Nghiên cứu hình thái cấu trúc mô xương đốt chân nam giới người Việt Nam trưởng thành dưới ảnh hưởng của dung dịch ướp bảo quản

Nghiên cứu hình thái cấu trúc mô xương đốt chân nam giới người Việt Nam trưởng thành dưới ảnh hưởng của dung dịch ướp bảo quản

Bộ giáo dục và đào tạo bộ quốc phòng Học viện quân y Nguyễn Văn Vận Nghiên cứu hình thái cấu trúc mô xơng đốt bàn chân nam giới ngời việt trởng thành dới ảnh hởng của dung dịch ớp bảo quản Chuyên ngành: Giải phẫu ngời Mã số: 62 72 01 10 Tóm tắt luận án tiến sĩ y học Hà Nội 2008 Công trình đợc hoàn thành tại Học viện Quân y Ngời hớng dẫn khoa học: GS. TS. Trần Văn Hanh TS. Lại Văn Hòa Phản biện 1: GS. TS. Trịnh Bình Phản biện 2: GS. TS. Nguyễn Hữu Chỉnh Phản biện 3: TS. Vũ Văn Bình Luận án đ đợc bảo vệ trớc Hội đồng chấm luận án cấp Nhà nớc tại họp tại Học viện Quân y: Vào hồi 14 giờ ngày 07 tháng 7 năm 2008 Có thể tìm hiểu luận án tại: Th viện Quốc gia Th viện Học viện Quân y Những công trình khoa học đ công bố Liên quan đến luận án 1. Nguyễn Văn Vận, Phạm Xuân Thắng, Nguyễn Hồng Minh và cộng sự (2001), Hình thái bề mặt pha khoáng xơng dới tác động của một số dung dịch, Tạp chí Hình thái học, tập 11(1), trang 10-13. 2. Lại Văn Hòa, Nguyễn Văn Vận, Phạm Văn Vơng (2003), The structural morphological characteristics of metatarsi in adult Vietnamese men by light and electron microscope, Proceedings of the 4 th Asean Microscopy Conference and the 3 rd Vietnam Conference on Electron Microscopy (ASEAN MC4), pp. 81-86. 3. Nguyễn Văn Vận, Phạm Văn Vơng (2003), Một số đặc điểm hình thái xơng sờn nam giới ngời Việt nam trởng thành dới kính hiển vi quang học và kính hiển vi điện tử quét, Hội nghị Mô học - Phôi thai học toàn quốc lần thứ 5, Học viện Quân y, trang 27-32. 4. Nguyễn Văn Vận, Lại Văn Hòa, Nguyễn Hồng Minh, Phạm Văn Vơng (2007), "Đánh giá ảnh hởng của dung dịch formalin trong quá trình cố định lâu dài đến hình thái cấu trúc xơng đốt bàn chân nam giới ngời Việt nam trởng thành và hàm lợng canxi, phosphat trong dung dịch", Tạp chí Y học thực hành (9), trang 72-74. 1 đặt vấn đề Giữ gìn tính toàn vẹn cấu trúc và duy trì độ bền vững của các mô thi thể trong đó có mô xơng có ý nghĩa quan trọng trong nhiệm vụ ớp bảo quản (ƯBQ) thi thể lâu dài phục vụ thăm viếng. ƯBQ thi thể lâu dài phục vụ chiêm ngỡng là một công nghệ phức tạp. Trong quá trình này, phải tiến hành qua nhiều giai đoạn kế tiếp nhau, sử dụng kết hợp nhiều loại hoá chất nhằm giữ đợc những đờng nét đặc trng nh lúc sinh thời, duy trì tính toàn vẹn cấu trúc và độ bền vững của các mô thi thể. Mô xơng khác với mô mềm là trong thành phần của nó, ngoài chất hữu cơ còn có chất khoáng. Các hoá chất sử dụng trong ƯBQ thi thể phục vụ chiêm ngỡng có tác động đến mô xơng, đặc biệt là chất khoáng xơng nh thế nào là vấn đề cần đợc nghiên cứu. ở Việt Nam, cha thấy công bố những công trình nghiên cứu tổng thể cả về cấu trúc hình thái cũng nh hoá sinh mô xơng trong quá trình ƯBQ thi thể lâu dài phục vụ thăm viếng. Xuất phát từ thực tế đó, chúng tôi tiến hành đề tài nghiên cứu với 3 mục tiêu: 1. Xác định một số đặc điểm cấu trúc hình thái và thành phần hoá học của xơng đốt bàn chân nam giới ngời Việt trởng thành. 2. Đánh giá ảnh hởng của dung dịch cố định formalin 10%, cồn ethylic 20% và dung dịch bảo quản III đến cấu trúc hình thái xơng đốt bàn chân nam giới ngời Việt trởng thành. 3. Xác định những biến đổi về độ pH, hàm lợng calci và phosphat của dung dịch formalin 10%, cồn ethylic 20% và dung dịch bảo quản III dùng trong mô hình bảo quản dài ngày xơng đốt bàn chân nam giới gời Việt trởng thành. 2 ý nghĩa thực tiễn và đóng góp mới của luận án 1. Đây là công trình đầu tiên nghiên cứu ảnh hởng của một số dung dịch sử dụng trong ƯBQ thi thể đến cấu trúc hình thái mô xơng đốt bàn chân nam giới ngời Việt trởng thành. 2. Làm rõ ảnh hởng của dung dịch formalin 10%, cồn ethylic 20%, dung dịch bảo quản III đến cấu trúc hình thái mô xơng đốt bàn chân, đặc biệt là cấu trúc khoáng hóa mô xơng. 3. Xác định đợc sự thay đổi pH, hàm lợng calci v phosphat của các dung dịch sử dụng trong ƯBQ thi thể khi ƯBQ mẫu xơng đốt bàn chân nam giới ngời Việt trởng thành. Những kết quả thu đợc là những thông tin tham khảo rất đáng quan tâm trong ƯBQ thi thể phục vụ thăm viếng. Những hình ảnh về cấu trúc mô xơng góp phần làm phong phú thêm tính đa dạng trong tổ chức cấu trúc mô xơng, có thể sử dụng làm tài liệu tham khảo khi nghiên cứu, giảng dạy về mô xơng. Cấu trúc luận án Ngoài phần đặt vấn đề và kết luận, luận án gồm 4 chơng: Chơng 1: Tổng quan: 30 trang; Chơng 2: Đối tợng và phơng pháp nghiên cứu: 17 trang; Chơng 3: Kết quả nghiên cứu: 53 trang; Chơng 4: Bàn luận: 28 trang. Luận án có 21 bảng; 2 sơ đồ; 8 biểu đồ và 56 ảnh; 112 tài liệu tham khảo (tiếng Việt 23; tiếng Nga 40; tiếng Anh 49). Chơng 1: tổng quan tài liệu 1.1. Sơ lợc lịch sử ớp bảo quản thi thể Có thể chia lịch sử ƯBQ thành các thời kỳ: - Ướp xác thời cổ đại: Lấy bỏ phủ tạng, dùng hơng liệu tự nhiên tẩm ớp thi thể. 3 - Ướp xác thời trung cổ: Do ảnh hởng tôn giáo, ớp xác không phát triển đợc. - Ướp xác thời trung đại: Dùng chất hoá học với chất liệu tự nhiên. Đa dung dịch ớp vào thi thể qua mạch máu. Bảo toàn hình dáng thi thể. - Ướp xác thời hiện đại: Dung dịch ƯBQ thi thể đợc cấp bằng sáng chế. Phát triển ƯBQ thi thể phục vụ thăm viếng. 1.2. Ướp bảo quản thi thể ở Việt Nam Ướp xác đ có từ lâu đời. Sự kiện lịch sử trọng đại ƯBQ thi thể ở nớc ta là ƯBQ lâu dài thi hài Chủ tịch Hồ Chí Minh. 1.3. Các hoá chất sử dụng trong ớp bảo quản thi thể - Trớc khi tìm ra formalin, sử dụng các hơng liệu tự nhiên, thymol, glycerin, kali acetat - Năm 1859, A.M. Butlerov tìm ra formalin, sau đó nó đợc sử dụng để ớp xác. Formalin có tính axit yếu, khi cố định lâu dài có thể gây khử khoáng mô xơng. - ƯBQ thi thể phục vụ thăm viếng đợc tiến hành qua 3 giai đoạn : Cố định; phục hồi màu sắc; bảo quản lâu dài. 1.4. Một số đặc điểm cấu trúc và hoá sinh mô xơng 1.4.1. Phân loại xơng Theo mô học: Theo đặc điểm cấu trúc: Xơng lới, xơng lá; theo nguồn gốc sinh xơng: Xơng cốt mạc, xơng Havers. 1.4.2. Những tế bào mô xơng Tiền tạo cốt bào; tạo cốt bào; huỷ cốt bào; tế bào xơng. 1.4.4. Collagen xơng Collagen xơng chủ yếu là dạng típ I, ít tan trong dung dịch muối trung tính và các dung dịch axit yếu. Collagen xơng thờng tập trung thành từng bó, các sợi trong bó liên kết chặt chẽ với nhau. 4 1.4.5. Chất khoáng xơng Thực hiện chức năng: Bảo vệ; dự trữ ion; điều hoà trao đổi ion. Chất khoáng xơng là hỗn hợp của tất cả các chất trung gian trong chu trình biến đổi dung dịch calciphosphat thành hydroxyapatit. Chất khoáng xơng tồn tại ở 2 dạng chính: * Chất khoáng xơng vô định hình (không kết tinh). * Các tinh thể khoáng: Có dạng hình kim hoặc hình lá. Trên các bề mặt tự nhiên của xơng, chất khoáng tạo thành 3 vùng: vùng xơng đ hình thành; đang hình thành; vùng phá huỷ xơng. Chơng 2: đối tợng và phơng pháp nghiên cứu 2.1. Đối tợng nghiên cứu 2.1.1. Mẫu nghiên cứu 125 mẫu xơng đốt bàn chân nam giới ngời Việt trởng thành, 20- 44 tuổi, thời gian lu mẫu < 36 giờ. 2.1.2. Phân lô thí nghiệm Lô 1: Xác định một số đặc điểm cấu trúc hình thái và thành phần hoá học của xơng đốt bàn chân nam giới ngời Việt trởng thành. Lô 2: Đánh giá ảnh hởng của dung dịch formalin 10% đến cấu trúc hình thái xơng đốt bàn chân nam giới ngời Việt trởng thành, sự biến đổi độ pH, hàm lợng calci và phosphat của dung dịch. Lô 3: Đánh giá ảnh hởng của dung dịch cồn ethylic 20% đến cấu trúc hình thái xơng đốt bàn chân nam giới ngời Việt trởng thành, sự biến đổi độ pH, hàm lợng calci và phosphat của dung dịch. Lô 4: Đánh giá ảnh hởng của dung dịch III đến cấu trúc hình thái xơng đốt bàn chân nam giới ngời Việt trởng thành, sự biến đổi độ pH, hàm lợng calci và phosphat của dung dịch. 2.1.3. Các dung dịch cố định và bảo quản Formalin 10%; cồn ethylic 20%; dung dịch bảo quản III . 5 2.2. Phơng pháp nghiên cứu Phơng pháp nghiên cứu mô xơng ở mức vi thể. Nghiên cứu mô xơng bằng kính HVĐTTQ. Nghiên cứu bề mặt khoáng hoá mô xơng bằng kính HVĐTQ: Khử chất hữu cơ xơng bằng natri hypoclorit 8%. Làm khô mẫu bằng cồn. Nghiên cứu mẫu dới kính HVĐTQ JSM-5410LV. Nghiên cứu collagen trong chất căn bản mô xơng bằng kính HVĐTQ: Loại bỏ tuỷ xơng, màng xơng bằng enzym trypsin 1,5%. Loại bỏ chất khoáng xơng bằng axit nitric 5%. Làm khô mẫu bằng máy đông khô. Nghiên cứu mẫu dới kính HVĐTQ JSM-5410LV. Phơng pháp xác định pH dung dịch cố định và bảo quản các mẫu xơng. Phơng pháp xác định calci bằng đo quang phổ hấp thụ nguyên tử: Vô cơ hoá mẫu. Xây dựng đờng chuẩn. Đo mẫu trên máy phổ hấp thụ nguyên tử AAS 3300. Phơng pháp xác định phosphat bằng trắc quang: Vô cơ hoá mẫu. Xây dựng đờng chuẩn. Đo mẫu trên máy đo quang phổ tử ngoại khả kiến UVIKON-941. Xác định 3 thành phần của xơng bằng khử khoáng, xấy khô. Đo đờng kính ống Havers, kích thớc hệ thống Havers toàn vẹn, khoảng cách giữa các ống Havers: Sử dụng phần mềm đo đạc Image- Pro Plus. Chng 3: KT QU NGHIấN CU 3.1. Nghiờn cu xng t bn chõn nam gii ngi Vit la tui 20 - 44 tui Trờn kớnh HVQH, t phớa mng ngoi xng vo cú 3 vựng: Bn xng ngoi; vựng xng Havers; bn xng trong. ni cỏc vỏch xng giao nhau, ụi khi bt gp mt h thng Havers trn vn. Trờn kớnh HVTTQ: xng cú hỡnh trũn, ovan. Trong cỏc xng cú 6 các tế bào xương, chúng có nhiều nhánh đi ra các tiểu quản xương. Collagen tập trung thành từng bó, thấy rõ các vân sáng, tối dọc theo chiều dài sợi. Trên kính HVĐTQ: Trên tiết diện ngang, các lá xương sáng, tối nằm xen kẽ nhau. Ở các bề mặt tự nhiên, xác định được 3 vùng nằm xen kẽ nhau: Vùng xương đã hình thành; vùng xương đang hình thành; vùng phá huỷ xương. Collagen tập trung thành từng bó sắp xếp có hướng. Các ổ xương có hình ovan, hình tròn. Kết quả đo hình thái mô xương đốt bàn chân. Bảng 3.1: Kích thước các lá xương, hệ thống Havers toàn vẹn, đường kính ống Havers, khoảng cách giữa các ống Havers(µm). Chỉ số Kích thước n X ± SD p Sáng 100 3,63 ± 0,34 Lá xương Tối 100 4,11 ± 0,46 < 0,05 Đường kính hệ thống Havers toàn vẹn 100 196,19 ± 34,90 Đường kính ống Havers 140 56,89 ± 14,57 Khoảng cách giữa các ống Havers 235 181,22 ± 32,91 Nhận xét: Kích thước lá xương sáng, tối khác nhau với p < 0,05. Kết quả nghiên cứu thành phần hoá học xương đốt bàn chân. Bảng 3.2: Hàm lượng (%) 3 thành phần chính của xương đốt bàn chân nam giới người Việt (20-44 tuổi). Giá trị Hàm lượng n X ± SD Thành phần khoáng 35 60,15 ± 0,65 Thành phần hữu cơ 35 28,65 ± 0,81 Thành phần nước 35 11,20 ± 0,36 Nhận xét: Thành phần chất khoáng chiểm tỉ lệ cao nhất. Hàm lượng nước chiếm tỉ lệ ít nhất. 7 Bảng 3.3: Hàm lượng calci và phosphat của xương đốt bàn chân nam giới người Việt từ 20 - 44 tuổi (mg/gam xương tươi). Giá trị Hàm lượng n X ± SD Hàm lượng calci 35 229,85 ± 7,48 Hàm lượng phosphat 35 320,82 ± 10,41 Hàm lượng phospho 35 104,62 ± 3,39 Tỉ lệ Ca/P (tỉ lệ mol) 35 1,70 Nhận xét: Hàm lượng calci cao hơn phospho 2,2 lần. Tỉ lệ Ca/P gần với giá trị đặc trưng của oxyapatit (1,67) của xương. 3.2. Đánh giá ảnh hưởng của dung dịch formalin 10% trong quá trình cố định đến cấu trúc hình thái xương đốt bàn chân nam giới người Việt trưởng thành, sự biến đổi độ pH, hàm lượng calci và phosphat của dung dịch. Sau cố định 2 tuần: Trên kính HVQH, HVĐTTQ, HVĐTQ, chưa phát hiện có sự biến đổi bề mặt khoáng hoá xương. Kết quả nghiên cứu một số chỉ số hoá sinh của dung dịch được chỉ ra ở bảng 3.4. Bảng 3.4: pH, hàm lượng calci và phosphat trong dung dịch formalin 10% sau cố định các mẫu xương đốt bàn chân 2 tuần. Formalin 10% Dung dịch Giá trị Trước cố định Sau cố định 2 tuần n 30 30 So sánh p pH (X ± SD) 4,01 ± 0,20 6,82 ± 0,30 < 0,05 HL calci (mg/l; X ± SD ) 0,59 ± 0.03 24,17 ± 3,15 < 0,05 HL phosphat (mg/l; X ± SD) 0,00 37,66 ± 5,69 < 0,05 HL phospho (mg/l; X ± SD) 0,00 12,28 ± 1,86 < 0,05 Tỉ lệ Ca/P (tỉ lệ mol) 1,52 Nhận xét: pH, hàm lượng calci, phosphat của dung dịch tăng có ý nghĩa thống kê (p < 0,05). 8 Sau cố định 1 tháng: Cấu trúc mô xương được giữ gìn nguyên vẹn. Một số chỉ số hoá sinh của dung dịch được nêu ở bảng 3.5. Bảng 3.5: pH, hàm lượng calci và phosphat trong dung dịch formalin 10% sau cố định các mẫu xương đốt bàn chân 1 tháng. Formalin 10% Dung dịch Giá trị Sau cố định 2 tuần Sau cố định 1 tháng n 30 26 So sánh p pH (X ± SD) 6,82 ± 0,30 6,89 ± 0,27 > 0,05 HL calci (mg/l; X ± SD ) 24,17 ± 3,15 35,11 ± 3,42 < 0,05 HL phosphat (mg/l; X ± SD) 37,66 ± 5,69 57,39 ± 4,62 < 0,05 HL phospho (mg/l; X ± SD) 12,28 ± 1,86 18,71 ± 1,51 Tỉ lệ Ca/P (tỉ lệ mol) 1,51 1,45 Nhận xét: Hàm lượng calci, phosphat tăng có ý nghĩa thống kê. Sau cố định 3 tháng: Không có sự thay đổi cấu trúc mô xương. Xác định chỉ số hoá sinh của dung dịch được chỉ ra ở bảng 3.6. Bảng 3.6: pH, hàm lượng calci và phosphat trong dung dịch formalin 10% sau cố định các mẫu xương đốt bàn chân 3 tháng. Dung dịch formalin 10% Dung dịch Giá trị Sau cố định 1 tháng Sau cố định 3 tháng n 26 22 So sánh p pH (X ± SD) 6,89 ± 0,27 6,99 ± 0,30 > 0,05 HL calci (mg/l; X ± SD ) 35,11 ± 3,42 54,80 ± 3,52 < 0,05 HL phosphat (mg/l; X ± SD) 57,38 ± 4,62 81,67 ± 4,88 < 0,05 HL phospho (mg/l; X ± SD) 18,71 ± 1,51 26,63 ± 1,59 < 0,05 Tỉ lệ Ca/P (tỉ lệ mol) 1,45 1,59 Nhận xét: Hàm lượng calci, phosphat trong dung dịch tăng lên có ý nghĩa thống kê (p < 0,05), và tăng tương đồng với nhau. 9 Sau cố định 6 tháng: Bắt đầu xuất hiện những thay đổi hình thái học đầu tiên có thể quan sát được. Trên kính HVĐTQ, bề mặt tự nhiên của xương bị bằng phẳng đi. Miệng tiểu quản xương mở rộng. Các sợi khoáng nhỏ hơn so với bình thường, không còn hình ảnh điển hình đặc trưng cho vùng xương đã hình thành. Thành ổ xương có viền hình răng cưa. Tuy nhiên, chưa phát hiện thấy sự thay đổi cấu trúc hình thái collagen xương. Kết quả xác định các chỉ số hoá sinh của dung dịch ở giai đoạn này được chỉ ra ở bảng 3.7. Bảng 3.7: pH, hàm lượng calci và phosphat trong dung dịch formalin 10% sau cố định các mẫu xương đốt bàn chân 6 tháng. Dung dịch formalin 10% Dung dịch Giá tri Sau cố định 3 tháng Sau cố định 6 tháng n 22 18 So sánh p pH (X ± SD) 6,99 ± 0,30 7,05 ± 0,30 > 0,05 HL calci (mg/l; X ± SD) 54,80 ± 3,52 81,42 ± 3,17 < 0,05 HL phosphat (mg/l; X SD) 81,67 ± 4,88 115,32 ± 5,07 < 0,05 HL phospho (mg/l; X ± SD) 26,63 ± 1,59 37,61 ± 1,65 < 0,05 Tỉ lệ Ca/P (tỉ lệ mol) 1,59 1,67 Nhận xét: pH của dung dịch thay đổi không có ý nghĩa thống kê. Hàm lượng calci, phosphat của dung dịch tiếp tục tăng lên . Sau cố định 9 tháng: Trên kính HVĐTQ, bề mặt tự nhiên của xương trở nên bằng phẳng, không còn phân biệt được đặc điểm cấu trúc khoáng hoá của các vùng xương. Miệng tiểu quản xương mở rộng. Bề mặt xương có hình ảnh mắt sàng. Thành ổ xương có đường viền răng cưa. Tuy nhiên, trên kính HVĐTTQ và HVĐTQ, collagen xương vẫn được giữ gìn nguyên vẹn, không thấy hình ảnh biến tính hoặc đứt đoạn của các sợi collagen. Kết quả xác định các chỉ số hoá sinh của dung dịch được chỉ ra ở bảng 3.8. 10 Bảng 3.8: pH, hàm lượng calci và phosphat trong dung dịch formalin 10% sau cố định các mẫu xương đốt bàn chân 9 tháng. Dung dịch formalin 10% Dung dịch Giá trị Sau cố định 6 tháng Sau cố định 9 tháng n 18 14 So sánh p pH (X ± SD) 7,05 ± 0,30 7,03 ± 0, 25 > 0,05 HL calci (mg/l; X ± SD) 81,42 ± 3,17 103,83 ± 3,42 < 0,05 HL phosphat (mg/l; X ± SD) 115,32 ± 5,07 149,24 ± 5,22 < 0,05 HL phospho (mg/l; X ± SD) 37,61 ± 1,65 48,67 ± 1,70 < 0,05 Tỉ lệ Ca/P (tỉ lệ mol) 1,67 1,65 Nhận xét: Hàm lượng calci, phosphat tăng lên (p < 0,05). Sau cố định 12 tháng: Bề mặt xương trở nên bằng phẳng, bờ ổ xương có hình răng cưa. Không thấy hình ảnh đứt đoạn hay biến tính sợi collagen. Kết quả các chỉ số hoá sinh của dung dịch cố định được chỉ ra ở bảng 3.9. Bảng 3.9: pH, hàm lượng calci và phosphat của dung dịch formalin 10% sau cố định các mẫu xương đốt bàn chân 12 tháng. Dung dịch formalin 10% Dung dịch Giá trị Sau cố định 9 tháng Sau cố định 12 tháng n 14 10 So sánh p pH (X ± SD) 7,03 ± 0,25 7,03 ± 0,23 > 0,05 HL calci (mg/l; X ± SD) 103,83 ± 3,42 120,19 ± 4,06 < 0,05 HL phosphat (mg/l; X SD) 149,24 ± 5,22 172,53 ± 4,67 < 0,05 HL phospho (mg/l; X ± SD) 48,67 ± 1,70 56,26 ± 1,52 < 0,05 Tỉ lệ Ca/P (tỉ lệ mol) 1,65 1,65 Nhận xét: Hàm lượng calci và phosphat của dung dịch tăng lên có ý nghĩa thống kê với p < 0,05. 11 3.3. Đánh giá ảnh hưởng của dung dịch cồn ethylic 20% trong quá trình bảo quản đến cấu trúc hình thái xương đốt bàn chân nam giới người Việt trưởng thành, sự biến đổi độ pH, hàm lượng calci và phosphat của dung dịch. Nghiên cứu các mẫu xương đốt bàn chân bảo quản trong dung dịch cồn ethylic 20% theo thời gian nhận thấy chưa thấy có sự thay đổi nào về hình ảnh cấu trúc xương. Kết quả xác định một số chỉ số hoá sinh của dung dịch được chỉ ra ở bảng 3.10; 3.11; 3.12. Bảng 3.10: pH, hàm lượng calci và phosphat trong dung dịch cồn ethylic 20% sau khi cố định các mẫu xương đốt bàn chân 2 tuần; 1 tháng. Dung dịch cồn ethylic 20% Dung dịch Chỉ số Trước cố định (1) Cố định 2 tuần (2) Cố định 1 tháng (3) n 30 30 26 So sánh p pH (X ± SD) 5,7 ± 0,20 7,1 ± 0,20 7,08 ± 0,25 p 1-2 <0,05 p 1-3 <0,05 p 2-3 >0,05 HL calci (mg/l; X ± SD) 0,34 ± 0,03 8,91 ± 0,75 13,45 ± 1,82 < 0,05 HL phosphat (mg/l; X ± SD) 0,00 13,45 ± 1,82 17,71 ± 2,09 < 0,05 HL phospho (mg/l; X ± SD) 0,00 4,39 ± 0,59 5,78 ± 0,68 < 0,05 Tỉ lệ Ca/P (mol) 1,57 1,79 Nhận xét: pH của dung dịch sau cố định các mẫu xương 2 tuần tăng lên có ý nghĩa thống kê (p < 0,05). Sau cố định 1 tháng, pH của dung dịch duy trì ổn định. Hàm lượng calci và phosphat trong dung dịch tăng lên theo thời gian cố định, giữa các giai đoạn có sự khác biệt rõ rệt với p < 0,05. 12 Bảng 3.11: pH, hàm lượng calci và phosphat trong dung dịch cồn ethylic 20% sau cố định xương đốt bàn chân 3 tháng; 6 tháng. Dung dịch cồn ethylic 20% Dung dịch Chỉ số Trước cố định (1) Cố định 3 tháng (2) Cố định 6 tháng (3) So sánh p n 30 22 18 pH (X ± SD) 5,70 ± 0,20 7,05 ± 0,20 7,10 ± 0,15 p 1-2 <0,05 p 2-3 >0,05 HL calci (mg/l; X ± SD) 0,34 ± 0,03 18,56 ± 1,21 25,26 ± 1,52 < 0,05 HL phosphat (mg/l; X ± SD) 0,00 28,96 ± 2,04 38,8 ± 2,29 < 0,05 HL phospho (mg/l; X ± SD) 0,00 9,44 ± 0,67 12,65 ± 0,75 < 0,05 Tỉ lệ Ca/P (mol) 1,52 1,54 Nhận xét: Hàm lượng calci và phosphat của dung dịch tiếp tục tăng lên có ý nghĩa thống kê với p < 0,05. Bảng 3.12: pH, hàm lượng calci và phosphat trong dung dịch cồn ethylic 20% sau cố định xương đốt bàn chân 9 tháng; 12 tháng. Dung dịch cồn ethylic 20% Dung dịch Chỉ số Trước cố định (1) Cố định 9 tháng (2) Cố định 12 tháng (3) n 30 14 10 So sánh p pH (X ± SD) 5,70 ± 0,20 7,10 ± 0,15 7,20 ± 0,10 p 1-2 <0,05 p 2-3 >0,05 HL calci (mg/l; X ± SD) 0,34 ± 0,03 30,59 ± 2,06 33,38 ± 2,20 < 0,05 HL phosphat (mg/l; X ± SD) 0,00 45,50 ± 2,34 49,58 ± 2,57 < 0,05 HL phospho (mg/l; X ± SD) 0,00 14,84 ± 0,76 16,17 ± 0,84 < 0,05 Tỉ lệ Ca/P (mol) 1,59 1,60 Nhận xét: Hàm lượng calci và phosphat tăng lên có ý nghĩa thống kê với p < 0,05, nhưng có diễn biến tăng chậm lại. 13 3.4. Đánh giá ảnh hưởng của dung dịch III trong quá trình bảo quản lâu dài đến cấu trúc hình thái xương đốt bàn chân nam giới người Việt trưởng thành, sự biến đổi độ pH, hàm lượng calci và phosphat của dung dịch. ƯBQ các mẫu xương đốt bàn chân theo nguyên lý của Melnhikov-Razvedenkov, ở giai đoạn bảo quản các mẫu xương trong dung dịch III, tiến hành nghiên cứu đặc điểm cấu trúc hình thái mô xương và một số chỉ số hoá sinh của dung dịch sau 1 tháng; 3 tháng; 6 tháng; 9 tháng; 12 tháng. pH của dung dịch chủ yếu tăng ở những giai đoạn đầu, sau đó ổn định. Hàm lượng calci, phosphat trong dung dịch lại tăng dần theo thời gian bảo quản. Chúng tăng mạnh ở những giai đoạn đầu. Kết quả nghiên cứu được chỉ ra ở các bảng sau: Bảng 3.15: pH, hàm lượng calci và phosphat của dung dịch III bảo quản các mẫu xương sau 1 tháng; 3 tháng. Dung dịch III sau bảo quản các mẫu xương Dung dịch Giá trị Dung dịch III trước bảo quản các mẫu xương 1 tháng 3 tháng n 22 22 18 So sánh p pH (X ± SD) 8,30 ± 0,01 8,40 ± 0,05 8,60 ± 0,03 >0,05 HL calci (mg/l; X ± SD) 26,93 ± 0,32 38,08 ± 4,11 42,78 ± 1,70 <0,05 HL phosphat (mg/l; X ± SD) 29,00 ± 0,56 44,25 ± 5,84 62,9 ± 5,64 <0,05 HL phospho (mg/l; X ± SD) 9,46 ± 0,18 14,43 ± 1,90 20,51 ± 1,84 <0,05 Tỉ lệ Ca/P (mol) 2,04 1,61 <0,05 Nhận xét: Sau bảo quản các mẫu xương trong dung dịch III với thời gian 1 tháng và 3 tháng, giá trị pH của dung dịch có xu hướng 14 tăng lên tuy nhiên không có ý nghĩa thống kê với p > 0,05. Hàm lượng calci và phosphat của dung dịch tăng dần theo thời gian bảo quản, sự thay đổi này có ý nghĩa thống kê với p < 0,05. Đồng thời, tỉ lệ Ca/P của dung dịch tiến gần lại với tỉ lệ Ca/P của mô xương. Bảng 3.16: pH, hàm lượng calci và phosphat của dung dịch III bảo quản các mẫu xương sau 6 tháng. Dung dịch III sau bảo quản các mẫu xương Dung dịch Giá trị Dung dịch III trước bảo quản các mẫu xương 3 tháng 6 tháng n 22 18 14 So sánh p pH (X ± SD) 8,30 ± 0,01 8,60 ± 0,03 8,60 ± 0,03 >0,05 HL calci (mg/l; X ± SD) 26,93 ± 0,32 42,78 ± 1,70 49,84 ± 3,39 <0,05 HL phosphat (mg/l; X ± SD) 29,00 ± 0,56 62,9 ± 5,64 67,56 ± 3,63 <0,05 HL phospho (mg/l; X ± SD) 9,46 ± 0,18 20,51 ± 1,84 22,03 ± 1,18 <0,05 Tỉ lệ Ca/P (mol) 1,61 1,75 <0,05 Nhận xét: Sau 6 tháng bảo quản các mẫu xương trong dung dịch III, giá trị pH của dung dịch không thay đổi. Trong khi đó hàm lượng calci và phosphat của dung dịch tiếp tục tăng lên có ý nghĩa thống kê với p < 0,05, đồng thời tăng hàm lượng calci gắn liền với tăng hàm lượng phosphat trong dung dịch. Tỉ lệ Ca/P của dung dịch nằm trong giới hạn của tỉ lệ Ca/P của mô xương. Kết quả nghiên cứu cho thấy cấu trúc hình thái xương đốt bàn chân vẫn giữ được cấu trúc bình thường như lúc chưa ướp. Trên kính 15 HVQH, thấy rõ hình ảnh cấu trúc hệ thống Havers, các tế bào xương nằm trong các ổ xương. Dưới kính HVĐTTQ, các sợi collagen không bị trương phồng, đứt đoạn hoặc biến tính. Trên kính HVĐTQ, bề mặt vùng khoáng hoá không bị bằng phẳng đi. Phân biệt rõ vùng xương đã hình thành, đang hình thành, vùng phá huỷ trên bề mặt xương. Bảng 3.17: pH, hàm lượng calci và phosphat của dung dịch III bảo quản các mẫu xương sau 9 tháng. Dung dịch III sau bảo quản các mẫu xương Dung dịch Giá trị Dung dịch III trước bảo quản các mẫu xương 6 tháng 9 tháng n 22 14 10 So sánh p pH (X ± SD) 8,30 ± 0,01 8,60 ± 0,03 8,60 ± 0,01 >0,05 HL calci (mg/l; X ± SD) 26,93 ± 0,32 49,84 ± 3,39 57,13 ± 4,14 <0,05 HL phosphat (mg/l; X ± SD) 29,00 ± 0,56 67,56 ± 3,63 76,64 ± 4,70 <0,05 HL phospho (mg/l; X ± SD) 9,46 ± 0,18 22,03 ± 1,18 24,99 ± 1,53 <0,05 Tỉ lệ Ca/P (mol) 1,75 1,76 >0,05 Nhận xét: Sau khi bảo quản các mẫu xương trong dung dịch III với thời gian 9 tháng, giá trị pH của dung dịch không thay đổi so với thời điểm bảo quản 6 tháng. Hàm lượng calci và phosphat của dung dịch tiếp tục tăng lên theo thời gian bảo quản và có ý nghĩa thống kê với p < 0,05. 16 Ở bề mặt xương không có màng xương bao phủ, quan sát được một số hình ảnh tế bào xương nằm ngay trên bề mặt xương, bào tương của chúng phân thành nhiều nhánh nối với các nhánh của các tế bào lân cận. Ngoài ra còn bắt gặp các tế bào xương nằm trong các ổ xương, từ thân tế bào này có các nhánh bào tương đi vào các tiểu quản xương. Bảng 3.18: pH, hàm lượng calci và phosphat của dung dịch III bảo quản các mẫu xương sau 12 tháng. Dung dịch III sau bảo quản các mẫu xương Dung dịch Giá trị Dung dịch III trước bảo quản các mẫu xương 9 tháng 12 tháng n 22 10 6 So sánh p pH (X ± SD) 8,30 ± 0,01 8,60 ± 0,01 8,60 ± 0,01 >0,05 HL calci (mg/l; X ± SD) 26,93 ± 0,32 57,13 ± 4,14 62,21 ± 5,9 <0,05 HL phosphat (mg/l; X ± SD) 29,00 ± 0,56 76,64 ± 4,7 80,59 ± 6,2 <0,05 HL phospho (mg/l; X ± SD) 9,46 ± 0,18 24,99 ± 1,53 26,28 ± 2,02 <0,05 Tỉ lệ Ca/P (mol) 1,76 1,80 Nhận xét: pH của dung dịch không có sự thay đổi so với khi bảo quản 9 tháng. Hàm lượng calci và phosphat của dung dịch vẫn tiếp tục có xu hướng tăng lên theo thời gian bảo quản và khác biệt so với giai đoạn bảo quản 9 tháng có ý nghĩa thống kê với p < 0,05. 17 Chương 4: BÀN LUẬN 4.1. Đặc điểm cấu trúc hình thái và thành phần hoá học của xương đốt bàn chân nam giới người Việt trưởng thành. Quan sát được hệ thống Havers toàn vẹn ở nơi các vách xương giao nhau. Đây là một trong những đặc điểm cấu trúc hình thái có thể làm phong phú thêm về tính đa dạng trong cách tổ chức cấu trúc của mô xương. Trên kính HVĐTQ, xác định rõ cấu trúc của các lá xương sáng và lá xương tối. mà trên kính HVQH không thể phân biệt được. Trong đời sống con người, xương luôn được đổi mới. Điều đó được thực hiện nhờ có quá trình phá huỷ và tái tạo diễn ra tuần tự. Biểu hiện trên bề mặt tự nhiên của xương xác định được 3 vùng đặc trưng: Vùng xương đã hình thành: Các tinh thể khoáng lấp đầy trong sợi collagen và khoảng không giữa các sợi, trên kính HVĐTQ chúng có hình các dải sợi. Vùng xương đang hình thành: Các điểm khoáng hoá diễn ra không đồng thời, các hạt khoáng to nhỏ không đều, sắp xếp lộn xộn. Vùng phá huỷ xương: Có các hốc lõm dạng tổ ong là do huỷ cốt bào tiết ra các men phân huỷ xương, để lại các hốc lõm. Xác định được kích thước của lá xương sáng; lá xương tối; đường kính của hệ thống Havers; đường kính ống Havers; khoảng cách giữa các ống Havers. Những kết quả lần đầu tiên được thực hiện tại Việt Nam, có thể là tài liệu tham khảo so sánh khi nghiên cứu chỉ số này ở các lứa tuổi khác nhau hoặc ở một số bệnh lý về mô xương. Thành phần hoá học của xương đốt bàn chân Thành phần khoáng chiếm tỉ lệ cao nhất (60,15 ± 0,65 %); thành phần hữu cơ chiếm 28,65 ± 0,81%; thành phần nước chiếm tỉ lệ thấp nhất (11,20 ± 0,36%). Hàm lượng calci là 229,85 ± 7,48mg/g, phosphat là 320,82 ± 10,41 mg/g, tỉ lệ Ca/P là 1,7. Những chỉ số này [...]... thay i c u trúc hình thái c a mô xương i u này càng có cơ s c ng c thêm nh n nh ư p b o qu n các m u xương theo nguyên lý c a Melnhikov-Razvedenkov, b o qu n trong dung d ch III sau m t năm chưa gây nên hi n tư ng kh khoáng xương 22 23 K T LU N 1 V c u trúc hình thái và thành ph n hoá h c c a xương t bàn chân nam gi i ngư i Vi t trư ng thành (20-44 tu i) 1.1 C u trúc hình thái xương t bàn chân nam gi... hư ng c a dung d ch formalin 10%, c n ethylic 20% và dung d ch b o qu n III n c u trúc hình thái xương t bàn chân nam gi i ngư i Vi t trư ng thành 2.1 S d ng dung d ch formalin 10% c nh xương t bàn chân: Sau 6 tháng k t khi c nh b t u có nh ng thay i c u trúc hình thái b m t khoáng c a xương B m t khoáng c a xương b b ng ph ng i n 12 tháng k t khi c nh, không còn phân bi t ư c hình nh c u trúc khoáng... trên b m t xương 2.2 S d ng dung d ch c n ethylic 20% c nh các m u xương t bàn chân: Sau 1 năm k t khi c nh, không phát hi n th y b t kỳ s thay i nào v c u trúc hình thái c a mô xương 2.3 B o qu n các m u xương t bàn chân trong dung d ch b o qu n III theo nguyên lí ư p c a Melnhikov-Razvedenkov: Sau 1 năm chưa phát hi n th y b t kì s thay i nào v c u trúc hình thái mô xương B m t khoáng hoá c a xương g... NG NGHIÊN C U TI P B o qu n các m u xương trong dung d ch b o qu n III sau 1 năm chưa th y có s thay i v c u trúc hình thái mô xương Tuy nhiên, trong dung d ch b o qu n các m u xương t bàn chân v n th y tăng hàm lư ng calci và phosphat, m c dù t c tăng có xu hư ng gi m d n theo th i gian b o qu n V y có ph i do lư ng calci và phosphat chuy n t xương vào dung d ch chưa bi n i c u trúc hình thái mô xương. .. gi a xương và dung d ch c nh s chênh nh, calci và phosphat d ch formalin K t qu v hình thái h c chưa phát hi n th y b t kỳ s tr ng thái t do chuy n t xương vào dung d ch làm cho hàm lư ng thay calci và phosphat trong dung d ch c hình thái b m t khoáng hoá xương ng th i, trong quá trình c nh tăng lên áng k nh, dung d ch formalin s ti p n làm xu t hi n nh ng thay i c u trúc hình thái c a collagen xương. .. ng c a dung d ch c xương ng c a chúng nh n thành ph n khoáng c a mô xương ng c a dung d ch c n ethylic 20% trong quá trình c n c u trúc hình thái xương t bàn chân, s bi n i pH, hàm lư ng calci và phosphat c a dung d ch i c u trúc hình thái b m t M c ích c a vi c s d ng dung d ch c n ethylic trong quá khoáng c a xương Tăng hàm lư ng calci và phosphat trong dung trình ƯBQ thi th là nh m h n ch t i a... t khoáng hoá xương có 3 vùng có c u trúc c trưng n m xen k nhau: Vùng xương ã hình thành: các tinh th khoáng t o thành các d i s i theo hư ng i c a s i collagen Vùng xương ang hình thành: các tinh th khoáng t o thành các h t khoáng to, nh không u, s p x p không có hư ng Vùng phá hu xương: là các h c lõm d ng t ong 1.2 Thành ph n hoá h c c a xương t bàn chân nam gi i ngư i Vi t trư ng thành Ch t khoáng:... và phosphat trong m u xương ã ngâm trong dung d ch c n ethylic qua các giai o n dung d ch b o qu n các m u xương ch không phát hi n th y s thay phosphat d ng các ion t do t tu xương, các d ch k lưu thông i hình nh khoáng hoá các b m t t nhiên c a xương 4.2.3 V tác qu n ng c a dung d ch b o qu n III trong quá trình b o n c u trúc hình thái xương trư ng thành, s bi n i t bàn chân nam gi i ngư i Vi t pH,... trình nghiên c u v mô xương sau này 4.2 h n ch t i a nh ng tác nh formalin 10%, c n ethylic 20% và dung d ch b o qu n III n c u trúc hình thái i Qua k t qu nghiên c u cho th y, m c dù hàm lư ng calci và phosphat trong dung d ch tăng d n theo th i gian c t bàn chân nam gi i ngư i Vi t trư ng thành, s bi n pH, hàm lư ng calci và phosphat c a dung d ch kh khoáng l i gi m d n theo th i gian c c n c u trúc hình. .. s cân b ng gi a pha xương và dung d ch b o qu n xương Trong th i gian t i c n ti p t c nghiên c u v s thoát calci và phosphat t xương vào dung d ch b o qu n trong quá trình b o qu n lâu dài T nh ng k t qu thu ư c khi nghiên c u tác ng c a dung d ch b o qu n III n c i m c u trúc hình thái và hoá sinh mô xương cho th y m c dù v m t hoá sinh có s tăng hàm lư ng calci và phosphat c a dung d ch b o qu n, . Đánh giá ảnh hưởng của dung dịch formalin 10%, cồn ethylic 20% và dung dịch bảo quản III đến cấu trúc hình thái xương đốt bàn chân nam giới người Việt trưởng thành. 2.1. Sử dụng dung dịch formalin. hình ảnh khoáng hoá ở các bề mặt tự nhiên của xương. 4.2.3. Về tác động của dung dịch bảo quản III trong quá trình bảo quản đến cấu trúc hình thái xương đốt bàn chân nam giới người Việt trưởng. trình nghiên cứu về mô xương sau này. 4.2. Đánh giá ảnh hưởng của dung dịch cố định formalin 10%, cồn ethylic 20% và dung dịch bảo quản III đến cấu trúc hình thái xương đốt bàn chân nam giới người