Phân lập và định lượng 5 fluoro mdmb pica từ một số hợp chất cần sa tổng hợp trong các mẫu bắt được tại các tỉnh phía nam ( từ năm 2018 2020 )

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGUYỄN HÙNG CƯỜNG PHÂN LẬP VÀ ĐỊNH LƯỢNG – FLUORO – MDMB – PICA TỪ MỘT SỐ HỢP CHẤT CẦN SA TỔNG HỢP TRONG CÁC MẪU BẮT ĐƯỢC TẠI CÁC TỈNH PHÍA NAM (TỪ NĂM 2018 - 2020) LUẬN VĂN THẠC SỸ DƯỢC HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGUYỄN HÙNG CƯỜNG PHÂN LẬP VÀ ĐỊNH LƯỢNG – FLUORO – MDMB – PICA TỪ MỘT SỐ HỢP CHẤT CẦN SA TỔNG HỢP TRONG CÁC MẪU BẮT ĐƯỢC TẠI CÁC TỈNH PHÍA NAM (TỪ NĂM 2018 - 2020) CHUYÊN NGÀNH: KIỂM NGHIỆM THUỐC – ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 8720210 LUẬN VĂN THẠC SỸ DƯỢC HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS NGUYỄN ĐĂNG TIẾN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2021 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu Các số liệu nêu luận văn trung thực, khách quan chưa công bố cơng trình khác Tác giả luận văn Nguyễn Hùng Cường ii Luận văn tốt nghiệp thạc sĩ dược học – Năm học 2019-2021 Chuyên ngành: Kiểm nghiệm thuốc độc chất – Mã số: 8720210 PHÂN LẬP VÀ ĐỊNH LƯỢNG – FLUORO – MDMB – PICA TỪ MỘT SỐ HỢP CHẤT CẦN SA TỔNG HỢP TRONG CÁC MẪU BẮT ĐƯỢC TẠI CÁC TỈNH PHÍA NAM (TỪ NĂM 2018 – 2020 ) Nguyễn Hùng Cường Giảng viên hướng dẫn: TS Nguyễn Đăng Tiến Từ khóa: Cần sa tổng hợp, cỏ Mỹ, – Fluoro – MDMB - PICA Mở đầu: “Cỏ Mỹ” chứa cần sa tổng hợp, có tác dụng nhanh mạnh gấp nhiều lần so với cần sa, có khả gây nghiện, ảo giác có tác dụng nguy hiểm đến người sử dụng Cỏ Mỹ dạng ma túy giới trẻ sử dụng nhiều Một hợp chất bật thường phát cỏ Mỹ – FLUORO – MDMB – PICA Một khó khăn lớn vụ án thiếu chất chuẩn để phục vụ cho công tác giám định Trong nghiên cứu này, lần Việt Nam, hợp chất – FLUORO – MDMB – PICA phân lập xác định cấu trúc phương pháp phân tích (TLC, IR, UV, GC-MS, NMR) nhằm định hướng sử dụng chất phân lập chất chuẩn làm việc phịng thí nghiệm giám định Đề tài xây dựng thẩm định thành cơng quy trình định lượng cỏ Mỹ phương pháp GC/MS Đối tượng - Phương pháp nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu: – Fluoro – MDMB – PICA chứa dạng cỏ Mỹ thu thập vụ án Việt Nam từ năm 2018 đến 2020 Phương pháp nghiên cứu: Cao chiết dicloromethan từ cỏ Mỹ (10g) tiến hành phân lập sắc ký cột (45 × cm, 0,040 - 0,063 mm) rửa giải hệ dung môi n-hexan – ethyl acetat theo tỷ lệ tăng dần độ phân cực Phân đoạn chứa – Fluoro – MDMB – PICA kết tinh lại xác định độ tinh khiết sắc ký lớp mỏng HPLC/PDA, xác định cấu trúc phổ IR, UV, MS NMR Định lượng – Fluoro – MDMB – PICA cỏ Mỹ phương pháp GC/MS cột HP – 5MS (30 m x 250 µm x 0,25 µm) với thời gian sắc ký 6,8 phút iii Kết quả: Đã phân lập 0,9 g – Fluoro – MDMB – PICA với độ tinh khiết HPLC/PDA 99,46% Xây dựng thành cơng quy trình định lượng – Fluoro – MDMB – PICA phương pháp GC/MS thẩm định đạt yêu cầu tính đặc hiệu, tính tuyến tính, độ xác, độ với giới hạn định lượng 0,2 μg/mL Kết hàm lượng trung bình – Fluoro – MDMB – PICA 20 mẫu 2,2 mg/100 mg cỏ Mỹ Kết luận: Đề tài phân lập thành công 0,9 g hợp chất – Fluoro – MDMB – PICA đạt độ tính khiết 99% xây dựng quy trình định lượng – Fluoro – MDMB – PICA có cỏ Mỹ phương pháp GC/MS đạt yêu cầu thẩm định phương pháp theo hướng dẫn ICH iv Master’s Thesis – Academic course: 2019 - 2021 Specialty: Drug Quality Control & Toxicology – Code: 8720210 ISOLATION AND PERIODICIZATION OF - FLUORO - MDMB - PICA FROM SOME ORDER OF CONDITIONS OF STARTING IN THE PROJECT SPECIALIZATION (FROM 2018 - 2020) Nguyen Hung Cuong Supervisor: Dr Nguyen Dang Tien Keywords: Synthetic cannabinoids, – Fluoro – MDMB - PICA, herbal mixtures Introduction: "American grass" contains synthetic marijuana, which is fast-acting and many times stronger than marijuana, has the ability to cause addiction, hallucinogens and dangerous effects on users American grass is the most commonly used drug among young people today One of the prominent compounds commonly detected in American grass is - FLUORO - MDMB - PICA One of the biggest difficulties in the cases is the lack of quality standards for forensic examination In this study, for the first time in Vietnam, compound - FLUORO - MDMB - PICA was isolated and structurally determined by analytical methods (TLC, IR, UV, GCMS, NMR) to identify guidelines for the use of isolates as working standards in inspection laboratories The project has also built and successfully evaluated the process of quantifying American weed by GC/MS method Materials and methods: Object of study: – Fluoro – MDMB – PICA contained in American grasses collected in cases in Vietnam from 2018 to 2020 Method: Dichloromethane extract from American grass (10g) was isolated on column chromatography (45 × cm, 0.040 - 0.063 mm) and eluted with n-hexane - ethyl acetate solvent system according to the ratio of increasing polarity The fraction containing - Fluoro - MDMB - PICA was recrystallized and the purity was determined by thin layer chromatography and HPLC/PDA, and the structure was determined by IR, UV, MS and NMR spectroscopy Quantification of - Fluoro MDMB - PICA in American grass by GC/MS method on HP - 5MS column (30 m x 250 µm x 0.25 µm) with chromatographic time of 6.8 v Results: 0.9 g - Fluoro - MDMB - PICA was isolated with a purity on HPLC/PDA of 99.46% Successfully a quantitative process of 5-Fluoro - MDMB PICA by GC/MS method was built and verified to meet the requirements of specificity, linearity, accuracy, accuracy with quantification limit of 0,2 μg/mL The average concentration of - Fluoro - MDMB - PICA in 20 samples was 2.2 mg/100 mg of American grass Conclusion: In the project, 0.9 g of compound - Fluoro - MDMB – PICA was isolated with purity over 99% and a quantitative process of 5-Fluoro - MDMB PICA in American grass by GC/MS method was built and meets the requirements for method validation according to the ICH guidelines vi LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến toàn thể quý thầy cô khoa Dược – Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh tận tình dạy bảo truyền đạt kiến thức cho em suốt khoảng thời gian học tập trường Em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến thầy TS Nguyễn Đăng Tiến - Viện trưởng Phân Viện Khoa học hình Thành phố Hồ Chí Minh tạo điều kiện cho em thực đề tài Em xin cảm ơn thầy dẫn tận tình, định hướng giúp đỡ em nhiều trình nghiên cứu Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến ThS Nguyễn Hồng Hà – Phó Viện trưởng Phân Viện Khoa học hình Thành phố Hồ Chí Minh tạo điều kiện cho em suốt trình thực đề tài phân viện Em xin chân thành cảm ơn đến toàn thể anh chị đội giám định hóa lý tận tình giúp đỡ em hết mình, yêu thương tạo điều kiện tốt cho em để em hồn thành tốt đề tài Em xin cảm ơn ThS Nguyễn Tấn Đạt, ThS Nguyễn Anh Tuấn, DS Phạm Phước Đầy, DS Lê Nguyễn Trung Nguyên giúp đỡ em thời gian qua để em hoàn thành tốt đề tài Thân gửi lời cảm ơn đến người bạn thực đề tài bên cạnh, động viên giúp đỡ suốt thời gian vừa qua Cuối cùng, với tất lịng kính u chân thành nhất, xin cảm ơn ba mẹ gia đình chỗ dựa vật chất tinh thần vững cho đường học tập hồn thiện thân để có ngày hôm Một lần nữa, xin chân thành cảm ơn tất cả! vii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn vi Mục lục vii Danh mục từ viết tắt viii Danh mục bảng x Danh mục sơ đồ xi Danh mục hình .xii MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Một số khái niệm chất ma túy cần sa tổng hợp 1.2 Hợp chất – Fluoro – MDMB – PICA 11 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Đối tượng nghiên cứu 17 2.2 Phương pháp nghiên cứu 20 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 29 3.1 Xây dựng quy trình phân lập 29 3.2 Xác định độ tinh khiết cấu trúc hợp chất phân lập 33 3.3 Xây dựng thẩm định quy trình định lượng hợp chất phân lập 44 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 56 4.1 Xây dựng quy trình phân lập 56 4.2 Xây dựng thẩm định quy trình định lượng hợp chất phân lập 58 CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 64 5.1 Kết luận 64 5.2 Kiến nghị 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC viii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Từ viết tắt 13 Từ gốc C-NMR 13 H-NMR C-Nuclear Magnetic Resonance H-Nuclear Magnetic Resonance Nghĩa tiếng Việt Cộng hưởng từ hạt nhân C13 Cộng hưởng từ hạt nhân proton MDMB: Methyl dimethyl butanoat 5-Fluoro- P: pentyl MDMB-PICA I: indol 5-Fluoro-MDMB-PICA CA: liên kết carboxamid CB1 Cannabinoid Thụ thể cannabinoid CB2 Cannabinoid Thụ thể cannabinoid DEA Drug Enforcement Administration Cơ quan phòng chống ma túy Distortionless enhancement by DEPT polarization transfer GC/MS HPLC Gas Chromatography-Mass Sắc ký khí ghép khối Spectrometry phổ High Performance Liquid Chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao Heteronuclear multiple bond HSQC correlation Hội nghị quốc tế hài ICH International conference on hòa thủ tục đăng ký Harmonization dược phẩm sử dụng cho người IR Infrared Spectroscopy Phổ hồng ngoại Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-4 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-5 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-6 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-7 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-8 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-9 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-10 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-11 PHỤ LỤC Phổ MS NC phân lập Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-12 PHỤ LỤC Tính tương thích hệ thống định lượng GC – MS STT Trung bình SD RSD % – Fluoro – MDMB – PICA (AS) Hệ Thời Diện tích số gian đỉnh kéo lưu đuôi 6881939,91 6,83 1,3 6721849,79 6,82 1,3 6847803,87 6,82 1,3 6671508,06 6,82 1,3 6629042,24 6,82 1,3 6799682,37 6,82 1,3 6758637,71 6,82 100576,95 1,49 Benzydamin (IS) Tỉ lệ diện tích đỉnh Diện tích đỉnh Thời gian lưu Hệ số kéo đuôi 3682994,69 3607873,07 3650176,21 3584121,11 3542471,63 3596914,31 5,21 5,21 5,21 5,21 5,21 5,21 1,3 1,3 1,3 1,3 1,3 1,3 1,8686 1,8631 1,8760 1,8614 1,8713 1,8904 1,30 3610758,50 5,21 1,30 1,8718 0,01 0,00 49687,94 0,00 0,00 0,01 0,08 0,00 1,38 0,00 0,00 0,56 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-13 PHỤ LỤC Tính tuyến tính định lượng GC – MS STT Diện tích Nồng độ (μg/mL) 5F-mdmb-pica (AS) Benzydamin (IS) Tỉ lệ diện tích 9,954 843312,27 4969456,47 0,17 19,908 2184838,11 4656444,66 0,47 29,862 3692611,45 4490740,34 0,82 39,816 4993781,72 4229232,42 1,18 49,770 7359707,9 4470649,57 1,65 59,724 10255506,03 5007069,53 2,05 79,632 12837646,05 4561551,13 2,81 99,540 13997764,85 3910451,31 3,58 Tỉ lệ diện tích Đồ thị biểu diễn mối tương quan giữa nồng độ tỷ lệ diện tích pic AS/IS 4.00 3.50 3.00 2.50 2.00 1.50 1.00 0.50 0.00 0.000 ŷ = 0.0388x - 0.2925 R² = 0.9986 20.000 40.000 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 60.000 80.000 100.000 120.000 Nồng độ (μg/mL) Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-14 SUMMARY OUTPUT Regression Statistics Multiple R R Square Adjusted R Square Standard Error Observations 0.999282028 0.998564571 0.998325333 0.048174622 ANOVA df Regression Residual Total Intercept X Variable Ftn SS MS F Significance F 9.686844925 9.686844925 4173.935297 9.2476E-10 0.013924765 0.002320794 9.70076969 Coefficients Standard Error t Stat P-value Lower 95% Upper 95% Lower 95.0% Upper 95.0% -0.292481297 0.033767953 8.661505228 0.000130601 -0.375108501 -0.209854094 -0.375108501 -0.209854094 0.038819939 0.000600872 64.60600047 9.2476E-10 0.037349658 0.04029022 0.037349658 0.04029022 Flt ta tb Tlt 4173.94 5.99 64.61 8.66 2.45 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-15 PHỤ LỤC Sắc ký đồ thẩm định tính tuyến tính GC-MS 9,954ppm 19,908ppm 29,862ppm 39,816ppm 49,770ppm 59,724ppm 79,632ppm 99,540ppm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-16 PHỤ LỤC Sắc ký đồ thẩm định độ GC – MS 60% 100% 160% Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-17 PHỤ LỤC LOD, LOQ định lượng GC 0,06 ppm 0,2 ppm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-18 PHỤ LỤC 10 Ứng dụng định lượng – Fluoro – MDMB – PICA GC – MS Năm 2019 (B1-B5) Năm 2018 (A1-A10) Mẫu Nồng độ (µg/mL) Năm 2020 (C1-C5) Hàm lượng (%) Mẫu Nồng độ (µg/mL) Hàm lượng (%) A1 32,354 1,62 B1 43,865 2,19 A2 55,294 2,76 B2 58,913 2,94 A3 46,504 2,33 B3 42,190 2,11 A4 32,024 1,60 B4 45,454 2,27 A5 48,590 2,43 B5 61,251 3,06 A6 34,164 1,71 C1 43,110 2,15 A7 35,955 1,80 C2 50,986 2,54 A8 35,920 1,79 C3 47,547 2,37 A9 34,505 1,72 C4 55,238 2,76 A10 36,702 1,83 C5 48,586 2,42 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn