Báo cáo khoa học CHUẩN HOá PHƯƠNG PHáP SàNG LọC Định TíNH KIểM SOáT TồN DƯ KHáNG SINH TRONG THựC PHẩM Có NGUồN GốC ĐộNG VậT THEO QUI ĐịNH Số 2002/657/EC CHUÈN HO¸ PH¦¥NG PH¸P SµNG LäC §Þnh TÝNH KIÓM S[.]
Báo cáo khoa học: CHUẩN HOá PHƯƠNG PHáP SàNG LọC Định TíNH KIểM SOáT TồN DƯ KHáNG SINH TRONG THựC PHẩM Có NGUồN GốC ĐộNG VậT THEO QUI ĐịNH Số 2002/657/EC CHUẩN HOá PHƯƠNG PHáP SàNG LọC Định TíNH KIểM SOáT TồN DƯ KHáNG SINH TRONG THựC PHẩM Có NGUồN GốC ĐộNG VậT THEO QUI ĐịNH Số 2002/657/EC analytical validation of screening methods for the control of antibiotic residues in food from animal origin according to the decision 2002/657/EC Ph¹m Kim Đăng1, Marie-Louise Scippo2; Guy Degand2; Caroline Douny2; Guy Maghuin-Rogister2 SUMMARY To answer the increasing social request in results of analysis in certain fields such as the environment, the agro-alimentary, the pharmaceutics and the medico-lega domain, it is necessary to be able to guarantee the liability and the traceability of the provided results The accuracy and the agreement of the results of analyses coming from intra and inter-laboratories comparisons are depending not only of the quality of the laboratory and the qualification of staff, but also of the validation of the methods used According to the scope of the method of analyses, various parameters have to be validated To meet the performances criteria of analytic methods (in the field of residues and contaminants in food) described in the European Legislation, the CRL (Community Reference Laboratory) of FougÌres (France) wrote guidelines and recommendations to validate screening methods The objective of this review is to provide to the reader definitions, validation principles and the parameters of performance of analytical methods in general, and recommendations in the case of the validation of a screening method for the control of antibiotic residues in food of animal origin according to the European Commission Decision 2002/657/EC Key words: analytical validation, screening method, antibiotic residue ĐặT VấN Đề Trớc đòi hỏi ngày cao chất lợng độ an toàn sản phẩm có nguồn gốc từ động vật ngời, việc tăng cờng quản lý công đoạn sản xuất việc phân tích kiểm tra, kiểm soát chất tồn d có ảnh hởng đến sức khoẻ cộng đồng cần thiết Trên thực tế, sử dụng phơng pháp, qui trình nhng kết phân tích phòng thí nghiệm, chí phòng thí nghiệm lại khác (Jardy, 1997; Vial, 1998) Mục đích trình phân tích nói chung tìm hàm lợng thực chất cần phân tích, nhng khó khăn lớn ngời phân tích thờng giá trị hàm lợng thực Do kết phân tích nói chung phân tích tồn d nói riêng có xác hay không phụ thuộc nhiều yếu tố nh: điều kiện trang thiết bị phòng thí nghiệm, ngời, đặc biệt phơng pháp có đợc chuẩn hoá hay không Để đảm bảo cách chắn tin cậy kết phân tích chất tồn d nói chung kháng sinh nói riêng sản phẩm động vật, Cộng đồng chung Châu Âu đV định số 2002/657/EC theo đặt tiêu chuẩn phơng Khoa Chăn nuôi- Thuỷ sản, Trờng ĐH Nông nghiệp I Phòng thí nghiệm phân tích thực phẩm có nguồn gốc động vật, Bộ môn khoa học thực phẩm, Khoa Thú y, Đại học Liège, Vơng quốc Bỉ pháp phân tích tồn d thực phẩm (EEC, 2002) Một phơng pháp muốn đa vào phân tích phải đợc chuẩn hoá đạt yêu cầu tối thiểu định đề Trong khuôn khổ viết này, muốn giới thiệu số khái niệm, nguyên tắc chuẩn hoá liên quan đến phơng pháp sàng lọc (Screening Method) khuyến cáo chuẩn hoá phơng pháp định tính CƠ Sở Lý THUYếT Và CáC KHáI NIệM LIÊN QUAN Chuẩn hoá (Validation) khẳng định việc kiểm tra cung cấp chứng cách thuyết phục yêu cầu đặc biệt thoả mVn mong đợi (ISO/IEC 17025, 2005) Hay nói cách khác phải chứng minh tin cậy kết phân tích theo yêu cầu tuỳ thuộc lĩnh vực, chất cần phân tích Để thuyết phục cần phải dựa vào đại lợng thống kê loại sai số hoá phân tích 2.1 Các đại lợng thống kê liên quan dùng chuẩn hoá phơng pháp - Giá trị thực (à): thực tế giá trị thực thờng nên thờng dùng giá trị trung bình n phân tích mÉu x = i =1 = n n n ∑x i n x i i=1 Thực tế giá trị thực = x l rấtt Khi chuẩn hoá phơng pháp cố gắng tối u để giá trị gần x tốt - Số phân tán: biểu diễn độ lệch kết phân tích Trong hoá phân tích thờng dùng giá trị phơng sai mẫu (s2) hay độ lệch chn mÉu (s) hƯ sè biÕn thiªn (CV%) S2 = n ∑(x − x )2 n − i =1 i n → ∞ th× x → CV% = dụng đợc, CV>20% (kết phân tán không nên sử dụng) - Độ ngờ: biểu diễn khác biệt giá trị đo trực tiếp ( x ) v giá trị thực (à) gồm: Độ ngờ tuyệt đối = x Giá trị lín nhÊt cđa ®é ngê th−êng b»ng 1/4 hay 1/2 độ chia bé dụng cụ đo, không xác định độ ngờ đơn vị chữ số cuối cùng, chẳng hạn: 12,20 0,06 g (có xác định độ ngờ tuyệt đối) 12,2 0,1 g (không xác định độ ngờ tuyệt đối) Độ ngờ tơng đối tỷ số độ ngờ tuyệt đối giá trị đo đợc, thờng biểu thị % - Sai số: biểu thị khác biệt giá trị thực (à) v ( x ) đợc xác định sở tính toán từ kết chuỗi kết phân tích Bao gồm: Sai số hệ thống sai số nguyên nhân biết đợc nh dụng cụ, hoá chất không chuẩn, chất lợng kỹ thuật viên, phơng pháp có khiếm khuyết ảnh hởng lên độ phân tích, thờng ảnh hởng chiều Có thể xác định đợc nên giảm loại trừ hay hiệu chỉnh xác định đợc nguyên nhân Sai số ngẫu nhiên sai số không theo qui luật, không xác định, ảnh hởng đến độ lặp lại phân tích Chỉ giảm sai số ngẫu nhiên cách tăng số lần phân tích lặp lại hoá phân tích n = 20-30 sai số ngẫu nhiên chấp nhận đợc - Độ đóng, độ lặp lại, độ xác phơng pháp Độ lặp lại: biểu diễn khác biệt giá trị xác định xi qua nhiều lần phân tích s 100 x Trong hoá phân tích giá trị CV