khảo, phản ứng thực môi trường base, sử dụng muối carbonat (Na2CO3, K2CO3, Cs2CO3), hydrid (LiH, NaH, CaH2), triethanolamin (TEA), … làm xúc tác, dung môi aceton, DMF, DMA, MeCN, NMP hay DMSO Luận án lựa chọn sử dụng K2CO3 làm xúc tác, dung môi aceton DMF, tác nhân alkyl hóa alkyl- benzoyl- bromid Thêm lượng nhỏ KI để tăng tốc carboxylic khó để loại bỏ Vì vậy, phản ứng thực nhiệt độ thấp (0 ℃, sử dụng hỗn hợp đá muối), đồng thời nhỏ từ từ dung dịch NaOH bão hịa làm lạnh vào bình phản ứng (tránh nhiệt độ tăng đột ngột làm phân hủy hydroxylamin tự do), yếu tố nhiệt độ pH kiểm tra trì Theo dõi sắc ký lớp mỏng thuốc thử màu sắt (III) clorid để xác định thời điểm kết thúc phản ứng, thu sản phẩm có hiệu suất cao (78 - 96 %) 4.1.2 Khẳng định cấu trúc Tất dẫn chất thiết kế sau tổng hợp tinh chế đo phổ IR, MS, 1H-NMR 13C-NMR để xác định cấu trúc Các chất trung gian trình tổng hợp IVa, Va VIa 3.8a, 3.9a 3.10a đo phổ khối lượng 4.1.2.1 Phổ hồng ngoại Dựa vào kết phổ đồ đối chiếu với giá trị tham khảo từ tài liệu, biện luận số nhóm chức sau: Khoảng từ 3566-3326 cm-1 có xuất vân hấp thụ rõ nét tù tương ứng với dao động hóa trị liên kết O-H nhóm chức acid hydroxamic; Khoảng từ 3329-3140 cm-1 thể dao động hóa trị liên kết N-H nhóm chức acid hydroxamic nhóm chức amid; Khoảng từ 3099-2997 cm-1 giúp nhận biết dao động hóa trị liên kết C-H sp2 2999-2806 cm-1 dao động hóa trị liên kết CH sp3; Khoảng từ 1695-1624 cm-1 xuất đỉnh hấp thụ với cường độ mạnh sắc nét giúp nhận biết dao động hóa trị liên kết C=O nhóm chức amid nhóm chức acid hydroxamic; Khoảng từ 1651-1614 cm-1 xuất đỉnh hấp thụ với cường độ mạnh sắc nét giúp nhận biết dao động hóa trị liên kết C=N nhóm chức imin khung quinazolin; Khoảng từ 1616-1520 cm-1 nhận dao động hóa trị liên kết C=C vòng benzen mạch alken Phổ đồ 27/55 chất có dao động hóa trị C=N khoảng 1651-1614 cm-1 Cầu nối alkyl khẳng định nhờ dao động hóa trị bất đối xứng CH2 (2999-2913 cm-1) dao động hóa trị đối xứng CH2 (2883-2806 cm-1) Các liệu phổ IR giúp sơ xác định khung cấu 11 trúc chất tổng hợp có vịng thơm, alken, cầu nối alkyl, nhóm chức carbonyl, imin, amid acid hydroxamic 4.1.2.2 Phổ khối lượng Phổ khối lượng liệu quan trọng để khẳng định cấu trúc chất tổng hợp, dựa việc xác định khối lượng phân tử khối lượng mảnh ion phổ đồ, đối chiếu với khối lượng phân tử số khối mảnh phân tử cấu trúc chất dự kiến Trên phổ đồ khối lượng tất dẫn chất tổng hợp, pic có cường độ cao tương ứng với giá trị pic ion phân tử chất, bao gồm pic [M+H]+ với chế độ đo positive [M-H]- với chế độ đo negative Như vậy, phổ khối lượng sở để khẳng định chất tổng hợp luận án có cơng thức phân tử thiết kế ban đầu 4.1.2.3 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân * Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton 1H-NMR a Phổ cộng hưởng từ proton dãy chất Ia-h, IIa-d IIIa-d Khung cấu trúc dãy chất IIa-d tương tự dãy Ia-h, khác nhóm methyl vị trí C3 khung quinazolin-4(3H)-on, khung cấu trúc dãy chất IIIa-d tương tự dãy Ia-h có thêm vinylen phần cầu nối Vì vậy, phổ đồ 1H-NMR dẫn chất dãy I III, xuất pic tương ứng với proton khung quinazolin4(3H)-on, cầu nối methylen, nhân benzen, vinylen acid hydroxamic với độ dịch chuyển, độ bội tín hiệu phù hợp với cấu trúc dự kiến, cụ thể: + Khung quinazolin-4(3H)-on có proton vị trí 2ʺ, 5ʺ, 6ʺ, 7ʺ 8ʺ xác định rõ ràng phổ đồ Đặc điểm tín hiệu khác phụ thuộc vào xuất đặc điểm nhóm vị trí 2ʺ, 6ʺ 7ʺ: - Proton vị trí 2ʺ (H-2ʺ) phổ đồ 12 dẫn chất Ia-h IIIad có tín hiệu cộng hưởng dạng singlet với độ dịch chuyển ổn định, khoảng 8,64-8,47 ppm Các dẫn chất IIa-d có nhóm vị trí 2ʺ nên khơng có tín hiệu phổ đồ 12 - Proton vị trí 5ʺ (H-5ʺ ) có độ dịch chuyển khoảng 8,84 - 7,91 ppm Tín hiệu cộng hưởng H-5ʺ dạng singlet, doublet, doubletdoublet Dạng singlet xuất chất mang nhóm -CH3, OCH3, -F -Cl 6ʺ gồm Ic, Ie, Ig, Ih, IIc IIIc Ở hợp chất này, H-5ʺ tương tác ghép cặp với H-7ʺ số ghép cặp nhỏ nên hình dạng pic thu phổ đồ singlet Dạng doublet, doublet-doublet có tín hiệu cộng hưởng chất cịn lại chất có tương tác H-5ʺ với H-6ʺ H7ʺ Giữa H-5ʺ H-6ʺ có tương tác với ortho nên số tách lớn (Jortho = 7,50 – 8,75 Hz), H-5ʺ H-7ʺ có tương tác meta nên số tương tác nhỏ (Jmeta = 1,00 – 2,50 Hz) Dẫn chất có nhóm hút điện tử mạnh (7ʺ-F, chất IIId) có tượng chồng phổ, vậy, pic H-5ʺ H-6ʺ quan sát phổ đồ dạng multiplet - Proton vị trí 6ʺ (H-6ʺ) xuất phổ đồ chất khơng có nhóm 6ʺ, độ dịch chuyển khoảng 7,84 – 7,36 ppm, tín hiệu cộng hưởng dạng doublet, triplet triplet-doublet Đối với chất có nhóm 7ʺ (chất Ib, Id, If, IIb IIIb), tín hiệu cộng hưởng H-6ʺ có dạng doublet có tương tác với H-5ʺ (Jortho = 8,00 – 9,00 Hz) Tín hiệu cộng hưởng dạng triplet triplet-doublet dẫn chất cịn lại, H6ʺ có tương tác với H-5ʺ, H-7ʺ H-8ʺ, với Jortho = 7,50 – 8,00 Hz Jmeta = 0,50 Hz (hoặc Jmeta nhỏ, khơng đo được) - Proton vị trí 7ʺ (H-7ʺ) xuất phổ đồ chất khơng có nhóm 7ʺ (chất Ia, Ic, Ig, Ih, IIa, IIc, IId, IIIa IIIc), với độ dịch chuyển khoảng hẹp 7,85 – 7,45 ppm Tín hiệu cộng hưởng có dạng doublet, doublet-doublet, doublet-triplet tripletdoublet, H-7ʺ có tương tác với H-6ʺ, H-8ʺ H-5ʺ, với Jortho = 6,50 – 9,00 Hz Jmeta = 1,00 – 2,50 Hz - Proton vị trí 8ʺ (H-8ʺ) có độ dịch chuyển khoảng 7,85 - 7,14 ppm Tín hiệu cộng hưởng H-8ʺ dạng singlet chất có nhóm 7ʺ (chất Ib, Id, Ie, If, IIb IIIb), dạng doublet multiplet chất lại H-8ʺ tương tác với H-7ʺ H-6ʺ, với Jortho = 8,00 – 10,00 Hz Jmeta nhỏ 13 - Các nhóm R khác khung quinazolin có tín hiệu cộng hưởng proton tương ứng Nhóm -CH3 có tín hiệu dạng singlet proton, = 2,48 - 2,43 ppm; nhóm -OCH3 có tín hiệu dạng singlet proton vùng trường thấp hơn, = 3,91 - 3,87 ppm + Hai proton cầu nối methylen tất chất có tín hiệu cộng hưởng dạng singlet, độ dịch chuyển khoảng 5,25-5,22 ppm (dãy Ia-h), 5,51-5,40 ppm (dãy IIa-d) 5,23-5,20 ppm (dãy IIa-d) + Vịng benzen phần cầu nối có dạng 1,4 tạo thành hai cặp proton đối xứng vị trí 2ʹ, 6ʹ 3ʹ, 5ʹ; proton xác định rõ ràng phổ đồ tất dẫn chất H-2ʹ H-6ʹ có độ dịch chuyển ổn định, khoảng 7,92 - 7,53 ppm, tín hiệu cộng hưởng có dạng đặc trưng doublet tương tác tương ứng với H-3ʹ H-5ʹ, JH-2ʹ, H-3ʹ (ortho) JH-6ʹ, H-5ʹ (ortho) từ 7,50 đến 8,50 Hz Tương tự, cặp (H-3ʹ H-5ʹ có độ dịch chuyển khoảng 7,72 - 7,26 ppm, tín hiệu cộng hưởng dạng doublet, JH-2ʹ-H-3ʹ (ortho) JH-6ʹ-H-5ʹ (ortho) từ 8,00 đến 8,50 Hz + Cầu nối vinylen (-CH=CH-) có chứa proton khơng tương đương mặt từ tính nên tín hiệu cộng hưởng proton có độ dịch chuyển khác phổ đồ chất dãy III Proton H-2 có độ dịch chuyển khoảng 6,52 - 6,44 ppm, dạng doublet, JH-2, H-3 = 15,50 - 16,00 Hz Proton H-3 có độ dịch chuyển khoảng 7,55 - 7,44 ppm, dạng doublet, JH-2-H-3 16,00 Hz Giá trị số ghép cặp hai proton H2, H3 dao động khoảng 15,50 - 16,00 Hz, đặc trưng cho cấu hình trans liên kết đơi -CH=CH- Do đó, kết luận tất dẫn chất dãy III tổng hợp cấu hình E Điều hồn toàn phù hợp với nguyên liệu ban đầu sử dụng chứng minh q trình tổng hợp khơng làm thay đổi cấu hình liên kết đơi + Hai proton hợp phần hydroxamic (-NH-OH) có vị trí rõ ràng phổ đồ hầu hết chất, với tín hiệu cộng hưởng đặc trưng dạng singlet Trong đó, nhóm -NH- gần nhóm C=O nhóm OH, bị ảnh hưởng nhiều hiệu ứng hút điện tử nhóm carbonyl, vậy, phổ đồ, proton nhóm -NH- cộng hưởng vùng trường yếu proton nhóm OH cộng hưởng vùng 14 trường mạnh Proton -NH- có độ dịch chuyển khoảng 11,21 11,15 ppm (dãy I-II) 10,78 - 10,75 ppm (dãy III), giá trị proton –OH khoảng 9,07 - 9,01 ppm Tuy nhiên, đặc điểm linh động, dễ bị trao đổi hỗ biến, hai proton khơng xuất phổ đồ dẫn chất có gắn thêm nhóm đẩy điện tử mạnh fluoro vị trí 7ʹ khung quinazolinon (chất IIId) b Phổ cộng hưởng từ proton dãy chất IVa-i, Va-i VIa-c + Các proton khung quinazolin-4(3H)-on, acid hydroxamic nhóm dẫn chất dãy IV-VI có tín hiệu cộng hưởng tương đồng với proton vị trí tương ứng biện luận dãy chất I-III + Các proton cầu nối alkyl có vân phổ đặc trưng dạng triplet multiplet với độ dịch chuyển khoảng 4,50 – 1,93 ppm c Phổ cộng hưởng từ proton dãy chất VIIa-i VIIIa-i + Khung quinazolin có proton vị trí 2’, 5’, 6’, 7’, 8’, nhóm R hợp phần hydroxamic (-NH-OH) xác định rõ ràng phổ đồ, tương tự chất dãy I-VI Do đặc điểm linh động, dễ bị trao đổi hỗ biến, proton –NH– không xuất phổ đồ dẫn chất có gắn thêm nhóm đẩy điện tử mạnh (chất VIIIi) + Proton nhóm amin cầu nối (-NH-) có vị trí rõ ràng phổ đồ hầu hết chất, với vân phổ đặc trưng dạng singlet, độ dịch chuyển 8,99 – 8,08 ppm Một số chất có vân phổ dạng triplet multiplet proton có tương tác ortho với proton cầu nối alkyl methylen, với số tách dao động 5,25 – 11,50 Hz + Các proton cầu nối alkyl tất dẫn chất dãy VII có vân phổ đặc trưng dạng triplet multiplet với độ dịch chuyển khoảng 3,66 – 1,93 ppm, tương tự chất dãy IV-VII + Hai proton cầu nối methylen chất VIIIa-i có vân phổ dạng doublet có tương tác với proton –NH-, với = 4,93 – 4,80 ppm, Jortho = 5,50 – 16,00 Hz 15 + Vòng benzen cầu nối tất dẫn chất dãy VIII có dạng 1,4 tạo thành hai cặp proton đối xứng vị trí 2, 3, 5; xác định rõ ràng phổ đồ, tương tự chất dãy I-III * Phổ cộng hưởng từ hạt nhân carbon 13C-NMR + Khung phân tử sáu dãy chất I-III có ngun tử carbon nhóm carbonyl, phổ đồ xuất tín hiệu cộng hưởng vùng trường thấp với độ chuyển dịch hóa học khoảng 169,57 154,58 ppm Hai dãy chất VII VIII có khung quinazolin-4(3H)-on thay quinazolin, phổ đồ có tín hiệu cộng hưởng vùng trường thấp với = 169,62 – 162,94 ppm + Các carbon khung quinazolin, vòng benzen -CH=CH phần cầu nối có vị trí cộng hưởng khoảng giữa, từ 165,72 – 100,25 ppm Các dẫn chất có nhóm fluoro cịn xảy tương tác nguyên tử F với carbon lân cận, làm tách đôi số pic + Các carbon phần cầu nối methylen alkyl có độ chuyển dịch hóa học nằm vùng trường cao hơn, khoảng 66,98 – 24,81 ppm + Phổ đồ chất cho tín hiệu cộng hưởng carbon có nhóm khung quinazolin: nhóm –CH3 có = 25,03 – 20,79 ppm; nhóm –OCH3 có = 57,25 – 55,69 ppm Các kết phân tích phổ khẳng định 55 dẫn chất tổng hợp luận án có cấu trúc thiết kế ban đầu 4.2 Bàn luận liên quan cấu trúc – tác dụng dẫn chất 4.2.1 Hoạt tính sinh học dãy chất IVa-i, Va-i VIa-c Dữ liệu Bảng 4.1 cho thấy tất chất có hoạt tính ức chế HDAC độc tính mạnh ba dịng tế bào thử nghiệm, số có hoạt tính tương đương mạnh SAHA Nghiên cứu docking phân tử cho thấy chất có liên kết tốt với enzym HDAC2, nhiều chất có liên kết chặt chẽ với enzym SAHA, giúp giải thích số chất có hoạt tính mạnh chất đối chứng Các dẫn chất Nhydroxycinnamamid (IIIb-d) có hoạt tính ức chế HDAC độc tính tế bào mạnh Các kết khẳng định cấu trúc quinazolin4(3H)-on sử dụng với vai trị nhóm nhận diện bề mặt 16 cấu trúc chất ức chế HDAC Các nhóm khác khung quinazolin có ảnh hưởng khơng nhiều đến hoạt tính dẫn chất Hai hợp phần N-hydroxybenzamid Nhydroxycinnamamid cầu nối mang lại hoạt tính tốt cho dẫn chất Những kết sở để luận án thiết kế tổng hợp chất nhóm (dãy IV-VI) Bảng 4.1 Kết ức chế HDAC gây độc tế bào dẫn chất Ia-h, IIa-d IIIa-d Chất R Ia Ib Ic Id Ie If Ig Ih IIa IIb IIc IId IIIa IIIb IIIc IIId -H 7-CH3 6-CH3 7-OCH3 6,7-(OCH3)2 7-F 6-F 6-Cl -H 7-CH3 6-CH3 6-Cl -H 7-CH3 6-CH3 7-F SAHA Độc tính tế bào (IC50, M) Ức chế /Dịng tế bào HDAC LogP PC3 NCI-H23 (IC50, M) SW620 1,15 1,70 1,70 1,24 0,80 1,35 1,35 1,80 2,31 2,86 2,86 2,51 1,24 1,79 1,79 1,88 1,44 0,41 0,91 0,49 1,01 0,37 0,86 1,50 0,61 1,19 0,62 0,71 0,76 0,22 0,15 0,09 0,17 0,23 5,18 3,65 2,94 4,61 0,96 1,92 6,06 1,27 2,81 0,46 1,15 0,73 1,50 0,63 0,87 0,65 2,8 5,85 4,59 2,46 3,5 0,82 1,92 3,89 0,73 2,98 0,84 0,87 0,64 1,12 0,81 0,81 0,62 2,99 5,72 4,85 2,26 4,46 0,65 1,85 3,54 1,30 3,88 1,18 0,71 0,92 1,49 0,99 1,16 0,70 3,14 4.2.2 Hoạt tính sinh học dãy chất IVa-i, Va-i, VIa-c Dãy chất IV-VI tổng hợp dựa thiết kế cấu trúc có phần nhận diện bề mặt quinazolin-4(3H)-on giống dãy chất III, thay cinnamamid cầu nối mạch alkyl có độ dài tương đương (dãy IV, VI) dài 1C (dãy V) Kết quả, 21 dẫn chất tổng hợp có khả ức chế HDAC độc tính tế bào mạnh, nhiều chất có hoạt lực tương đương, số chất ức chế HDAC gây độc tế bào 17 mạnh SAHA Docking phân tử cho thấy chất có liên kết tốt với HDAC2, nhiều chất có liên kết chặt chẽ với enzym SAHA, góp phần giải thích hoạt tính mạnh SAHA số chất Các kết tiếp tục khẳng định quinazolin-4(3H)-on có nhóm kích thước nhỏ khung phù hợp cho thiết kế cấu trúc phần nhận diện bề mặt HDACi Các nhóm vịng quinazolin có ảnh hưởng khác đến hoạt tính dẫn chất Phần cầu nối có cấu trúc mạch alkyl carbon tốt cho hoạt tính enzym Những kết sở cho việc thiết kế tổng hợp dãy chất VII-VIII (nhóm 3) Bảng 4.3 Kết ức chế HDAC gây độc tế bào dẫn chất IVa-i, Va-i VIa-c Chất R IVa IVb IVc IVd IVe IVf IVg IVh IVi Va Vb Vc Vd Ve Vf Vg Vh Vi VIa VIb VIc -H 7-CH3 6-CH3 7-OCH3 6,7-(OCH3)2 7-F 6-F 6-Cl 7-NO2 -H 7-CH3 6-CH3 7-OCH3 6,7-(OCH3)2 7-F 6-F 6-Cl 7-NO2 -H 6-CH3 6-Cl SAHA Độc tính tế bào (IC50, M) Ức chế /Dòng tế bào HDAC LogP NCI-H23 (IC50, M) SW620 PC3 1,16 1,71 1,71 1,24 0,81 1,36 1,36 1,81 0,98 1,65 2,20 2,20 1,73 1,30 1,85 1,85 2,30 1,47 2,32 2,87 2,52 1,44 0,52 0,30 0,56 0,28 0,23 0,52 0,55 0,22 0,57 0,96 0,50 0,91 0,09 2,20 1,46 0,78 0,29 0,49 0,82 0,16 0,16 0,26 18 0,28 0,16 0,13 0,56 1,49 1,33 1,17 0,25 1,26 1,09 1,10 1,04 0,93 2,37 1,86 0,75 0,65 0,89 1,12 0,63 >14 3,40 0,21 0,13 0,10 0,50 1,23 1,20 1,20 0,53 1,73 0,96 1,13 1,07 1,05 2,50 1,00 0,31 0,33 1,00 1,78 0,57 >14 3,67 0,38 0,16 0,10 0,56 1,29 1,37 1,63 0,19 1,38 1,15 1,23 1,13 1,11 2,78 1,06 0,40 0,50 1,03 0,92 0,44 >14 3,29 Dãy chất IV-VI tổng hợp dựa thiết kế cấu trúc có phần nhận diện bề mặt quinazolin-4(3H)-on giống dãy chất III, thay cinnamamid cầu nối mạch alkyl có độ dài tương đương (dãy IV, VI) dài 1C (dãy V) Kết quả, 21 dẫn chất tổng hợp có khả ức chế HDAC độc tính tế bào mạnh, nhiều chất có hoạt lực tương đương, số chất ức chế HDAC gây độc tế bào mạnh SAHA Docking phân tử cho thấy chất có liên kết tốt với HDAC2, nhiều chất có liên kết chặt chẽ với enzym SAHA, góp phần giải thích hoạt tính mạnh SAHA số chất Các kết tiếp tục khẳng định quinazolin-4(3H)-on có nhóm kích thước nhỏ khung phù hợp cho thiết kế cấu trúc phần nhận diện bề mặt HDACi Các nhóm vịng quinazolin có ảnh hưởng khác đến hoạt tính dẫn chất Phần cầu nối có cấu trúc mạch alkyl carbon tốt cho hoạt tính enzym Những kết sở cho việc thiết kế tổng hợp dãy chất VII-VIII (nhóm 3) 4.2.3 Hoạt tính sinh học dãy chất VIIa-i VIIIa-i Từ kết nghiên cứu dãy chất I-VI, luận án phát triển hai dãy chất VIIa-i VIIIa-i, cấu trúc quinazolin tiếp tục sử dụng cho phần nhận diện bề mặt có thay đổi vị trí liên kết với phần cầu nối mạch methylen carbon cấu trúc mang nhân thơm benzamid Kết quả, dẫn chất acid hydroxamic N-hydroxybenzamid mang khung quinazolin có hoạt tính ức chế HDAC gây độc tế bào mạnh ba dòng tế bào thử nghiệm So với SAHA, nhiều chất có hoạt lực tương đương, số chất ức chế HDAC gây độc tế bào mạnh SAHA Các kết thử hoạt tính docking phân tử tiếp tục khẳng định khung quinazolin phù hợp cho thiết kế cấu trúc phần nhận diện bề mặt enzym HDACi Các nhóm khác vịng quinazolin ảnh hưởng đến hoạt tính ức chế HDAC độc tính tế bào dẫn chất Hợp phần có chứa nhân thơm benzamid cho hoạt tính tốt so với cấu trúc heptanamid phần cầu nối 19 Bảng 4.5 Kết ức chế HDAC gây độc tế bào dẫn chất VIIa-i VIIIa-i Chất VIIa VIIb VIIc VIId VIIe VIIf VIIg VIIh VIIi VIIIa VIIIb VIIIc VIIId VIIIe VIIIf VIIIg VIIIh VIIIi R -H 7-CH3 6-CH3 7-OCH3 6,7-(OCH3)2 7-F 6-F 6-Cl 7-NO2 -H 7-CH3 6-CH3 7-OCH3 6,7-(OCH3)2 7-F 6-F 6-Cl 7-NO2 SAHA4 LogP 2,09 2,64 2,64 2,17 1,74 2,29 2,29 2,74 1,91 1,78 2,33 2,33 1,87 1,43 1,99 1,99 2,43 1,60 1,44 Ức chế HDAC (IC50, M) 0,31 0,33 0,46 0,41 0,20 0,42 0,13 0,31 0,30 0,88 0,52 0,16 0,28 0,17 0,45 0,58 0,12 0,62 0,23 Độc tính tế bào (IC50, M)/Dịng tế bào SW620 PC3 NCI-H23 1,14 0,50 0,33 1,19 3,42 2,22 0,65 0,74 0,42 1,43 1,40 0,36 1,63 5,45 3,78 1,28 0,55 1,80 3,63 1,14 0,70 0,17 1,13 5,94 2,61 0,65 0,53 0,93 1,74 1,67 0,26 0,65 6,72 3,59 1,47 0,49 1,87 3,37 1,49 0,93 0,56 2,14 7,43 2,58 0,85 0,43 0,93 3,19 1,88 0,58 2,84 9,00 5,25 1,86 0,67 2,51 3,40 4.2.4 Liên quan cấu trúc – tác dụng dẫn chất Kết so sánh khả tương tác với enzym, khả ức chế HDAC2 khả gây độc tế bào tất dẫn chất khẳng định khả mang lại hoạt tính ức chế enzym đáng kể khung quinazolin cấu trúc phần nhận diện bề mặt Vị trí liên kết với phần cầu nối N3 tốt cho hoạt tính ức chế enzym độc tính tế bào so với vị trí C4 khung quinazolin (các chất dãy VII-VIII có hoạt tính tốt dãy I-VI, giải thích kết docking) Việc thiết kế cấu trúc chất nhóm sở khảo sát thay đổi hướng liên kết khung quinazolin phần nhận diện bề mặt so với nhóm chất cho kết khả quan 20 Việc gắn thêm nhóm methyl vị trí khung quinazolin mang lại hiệu ức chế HDAC tốt phù hợp với cấu trúc dãy chất mang cầu nối benzamid so với cầu nối heptanamid Các nhóm đẩy điện tử (methyl, methoxy) thích hợp cho cấu trúc chất thiết kế nhóm hút điện tử (cloro, fluoro, nitro, nhóm dimethoxy) Như vậy, nhóm khác gắn khung quinazolin có ảnh hưởng khác đến khả tương tác với enzym độc tính tế bào dẫn chất, đó, phù hợp cho hoạt tính alkyl hóa vị trí nhóm có kích thước nhỏ đẩy điện tử yếu methyl methoxy Khi sử dụng quinazolin cho phần nhận diện bề mặt, việc thay cầu nối benzamid cinnamamid cấu trúc mạch thẳng đơn giản mang lại dẫn chất acid hydroxamic có hoạt tính sinh học tốt, phù hợp với dự kiến thiết kế cấu trúc dãy chất nhóm dựa kết thử hoạt tính dãy chất nhóm thực luận án Các kết so sánh hoạt tính dãy chất tiếp tục khẳng định cấu trúc cầu nối phù hợp cho hoạt tính ức chế HDAC kháng tế bào ung thư chất thiết kế luận án benzamid (dãy I, II VIII), cinnamamid (dãy III) heptanamid (dãy IV, VI VII) Các dẫn chất dãy I-III VIII dự đốn có tương tác tốt với HDAC6, gợi ý cấu trúc mang khung quinazolin quinazolin-4(3H)-on phần nhận diện bề mặt cấu trúc benzamid cinnamamid phần cầu nối acid hydroxamic tổng hợp luận án phù hợp cho hoạt tính ức chế HDAC6, đồng thời góp phần giải thích cho bất tương đồng hoạt tính ức chế HDAC tổng chiết từ tế bào HeLa tác dụng gây độc tế bào Những kết lần cho thấy hợp phần Nhydroxycinnamamid khung phân tử dãy III cấu trúc tiềm cho chất ức chế HDAC kháng tế bào ung thư 21 Bảng 4.8 Tóm tắt liên quan cấu trúc – tác dụng dẫn chất 4.3 Bàn luận hợp chất tiềm Kết dự đốn ADMET bốn chất có hoạt tính sinh học mạnh (VIIc, VIIg, VIIIc VIIIh) cho thấy bốn chất thỏa mãn qui tắc Ro5 (tính giống thuốc, theo Lipinsky) qui tắc Ro3 (tính giống chất dẫn đường, theo Teague) Các chất dự đốn khơng phù hợp với việc sử dụng qua đường uống, có tính thấm trung bình qua màng ruột non, đạt sinh khả dụng khoảng 55 % - 60 %, có khả gắn khác với P-gp CYP Các thơng số khác để dự đốn khả phân bố, thải trừ độc tính bốn chất cho thấy chất VIIIc ứng viên tiềm cho nghiên cứu KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Từ kết nghiên cứu trình bày, rút số kết luận sau: 1) Về thiết kế tổng hợp Đã thiết kế tổng hợp 55 dẫn chất acid hydroxamic mang khung quinazolin hướng ức chế HDAC kháng tế bào ung thư Cả 55 chất có cấu trúc thiết kế, chứng minh 22 phổ IR, MS, 1H-NMR, 13C-NMR chưa cơng bố tài liệu trước Các dẫn chất chia thành ba nhóm: - Nhóm 1: Gồm 16 dẫn chất thuộc dãy chất Ia-h, IIa-d IIIad Các dẫn chất có cấu trúc quinazolin-4(3H)-on hợp phần phần nhận diện bề mặt cấu trúc benzamid cinnamamid phần cầu nối - Nhóm 2: Gồm 21 dẫn chất thuộc dãy chất IVa-i, Va-i VIac Các dẫn chất có cấu trúc quinazolin-4(3H)-on hợp phần phần nhận diện bề mặt cấu trúc heptanamid octanamid phần cầu nối - Nhóm 3: Gồm 18 dẫn chất thuộc dãy chất VIIa-i VIIIa-i Các dẫn chất có cấu trúc quinazolin-4-yl hợp phần phần nhận diện bề mặt cấu trúc benzamid heptanamid phần cầu nối 2) Về đánh giá tác dụng Các dẫn chất tổng hợp đánh giá tác dụng ức chế HDAC tổng chiết từ tế bào HeLa phương pháp định lượng huỳnh quang Kết thử nghiệm cho thấy 55 chất có khả ức chế HDAC, có số dẫn chất Ie, IIIa-d, IVe, IVh, Vd, VIb-c, VIIe, VIIg, VIIIe, VIIIc VIIIh có tác dụng tương đương mạnh SAHA Tất dẫn chất tổng hợp đánh giá tác dụng kháng tế bào ung thư theo phương pháp SRB ba dòng tế bào SW620, PC3 NCI-H23 Kết thử nghiệm cho thấy, chất VIc khơng có tác dụng kháng tế bào tính thấm qua màng kém, dẫn chất có hoạt tính ức chế tế bào tốt Có 50 chất tổng số 55 chất (Ie-f, Ih, IIb-d, IIIa-d, IVa-i, Va-i, VIa-b, VIIa-d, VIIf-i, VIIIa-d VIIIf-i) có tác dụng mạnh SAHA ba dòng tế bào thử nghiệm, đó, hai chất IVb IVc có độc tính tế bào mạnh nhất, với giá trị IC50 ba dòng tế bào thấp 30 lần so với SAHA Các dẫn chất tổng hợp dự đoán khả liên kết với trung tâm hoạt động HDAC2 Kết nghiên cứu cho thấy 23 dẫn chất có khả tương tác tốt với acid amin vùng xúc tác enzym, phần cầu nối phù hợp để hợp phần acid hydroxamic tạo phức với ion kẽm phần đáy kênh HDAC2, nhiều chất có khả tương tác với enzym tốt SAHA Phân tích liên quan cấu trúc – tác dụng chất khẳng định cấu trúc tốt cho hoạt tính ức chế enzym độc tính tế bào, bao gồm: khung quinazolin quinazolin-4(3H)- on, mang thêm số nhóm có kích thước nhỏ vị trí 2, và/hoặc cho phần nhận diện bề mặt; cấu trúc benzamid, cinnamamid heptanamid cho phần cầu nối Một số chất có tác dụng sinh học bật, bao gồm chất VIIc, VIIg, VIIIc VIIIh dự đốn số thơng số dược động học – độc tính, kết cho thấy VIIIc chất có tiềm cho nghiên cứu để phát triển thành thuốc Như vậy, luận án hoàn thành mục tiêu đề ra, đồng thời có đóng góp cho nghiên cứu phát triển thuốc điều trị ung thư theo hướng ức chế enzym HDAC Các kết thu chứng minh khung quinazolin phù hợp để làm nhóm nhận diện bề mặt cho dẫn chất acid hydroxamic, có tiềm để tạo chất ức chế HDAC tác dụng kháng số dịng tế bào ung thư với hoạt tính mạnh KIẾN NGHỊ Thiết kế cấu trúc chất có tác dụng ức chế HDAC độc tính tế bào mạnh tác dụng chọn lọc HDAC6 theo hướng mở rộng nhóm nhận diện bề mặt cách gắn nhóm có kích thước lớn hơn, kết hợp khung quinazolin với số vòng thơm hay dị vòng khác Tiến hành thử nghiệm mức độ sinh học phân tử nhằm tìm chế gây độc tế bào chất VIIIc, giúp tối ưu hóa cấu trúc tìm kiếm ứng viên 24 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ Doan Thanh Hieu, Duong Tien Anh, Nguyen Minh Tuan, PhamThe Hai, Le-Thi-Thu Huong, Jisung Kim, Jong Soon Kang, Tran Khac Vu, Phan Thi Phuong Dung, Sang-Bae Han, Nguyen-Hai Nam, Nguyen-Dang Hoa (2018), “Design, Synthesis and Evaluation of Novel N-Hydroxybenzamides NHydroxypropenamides Incorporating Quinazolin-4(3H)-ones as Histone Deacetylase Inhibitors and Antitumor Agents”, Bioorganic Chemistry, 76(2018), pp.258-267 Doan Thanh Hieu, Duong Tien Anh, Pham-The Hai, Le-Thi-Thu Huong, Eun Jae Park, Jeong Eun Choi, Jong Soon Kang, Phan Thi Phuong Dung, Sang-Bae Han, and Nguyen-Hai Nam (2018), "Quinazoline-Based Hydroxamic Acids: Design, Synthesis, and Evaluation of Histone Deacetylase Inhibitory Effects and Cytotoxicity", Chemistry & Biodiversity 2018, 15, e1800027 Doan Thanh Hieu, Duong Tien Anh, Pham The Hai, Nguyen Thi Thuan, Eun Jae Park, A Young Ji, Jong Soon Kang, Phan Thi Phuong Dung, Sang-Bae Han, Nguyen-Hai Nam (2019), "Quinazolin-4(3H)-one-based Hydroxamic Acids: Design, Synthesis and Evaluation of Histone Deacetylase Inhibitory Effects and Cytotoxicity", Chemistry & Biodiversity, 16 (4), e1800502 Các chất luận án đăng ký 01 phát minh sáng chế Hàn Quốc: Sang Bae Han, Jin Tae Hong, Young Soo Kim, NguyenHai Nam, Phan Thi Phuong Dung, Doan Thanh Hieu (2017), "Novel N-Hydroxybenzamides or N-Hydroxypropenamides Incorporating Quinazolin-4(3H)-ones as Histone Deacetylase Inhibitors and Anticancer ", Korean Patent, No 10-2017-0132660 (số nhận hồ sơ 1-1-2017-1004054-62) 25