Luận án tiến sĩ nông nghiệp nghiên cứu nấm đối háng trichoderma phòng trừ bệnh mốc vàng do nấm aspergillus flavus in hại lạc tại nghệ an

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM HỒ THỊ NHUNG NGHIÊN CỨU NẤM ĐỐI KHÁNG Trichoderma PH NG TRỪ BỆNH MỐC VÀNG DO NẤM Aspergillus flavus in HẠI ẠC TẠI NGHỆ AN UẬN ÁN TIẾN SĨ NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI - 2017 i BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM HỒ THỊ NHUNG NGHIÊN CỨU NẤM ĐỐI KHÁNG Trichoderma PH NG TRỪ BỆNH MỐC VÀNG DO NẤM Aspergillus flavus in HẠI ẠC TẠI NGHỆ AN Chuyên ngành: Bảo vệ thực vật M số: 6 12 UẬN ÁN TIẾN SĨ NÔNG NGHIỆP Người hướng dẫn hoa học: GS.TS Vũ Triệu Mân PGS.TS Nguyễn Văn Viết Hà Nội, 2017 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu đƣợc trình bày luận án trung thực khách quan Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận án đƣợc cảm ơn, thơng tin trích dẫn luận án đƣợc rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận án Hồ Thị Nhung ii LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hồn thành luận án, tơi nhận đƣợc hƣớng dẫn, bảo tận tình thầy cô giáo, giúp đỡ, động viên bạn bè, đồng nghiệp gia đình Cho phép tơi đƣợc bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới GS.TS Vũ Triệu Mân, PGS.TS Nguyễn Văn Viết PGS.TS Trần Ngọc Lân định hƣớng nghiên cứu, tận tình hƣớng dẫn, dành nhiều cơng sức, thời gian tạo điều kiện cho tơi suốt q trình học tập thực đề tài Quá trình thực đề tài, hoàn thiện báo luận án, tơi đƣợc nhận giúp đỡ, góp ý q báu cô TS Đặng Vũ Thị Thanh thầy PGS.TS Hà Viết Cƣờng Nhân dịp này, xin đƣợc bày tỏ cảm ơn sâu sắc đến giúp đỡ nhiệt tình mà Thầy Cơ dành cho Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Ban Đào tạo Sau đại học - Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam đơn vị sinh hoạt chuyên môn Viện Bảo vệ thực vật, đặc biệt TS Phạm Bích Hiên TS Lê Mai Nhất tận tình giúp đỡ tơi q trình học tập bảo vệ luận án Tôi xin cảm ơn tập thể lãnh đạo, cán viên chức Trƣờng Đại học Vinh, TS Nguyễn Thị Thanh - chủ nhiệm đề tài KH&CN Độc lập cấp Nhà nƣớc (Mã Số: ĐTĐL.2011G/28/HĐ) thành viên đề tài giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi suốt q trình cơng tác thực đề tài Xin chân thành cảm ơn gia đình, ngƣời thân tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi mặt, động viên khuyến khích tơi suốt thời gian học tập Xin chân thành cảm ơn bạn bè, đồng nghiệp em sinh viên giúp đỡ tơi hồn thành luận án./ Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Nghiên cứu sinh Hồ Thị Nhung iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ii iii iv DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH v vi MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài 1 Mục đích yêu cầu 2.1 3.1 3.2 Mục đích Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Ý nghĩa khoa học Ý nghĩa thực tiễn Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu đề tài 2 2 4.1 Đối tƣợng nghiên cứu 4.2 Phạm vi nghiên cứu Những đóng góp luận án CHƢƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình nghiên cứu giới 1.1.1 Tình hình sản xuất lạc giới 1.1.2 Nghiên cứu bệnh mốc vàng nấm Aspergillus flavus Link hại lạc 1.1.3 Tình trạng nhiễm aflatoxin nấm A flavus tiết lạc 1.1.4 1.1.5 1.1.6 1.2 1.2.1 1.2.2 Biện pháp chẩn đoán nấm A flavus sinh độc tố aflatoxin sử dụng môi trƣờng CAM (Coconut Agar Medium) Nghiên cứu phƣơng pháp phòng trừ nấm A flavus sinh độc tố aflatoxin Nghiên cứu sử dụng nấm Trichoderma phịng trừ nấm A flavus sinh độc tố aflatoxin Tình hình nghiên cứu Việt Nam Tình hình sản xuất lạc Việt Nam tỉnh Nghệ An Nghiên cứu bệnh mốc vàng nấm Aspergillus flavus Link hại lạc 1.2.3 Tình trạng nhiễm aflatoxin nấm A flavus tiết lạc 1.2.4 Nghiên cứu phƣơng pháp phòng trừ nấm A flavus sinh độc tố aflatoxin 3 4 10 12 21 21 23 26 28 iii 1.2.5 Nghiên cứu sử dụng nấm Trichoderma phòng trừ nấm A flavus sinh độc tố aflatoxin 1.2.6 30 Ứng dụng nấm đối kháng Trichoderma phòng trừ nấm A flavus sinh độc tố aflatoxin 1.3 Những tồn vấn đề đề tài tập trung nghiên cứu CHƢƠNG II VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 35 36 37 2.1 2.2 Vật liệu nghiên cứu Thiết bị dụng cụ 37 37 2.3 Địa điểm thời gian nghiên cứu 37 2.4 2.5 Nội dung nghiên cứu Phƣơng pháp nghiên cứu 38 38 2.5.1 Nghiên cứu thực trạng nhiễm nấm A flavus hạt lạc đất trồng lạc Nghệ An Phƣơng pháp thu thập, phân lập, tuyển chọn nguồn nấm Trichoderma có khả đối kháng với nấm mốc A flavus hại lạc Nghệ An 2.5.2 2.5.3 Nghiên cứu biện pháp kỹ thuật sản xuất chế phẩm T asperellum phòng trừ nấm A flavus hại lạc Nghệ An 2.5.4 Nghiên cứu biện pháp kỹ thuật sử dụng chế phẩm T asperellum phòng trừ nấm A flavus hại lạc Nghệ An 2.6 Phƣơng pháp xử lý số liệu CHƢƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Thực trạng nhiễm nấm A flavus hạt lạc đất trồng lạc Nghệ An 3.1.1 Thành phần nấm hại hạt lạc Nghệ An năm 2012 3.1.2 Tỷ lệ nhiễm nấm A flavus hạt lạc thu từ chợ Nghệ An năm 2012 3.1.3 Tỷ lệ nhiễm nấm A flavus hạt lạc thu từ nông hộ Nghệ An năm 2012 3.1.4 Thành phần nấm hại đất trồng lạc Nghệ An năm 2012 3.1.5 Tỷ lệ nhiễm nấm A flavus đất trồng lạc điểm điều tra Nghệ An năm 2012 3.1.6 Khả sinh độc tố aflatoxin mẫu nấm A flavus phân lập đƣợc hạt lạc giống thu từ chợ huyện Nghi Lộc thành phố Vinh 3.1.7 Khả sinh độc tố aflatoxin mẫu nấm A flavus phân lập đƣợc hạt lạc giống thu từ nông hộ Nghệ An 38 45 55 56 56 56 56 57 58 62 iii 3.1.8 Khả sinh độc tố aflatoxin mẫu nấm A.flavus phân lập đƣợc từ đất trồng lạc Nghệ An 63 3.2 Thu thập, phân lập tuyển chọn nguồn nấm Trichoderma có khả 3.2.1 3.2.2 đối kháng với nấm mốc A flavus hại lạc Nghệ An Thu thập phân lập nấm đối kháng Trichoderma đất trồng lạc Nghiên cứu tuyển chọn nguồn nấm Trichoderma đối kháng cao 64 64 65 3.2.3 với nấm mốc A flavus hại lạc Định danh 15 nguồn nấm Trichoderma có khả đối kháng cao với nấm mốc A flavus hại lạc dựa vùng gen ITS-rDNA 3.2.4 Mơ tả đặc điểm hình thái T asperellum (Tri.020(2).NC) 3.3 Nghiên cứu biện pháp kỹ thuật sản xuất chế phẩm T asperellum 74 (Tri.020(2).NC) phòng trừ A flavus hại lạc Nghệ An Ảnh hƣởng loại môi trƣờng nuôi cấy giống cấp đến phát triển nấm T asperellum (Tri.020(2).NC) Lựa chọn môi trƣờng nhân giống cấp thích hợp cho nấm T asperellum (Tri.020(2).NC) 77 3.3.1 3.3.2 3.3.3 Lựa chọn môi trƣờng rắn ni nhân sinh khối thích hợp cho nấm T asperellum (Tri.020(2).NC) 3.4 Nghiên cứu biện pháp kỹ thuật sử dụng chế phẩm T asperellum phòng trừ A flavus hại lạc Nghệ An 3.4.1 Nghiên cứu ứng dụng chế phẩm nấm T asperellum phòng trừ nấm A flavus hại lạc điều kiện nhà lƣới 3.4.2 Nghiên cứu chế phẩm nấm T asperellum phòng trừ nấm A flavus hại lạc điều kiện đồng ruộng 77 78 82 95 3.4.3 Kết xây dựng đánh giá hiệu mơ hình sử dụng chế phẩm nấm T asperellum phịng trừ nấm A flavus hại lạc ngồi đồng ruộng vụ xuân Nghi Lộc KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ KẾT LUẬN KIẾN NGHỊ DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN TÀI LIỆU THAM KHẢO 107 112 112 113 114 115 PHỤ LỤC 124 iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT TT Chữ viết tắt Từ viết tắt A flavus Aspergillus flavus A nomius A parasiticus bt/g Aspergillus nomius Aspergillus parasiticus Bào tử/gam bt/ml Bào tử/ml BVTV Bảo vệ thực vật CAM CMA Coconut agar medium Corn Meal Aga 10 11 12 13 CFU CT CV ICRISAT LSD Colony forming units Công thức Coefficient of Variation International Crops Research Institute for the Semi-Arid Tropics Least Significant Difference 14 MEA 15 PCR 16 PDA Malt Extract Agar Polymerase Chain Reaction Potato Dextro Agar 17 18 19 20 21 PIRG RCB T atroviride T asperellum T aureoviride Percentage inhibition of radial growth Randommized Complete Block Trichoderma atroviride Trichoderma asperellum Trichoderma aureoviride 22 23 24 25 26 27 28 29 T hamatum T harzianum T koningii T pseudokonigii T reesci T virens TSM UV Trichoderma hamatum Trichoderma harzianum Trichoderma koningii Trichoderma pseudokonigii Trichoderma reesci Trichoderma virens Trichoderma specific medium Ultraviolet 30 WA 0,01% Water agar 0,01% v DANH MỤC BẢNG Tên bảng STT 1.1 Diện tích, suất sản lƣợng lạc giới (năm 2000 - 2014) Trang Diện tích, suất sản lƣợng lạc Việt Nam (năm 2004 - 2014) 21 1.3 Diện tích, suất sản lƣợng lạc Nghệ An (năm 2004 - 2014) 22 1.2 1.4 Kết điều tra tình hình nhiễm aflatoxin lạc Việt Nam 1.5 Mối tƣơng quan tỷ lệ hạt lạc bị nhiễm nấm A flavus với mức độ nhiễm độc tố aflatoxin 3.1 Thành phần nấm hại hạt lạc Nghệ An năm 2012 27 27 56 3.2 Tỷ lệ nhiễm nấm A flavus hạt lạc thu từ chợ huyện Nghi Lộc thành phố Vinh năm 2012 57 3.3 Tỷ lệ nhiễm A flavus hạt lạc thu từ nông hộ Nghệ An năm 2012 58 3.4 Thành phần nấm bệnh đất trồng lạc Nghệ An năm 2012 59 3.5 Tỷ lệ nhiễm nấm A.flavus đất trồng lạc điểm điều tra Nghệ An năm 2012 3.6 Số lƣợng mẫu nấm A flavus phân lập đƣợc hạt lạc giống thu từ chợ huyện Nghi Lộc thành phố Vinh sinh độc tố aflatoxin 3.7 63 Số lƣợng mẫu nấm A flavus phân lập đƣợc từ đất trồng lạc Nghệ An sinh độc tố aflatoxin 3.9 62 Số lƣợng mẫu nấm A flavus phân lập đƣợc hạt lạc giống thu từ nông hộ Nghệ An sinh độc tố aflatoxin 3.8 61 64 Tần suất xuất nấm Trichoderma đất trồng lạc điểm thu mẫu từ 2011-2013 64 3.10 Khả đối kháng nguồn nấm Trichoderma phân lập đƣợc từ đất trồng lạc Nghệ An nấm A flavus (Asp1.011NA) sau ngày nuôi cấy 65 3.11 Khả đối kháng nguồn nấm Trichoderma phân lập từ đất trồng lạc Thanh Hóa nấm mốc A flavus (Asp1.011NA) sau ngày nuôi cấy 66 3.12 Khả đối kháng nguồn nấm Trichoderma phân lập đƣợc từ đất trồng lạc Hà Tĩnh nấm mốc A flavus (Asp1.011NA) sau ngày nuôi cấy 67 v 3.13 Hiệu lực phòng trừ nguồn nấm Trichoderma nấm mốc A flavus chất kháng sinh bay sau ngày nuôi cấy 70 3.14 Kết định danh nguồn nấm Trichoderma dùng phần mềm TrichOKEY v 2.0 3.15 Đặc điểm hình thái nấm T asperellum (Tri.020(2).NC) 71 75 3.16 Ảnh hƣởng loại môi trƣờng nuôi cấy tới phát triển nấm T asperellum (Tri.020(2).NC) 3.17 77 Khối lƣợng đƣờng glucose thích hợp cho phát triển nấm T asperellum (Tri.020(2).NC) môi trƣờng lỏng sau 72 300C 78 3.18 Khối lƣợng giá đỗ thích hợp cho phát triển nấm T asperellum (Tri.020(2).NC) môi trƣờng lỏng sau 72 300C 79 3.19 Thời gian thu hồi sinh khối nấm T asperellum (Tri.020(2).NC) thích hợp mơi trƣờng nhân giống cấp 81 3.20 Sự phát triển nấm T asperellum (Tri.020(2).NC) loại chất rắn sau 10 ngày nuôi cấy 82 3.21 Sự phát triển nấm T asperellum (Tri.020(2).NC) tỷ lệ thóc/lƣợng nƣớc sau 10 ngày nuôi cấy 83 3.22 Sự phát triển nấm T asperellum (Tri.020(2).NC) túi mơi trƣờng thóc đƣợc bọc kín đảo trộn khác sau 10 ngày nuôi cấy 85 3.23 Sự phát triển nấm T asperellum (Tri.020(2).NC) túi mơi trƣờng thóc đƣợc để hở đảo trộn khác sau 10 ngày nuôi cấy 86 3.24 Sự phát triển nấm T asperellum (Tri.020(2).NC) với mức thời gian chiếu sáng khác sau 10 ngày nuôi cấy 87 3.25 Ảnh hƣởng chế phẩm T asperellum đến khối lƣợng chuột thí nghiệm sau ngày 90 3.26 Khả ức chế nấm T asperellum với nấm A flavus mức mật độ khác điều kiện nhà lƣới sau tuần gieo hạt 92 3.27 Ảnh hƣởng thời điểm sử dụng chế phẩm nấm T asperellum khác đến số lƣợng mầm bệnh nấm A flavus điều kiện nhà lƣới sau tuần gieo hạt 93 131 TGCACAACTCGCACCGGGAGCGCGGCGCGTCCACGTCCGTAAAACACCCAACTT TCTGAAATGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATACA AAAAGGGGGAGGAAGAGAA Trình tự vùng gen ITS nguồn nấm VN NC (hoặc Tri.002(2).NC) CAGCGGAGGGATCATTACCGAGTTTACAACTCCCAAACCCAATGTGAACGTTAC CAAACTGTTGCCTCGGCGGGGTCACGCCCCGGGTGCGTCGCAGCCCCGGAACCA GGCGCCCGCCGGAGGAACCAACCAAACTCTTTCTGTAGTCCCCTCGCGGACGTA TTTCTTTACAGCTCTGAGCAAAAATTCAAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGG ATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTG AATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAG TATTCTGGCGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCAACCCTCGAACCCCTCCGGG GGATCGGCGTTGGGGATCGGGACCCCTCACACGGGTGCCGGCCCCTAAATACAG TGGCGGTCTCGCCGCAGCCTCTCCTGCGCAGTAGTTTGCACAACTCGCACCGGG AGCGCGGC Trình tự vùng gen ITS nguồn nấm VN N (hoặc Tri.002(2).NX) GAACGTTACCAAACTGTTGCCTCGGCGGGGTCACGCCCCGGGTGCGTCGCAGCC CCGGAACCAGGCGCCCGCCGGAGGAACCAACCAAACTCTTTCTGTAGTCCCCTC GCGGACGTATTTCTTTACAGCTCTGAGCAAAAATTCAAAATGAATCAAAACTTTC AACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAA GTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCG CCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCAACCCTCGAACC CCTCCGGGGGATCGGCGTTGGGGATCGGGACCCCTCACACGGGTGCCGGCCCCT AAATACAGTGGCGGTCTCGCCGCAGCCTCTCCTGCGCAGTAGTTTGCACAACTC GCACCGGGAGCGCGGCGCGTCCACGTCCGTAAAACACCCA Trình tự vùng gen ITS nguồn nấm Tri.004(2).NX CAAGGTCTCCGTTGGTGAACCAGCGGAGGGATCATTACCGAGTTTACAACTCCC AAACCCAATGTGAACGTTACCAAACTGTTGCCTCGGCGGGGTCACGCCCCGGGT GCGTCGCAGCCCCGGAACCAGGCCCGCCCGCGCGGAGGAACCAACCAAACTCTT TCTGTAGTCCCCTCGCGGACGTATTTCTTACAGCTCTGAGCAAAAAAGTTCAATT TAAGGAATGAATCTTTCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGA TGAACGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTGAATGTGAATTGCAGAAATTCAGTTG AATCATCGAATCATCTTTGAACGCCACATTGCGCTTCCTTGAGAGCCTTGATTCA CAGTGAATTCTTGTTGAGGGCATGCATAAAACCGAGCGTCATTTCAACCTCGAA CCCCTTGTGGGCCTGGGGGGATCGGCGTTGGGGATCGGGACCCCTCACACGGGT GCCGGCCCCGAAATACAGTGGCGGTCTACCGCCGAAGCGTTCACTCTGGGTTCC TGCGCAGTAGACTTTGCACAACTCGCCACCGGTTCGAGCGCGGCGCCCGTCCAA ATCCGTA Trình tự vùng gen ITS nguồn nấm Tri 5( ) NĐ CCCAATGTGAACGTTACCAAACTGTTGCCTCGGCGGGATCTCTGCCCCGGGTGC GTCGCAGCCCCGGACCAAGGCGCCCGCCGGAGGACCAACCAAAACTCTTATTGT ATACCCCCTCGCGGGTTTTTTTATAATCTGAGCCTTCTCGGCGCCTCTCGTAGGC GTTTCGAAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGAT GAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATC ATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTC CGAGCGTCATTTCAACCCTCGAACCCCTCCGGGGGGTCGGCGTTGGGGATCGGC CCTGCCTTGGCGGTGGCCGTCTCCGAAATACAGTGGCGGTCTCGCCGCAGCCTCT CCTGCGCAGTAGTTTGCACACTCGCATCGGGAGCGCGGCGCGTCC Trình tự vùng gen ITS nguồn nấm VN NC (hoặc Tri.011(1).NC) AGGTCTCCGTTGGTGAACCAGCGGAGGGATCATTACCGAGTTTACAACTCCCAA ACCCAATGTGAACGTTACCAAACTGTTGCCTCGGCGGGGTCACGCCCCGGGTGC 132 GTCGCAGCCCCGGAACCAGGCGCCCGCCGGAGGAACCAACCAAACTCTTTCTGT AGTCCCCTCGCGGACGTATTTCTTTACAGCTCTGAGCAAAAATTCAAAATGAATC AAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAA ATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACG CACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCAAC CCTCGAACCCCTCCGGGGGATCGGCGTTGGGGATCGGGACCCCTCACACGGGTG CCGGCCCCTAAATACAGTGGCGGTCTCGCCGCAGCCTCTCCTGCGCAGTAGTTTG CACAACTCGCACCGGGAGCGCGGCGCGTCCACGTCCGTAAAACACCCAACTTTC TGAAATGTTGACCTCGGATCAGGT 3.9 Trình tự vùng gen ITS nguồn nấm VN 4N (hoặc Tri.014(1).NL) ACCCAATGTGAACGTTACCAAACTGTTGCCTCGGCGGGGTCACGCCCCGGGTGC GTCGCAGCCCCGGAACCAGGCGCCCGCCGGAGGAACCAACCAAACTCTTTCTGT AGTCCCCTCGCGGACGTATTTCTTTACAGCTCTGAGCAAAAATTCAAAATGAATC AAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAA ATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACG CACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCAAC CCTCGAACCCCTCCGGGGGATCGGCGTTGGGGATCGGGACCCCTCACACGGGTG CCGGCCCCTAAATACAGTGGCGGTCTCGCCGCAGCCTCTCCTGCGCAGTAGTTTG CACAACTCGCACCGGGAGCGCGGCGCGTCCACGTCCGTAAAACACCCAACTTTC TGAAATGTTGACCTCGGAT Trình tự vùng gen ITS nguồn nấm VN 9NC (hoặc Tri.019(4).NC) TTTTGAAAAAAAAAAAAAAGTAACAAGGTCTCCGTTGGTGAACCAGCGGAGGG ATCATTACCGAGTTTACAACTCCCAAACCCAATGGTGAACGTTACCAAACTGTTG CCTCGGCGGGGTCACGCCCCGGGTGCGTCGCAGCCCCGGAACCAGGCGCCCGCC GGAGGAACCAACCAAACTCTTTCTGTAGTCCCCTCGCGGACGTATTTCTTTACAG CTCTGAGCAAAAATTCAAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTT CTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAAT TCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGG CATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCAACCCTCGAACCCCTCCGGGGGATCGGCGTTG GGGATCGGGACCCCTCACACGGGTGCCGGCCCCTAAATACAGTGGCGGTCTCGC CGCAGCCTCTCCTGCGCAGTAGTTTGCACAACTCGCACCGGGAGCGCGGCGCGT CCACGTCCGTAAAACACCCAACTTTCTGAAATGTTGACCTCGGATCAGGTA Trình tự vùng gen ITS nguồn nấm VN 7ND (hoặc Tri 7( ) NĐ) TTTTGAAAAAAAAAAAAAAGTAACAAGGTCTCCGTTGGTGAACCAGCGGAGGG ATCATTACCGAGTTTACAACTCCCAAACCCAATGTGAACGTTACCAAACTGTTGC CTCGGCGGGGTCACGCCCCGGGTGCGTCGCAGCCCCGGAACCAGGCGCCCGCCG GAGGAACCAACCAAACTCTTTCTGTAGTCCCCTCGCGGACGTATTTCTTTACAGC TCTGAGCAAAAATTCAAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCT GGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTC AGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGC ATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCAACCCTCGAACCCCTCCGGGGGATCGGCGTTGG GGATCGGGACCCCTCACACGGGTGCCGGCCCCTAAATACAGTGGCGGTCTCGCC GCAGCCTCTCCTGCGCAGTAGTTTGCACAACTCGCACCGGGAGCGCGGCGCGTC CACGTCCGTAAAACACCCAACTTTCTGAAATGTTGACCTCGGAT Trình tự vùng gen ITS nguồn nấm VN 69Q (hoặc Tri.069(2).QX) TTTTGAAAAAAAAAAAAAAGTAACAAGGTCTCCGTTGGTGAACCAGCGGAGGGAT CATTACCGAGTTTACAACTCCCAAACCCAATGTGAACGTTACCAAACTGTTGCCTC GGCGGGGTCACGCCCCGGGTGCGTCGCAGCCCCGGAACCAGGCGCCCGCCGGAGG AACCAACCAAACTCTTTCTGTAGTCCCCTCGCGGACGTATTTCTTTACAGCTCTGAG CAAAAATTCAAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCG ATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATC 133 ATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTCC GAGCGTCATTTCAACCCTCGAACCCCTCCGGGGGATCGGCGTTGGGGATCGGGACC CCTCACACGGGTGCCGGCCCCTAAATACAGTGGCGGTCTCGCCGCAGCCTCTCCTG CGCAGTAGTTTGCACAACTCGCACCGGGAGCGCGGCGCGTCCACGTCCGTAAAAC ACCCAACTTTCTGAAATGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAA 3 Trình tự vùng gen ITS nguồn nấm VN011NL (hoặc Tri.011(1).NL) AAGGTCTCCGTTGGTGAACCAGCGGAGGGATCATTACCGAGTTTACAACTCCCA AACCCAATCGTGAACGTTACCAAACTGTTGCCTCGGCGGGGTCACGCCCCGGGT GCGTCGCAGCCCCGGAACCAGGCGCCCGCCGGAGGAACCAACCAAACTCTTTCT GTAGTCCCCTCGCGGACGTATTTCTTACAGCTCTGAGCAAAAATTCAAAATGAAT CAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGA AATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAAC GCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCAA CCCTCGAACCCCTCCGGGGGATCGGCGTTGGGGATCGGGACCCCTCACACGGGT GCCGGCCCCGAAATACAGTGGCGGTCTCGCCGCAGCCTCTCCTGCGCAGTAGTT TGCACAACTCGCACCGGGAGCGCGGCGCGTCCACGTCCGTAAAACACCCAACTT TCTGAAATGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATTTA AAAAAGGGAGAGAGAAAAAA 3.14 Trình tự vùng gen ITS nguồn nấm VN NC (hoặc Tri.020(2).NC) GGAGGGATCATTACCGAGTTTACAACTCCCAAACCCAATGTGAACGTTACCAAACTG TTGCCTCGGCGGGGTCACGCCCCGGGTGCGTCGCAGCCCCGGAACCAGGCGCCCGCC GGAGGAACCAACCAAACTCTTTCTGTAGTCCCCTCGCGGACGTATTTCTTTACAGCTC TGAGCAAAAATTCAAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCA TCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAAT CATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTCCG AGCGTCATTTCAACCCTCGAACCCCTCCGGGGGATCGGCGTTGGGGATCGGGACCCC TCACACGGGTGCCGGCCCCTAAATACAGTGGCGGTCTCGCCGCAGCCTCTCCTGCGC AGTAGTTTGCACAACTCGCACCGGGAGCGCGGCGCGTCCACGTCCGTAAAACACCCA ACTTTCTGAAATGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAA Trình tự vùng gen ITS nguồn nấm VN 7ND (hoặc Tri 7( ) NĐ) ACAAGGTCTCCGTTGGTGAACCAGCGGAGGGATCATTACCGAGTTTACAACTCC CAAACCCAATGTGAACGTTACCAAACTGTTGCCTCGGCGGGGTCACGCCCCGGG TGCGTCGCAGCCCCGGAACCAGGCGCCCGCCGGAGGAACCAACCAAACTCTTTC TGTAGTCCCCTCGCGGACGTATTTCTTACAGCTCTGAGCAAAAATTCAAAATGAA TCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCG AAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAA CGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCA ACCCTCGAACCCCTCCGGGGGATCGGCGTTGGGGATCGGGACCCCTCACACGGG TGCCGGCCCCGAAATACAGTGGCGGTCTCGCCGCAGCCTCTCCTGCGCAGTAGT TTGCACAACTCGCACCGGGAGCGCGGCGCGTCCACGTCCGTAAAACACCCAACT TTCTGAAATGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAA lý thống ê 4.1 Các thí nghiệm nhà lưới ** Thời điểm BALANCED ANOVA FOR VARIATE SLMB FILE TRI_TD 12/ 8/** 16:15 PAGE VARIATE V003 SLMB LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 106.000 35.3333 476.99 0.000 LL 1.55556 777778 10.50 0.012 134 * RESIDUAL 444458 740763E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 108.000 9.81818 BALANCED ANOVA FOR VARIATE GIAMSODC FILE TRI_TD 12/ 8/** 16:15 PAGE VARIATE V004 GIAMSODC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 7949.90 2649.97 719.33 0.000 LL 4.58141 2.29070 0.62 0.572 * RESIDUAL 22.1038 3.68396 * TOTAL (CORRECTED) 11 7976.59 725.144 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TRI_TD 12/ 8/** 16:15 PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS SLMB GIAMSODC CT1 11.5556 0.000000 CT2 3.66667 68.2870 CT3 5.22222 54.8611 CT4 7.55556 34.4907 SE(N= 3) 0.157137 1.10815 5%LSD 6DF 0.543563 3.83325 MEANS FOR EFFECT LL LL NOS SLMB GIAMSODC 7.33333 38.8889 7.16667 40.2778 6.50000 39.0625 SE(N= 4) 0.136085 0.959683 5%LSD 6DF 0.470739 3.31970 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TRI_TD 12/ 8/** 16:15 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SLMB GIAMSODC GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 12) SD/MEAN | NO BASED ON BASED ON % | OBS TOTAL SS RESID SS | 12 7.0000 3.1334 0.27217 3.9 0.0000 12 39.410 26.929 1.9194 4.9 0.0000 |LL | | | 0.0116 0.5715 | | | | **Liều lượng BALANCED ANOVA FOR VARIATE SLMB FILE TRI_LL 12/ 8/** 16:23 PAGE VARIATE V003 SLMB LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 166.102 55.3673 618.60 0.000 LL 2.35185 1.17592 13.14 0.007 * RESIDUAL 537026 895044E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 168.991 15.3628 BALANCED ANOVA FOR VARIATE GIAMSODC FILE TRI_LL 12/ 8/** 16:23 PAGE 135 VARIATE V004 GIAMSODC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 9035.91 3011.97 ****** 0.000 LL 3.37201 1.68601 3.34 0.106 * RESIDUAL 3.03026 505043 * TOTAL (CORRECTED) 11 9042.31 822.028 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TRI_LL 12/ 8/** 16:23 PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS SLMB GIAMSODC CT1 13.5556 0.000000 CT2 7.44444 45.0881 CT3 3.11111 77.0362 CT4 8.66667 36.1037 SE(N= 3) 0.172728 0.410302 5%LSD 6DF 0.597492 1.41930 MEANS FOR EFFECT LL LL NOS SLMB GIAMSODC 7.66667 39.4737 8.75000 38.9535 8.16667 40.2439 SE(N= 4) 0.149586 0.355332 5%LSD 6DF 0.517443 1.22915 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TRI_LL 12/ 8/** 16:23 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SLMB GIAMSODC GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 12) SD/MEAN | NO BASED ON BASED ON % | OBS TOTAL SS RESID SS | 12 8.1944 3.9195 0.29917 3.7 0.0000 12 39.557 28.671 0.71066 1.8 0.0000 |LL | | | 0.0070 0.1057 | | | | Các thí nghiệm đồng ruộng * Số lượng mầm bệnh BALANCED ANOVA FOR VARIATE SLMBTH FILE SLMB 2/ 8/** 15:24 PAGE VARIATE V004 SLMBTH LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CSD$ 74.0139 74.0139 216.04 0.000 LL$ 2653.82 884.607 ****** 0.000 CSD$*LL$ 21.9306 7.31019 21.34 0.000 * RESIDUAL 24 8.22208 342587 * TOTAL (CORRECTED) 31 2757.99 88.9673 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HLMB FILE SLMB 2/ 8/** 15:24 PAGE VARIATE V005 HLMB LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= 136 CSD$ 708.365 708.365 359.70 0.000 LL$ 27548.4 9182.80 ****** 0.000 CSD$*LL$ 247.992 82.6640 41.98 0.000 * RESIDUAL 24 47.2638 1.96933 * TOTAL (CORRECTED) 31 28552.0 921.033 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE SLMB 2/ 8/** 15:24 PAGE MEANS FOR EFFECT CSD$ CSD$ NOS SLMBTH HLMB 16 13.8333 55.2480 16 16.8750 45.8381 SE(N= 16) 0.146327 0.350832 5%LSD 24DF 0.427088 1.02398 MEANS FOR EFFECT LL$ LL$ NOS SLMBTH HLMB 31.0417 0.000000 11.5417 62.8162 9.95833 67.9424 8.87500 71.4137 SE(N= 8) 0.206938 0.496151 5%LSD 24DF 0.603994 1.44813 MEANS FOR EFFECT CSD$*LL$ CSD$ LL$ NOS SLMBTH HLMB 1 30.9167 0.000000 9.66667 68.7083 7.66667 75.2018 4 7.08333 77.0819 31.1667 0.000000 2 13.4167 56.9241 12.2500 60.6830 4 10.6667 65.7454 SE(N= 4) 0.292655 0.701663 5%LSD 24DF 0.854177 2.04796 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE SLMB 2/ 8/** 15:24 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SLMBTH HLMB GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CSD$ (N= 32) SD/MEAN | NO BASED ON BASED ON % | OBS TOTAL SS RESID SS | 32 15.354 9.4322 0.58531 3.8 0.0000 32 50.543 30.349 1.4033 2.8 0.0000 |LL$ | | | 0.0000 0.0000 |CSD$*LL$| | | | | | | 0.0000 0.0000 * Tỷ lệ hạt nhiễm nấm A flavus sau 12 tháng bảo quản BALANCED ANOVA FOR VARIATE HATNHIEM FILE HN12T 26/ 7/** 16: PAGE VARIATE V004 HATNHIEM LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CSD$ 282.031 282.031 342.73 0.000 LL$ 4775.59 1591.86 ****** 0.000 CSD$*LL$ 105.344 35.1146 42.67 0.000 137 * RESIDUAL 24 19.7493 822886 * TOTAL (CORRECTED) 31 5182.72 167.184 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HLHN FILE HN12T 26/ 7/** 16: PAGE VARIATE V005 HLHN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CSD$ 2015.21 2015.21 555.28 0.000 LL$ 32800.7 10933.6 ****** 0.000 CSD$*LL$ 693.141 231.047 63.66 0.000 * RESIDUAL 24 87.1000 3.62917 * TOTAL (CORRECTED) 31 35596.2 1148.26 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE HN12T 26/ 7/** 16: PAGE MEANS FOR EFFECT CSD$ CSD$ NOS HATNHIEM HLHN 16 14.1250 63.0529 16 20.0625 47.1815 SE(N= 16) 0.226783 0.476259 5%LSD 24DF 0.661915 1.39007 MEANS FOR EFFECT LL$ LL$ NOS HATNHIEM HLHN 38.1250 0.000000 12.1250 68.1377 9.75000 74.3505 8.37500 77.9806 SE(N= 8) 0.320719 0.673532 5%LSD 24DF 0.936090 1.96585 MEANS FOR EFFECT CSD$*LL$ CSD$ LL$ NOS HATNHIEM HLHN 1 38.2500 0.000000 8.50000 77.7542 5.25000 86.2137 4 4.50000 88.2436 38.0000 0.000000 2 15.7500 58.5212 14.2500 62.4872 4 12.2500 67.7176 SE(N= 4) 0.453565 0.952518 5%LSD 24DF 1.32383 2.78013 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE HN12T 26/ 7/** 16: PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HATNHIEM HLHN GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CSD$ (N= 32) SD/MEAN | NO BASED ON BASED ON % | OBS TOTAL SS RESID SS | 32 17.094 12.930 0.90713 5.3 0.0000 32 55.117 33.886 1.9050 3.5 0.0000 |LL$ | | | 0.0000 0.0000 |CSD$*LL$| | | | | | | 0.0000 0.0000 138 Phụ lục ác định nguồn nấm Trichoderma phần mềm TrichOKEY v.2 (http://www.isth.info/tools/molkey/index.php) Working with sequence: VN013NC Analysing sequence: VN013NC VN013NC - Trichoderma koningiopsis | reliability: high | full mode | Biodiversity | Check in VN013NC - Trichoderma ovalisporum | reliability: standard | Check in full mode | VN013NC - Trichoderma asperellum | reliability: high | full mode | Biodiversity | Biodiversity | Check in Working with sequence: VN013NC Analysing sequence: VN053TG VN053TG - Trichoderma koningiopsis | reliability: high | full mode | Biodiversity | Check in VN053TG - Trichoderma ovalisporum | reliability: standard | in full mode | Biodiversity | Check 139 VN053TG - Trichoderma asperellum | reliability: high | mode | Biodiversity | Check in full Working with sequence: VN053TG Analysing sequence: VN095TH VN095TH - Trichoderma koningiopsis | reliability: high | full mode | Biodiversity | Check in VN095TH - Trichoderma ovalisporum | reliability: standard | in full mode | VN095TH - Trichoderma asperellum | reliability: high | mode | Biodiversity | Check Biodiversity | Check in full Working with sequence: VN095TH Analysing sequence: VN002NC VN002NC - Trichoderma koningiopsis | reliability: high | full mode | Biodiversity | Check in 140 VN002NC - Trichoderma ovalisporum | reliability: standard | in full mode | VN002NC - Trichoderma asperellum | reliability: high | mode | Biodiversity | Check Biodiversity | Check in full Working with sequence: VN002NC Analysing sequence: VN002NX VN002NX - Trichoderma koningiopsis | reliability: high | full mode | Biodiversity | Check in VN002NX - Trichoderma ovalisporum | reliability: standard | in full mode | VN002NX - Trichoderma asperellum | reliability: high | mode | Working with sequence: VN002NX Biodiversity | Check Biodiversity | Check in full 141 Analysing sequence: Tri.004(2).NX Tri.004(2).NX - Trichoderma asperellum | reliability: high | full mode | Biodiversity | Check in Working with sequence: Tri.004(2).NX Analysing sequence: Tri.005(2).NĐ Tri.005(2).NĐ - Hypocrea lixii/Trichoderma harzianum | reliability: high | Biodiversity | Check in full mode | Working with sequence: Tri.005(2).NĐ Analysing sequence: VN011NC VN011NC - Trichoderma koningiopsis | reliability: high | full mode | Biodiversity | Check in VN011NC - Trichoderma ovalisporum | reliability: standard | in full mode | VN011NC - Trichoderma asperellum | reliability: high | mode | Working with sequence: VN011NC Biodiversity | Check Biodiversity | Check in full 142 Analysing sequence: VN014NL VN014NL - Trichoderma koningiopsis | reliability: high | full mode | Biodiversity | Check in VN014NL - Trichoderma ovalisporum | reliability: standard | in full mode | VN014NL - Trichoderma asperellum | reliability: high | mode | Biodiversity | Check Biodiversity | Check in full Working with sequence: VN014NL Analysing sequence: VN019NC VN019NC - Trichoderma koningiopsis | reliability: high | full mode | Biodiversity | Check in VN019NC - Trichoderma ovalisporum | reliability: standard | in full mode | VN019NC - Trichoderma asperellum | reliability: high | mode | Biodiversity | Check Biodiversity | Check in full 143 Working with sequence: VN019NC Analysing sequence: VN027ND VN027ND - Trichoderma koningiopsis | reliability: high | full mode | Biodiversity | Check in VN027ND - Trichoderma ovalisporum | reliability: standard | in full mode | VN027ND - Trichoderma asperellum | reliability: high | mode | Biodiversity | Check Biodiversity | Check in full Working with sequence: VN027ND Analysing sequence: VN069QX VN069QX - Trichoderma koningiopsis | reliability: high | full mode | Biodiversity | Check in VN069QX - Trichoderma ovalisporum | reliability: standard | in full mode | Biodiversity | Check 144 VN069QX - Trichoderma asperellum | reliability: high | mode | Biodiversity | Check in full Working with sequence: VN069QX Analysing sequence: VN011NL VN011NL - Trichoderma koningiopsis | reliability: high | full mode | Biodiversity | Check in VN011NL - Trichoderma ovalisporum | reliability: standard | in full mode | VN011NL - Trichoderma asperellum | reliability: high | mode | Biodiversity | Check Biodiversity | Check in full Working with sequence: VN011NL Analysing sequence: VN020NC VN020NC - Trichoderma koningiopsis | reliability: high | full mode | Biodiversity | Check in 145 VN020NC - Trichoderma ovalisporum | reliability: standard | in full mode | VN020NC - Trichoderma asperellum | reliability: high | mode | Biodiversity | Check Biodiversity | Check in full Working with sequence: VN020NC Analysing sequence: VN007ND VN007ND - Trichoderma koningiopsis | reliability: high | full mode | Biodiversity | Check in VN007ND - Trichoderma ovalisporum | reliability: standard | in full mode | VN007ND - Trichoderma asperellum | reliability: high | mode | Biodiversity | Check Biodiversity | Check in full