Luận văn thạc sĩ xây dựng quy trình bào chế và đánh giá độc tính của cao đặc từ bài thuốc knc trên thực nghiệm

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ HỌC VIỆN Y DƢỢC HỌC CỔ TRUYỀN VIỆT NAM LÊ THỊ DIỆU THÚY XÂY DỰNG QUY TRÌNH BÀO CHẾ VÀ ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CỦA CAO ĐẶC TỪ BÀI THUỐC KNC TRÊN THỰC NGHIỆM LUẬN VĂN THẠC SỸ Y HỌC Hà Nội – 2020 n BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ HỌC VIỆN Y DƢỢC HỌC CỔ TRUYỀN VIỆT NAM LÊ THỊ DIỆU THÚY XÂY DỰNG QUY TRÌNH BÀO CHẾ VÀ ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CỦA CAO ĐẶC TỪ BÀI THUỐC KNC TRÊN THỰC NGHIỆM LUẬN VĂN THẠC SỸ Y HỌC Chuyên ngành: Y học cổ truyền Mã số: 8720115 Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS.TS Đậu Xuân Cảnh Hà Nội – 2020 n LỜI CẢM ƠN Với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, em chân thành gửi lời cảm ơn tới: - PGS.TS Đậu Xuân Cảnh, Giám đốc Học viện Y dược học cổ truyền Việt Nam, người thầy trực tiếp hướng dẫn, dành nhiều thời gian công sức dạy bảo, truyền đạt cho em nhiều kiến thức quý báu - TS Nguyễn Hoàng Ngân, Trưởng khoa Nghiên cứu thực nghiệm Học viện Quân y tập thể y bác sỹ khoa tận tình giúp đỡ trình em tiến hành đề tài khoa - Ths Nguyễn Thị Ngọc, Bác sỹ khoa Khám bệnh Bệnh viện Tuệ Tĩnh – Học viện Y dược học cổ truyền Việt Nam, có ý kiến hướng dẫn, bảo giúp em hồn thành luận văn - Các thầy Phịng Đào tạo sau đại học, thầy cô Hội đồng thông qua Đề cương, Hội đồng bảo vệ luận văn tốt nghiệp có ý kiến hướng dẫn, bảo giúp em hoàn thành luận văn Con gửi tới ba mẹ lòng biết ơn sâu sắc, người có cơng sinh thành, ni dưỡng, dạy dỗ ln dành cho tình cảm yêu quý Xin gửi lời cảm ơn tới tồn thể gia đình, bạn bè, người động viên, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi giúp tơi hồn thành luận văn Hà Nội ngày 14 tháng 06 năm 2020 Tác giả luận văn Lê Thị Diệu Thúy n LỜI CAM ĐOAN Những số liệu có luận văn trực tiếp thu thập khoa Nghiên cứu thực nghiệm Học viện Quân y Khoa Dược lý – Học viện Y dược học cổ truyền Việt Nam Kết nghiên cứu chưa công bố không trùng lặp với nghiên cứu khác Tơi hồn tồn chịu trách nhiệm tất vấn đề trình bày luận văn Hà Nội, ngày 14 tháng 06 năm 2020 Tác giả luận văn Lê Thị Diệu Thúy n DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT YHCT : Y học cổ truyền YHHĐ : Y học đại PHTT : Phong hàn thấp tý PTNT : Phong thấp nhiệt tý LD Lethal dose – Liều chết : : Absolute lethal dose – Liều chết tuyệt đối MLD : Median lethal dose – Liều chết trung bình TI : Therapeutic index – Chỉ số điều trị ALD ALT : Alanine Amino Transferases AST : Aspartate Amino Transferases TCCS : Tiêu chuẩn sở NXB Nhà xuất : OECD : Organisation for Economic Co – operation and Development n MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN Chương I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Các phương pháp chiết xuất bào chế thuốc Y học cổ truyền 1.1.1 Định nghĩa bào chế 1.1.2 Các phương pháp bào chế 1.1.3 Một số dạng thuốc bào chế thông thường [1],[2],[3] 1.1.4 Các bước bào chế cao đặc [2],[3],[15] 1.1.5 Yêu cầu chất lượng cao đặc [2],[15] 1.2 Tổng quan phương pháp nghiên cứu độc tính thuốc [32] 1.2.1 Tổng quan độc tính cấp [22],[32] 1.2.2 Tổng quan độc tính bán trường diễn [28],[22] 1.2.3 Ý nghĩa tính an tồn thuốc YHCT 11 1.3 Tổng quan thuốc “KNC” 14 1.3.1 Thành phần thuốc: 14 1.3.2 Cơ sở thiết kế thuốc: 14 1.3.3 Tác dụng định điều trị: [11] 15 1.3.4 Cách sử dụng: 16 1.3.5 Tiêu chuẩn kiểm định chất lượng vị thuốc cách bào chế theo dược điển Việt Nam V 16 2.1 Vật liệu nghiên cứu 29 2.1.1 Chế phẩm nghiên cứu: 29 2.1.2 Các vật liệu phương tiện khác 30 2.2 Đối tượng nghiên cứu 31 2.2.1 Đánh giá độc tính cấp : 31 2.2.2 Đánh giá độc tính bán trường diễn: 31 2.3 Địa điểm thời gian nghiên cứu 32 2.4 Phương pháp nghiên cứu 32 2.4.1 Thiết kế nghiên cứu 32 2.4.2 Bào chế xây dựng tiêu chuẩn sở cao đặc KNC 32 n 2.4.3 Đánh giá độc tính cấp 33 2.4.4 Đánh giá độc tính bán trường diễn 34 2.5 Phương pháp xử lý số liệu 35 2.6 Đạo đức nghiên cứu 35 3.1 Quy trình bào chế xây dựng tiêu chuẩn sở cao đặc KNC 36 3.1.1 Kết bào chế cao đặc 36 3.2 Nghiên cứu độc tính cấp 38 3.3 Nghiên cứu độc tính bán trường diễn 40 3.3.1 Tình trạng chung thay đổi thể trọng chuột cống trắng 40 dùng dài ngày 40 3.3.2 Sự thay đổi huyết học chuột 41 3.3.3 Sự thay đổi chức sinh hóa chuột 44 3.3.4 Ảnh hưởng dung dịch KNC điện tim chuột đạo trình DII………… 47 3.3.5 Sự thay đổi mô bệnh học gan, lách thận chuột 48 Chương IV BÀN LUẬN 53 4.1 Về độc tính cấp 53 4.2 Về độc tính bán trường diễn 54 4.2.1 Ảnh hưởng dung dịch KNC đến tình trạng chung thay đổi cân nặng chuột cống : 54 4.2.2 Ảnh hưởng dung dịch KNC đến chức tạo máu: 55 4.2.3 Ảnh hưởng dung dịch KNC đến chức gan: 56 4.2.4 Ảnh hưởng dung dịch KNC đến chức thận 57 4.2.5 Ảnh hưởng cao đặc KNC đến điện tim chuột 57 4.2.6 Ảnh hưởng dung dịch KNC đến kết mô bệnh học 57 KẾT LUẬN 58 KIẾN NGHỊ………………………………………………………………… TÀI LIỆU THAM KHẢO…………………………………………………… PHỤ LỤC…………………………………………………………………… n DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Số chuột chết lô chuột 39 Bảng 3.2 Ảnh hưởng cao đặc KNC đến thể trọng chuột 40 Bảng 3.3 Ảnh hưởng cao đặc KNC đến số lượng hồng cầu huyết sắc tố máu chuột 41 Bảng 3.4 Ảnh hưởng cao đặc KNC đến hematocrit thể tích trung bình hồng cầu máu 42 Bảng 3.5 Ảnh hưởng cao đặc KNC đến số lượng bạch cầu tiểu cầu máu 43 Bảng 3.6 Ảnh hưởng cao đặc KNC đến hoạt độ ALT AST máu chuột 44 Bảng 3.7 Ảnh hưởng cao đặc KNC đến hàm lượng billirubin toàn phần máu chuột 45 Bảng 3.8 Ảnh hưởng cao đặc KNC đến hàm lượng albumin cholesterol máu chuột 46 Bảng 3.9 Ảnh hưởng cao đặc KNC đến hàm lượng creatinin máu chuột 47 Bảng 3.10 Ảnh hưởng cao đặc KNC điện tim chuột đạo trình DII……… 47 n DANH MỤC ẢNH Ảnh 1.1: Độc hoạt 16 Ảnh 1.2: Tần giao 17 Ảnh 1.3: Ngưu tất 18 Ảnh 1.4: Thục địa 19 Ảnh 1.5: Tế tân 20 Ảnh 1.6: Đương quy 21 Ảnh 1.7: Đỗ trọng 22 Ảnh 1.8: Phòng phong 23 Ảnh 1.9: Tang ký sinh 24 Ảnh 1.10: Bạch thược 25 Ảnh 1.11: Khương hoạt 26 Ảnh 1.12: Đẳng sâm 27 Ảnh 1.13: Xuyên khung 27 Ảnh 1.14: Cam thảo 28 Hình 3.1: Hình ảnh đại thể gan, lách, thận chuột lơ chứng 49 Hình 3.2: Hình ảnh đại thể gan, lách, thận chuột lô trị 49 Hình 3.3: Hình ảnh đại thể gan, lách, thận chuột lô trị 49 Hình 3.4: Hình ảnh vi thể gan chuột lơ chứng 50 Hình 3.5: Hình ảnh vi thể gan chuột lô chứng 50 Ảnh 3.6: Hình ảnh vi thể gan chuột lô trị 50 Ảnh 3.7: Hình ảnh vi thể lách chuột lơ chứng 51 Ảnh 3.8: Hình ảnh vi thể lách chuột lô trị 51 Ảnh 3.9: Hình ảnh vi thể lách chuột lô trị 51 Ảnh 3.10: Hình ảnh vi thể thận chuột lô chứng 52 Ảnh 3.11: Hình ảnh vi thể thận chuột lơ trị 52 Ảnh 3.12: Hình ảnh vi thể thận chuột lô trị 52 n ĐẶT VẤN ĐỀ Ở Việt Nam, sách quốc gia thuốc định hướng chiến lược chăm sóc sức khỏe nhân dân giai đoạn 2000 – 2020 có yêu cầu “phát huy, thừa kế có chọn lọc, đánh giá tính an tồn, hiệu lực thuốc đồng thời đại hóa dạng bào chế từ thuốc cổ truyền để sử dụng rộng rãi cộng đồng”[17] Chế phẩm đông dược xem lĩnh vực có nhiều tiềm phát triển Sử dụng chế phẩm thuốc đông y xu hướng người bệnh bác sỹ cân nhắc lựa chọn điều trị[17] So với thuốc Tây y chủ yếu điều trị triệu chứng bệnh, thuốc Đông y mang lại hiệu điều trị lâu dài sở lý luận “bệnh thăng rối loạn âm dương”, “nguyên tắc điều trị chủ yếu lập lại cân âm dương điều hòa âm dương” [13] Tuy nhiên, nhược điểm thuốc đông y thời gian sắc thuốc, khơng có tính động dễ vận chuyển thuốc Tây y Bên cạnh đó, lâm sàng bác sỹ y học cổ truyền thường sử dụng thuốc cổ phương kết hợp gia giảm Tuy thuốc mang hiệu điều trị định chưa kiểm định tính an tồn, chưa có hành lang pháp lý để sử dụng rộng rãi thị trường Theo Cục quản lý y dược cổ truyền – Bộ y tế nhu cầu sử dụng, có khoảng 80% dân số nước phát triển sử dụng thuốc từ thảo dược để chăm sóc bảo vệ sức khỏe, người cao tuổi, người mắc bệnh mạn tính, bệnh khó chữa[17] Vậy sản xuất đơng dược chiếm thị phần nhỏ, xấp xỉ – 1,5%[17] Vấn đề đặt khơng thuốc, thuốc đơn mà di sản văn hóa dân tộc cần bảo vệ, phát huy, phát triển Do việc triển khai đại hóa y học cổ truyền, nghiên cứu bào chế thuốc y học cổ truyền thành dạng dễ sử dụng yêu cầu tất yếu đặt [17] Trong số đó, thuốc “KNC” thuốc kinh nghiệm Phó giáo sư Tiến sĩ Đậu Xuân Cảnh sử dụng lâm sàng nhiều mang lại hiệu tốt cho nhiều bệnh nhân mắc bệnh khớp như: thối hóa khớp gối, n PHỤ LỤC Phụ lục 1: Một số hình ảnh trình nghiên cứu Phụ lục 2: Kết thực nghiệm Phụ lục 3: Sơ đồ quy trình bào chế cao đặc KNC n Phụ lục 1: Một số hình ảnh trình nghiên cứu Lọ cao đặc KNC Cho chuột uống dung dịch KNC kim cong đầu tù n Cho chuột uống nước qua Kim cong đầu tù máng uống tự động Chuột nhắt trắng Swiss chủng trưởng thành Chuột cống trắng trưởng thành dòng Wistar n Phụ lục 2: Kết xây dựng tiêu chuẩn sở cao đặc KNC HỌC VIỆN QUÂN Y KHOA NGHIÊN CỨU THỰC NGHIỆM KẾT QUẢ XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CƠ SỞ VÀ NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH BÀI THUỐC KNC TRÊN THỰC NGHIỆM ** Bản tiêu chuẩn sở đƣợc xây dựng nhƣ sau  Công thức điều chế cho 100 g cao đặc KNC: Độc hoạt Tám mươi hai phảy năm gam 82,5g Phòng phong Tám mươi hai phảy năm gam 82,5g Tần giao Tám mươi hai phảy năm gam 82,5g Tang ký sinh Tám mươi hai phảy năm gam 82,5g Ngưu tất Tám mươi hai phảy năm gam 82,5g Đẳng sâm Tám mươi hai phảy năm gam 82,5g Bạch thược Bốn mươi mốt phảy hai lăm gam 41,25g Thục địa Bốn mươi mốt phảy hai lăm gam 41,25g Khương hoạt Bốn mươi mốt phảy hai lăm gam 41,25g Tế tân Bốn mươi mốt phảy hai lăm gam 41,25g Đương quy Bốn mươi mốt phảy hai lăm gam 41,25g Đỗ trọng Bốn mươi mốt phảy hai lăm gam 41,25g Xuyên khung Bốn mươi mốt phảy hai lăm gam 41,25g Mười sáu phảy hai lăm gam 16,25g Cam thảo Nước tinh khiết Vừa đủ theo quy trình * Yêu cầu chất lƣợng: - Tính chất, cảm quan : Chế phẩm dạng khối mềm, màu nâu, có mùi dược liệu đặc trưng, đồng n - Mất khối lượng làm khô : Không 20% - Định tính : Phải đạt theo quy định - Giới hạn nhiễm khuẩn : Tổng số vi sinh vật hiếu khí khơng q CFU/g 104; tổng số nấm không CFU/g 102; không 102 CFU vi khuẩn gram âm dung nạp mật g Không có Salmonella 10 g Khơng có Escherichia coli, Staphylococcus aureus g * Phƣơng pháp thử - Tính chất, cảm quan: Bằng cảm quan, cao đặc phải đạt theo yêu cầu nêu - Mất khối lượng làm khô: Tiến hành theo phụ lục 12.13 (xác định khối lượng làm khô) - DĐVN V Khoảng 1,0 g chế phẩm, sấy 800C áp suất giảm * Định tính Định tính bạch thược: phương pháp SKLM - Dung dịch thử: Lấy khoảng 1,5 g chế phẩm, thêm 20 ml ethanol 96% Khuấy siêu âm để hịa tan Lọc, bốc dịch lọc tới khơ cách thủy Hòa tan cắn trở lại ml ethanol 96% - Dung dịch đối chiếu: Cân xác khoảng 0,5 g bột bạch thược chuẩn vào bình nón nút mài 50 ml, thêm 20 ml ethanol 96%, siêu âm 20 phút Lọc, bốc dịch lọc tới khơ cách thủy Hịa tan cắn trở lại ml ethanol 96% - Dung môi khai triển: Hỗn hợp cloroform- ethyl acetat- methanolacid formic (40: 5: 10: 0,2, tt/tt) - Bản mỏng: Silica gel G, hoạt hóa 1050C 30 phút - Tiến hành: Chấm riêng biệt lên mỏng 10 µl dung dịch đối chiếu thử Triển khai sắc ký đến dung môi lớn 2/3 mỏng Lấy mỏng ra, để khơ ngồi khơng khí - Hiện màu: Phun dung dịch vanilin 5% acid sulfuric (TT) Sấy 1050C tới rõ vết n - Yêu cầu: Trên sắc ký đồ dung dịch thử phải có vết có màu sắc giá trị Rf với vết có sắc ký đồ dung dịch đối chiếu Định tính độc hoạt: phương pháp SKLM - Dung dịch thử: Lấy khoảng 2,0 g chế phẩm vào bình nón nút mài 50 ml, thêm 20 ml ether (TT), lắc siêu âm 30 phút Lọc, bốc dịch lọc tới khơ cách thủy Hịa tan cắn trở lại ml cloroform (TT) - Dung dịch đối chiếu: Lấy khoảng 2,0 g bột độc hoạt chuẩn vào bình nón nút mài 50 ml, thêm 20 ml ether (TT), ngâm qua đêm Lọc, bốc dịch lọc tới khơ cách thủy Hịa tan cắn trở lại ml cloroform (TT) - Dung môi khai triển: Hỗn hợp cyclohexan- ethyl acetat- aceton (8: 2: 0,5, tt/tt) - Bản mỏng: Silica gel 60 F254, hoạt hóa 1050C 30 phút - Tiến hành: Chấm riêng biệt lên mỏng µl dung dịch đối chiếu thử Sau triển khai, lấy mỏng ra, để khơ ngồi khơng khí Quan sát ánh sáng tử ngoại bước sóng 366 nm - Yêu cầu: Trên sắc ký đồ dung dịch thử phải có vết phát huỳnh quang màu sắc giá trị Rf với vết có sắc ký đồ dung dịch đối chiếu Định tính thục địa: phương pháp SKLM - Dung dịch thử: Lấy khoảng 1,0 g chế phẩm vào bình nón nút mài 100 ml, thêm 50 ml methanol (TT) Siêu âm 30 phút Lọc, bốc dịch lọc tới khô cách thủy Hòa tan cắn trở lại ml nước Lắc với n- butanol bão hòa nước (TT) lần, lần 10 ml Gộp dịch chiết n- butanol, đến cạn Hịa tan cắn ml methanol (TT) dung dịch thử - Dung dịch đối chiếu: Lấy khoảng g bột thục địa chuẩn vào bình nón nút mài 100 ml, tiến hành tương tự dung dịch thử - Dung môi khai triển: Hỗn hợp Ethyl acetat- methanol- acid formic (16: 0,5: 2, tt/tt) - Bản mỏng: Silica gel GF254, hoạt hóa 1050C 30 phút n - Tiến hành: Chấm riêng biệt lên mỏng µl dung dịch đối chiếu thử Sau triển khai, lấy mỏng ra, để khơ ngồi khơng khí - Hiện màu: Phun dung dịch 2- aminoethyl diphenylorinat 1% methanol (TT), sấy mỏng 1050C phút Quan sát mỏng ánh sáng tử ngoại bước sóng 366 nm - Yêu cầu: Trên sắc ký đồ dung dịch thử phải có vết phát huỳnh quang màu sắc giá trị Rf với vết có sắc ký đồ dung dịch đối chiếu * Giới hạn nhiễm khuẩn Không nhiễm khuẩn (Thử theo phụ lục 13.6 (thử giới hạn nhiễm khuẩn) – Dược điển Việt Nam V) ** Kết nghiên cứu độc tính cấp Bảng Độc tính cấp theo đường uống cao đặc KNC chuột nhắt trắng Số Lơ chuột chuột thí nghiệm Liều dùng (g cao đặc/kg thể trọng) Lô 10 12,0 Lô 10 18,0 Lô 10 24,0 Lô 10 30,0 Lô 10 36,0 Lơ 10 42,0 Thể tích cho uống 0,2 mL/10g x 3lần 0,2 mL/10g x 3lần 0,2 mL/10g x 3lần 0,2 mL/10g x 3lần 0,2 mL/10g x 3lần 0,2 mL/10g x 3lần n Số chuột sống/chết sau 72 Số chuột sống/chết sau 168 10/0 10/0 10/0 10/0 10/0 10/0 10/0 10/0 10/0 10/0 10/0 10/0 Bảng 2: Ảnh hưởng cao đặc KNC đến thể trọng chuột Thời điểm Lô nghiên cứu Thể trọng Lô chứng Lô trị Lô trị (g) sinh lý (1) (2) (3) Trƣớc thí n 10 10 10 p2-1> 0,05 nghiệm x 168,10 167,50 168,50 p3-2> 0,05 (a) SD 3,42 4,54 3,93 p3-1> 0,05 n 10 10 10 p2-1> 0,05 x 198,40 197,60 199,70 p3-2> 0,05 SD 5,57 4,92 7,01 p3-1> 0,05 n 10 10 10 p2-1> 0,05 x 216,00 215,50 216,80 p3-2> 0,05 SD 4,77 3,14 5,91 p3-1> 0,05 xét nghiệm Sau 45 ngày (b) Sau 90 ngày (c) p p pb-a < 0,05;pc-b < 0,05;pc-a < 0,05 Bảng 3: Ảnh hưởng cao đặc KNC đến số lượng hồng cầu huyết sắc tố máu chuột Thời điểm XN Lô chứng sinh lý (1) Lô trị (2) Lô trị (3) p Số lƣợng hồng cầu chuột (x1012g/l) Trƣớc thí 8,25 ± 0,84 8,22 ± 0,56 8,21 ± 0,77 Sau 45 ngày (b) 8,34 ± 0,78 8,38 ± 0,62 8,32 ± 1,15 Sau 90 ngày (c) 8,22 ± 0,38 8,30 ± 1,11 8,26 ± 0,64 nghiệm (a) p pb-a > 0,05;pc-b > 0,05;pc-a > 0,05 Hàm lƣợng huyết sắc tố máu chuột (g/L) n p2-1> 0,05 p3-2> 0,05 p3-1> 0,05 - Trƣớc thí 137,70 134,00 139,10 nghiệm (a) ± 8,29 ± 10,27 ± 12,47 139,50 136,80 138,60 ± 9,65 ± 10,64 ± 11,67 141,80 138,10 140,90 ± 9,13 ± 15,37 ± 10,27 Sau 45 ngày (b) Sau 90 ngày (c) p pb-a > 0,05;pc-b > 0,05;pc-a > 0,05 p2-1> 0,05 p3-2> 0,05 p3-1> 0,05 - Bảng 3.4 Ảnh hưởng cao đặc KNC đến hematocrit thể tích trung bình hồng cầu máu Thời điểm XN Lô chứng sinh lý (1) Lô trị (2) Lơ trị (3) p Hematocrit (%) Trƣớc thí 41,10 ± 1,82 41,04 ± 2,98 41,72 ± 2,25 p2-1> 0,05 Sau 45 ngày (b) 41,69 ± 2,77 41,76 ± 2,41 41,79 ± 3,14 Sau 90 ngày (c) 41,66 ± 2,34 41,52 ± 4,04 40,56 ± 2,04 nghiệm (a) p pb-a > 0,05;pc-b > 0,05;pc-a > 0,05 p3-2> 0,05 p3-1> 0,05 - Thể tích trung bình hồng cầu (fl) Trƣớc thí 50,60 50,90 50,30 nghiệm (a) ± 2,17 ± 2,38 ± 1,89 50,90 51,00 50,40 ± 2,77 ± 2,11 ± 1,96 50,70 50,80 50,50 ± 2,54 ± 3,22 ± 2,37 Sau 45 ngày (b) Sau 90 ngày (c) p pb-a > 0,05;pc-b > 0,05;pc-a > 0,05 p2-1> 0,05 p3-2> 0,05 p3-1> 0,05 - Bảng 5: Ảnh hưởng cao đặc KNC đến số lượng bạch cầu tiểu cầu máu n Lô chứng Thời điểm XN Lô trị (2) sinh lý (1) Lô trị (3) p Số lƣợng bạch cầu (G/l) Trƣớc thí 10,52 ± 1,03 10,26 ± 2,81 9,95 ± 2,07 Sau 45 ngày (b) 10,84 ± 2,03 11,37 ± 2,14 11,13 ± 2,17 Sau 90 ngày (c) 10,01 ± 2,95 11,19 ± 3,24 10,68 ± 2,73 nghiệm (a) pb-a > 0,05;pc-b > 0,05;pc-a > 0,05 p p2-1> 0,05 p3-2> 0,05 p3-1> 0,05 - Số lƣợng tiểu cầu (G/l) Trƣớc thí 622,00 605,80 600,80 nghiệm (a) ± 96,42 ± 125,77 ± 96,12 580,20 602,50 616,10 ± 88,76 ± 130,31 ± 72,91 594,00 590,40 614,40 ± 86,79 ± 86,05 ± 121,07 Sau 45 ngày (b) Sau 90 ngày (c) pb-a > 0,05;pc-b > 0,05;pc-a > 0,05 p p2-1> 0,05 p3-2> 0,05 p3-1> 0,05 - Bảng 6: Ảnh hưởng cao đặc KNC đến hoạt độ ALT AST máu chuột Thời điểm XN Lô chứng sinh lý (1) Lô trị (2) Lô trị (3) p Hoạt độ AST (UI/l) Trƣớc thí nghiệm 83,20 82,90 85,20 (a) ± 15,22 ± 11,50 ± 15,34 86,60 89,10 85,40 ± 15,06 ± 11,25 ± 18,42 91,60 90,20 84,40 ± 24,27 ± 14,00 ± 15,53 Sau 45 ngày (b) Sau 90 ngày (c) p pb-a > 0,05;pc-b > 0,05;pc-a > 0,05 n p2-1> 0,05 p3-2> 0,05 p3-1> 0,05 - Hoạt độ ALT (UI/l) Trƣớc thí nghiệm 66,80 64,40 68,40 (a) ± 16,93 ± 12,38 ± 17,54 67,40 66,00 65,40 ± 23,59 ± 14,61 ± 14,33 61,20 63,10 65,20 ± 13,03 ± 15,47 ± 11,56 Sau 45 ngày (b) Sau 90 ngày (c) p2-1> 0,05 p3-2> 0,05 p3-1> 0,05 pb-a > 0,05;pc-b > 0,05;pc-a > 0,05 p - Bảng 7: Ảnh hưởng cao đặc KNC đến hàm lượng billirubin tồn phần máu chuột Thời điểm XN Lơ chứng Lô trị (2) sinh lý (1) Lô trị (3) p Bilirubin tồn phần (µmol/L) Trƣớc thí 72,70 ± 77,30 ± 76,90 ± nghiệm (a) 21,86 17,76 14,46 76,70 ± 75,50 ± 75,90 ± 23,20 27,65 18,85 79,10 ± 75,10 ± 74,90 ± 15,35 18,55 16,91 Sau 45 ngày (b) Sau 90 ngày (c) p pb-a > 0,05;pc-b > 0,05;pc-a > 0,05 p2-1> 0,05 p3-2> 0,05 p3-1> 0,05 - Bảng 8: Ảnh hưởng cao đặc KNC đến hàm lượng albumin cholesterol máu chuột Thời điểm XN Lô chứng Lô trị (2) sinh lý (1) Lô trị (3) Albumin huyết tƣơng (g/l) n p Trƣớc thí 31,30 ± 2,79 31,50 ± 2,27 31,40 ± 2,67 Sau 45 ngày (b) 31,40 ± 2,32 31,70 ± 2,16 31,60 ± 2,46 nghiệm (a) p2-1> 0,05 p3-2> 0,05 p3-1> 0,05 Sau 90 ngày (c) 31,50 ± 2,37 p 31,80 ± 1,55 32,50 ± 1,72 pb-a > 0,05;pc-b > 0,05;pc-a > 0,05 - Cholesterol tồn phần (mmol/l) Trƣớc thí nghiệm (a) Sau 45 ngày (b) 1,17 ± 0,23 1,19 ± 0,47 1,16 ± 0,34 1,19 ± 0,14 1,16 ± 0,17 1,18 ± 0,32 p2-1> 0,05 p3-2> 0,05 p3-1> 0,05 Sau 90 ngày (c) p 1,15 ± 0,25 1,13 ± 0,29 1,14 ± 0,13 pb-a > 0,05;pc-b > 0,05;pc-a > 0,05 - Bảng 9: Ảnh hưởng cao đặc KNC đến hàm lượng creatinin máu chuột Thời điểm XN Lô chứng Lô trị (2) sinh lý (1) Lô trị (3) p p2-1> 0,05 Creatinin (mmol/l) Trƣớc thí 46,90 ± 7,16 47,60 ± 4,60 49,10 ± 5,36 Sau 45 ngày (b) 48,20 ± 9,02 47,30 ± 5,14 48,80 ± 8,18 Sau 90 ngày (c) 48,40 ± 12,05 46,90 ± 4,68 46,30 ± 8,11 nghiệm (a) p pb-a > 0,05;pc-b > 0,05;pc-a > 0,05 n p3-2> 0,05 p3-1> 0,05 - Bảng 3.10 Ảnh hưởng cao đặc KNC điện tim chuột đạo trình DII Thời điểm XN Lô chứng Lô trị (2) sinh lý (1) Lô trị (3) p Tần số tim (CK/phút, x ± SD) Trƣớc thí nghiệm 490,00 488,80 488,20 (a) ± 13,34 ± 10,52 ± 12,59 Sau 45 ngày 489,80 486,80 489,80 (b) ± 15,80 ± 18,63 ± 7,73 Sau 90 ngày 489,40 479,90 486,50 (c) ± 21,54 ± 9,91 ± 16,30 p pb-a > 0,05;pc-b > 0,05;pc-a > 0,05 p2-1> 0,05 p3-2> 0,05 p3-1> 0,05 - Biên độ (mV, x ± SD) Trƣớc thí nghiệm 0,319 0,318 0.316 (a) ± 0,044 ± 0,025 ± 0,031 0,318 0,316 0,319 ± 0,034 ± 0,038 ± 0,022 0,316 0,318 0,318 ± 0,042 ± 0,034 ± 0,039 Sau 45 ngày (b) Sau 90 ngày (c) p Sóng bất thƣờng pb-a > 0,05;pc-b > 0,05;pc-a > 0,05 Không Không n Không p2-1> 0,05 p3-2> 0,05 p3-1> 0,05 - n Phụ lục 3: Sơ đồ quy trình bào chế cao đặc KNC Dược liệu khô Kiểm tra chất lượng Cân theo tỷ lệ thuốc Sắc 1-2 giờ Đổ ngập nước,sắc 1giờ Lấy dịch sắc lần Lấy dịch sắc lần Tổng số dịch sắc Cô thủy Cao lỏng 1g/ml Lọc tạp chất Dịch chiết đạt tiêu chuẩn Cô quay chân không Cao đặc KNC n ... chế đánh giá độc tính cao đặc từ thuốc KNC thực nghiệm? ?? với mục tiêu sau: Xây dựng quy trình bào chế cao đặc từ thuốc ? ?KNC? ?? Xác định độc tính cấp độc tính bán trường diễn cao đặc ? ?KNC? ?? n Chƣơng...BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ HỌC VIỆN Y DƢỢC HỌC CỔ TRUYỀN VIỆT NAM LÊ THỊ DIỆU THÚY XÂY DỰNG QUY TRÌNH BÀO CHẾ VÀ ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CỦA CAO ĐẶC TỪ BÀI THUỐC KNC TRÊN THỰC NGHIỆM LUẬN VĂN THẠC... 3.1 .Quy trình bào chế xây dựng tiêu chuẩn sở cao đặc KNC 3.1.1 Kết bào chế cao đặc Bào chế cao đặc KNC thực theo bước sau: - Từ 100 thang thuốc KNC dạng dược liệu khô, thang 97g, tiến hành sắc thuốc,