BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC VIỆN DƯỢC LIỆU BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ HỌ NHO (VITACEAE) CÂY NHO RỪNG (Vitis heyneana Roem & Schult ), TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM CỦA THÀNH PHẦN[.]Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của cây Nho rừng (Vitis heyneana Roem. & Schult.), họ Nho (Vitaceae)Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của cây Nho rừng (Vitis heyneana Roem. & Schult.), họ Nho (Vitaceae)Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của cây Nho rừng (Vitis heyneana Roem. & Schult.), họ Nho (Vitaceae)Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của cây Nho rừng (Vitis heyneana Roem. & Schult.), họ Nho (Vitaceae)Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của cây Nho rừng (Vitis heyneana Roem. & Schult.), họ Nho (Vitaceae)Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của cây Nho rừng (Vitis heyneana Roem. & Schult.), họ Nho (Vitaceae)Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của cây Nho rừng (Vitis heyneana Roem. & Schult.), họ Nho (Vitaceae)Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của cây Nho rừng (Vitis heyneana Roem. & Schult.), họ Nho (Vitaceae)Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của cây Nho rừng (Vitis heyneana Roem. & Schult.), họ Nho (Vitaceae)Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của cây Nho rừng (Vitis heyneana Roem. & Schult.), họ Nho (Vitaceae)Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của cây Nho rừng (Vitis heyneana Roem. & Schult.), họ Nho (Vitaceae)Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của cây Nho rừng (Vitis heyneana Roem. & Schult.), họ Nho (Vitaceae)Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của cây Nho rừng (Vitis heyneana Roem. & Schult.), họ Nho (Vitaceae)Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của cây Nho rừng (Vitis heyneana Roem. & Schult.), họ Nho (Vitaceae)Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của cây Nho rừng (Vitis heyneana Roem. & Schult.), họ Nho (Vitaceae)Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của cây Nho rừng (Vitis heyneana Roem. & Schult.), họ Nho (Vitaceae)Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của cây Nho rừng (Vitis heyneana Roem. & Schult.), họ Nho (Vitaceae)Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của cây Nho rừng (Vitis heyneana Roem. & Schult.), họ Nho (Vitaceae)Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của cây Nho rừng (Vitis heyneana Roem. & Schult.), họ Nho (Vitaceae)Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của cây Nho rừng (Vitis heyneana Roem. & Schult.), họ Nho (Vitaceae)Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của cây Nho rừng (Vitis heyneana Roem. & Schult.), họ Nho (Vitaceae)Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng chống viêm của cây Nho rừng (Vitis heyneana Roem. & Schult.), họ Nho (Vitaceae)
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ VIỆN DƯỢC LIỆU PHÙNG THANH LONG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM CỦA CÂY NHO RỪNG (Vitis heyneana Roem & Schult.), HỌ NHO (VITACEAE) LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI, 2023 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ VIỆN DƯỢC LIỆU PHÙNG THANH LONG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM CỦA CÂY NHO RỪNG (Vitis heyneana Roem & Schult.), HỌ NHO (VITACEAE) LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƯỢC LIỆU - DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 9720206 Người hướng dẫn khoa học : PGS.TS Đỗ Thị Hà TS Hà Vân Oanh HÀ NỘI, 2023 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận án cơng trình khoa học riêng tơi hướng dẫn PGS.TS Đỗ Thị Hà TS Hà Vân Oanh Kết trình bày luận án trung thực, khách quan chưa cơng bố cơng trình khác Tác giả luận án NCS Phùng Thanh Long LỜI CẢM ƠN Trong q trình nghiên cứu hồn thành luận án, nhận nhiều giúp đỡ quý báu từ Thầy Cô giáo, Nhà khoa học từ nhiều đơn vị, đồng nghiệp, gia đình bạn bè Đầu tiên, tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Đỗ Thị Hà TS Hà Vân Oanh, hai người thầy trực tiếp hướng dẫn, hết lịng bảo tận tình động viên tơi suốt q trình học tập nghiên cứu khoa học Tôi xin chân thành cảm ơn PGS.TS Nguyễn Thế Cường, TS Đỗ Thị Nguyệt Quế, TS Trần Thị Hiền thầy cô giáo, nhà khoa học công tác Viện Dược liệu, Trường Đại học Dược Hà Nội Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam giúp đỡ đóng góp ý kiến cho tơi suốt q trình thực nghiên cứu Nhân dịp này, tơi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến Ban Giám đốc, Phòng Khoa học Đào tạo, thư viện Viện Dược liệu tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành luận án Luận án hỗ trợ phần kinh phí từ đề tài “Nghiên cứu chế tác dụng chống viêm số hợp chất oligostilbenoid phân lập từ loài Nho dại (Vitis sp.) thu hái miền bắc Việt Nam, mã số 106.YS.05-2014.26”, đó, tơi xin gửi lời cảm ơn tới Quỹ phát triển Khoa học Công nghệ quốc gia (NAFOSTED) tạo điều kiện để thực luận án Lời sau cùng, xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới gia đình bạn bè động viên chia sẻ giúp đạt kết ngày hôm Tôi xin chân thành cảm ơn! NCS Phùng Thanh Long MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ ĐẶT VẤN ĐỀ .1 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Nho Vitis L .3 1.1.1 Thực vật 1.1.2 Thành phần hóa học 1.1.3 Tác dụng sinh học 27 1.2 Tổng quan loài Nho rừng 36 1.2.1 Đặc điểm thực vật Nho rừng 36 1.2.2 Thành phần hóa học Nho rừng 37 1.2.3 Tác dụng công dụng Nho rừng .39 1.3 Tổng quan viêm 40 1.3.1 Khái niệm viêm 40 1.3.2 Các chất trung gian phản ứng viêm 40 1.3.3 Một số mơ hình đánh giá tác dụng chống viêm 45 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .49 2.1 Đối tượng nghiên cứu, hóa chất, thiết bị, dụng cụ 49 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 49 2.1.2 Nguyên liệu 49 2.1.3 Động vật thực nghiệm 49 2.1.4 Thuốc thử, hóa chất, dung mơi 49 2.1.5 Máy móc, thiết bị 50 2.2 Địa điểm nghiên cứu 51 2.2.1 Địa điểm nghiên cứu thực vật 51 2.2.2 Địa điểm nghiên cứu hóa học 51 2.2.3 Địa điểm nghiên cứu tác dụng sinh học 51 2.3 Phương pháp nghiên cứu 52 2.3.1 Thu thập, xử lý mẫu nghiên cứu 52 2.3.2 Phương pháp nghiên cứu thực vật học 52 2.3.3 Phương pháp nghiên cứu thành phần hóa học .52 2.3.4 Phương pháp nghiên cứu số tác dụng sinh học 52 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 59 3.1 Kết nghiên cứu đặc điểm thực vật 59 3.1.1 Đặc điểm hình thái giám định tên khoa học 59 3.1.2 Đặc điểm vi phẫu 61 3.1.3 Đặc điểm bột dược liệu 63 3.2 Kết nghiên cứu thành phần hóa học 65 3.2.1 Kết định tính 65 3.2.2 Kết chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc hợp chất 66 3.3 Kết nghiên cứu tác dụng sinh học 100 3.3.1 Kết nghiên cứu tác dụng chống viêm 100 3.3.2 Kết nghiên cứu tác dụng giảm đau .106 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 108 4.1 Về thực vật 108 4.2 Về hóa học 109 4.2.1 Về định tính .110 4.2.2 Về chiết xuất phân lập 110 4.3 Về tác dụng chống viêm giảm đau 118 4.3.1 Tác dụng chống viêm in vitro 118 4.3.2 Tác dụng chống viêm giảm đau in vivo .122 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 126 KẾT LUẬN 126 KIẾN NGHỊ .127 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Kí hiệu Giải thích AA Acid arachidonic Akt Proteinkinase B AMPK Adenosin monophosphat-activated protein kinase AP-1 Activator protein -1 ATF Activating transcription factor (yếu tố hoạt hóa phiên mã) Chuột SHR Spontaneously hypertensive rat (một dòng chuột phát triển để nghiên cứu bệnh cao huyết áp) COX Cyclooxygenase COSY Correlated Spectroscopy (Phổ tương quan) DCM Dichloromethan DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer ESI ElectroSpray Ionisation (kỹ thuật ion hóa phun mù điện) Glc β-ᴅ-glucopyranosyl GLUT Glucose transporter type HDL High density lipoprotein (lipoprotein tỷ trọng cao) HMBC Heteronuclear Multiple Bond Correlation (Phổ tương quan dị nhân đa liên kết) H-NMR Proton Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton) HO-1 Heme oxygenase - HSQC Heteronuclear Single Quantum Coherence (Phổ tương tác dị nhân lượng tử đơn) IKK IκB kinase IL Interleukin iNOS Inducible nitric oxide synthetase LDL Low density lipoprotein (lipoprotein tỷ trọng thấp) LPS Lipopolysaccharid MAPK Mitogen-activated protein kinase (Protein kinase hoạt hóa phân bào) MDA Malondialdehyd MMP Matrix metallopetidase MS Mass spectrometry (Phổ khối lượng) MTT [3-(4,5- dimethylthiazol-2-yl) 2,5- diphenyl-tetrazolium bromid] NF-κB Nuclear factor kappa B (yếu tố nhân kappa B) NrF2 Nuclear factor erythroid 2-related factor NO Nitric oxid NOS Nitric oxid synthase PGE2 Prostaglandin E2 PGHS Prostaglandin endoperoxid H synthase PI3K Phosphatidylinositide-3-kinase RNA Acid ribonucleic RNS Reactive nitrogen species (Các chất hoạt động chứa nitơ) ROS Reactive oxygen species (Các chất hoạt động chứa oxy) RT-PCR Reverse transcription polymerase chain reaction SIRT Sirtuin SOD Superoxide dismutase STT Số thứ tự TGF Tumor growth factor (yếu tố tăng trưởng khối u) TLR-4 Toll-like receptor TLTK Tài liệu tham khảo TNF Tumor necrosis factor (yếu tố hoại tử khối u) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Đặc điểm sinh thái vùng phân bố loài Nho Việt Nam .4 Bảng 1.2 Các monomer stilbenoid (1-13) phân lập từ loài thuộc chi Nho Bảng 1.3 Các dimer stilbenoid (14-52) phân lập từ loài thuộc chi Nho .8 Bảng 1.4 Các trimer stilbenoid (53-71) phân lập từ loài thuộc chi Nho 13 Bảng 1.5 Các tetramer stilbenoid (72-96) phân lập từ loài thuộc chi Nho 15 Bảng 1.6 Các pentamer, hexamer stilbenoid (97-100) phân lập từ loài thuộc chi Nho .18 Bảng 1.7 Một số hợp chất flavonoid (101-134) tìm thấy chi Nho .20 Bảng Một số hợp chất phenol (135-146) khác thuộc chi Nho 24 Bảng 1.9 Một số hợp chất không phenol khác (164-175) phân lập từ chi Nho 26 Bảng 1.10 Các hợp chất phân lập từ loài Nho rừng V heyneana 37 Bảng 3.1 Kết định tính phần mặt đất lồi Nho rừng 65 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ NMR hợp chất VH1 70 Bảng 3.3 Dữ liệu phổ NMR hợp chất VH2 71 Bảng 3.4 Dữ liệu phổ NMR hợp chất VH3 72 Bảng 3.5 Dữ liệu phổ NMR hợp chất VH4 74 Bảng 3.6 Dữ liệu phổ NMR hợp chất VH5 76 Bảng 3.7 Dữ liệu phổ NMR hợp chất VH6 78 Bảng 3.8 Dữ liệu phổ NMR hợp chất VH7 79 Bảng 3.9 Dữ liệu phổ NMR hợp chất VH8 83 Bảng 3.10 Dữ liệu phổ hợp chất VH9 88 Bảng 3.11 Dữ liệu phổ hợp chất VH10 90 Bảng 3.12 Dữ liệu phổ hợp chất VH11 92 Bảng 3.13 Dữ liệu phổ hợp chất VH12 94 Bảng 3.14 Dữ liệu phổ hợp chất VH13 95 Bảng 3.15 Dữ liệu phổ hợp chất VH15 97 Bảng 3.16 Dữ liệu phổ hợp chất VH16 98 Phụ lục 14.3 Phổ DEPT hợp chất VH12 CD3OD Inten.(x1,000,000) 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 339.30 3.5 3.0 325.30 2.5 153.10 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 100 267.10 189.05 111.20 150 200 250 297.25 300 353.30 350 Phụ lục 14.4 Phổ MS hợp chất VH12 lxxvi 400 450 m/z Phụ lục 15 Dữ liệu phổ hợp chất VH13 Cấu trúc hóa học hợp chất VH13 Phụ lục 15.1 Phổ 1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) hợp chất VH13 Phụ lục 15.2 Phổ 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz) hợp chất VH13 Phụ lục 15.3 Phổ DEPT hợp chất VH13 CDCl3 Phụ lục 15.4 Phổ NOESY hợp chất VH13 lxxvii Phụ lục 15.1 Phổ 1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) hợp chất VH13 Phụ lục 15.2 Phổ 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz) hợp chất VH13 lxxviii lxxix Phụ lục 15.3 Phổ DEPT hợp chất VH13 CDCl3 lxxx lxxxi Phụ lục 15.4 Phổ NOESY hợp chất VH13 CDCl3 lxxxii Phụ lục 16 Sắc kí đồ đối chứng VH14 β-sitosterol n-Hexan-Ethyl acetat(6:1) n-Hexan-Aceton(8:1) Cấu trúc hóa học hợp chất VH20 lxxxiii Phụ lục 17 Dữ liệu phổ hợp chất VH15 Cấu trúc hóa học hợp chất VH15 Phụ lục 17.1 Phổ 1H-NMR (CDCl3 & CD3OD, 500 MHz) hợp chất VH15 Phụ lục 17.2 Phổ 13C-NMR (CDCl3 & CD3OD, 125 MHz) hợp chất VH15 Phụ lục 17.3 Phổ DEPT hợp chất VH15 CDCl3 & CD3OD lxxxiv Phụ lục 17.1 Phổ 1H-NMR (CDCl3 & CD3OD, 500 MHz) hợp chất VH15 Phụ lục 17.2 Phổ 13C-NMR (CDCl3 & CD3OD, 125 MHz) hợp chất VH15 lxxxv lxxxvi Phụ lục 17.3 Phổ DEPT hợp chất VH15 CDCl3 & CD3OD lxxxvii Phụ lục 18 Dữ liệu phổ hợp chất VH16 Cấu trúc hóa học hợp chất VH16 Phụ lục 18.1 Phổ 1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) hợp chất VH16 Phụ lục 18.2 Phổ 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz) hợp chất VH16 Phụ lục 18.3 Phổ DEPT hợp chất VH16 CDCl3 Phụ lục 18.4 Phổ MS hợp chất VH16 lxxxviii Phụ lục 18.1 Phổ 1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) hợp chất VH16 Phụ lục 18.2 Phổ 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz) hợp chất VH16 lxxxix Phụ lục 18.3 Phổ DEPT hợp chất VH16 CDCl3 xc