1 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN HOÁ HỌC LÊ THỊ HỒNG NHUNG NGHIÊN CỨU HÓA HỌC VÀ THĂM DÒ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA LOÀI THÔNG LÁ DẸT (PINUS KREMPFII LECOMTE) VÀ NGŨ GIA B[.]
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN HỐ HỌC LÊ THỊ HỒNG NHUNG NGHIÊN CỨU HĨA HỌC VÀ THĂM DỊ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA LỒI THƠNG LÁ DẸT (PINUS KREMPFII LECOMTE) VÀ NGŨ GIA BÌ HƯƠNG (ACANTHOPANAX TRIFOLIATUS L MERR.) LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC Hà Nội – Năm 2014 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận án trung thực chưa có cơng bố cơng trình nghiên cứu trước Tác giả luận án Lê Thị Hồng Nhung LỜI CẢM ƠN Luận án hoàn thành Phịng Tổng hợp hữu cơ, Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Trong trình nghiên cứu, tơi nhận nhiều giúp đỡ chân tình thầy cơ, nhà khoa học đồng nghiệp, bạn bè người thân Với lòng biết ơn chân thành sâu sắc nhất, xin gửi đến PGS TS Trịnh Thị Thủy TS Nguyễn Thanh Tâm – người thầy tạo điều kiện thuận lợi, tận tình hướng dẫn có nhiều góp ý quý báu thời gian thực luận án Tôi xin chân thành cảm ơn GS TSKH Trần Văn Sung tạo điều kiện tốt để tơi học tập, nghiên cứu Phịng Tổng hợp hữu người ủng hộ thực luận án Tôi xin cảm ơn đến cán nghiên cứu phòng Tổng hợp hữu – Viện Hóa học giúp đỡ tơi nhiều q trình thực nghiệm hồn thành luận án Tôi xin gửi lời cảm ơn đến thầy cơ, nhà khoa học Viện Hóa học giảng dạy, hướng dẫn tơi hồn thành học phần chuyên đề chương trình đào tạo Tôi trân trọng cảm ơn Ban lãnh đạo Trường Đại học Công nghiệp Hà Nội Ban lãnh đạo Viện Hóa học tạo điều kiện thuận lợi cho thời gian học tập Cuối cùng, xin bày tỏ lịng cảm ơn sâu sắc đến tồn thể gia đình, đồng nghiệp bạn bè ủng hộ động viên tơi hồn thành tốt luận án Tơi xin trân trọng cảm ơn! Hà nội, ngày…… tháng…… năm 2014 Tác giả luận án MỤC LỤC DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ ………….……………………………….……… v DANH MỤC CÁC HÌNH ………………………………………….…… vi DANH MỤC CÁC BẢNG……………………………………………… … iix DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT………………………ix MỞ ĐẦU………….……………………………….……………… … ……… CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan hai loài nghiên cứu 1.1.1 Lồi Thơng dẹt (Pinus krempfii Lecomte) 1.1.1.1 Đặc điểm thực vật lồi Thơng dẹt 1.1.1.2 Tình hình nghiên cứu lồi Thơng dẹt 1.1.1.3 Tình hình nghiên cứu hóa học hoạt tính sinh học chi Pinus 1.1.2 Lồi Ngũ gia bì hương (Acanthopanax trifoliatus L.Merr.) 1.1.2.1 Đặc điểm thực vật loài Ngũ gia bì hương 1.1.2.2 Ứng dụng y học dân gian loài Ngũ gia bì hương 1.1.2.3 Tình hình nghiên cứu lồi Ngũ gia bì hương 1.2 Các hợp chất flavonoid 14 1.2.1 Cấu trúc hóa học 14 1.2.2 Hoạt tính sinh học 16 1.3 Các hợp chất triterpene khung lupane 19 1.3.1 Cấu trúc hóa học 19 1.3.2 Hoạt tính sinh học 19 1.4 Chuyển hóa hóa học hợp chất triterpene khung lupane hoạt tính sinh học chúng 22 1.4.1 Chuyển hóa nhóm OH 22 1.4.1.1 Chuyển hóa thành ester 22 1.4.1.2 Chuyển hoá thành ketone, acid, oxime, amine 24 1.4.1.3 Chuyển hóa thành carbamate 26 1.4.2 Chuyển hoá nhóm isopropenyl 27 1.4.2.1 Khử hố nối đơi ∆ 20(29) 27 1.4.2.2 Oxy hố nối đơi ∆ 20(29) 28 1.4.2.3 Chuyển hố vị trí allyl nối đôi 28 1.4.3 Chuyển hóa nhóm 28-COOH 29 1.4.3.1 Chuyển hóa thành ester 29 1.4.3.2 Chuyển hóa thành amide 30 CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU, HÓA CHẤT VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 32 2.1 Nguyên liệu, hóa chất thiết bị 32 2.1.1 Nguyên liệu 32 2.1.2 Hóa chất 32 2.1.3 Thiết bị 32 2.2 Phương pháp nghiên cứu 33 2.2.1.Phương pháp chiết tách 33 2.2.1.1 Phương pháp chiết tách chất từ lồi Thơng dẹt 33 2.2.1.2 Phương pháp chiết tách chất từ lồi Ngũ gia bì hương 34 2.2.2.Phương pháp xác định cấu trúc 34 2.2.3.Phương pháp đánh giá hoạt tính sinh học 35 2.2.3.1 Hoạt tính kháng chủng Bacillus subtilis 35 2.2.3.2 Hoạt tính gây độc tế bào 35 2.2.3.3 Hoạt tính chống oxi hóa 37 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM 39 3.1 Loài Thông dẹt (Pinus krempfii Lecomte) 38 3.1.1 Cặn chiết n-hexane 40 3.1.2 Cặn chiết ethyl acetate (EtOAc) 40 3.1.2.1 Phân lập chất 40 3.1.2.2 Dữ liệu phổ hợp chất phân lập 42 3.1.3 Cặn chiết n-buthanol (n-BuOH) 43 3.2 Loài Ngũ gia bì hương (Acanthopanax trifoliatus (L.) Merr.) 45 3.2.1 Phân lập hợp chất từ loài Ngũ gia bì hương 45 3.2.1.1 Quá trình phân lập 45 3.2.1.2 Dữ liệu phổ hợp chất phân lập 48 3.2.2 Tổng hợp dẫn xuất hai chất AT1, AT2 48 3.2.2.1 Tổng hợp dẫn xuất chất AT1 48 3.2.2.2 Tổng hợp dẫn xuất chất AT2 57 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 64 4.1 Kết từ lồi Thơng dẹt (Pinus krempfii Lecomte) 64 4.1.1 Thành phần hóa học cặn n-hexane 64 4.1.2 Các chất phân lập từ cặn EtOAc 65 4.1.2.1 Tectochrysin (PK1) 65 4.1.2.2 Pinostrobin (PK2) 68 4.1.2.3 Pinobanksin (PK3) 71 4.1.2.4 Galangin (PK4) 75 4.1.2.5 Strobopinin (PK5) 78 4.1.2.6 Crytostrobin (PK6) 82 4.1.3 Chất phân lập từ cặn chiết n-BuOH 85 4.2 Kết từ lồi Ngũ gia bì hương (Acanthopanax trifoliatus L Merr.) 92 4.2.1 Các hợp chất phân lập xác định từ lồi Ngũ gia bì hương 92 4.2.1.1 24-nor-11α-hydroxy-3-oxo-lup-20(29)-ene-28-oic acid (AT1) 92 4.2.1.2 24-nor-3α,11α dihydroxy-lup-20(29)-ene-28-oic acid (AT2) 95 4.2.1.3 11α,23-dihydroxy-3-oxo-lup-20(29)-ene-28-oic acid (AT3) 98 4.2.2 Các dẫn xuất chuyển hóa hóa học hợp chất AT1, AT2 105 4.2.2.1 Các dẫn xuất AT1 106 4.2.2.2 Các dẫn xuất AT2 112 4.3 Hoạt tính sinh học hợp chất phân lập chuyển hóa hóa học.117 4.3.1 Hoạt tính gây độc tế bào 117 4.3.2 Hoạt tính kháng chủng Bacillus subtilis 119 4.3.3 Hoạt tính chống oxi hóa 120 BẢNG TỔNG HỢP CÁC HỢP CHẤT PHÂN LẬP VÀ CHUYỂN HĨA HỐ HỌC TỪ HAI LỒI NGHIÊN CỨU………….… … 122 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 128 CÁC CƠNG TRÌNH LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 130 NHỮNG ĐÓNG GÓP MỚI CỦA LUẬN ÁN BẰNG TIẾNG ANH 132 TÀI LIỆU THAM KHẢO 133 PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ Trang Sơ đồ 1.1 Ester hố acid betulinic vị trí 3β-OH tạo hợp chất 22 56.1–56.8 Sơ đồ 1.2 Ester hoá betulinic acid vị trí 3β-OH tạo hợp chất 57 23 Sơ đồ 1.3 Chuyển hóa nhóm 3β-OH, 28-OH betulin 23 Sơ đồ 1.4 Chuyển hóa nhóm 28-OH betulin tạo dẫn xuất 64, 65 24 Sơ đồ 1.5 Chuyển hố nhóm 3β-OH betulinic acid thành ketone, 25 oxime, amine Sơ đồ 1.6 Tổng hợp acid betulinic từ betulin 25 Sơ đồ 1.7 Tổng hợp dẫn xuất carbamate betulinic acid 26 Sơ đồ 1.8 Chuyển hóa dẫn xuất carbamate betulin 27 Sơ đồ 1.9 Khử hố nối đơi ∆ 20(29) betulinic acid 27 Sơ đồ 1.10 Oxi hóa nối đơi ∆ 20(29) betulinic acid 28 Sơ đồ 1.11 Chuyển hóa vị trí allyl nối đôi tạo hợp chất 85- 87 29 Sơ đồ 1.12 Tổng hợp số dẫn xuất este 23-hydroxy betulinic acid 30 Sơ đồ 1.13 Tổng hợp dẫn xuất A43-D betulinic acid 31 Sơ đồ 3.1 Quy trình chiết rễ Thơng dẹt 39 Sơ đồ 3.2 Phân lập chất từ cặn chiết EtOAc rễ Thông dẹt 41 Sơ đồ 3.3 Phân lập chất PK7 từ cặn chiết n-BuOH rễ Thông dẹt 44 Sơ đồ 3.4 Quy trình chiết mẫu Ngũ gia bì hương 45 Sơ đồ 3.5 Phân lập hợp chất từ cặn chiết dichlorometan loài 47 Ngũ gia bì hương Sơ đồ 4.1 Tổng hợp dẫn xuất chất AT1 106 Sơ đồ 4.2 Tổng hợp dẫn xuất chất AT2 112 DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 1.1 Ảnh tiêu lồi Thơng dẹt Hình 1.2 Hình ảnh lồi Ngũ gia bì hương Hình 1.3 Vịng benzopyrano hợp chất flavonoid 14 Hình 4.1 Phổ khối ESI-MS (positive) chất PK1 67 Hình 4.2 Phổ 1H-NMR chất PK1 (500 MHz, DMSO-d6) 67 Hình 4.3 Phổ 13C-NMR DEPT chất PK1 (125 MHz, DMSO-d6) 68 Hình 4.4 Phổ 1H-NMR chất PK2 (500 MHz, CD3OD) 70 Hình 4.5 Phổ 1H-NMR (giãn) chất PK2 (500 MHz, CD3OD) 70 Hình 4.6 Phổ 13C-NMR DEPT chất PK2 (125 MHz, CD3OD) 71 Hình 4.7 Phổ khối FT-IR chất PK3 73 Hình 4.8 Phổ khối ESI-MS (positive ion) chất PK3 73 Hình 4.9 Phổ 1H-NMR chất PK3 (500 MHz, CD3OD) 74 Hình 4.10 Phổ 1H-NMR (giãn) chất PK3 (500 MHz, CD3OD) 74 13 Hình 4.11 Phổ C-NMR chất PK3 (125 MHz, CD3OD) 75 Hình 4.12 Phổ ESI-MS (positive ion) chất PK4 77 Hình 4.13 Phổ 1H-NMR chất PK4(500 MHz, CD3OD) 77 Hình 4.14 Phổ 13C-NMR chất PK4 (125 MHz, CD3OD) 78 Hình 4.15 Phổ FT-IR chất PK5 80 Hình 4.16 Phổ 1H-NMR chất PK5 (500 MHz, CD3OD) 81 Hình 4.17 Phổ 1H-NMR (giãn) chất PK5 (500 MHz, CD3OD) 81 Hình 4.18 Phổ 13C-NMR DEPT chất PK5 (125 MHz, CD3OD) 82 Hình 4.19 Phổ 1H-NMR chất PK6 (500MHz, CD3OD) 84 Hình 4.20 Phổ 1H-NMR (giãn) chất PK6 (500MHz, CD3OD) 84 Hình 4.21 Phổ 13C-NMR DEPT chất PK6 (125MHz, CD3OD) 85 Hình 4.22 Một số tương tác phổ HMBC chất PK7 86 Hình 4.23 Một số tương tác phổ NOESY chất PK7 87 Hình 4.24 Chất burselignan (PK7a) 87 Hình 4.25 Phổ HR-ESI-MS (positive ion) chất PK7 88 Hình 4.26 Phổ 1H NMR chất PK7 (500 MHz, CD3OD) 89 Hình 4.27 Phổ 13C DEPT chất PK7 (125 MHz, CD3OD) 89 Hình 4.28 Phổ HSQC chất PK7 90 Hình 4.29 Phổ HMBC chất PK7 90 Hình 4.30 Phổ NOESY chất PK7 91 Hình 4.31 Phổ khối ESI-MS (positive ion) chất AT1 94 Hình 4.32 Phổ 1H-NMR chất AT1 (500 MHz, CDCl3) 94 Hình 4.33 Phổ 13C-NMR DEPT chất AT1 (125MHz, CDCl3) 95 Hình 4.34 Phổ ESI-MS (positive ion) chất AT2 97 Hình 4.35 Phổ H-NMR chất AT2 (500 MHz, CDCl3) 97 Hình 4.36 Phổ 13C-NMR DEPT chất AT2 (125MHz, CDCl3) 98 Hình 4.37 Các tương tác phổ COSY, HMBC chất AT3 100 Hình 4.38 Phổ FT- IR chất AT3 101 Hình 4.39 Phổ HR-ESI-MS (positive ion) chất AT3 101 Hình 4.40 Phổ 1H-NMR chất AT3 (500 MHz, CD3OD) 102 Hình 4.41 Phổ 1H-NMR (giãn) chất AT3 (500 MHz, CD3OD) 102 13 Hình 4.42 Phổ C-NMR DEPT chất AT3 (125 MHz, CD3OD) 103 Hình 4.43 Phổ HSQC chất AT3 103 Hình 4.44 Phổ HMBC chất AT3 104 Hình 4.45 Phổ COSY chất AT3 104 10 DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Một số thành phần thường có tinh dầu, nhựa chi Pinus Bảng 1.2 Một số terpene tiêu biểu phân lập từ thân gỗ chi Pinus Bảng 1.3 Một số khung flavonoid thường gặp 15 Bảng 3.1 Các thông số phản ứng chuyển hóa tạo AT6, AT7 50 Bảng 3.2 Các thơng số phản ứng chuyển hóa tạo AT10 – AT12 52 Bảng 3.3 Các thông số phản ứng chuyển hóa tạo AT15 – AT17 55 Bảng 3.4 Các thơng số phản ứng chuyển hóa tạo AT20 – AT23 58 Bảng 4.1 Kết phân tích thành phần hóa học cặn chiết n- 64 hexane phương pháp GC-MS Bảng 4.2 Số liệu phổ 1H-, 13C-NMR PK1 tectochrysin 13 66 Bảng 4.3 Số liệu phổ H, C-NMR PK2 pinostrobin 69 Bảng 4.4 Số liệu phổ 1H, 13C-NMR PK3 số liệu pinobanksin 72 Bảng 4.5 Số liệu phổ 1H, 13C-NMR PK4 76 Bảng 4.6 Số liệu phổ 1H-, 13C-NMR PK5 (2S)-Strobopinin 79 Bảng 4.7 Số liệu phổ 1H-, 13C-NMR PK6 (2S)-Cryptostrobin 83 Bảng 4.8 Số liệu phổ 1H, C-NMR PK7, (+)-Isolariciresinol 87 C-NMR AT1 24-nor-11α-hydroxy- 93 13 Burselignan Bảng 4.9 Số liệu phổ 1H-, 13 3-oxo-lup-20(29)-ene-28-oic acid Bảng 4.10 Số liệu phổ H-, 13 C-NMR AT1 24-nor-3α,11α 96 dihydroxy-lup-20(29)-ene-28-oic acid Bảng 4.11 Số liệu phổ 1H, 13C-NMR AT3 (CD3OD, 500/125MHz) 99 Bảng 4.12 Kết hoạt tính gây độc tế bào 117 11 Bảng 4.13 Kết hoạt tính kháng chủng Bacillus subtilis 119 Bảng 4.14 Kết hoạt tính chống oxi hóa theo phương pháp DPPH 120 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT H-NMR Proton Nuclear Magnetic Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton Resonance Spectroscopy 13 C- Carbon -13 Nuclear Magnetic NMR Resonance Spectroscopy DEPT Distortionless Enhancement by Phổ cộng hưởng từ hạt nhân cacbon 13 Phổ DEPT Polarisation Transfer HMBC HSQC H-1H- Heteronuclear Multiple Bond Phổ tương tác đa liên kết hai chiều dị hạt Correlation nhân Heteronuclear Single Quantum Phổ tương tác hai chiều trực tiếp dị hạt Coherence nhân Phổ tương tác hai chiều đồng hạt nhân H-1H- Correlation Spectroscopy H-1H COSY ESI-MS Phổ khối ion hóa phun mù điện tử Electron Spray Ionization-Mass Spectroscopy HR-ESI- High Resolution Electron Spray Phổ khối phân giải cao ion hóa MS Ionization Mass Spectroscopy phun mù điện tử FT-IR Infrared Spectroscopy Phổ hồng ngoại s singlet d doublet t triplet q quartet dd doublet of doublet dt doublet of triplet br broad m multiplet J (Hz) Hằng số tương tác (Hz) 12 δ (ppm) Độ dịch chuyển hóa học tính (ppm = part per million) ppm (phần triệu) CC Column Chromatography Sắc ký cột SKLM Sắc ký lớp mỏng KB Human epidermoid carcinoma Ung thư biểu mô Hep-G2 Hepatocellular carcinoma human Ung thư gan người MCF-7 Adeno carcinoma Ung thư vú Lu Human lung carcinoma Ung thư phổi RD Human rhabdomyosarcoma Ung thư màng tim TPA 12-O-Tetradecanoylphorbol-13acetate IC50 Inhibitory concentration 50% Nồng độ ức chế 50% tế bào thử nghiệm EC50 Effective concentration 50% Liều có hiệu 50% tế bào thử nghiệm MIC Minimum inhibitory concentration Nồng độ ức chế tối thiểu Ac CH3CO- Acetyl Me -CH3 Methyl Bu -C4H9 Butyl Et -C2H5 Ethyl DMSO Dimetylsunfoxit TMS Tetrametyl Silan 4-DMAP 4-dimetylaminopyridin THF Tetrahydrofuran TEA Triethylamine AZT Azidothymidine TBDPSCl Tert-Butyldiphenylchlorosilane DIBALH Diisobutylaluminium hydride EDCI 1-Ethyl-3-(3- 13 dimethylaminopropyl)carbodiimide PL rt Phụ lục Nhiệt độ phòng Room temperature hiệu suất phản ứng H Rf Retention factor [αD] Năng suất quay cực LSP Lượng sản phẩm CTPT Công thức phân tử KLPT Khối lượng phân tử 14 15 MỞ ĐẦU Y học cổ truyền phương Đơng có lịch sử lâu đời kho tàng y dược phong phú từ hàng nghìn năm Ngày nay, với phát triển khoa học kỹ thuật nói chung, y học nói riêng, y học cổ truyền có đóng góp to lớn vào việc phòng chữa bệnh, làm tăng tuổi thọ người nâng cao chất lượng sống Nhiều hợp chất hóa học có nguồn gốc từ thiên nhiên sử dụng làm thuốc có hiệu atermisinin từ Thanh hao hoa vàng (Artemisia annua L.) làm thuốc chống sốt rét diệt thể phân liệt, taxol từ Thông đỏ (Taxus Cuspidata) sử dụng làm thuốc chống ung thư…Ngồi ra, người ta cịn sử dụng dịch chiết thảo dược làm thực phẩm chức việc hỗ trợ chữa bệnh dịch chiết từ Trinh nữ hoàng cung (Crinum latifolium) thuốc điều trị phì đại lành tính tuyến tiền liệt (u xơ tuyến tiền liệt) nam giới u xơ tử cung nữ giới, hay gần sản phẩm từ dịch chiết loại thảo dược quý (Khổ qua, Dây thìa canh, Hồi sơn, Sinh địa, Thương truật, Linh chi tảo Spirulina) có khả điều trị đái tháo đường… Với kết đạt cho thấy việc nghiên cứu thành phần hóa học từ cỏ thiên nhiên có ý nghĩa khoa học thực tiễn cao, đặc biệt Việt Nam, nước có thảm thực vật phong phú, có nguồn tài ngun dược liệu vơ q giá Ngồi việc phân lập hợp chất thiên nhiên, nhà khoa học cịn tiến hành chuyển hóa hóa học từ hợp chất thiên nhiên ban đầu nhằm tạo hoạt chất có hoạt lực cao hơn, ưu việt hơn, độc tính thấp Đây phương pháp để tìm kiếm hợp chất có hoạt tính sinh học, định hướng cho ngành hóa dược Theo thống kê dựa vào đơn thuốc Mỹ công bố cho thấy 50% loại thuốc kê đơn chứa hoạt chất có nguồn gốc từ tự nhiên tổng hợp dựa vào cấu trúc hợp chất tự nhiên Lồi Thơng dẹt (Pinus krempfii Lecomte) thuộc chi Pinus, họ Pinaceae Lồi có công bố giới từ năm 1966 thực vật đặc hữu Việt Nam, “hóa thạch sống” hoi cịn sót lại ngày 16 Việc nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học lồi Thơng dẹt ngồi ý nghĩa khoa học cịn có ý nghĩa lớn mặt xã hội Loài Ngũ gia bì hương (Acanthopanax trifoliatus (L.) Merr.) thuộc chi Acanthopanax, họ Araliaceae Ngay từ năm 80 kỷ trước, có nhiều cơng trình cơng bố thành phần hóa học Nhiều hợp chất triterpene acid có khung lupan với hàm lượng cao phân lập xác định Tuy nhiên, chưa có cơng trình khoa học nghiên cứu tổng hợp dẫn xuất triterpene từ cơng bố Trên tảng đó, chúng tơi lựa chọn đề tài: “Nghiên cứu hóa học thăm dị hoạt tính sinh học lồi Thơng dẹt (Pinus krempfii Lecomte) Ngũ gia bì hương (Acanthopanax trifoliatus L.Merr.)” Mục tiêu luận án: Nghiên cứu thành phần hóa học lồi Thơng dẹt (Pinus krempfii Lecomte) Nghiên cứu chiết tách chất, đặc biệt triterpene khung lupane có hàm lượng cao từ Ngũ gia bì hương (Acanthopanax trifoliatus L.Merr.) để làm nguyên liệu cho q trình chuyển hóa Tổng hợp dẫn xuất từ triterpene phân lập Khảo sát hoạt tính sinh học khả kháng chủng Bacillus subtilis, khả gây độc với số dòng tế bào ung thư, khả chống oxi hóa dịch chiết chất phân lập làm sở khoa học định hướng cho việc nghiên cứu ứng dụng hợp chất cơng nghệ hóa dược CHƯƠNG TỔNG QUAN 17 1.1 Tổng quan hai loài nghiên cứu 1.1.1 Lồi Thơng dẹt (Pinus krempfii Lecomte) 1.1.1.1 Đặc điểm thực vật lồi Thơng dẹt Thơng dẹt hay cịn gọi Thơng hai dẹt hay Thông dẹp, Thông Sré (Pinus krempfii, tên đồng nghĩa Ducampopinus krempfii (Lecomte) A Chev), thuộc chi Pinus, họ Thơng Pinaceae Lồi ví “sứ giả thời tiền sử” sinh thời với khủng long, thực vật cổ “hóa thạch sống” hoi cịn sót lại ngày Hiện tại, Thơng hai dẹt xếp loài hiếm, mức độ đe dọa bị tuyệt chủng (bậc R) nạn săn lùng sơn tràng môi trường sống chúng (rừng) bị thu hẹp đáng kể Loài thơng cổ với đặc trưng có hai dẹt hình lưỡi kiếm, lồi đặc hữu Việt Nam, phân bố hẹp tỉnh Lâm Đồng lồi thơng nhiều nhà thực vật học giới quan tâm [1], [2], [3], [4] Thông dẹt đại thụ cao 30m, đường kính đạt 1,5-1,6m, đơi tới 2m Tán thường rộng, dày, sẫm màu có hình rẻ quạt Đoạn thân cành lớn, khơng có cành nhánh, trịn đâm thẳng vào tán Cây mầm thường có khoảng 10-13 mầm có hình xoắn cong hướng lưỡi liềm, dài khoảng 2-3cm, sau đến nhỏ mọc quanh thân, dài 1,5-2,5cm Khi độ tuổi non (5-20 tuổi), dài rộng (dài 10-15cm) trưởng thành, xếp hai lưỡi kéo phần đầu cành Khi trưởng thành, nhỏ ngắn lại (dài 4-5cm), màu sẫm, mọc thành búi dày đầu cành, làm cho tán thông già trở nên dày sẫm màu [3] Hạt màu nâu nhạt có cánh trắng chín, hạt phát tán phạm vi tương đối rộng nón cịn tồn thời gian Quả chín vào mùa mưa 18 Hình 1.1 Ảnh tiêu lồi Thơng dẹt (lưu Bảo tàng thiên nhiên Việt Nam) Trong cơng trình Thực vật học đại cương Đông Dương, Hickel cho biết thông dẹt thường gặp độ cao 1200 - 1500m mọc thành quần thụ lớn Ở Việt Nam, Thông dẹt phân bố Lâm Đồng, song nơi dễ tiếp cận vùng Cổng Trời, dãy Hòn Nga thuộc xã Lát, huyện Lạc Dương, cách thành phố Đà Lạt 20km vùng núi Bidoup nằm khu bảo tồn thiên nhiên Thượng Đa Nhim, địa phận Long Lanh, cách thành phố Đà Lạt 50km 1.1.1.2 Tình hình nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học lồi Thơng dẹt Trên giới Việt Nam, có cơng trình nghiên cứu thành phần hóa học lồi Holger Erdtman, Thụy Sĩ công bố vào năm 1966 Từ thân gỗ Thông dẹt thu Nha Trang, Việt Nam, 10 chất chrysin (5,7-dihydroxyflavone) (1), strobopinin (2), cryptostrobin (3), demethoxymatteucinol (6,8-dimethylpinocembrin) (4), pinosylvin (5), pinosylvin monomethylether (6), tectochrysin (7), pinobanksin (8), pinocembrin (9), pinostrobin (10) nhóm nghiên cứu phân lập nhận dạng [4] Điều thú 19 hợp chất thuộc nhóm flavanoid Trong đó, hợp chất Cmethyl flavanoid 2, 3, 4, 8, hợp chất có cấu trúc thú vị [4],[5]: HO O HO H O H OH H3C O OH H O CH3 H HO O H H3C H OH O RO O O HO OH 5: R = H 6: R = Me HO O O H O O H OH O R OH 8: R = OH 9: R = H O 10 Bên cạnh đó, thành phần nhựa gỗ xác định dehydroabietic acid tinh dầu monoterpenoid, thành phần đặc trưng có mặt hầu hết tình dầu lồi thơng, đặc biệt α- β-pinen 1.1.1.3 Tình hình nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học chi Pinus Trong lồi Thơng dẹt nghiên cứu có nhiều lồi thuộc chi Pinus lại có nhiều cơng trình nghiên cứu thành phần hoạt tính sinh học cơng bố cho thấy có nhiều điều thú vị chi Theo thống kê giới đến năm 2012 có 450 hợp chất phân lập từ 80 loài thuộc chi 20 ... hoàn thành Phịng Tổng hợp hữu cơ, Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Trong q trình nghiên cứu, tơi nhận nhiều giúp đỡ chân tình thầy cơ, nhà khoa học đồng nghiệp, bạn bè người... loài nghiên cứu 1.1.1 Lồi Thơng dẹt (Pinus krempfii Lecomte) 1.1.1.1 Đặc điểm thực vật lồi Thơng dẹt 1.1.1.2 Tình hình nghiên cứu lồi Thơng dẹt 1.1.1.3 Tình hình nghiên cứu. .. chi tảo Spirulina) có khả điều trị đái tháo đường… Với kết đạt cho thấy việc nghiên cứu thành phần hóa học từ cỏ thiên nhiên có ý nghĩa khoa học thực tiễn cao, đặc biệt Việt Nam, nước có thảm thực