Đề tài thuyết minh hàm lượng thuốc kháng sinh nhóm tetracyclin trong sản phẩm thuỷ sản

HÀM LƯỢNG THUỐC KHÁNG SINH NHÓM TETRACYCLIN TRONG SẢN PHẨM THUỶ SẢN PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO GVHD: PH ÙNG VÕ CẨM HỒNG SINH VIÊN: TRẦN QUANG TUẤN MSSV:08139324 Tổng quan I.Mức độ độc hại tetracycline II.Phương pháp phân tích III.Đánh giá kết phân tích IV.Tài liệu tham khảo I.Mức độ độc hại tetracycline Kháng sinh nhóm tetracyclin bao gồm kháng sinh sau: tetracyclin (gọi tắt TC), oxytetracyclin (gọi tắt OTC) clortetracyclin (gọi tắt CTC) Tetracycline Oxytetracyclin Oxytetracyclin Tác dụng độc hại tetracyclin: Phản ứng với đường tiêu hóa: + Thường gặp ăn ngon, buồn nơn, nơn, lỏng, chứng nóng rát dày + Bội nhiễm nấm Candida albicans phải chữa trị với nystatin + Viêm ruột staphylocoque: thường nặng người già trẻ em Tai biến nhiễm độc gan: + Hiếm gặp nặng thoái hóa mỡ gan dùng liều cao theo đường tĩnh mạch + Ở bệnh nhân có thai tháng cuối sau sinh + Ở người suy thận Tai biến nhiễm độc thận: - Làm nặng thêm bệnh suy thận có từ trước - Viêm gan - thận tình trạng thối hóa mỡ gan - Gây tổn thương ống thận Tai biến răng: Ở trẻ em tuổi, thuốc gây rối loạn đổi màu làm hỏng men dùng thuốc nhiều lần Phụ nữ có thai cho bú: Khơng nên dùng thuốc tetracyclin thuốc qua sữa làm hỏng răng, hỏng men em bé, dễ gây hỏng chất xương răng, trẻ em dễ bị sâu Dung dịch chuẩn hỗn hợp 25 µg/ml 20 ml 40 ml 100 ml 200 ml 400 ml định mức 10 ml ml ddaxít oxalicmetanol Dung dịch chuẩn hỗn hợp 0.05 µg/ml 0.10 0.25 0.50 1.00 5.Phương pháp tiến hành: 5.1 Chuẩn bị mẫu thử -Cân 5,00 g (+/- 0,05) mẫu (m) băm nhuyễn cho vào ống ly tâm thủy tinh thứ -Thêm 20 ml dung dịch đệm vào ống nghiền 30 giây máy nghiền đồng thể Sau đó, ly tâm ống máy ly tâm 10 phút tốc độ 000 vòng/phút Gạn dịch ống thứ vào ống ly tâm thủy tinh thứ -Cho thêm 20 ml dung dịch đệm vào ống ly tâm thuỷ tinh thứ Trộn đều, ly tâm ống 10 phút tốc độ 000 vòng/phút lại gạn dịch vào ống ly tâm thủy tinh thứ Mẫu băm nhuyễn 5g 20 ml dung dịch đệm ống ly tâm thủy tinh thứ 10 ml dung dịch đệm ống ly tâm thủy tinh thứ ly tâm 10 phút tốc độ 000 v/ph Ly tâm 20 phút tốc độ 000 vph MẪU THỬ lọc qua giấy phễu Buch-ner ống ly tâm thủy tinh thứ Gạn dịch ống ly tâm thủy tinh thứ 5.2 Chuẩn bị mẫu trắng: -Mẫu trắng định nghĩa mẫu thủy sản xác định khơng có kháng sinh thuộc nhóm TC Tiến hành chuẩn bị mẫu trắng giống chuẩn bị với mẫu thử theo qui định Ðiều 5.1 5.3 Chuẩn bị mẫu để xác định độ thu hồi: -Thêm 100 µl dung dịch chuẩn hỗn hợp 25 µg/ml (4.3.7) vào 5,00 g mẫu trắng Ðồng mẫu máy nghiền đồng thể (4.1.3) Tiến hành chuẩn bị mẫu giống chuẩn bị với mẫu thử theo qui định Ðiều 5.1 100 µl dd chuẩn hh 25 µg/ml g mẫu trắng Ðồ ng ng hi nh ền ấ đồ t bằ ng ng th m ể áy mẫu trắng mẫu để xác định độ thu hồi 5.4 Làm dịch chiết: 5.4.1 Chuẩn bị cột Nối cột Sep - Pak C18 vào đầu xi lanh thủy tinh dung tích 100 ml Thêm 20 ml metanol , 20 ml nước cất vào xi lanh thủy tinh Loại bỏ dung dịch chảy qua cột 5.4.2 Làm dịch chiết: 5.4.2.1 Cho dịch chiết ống ly tâm thu vào cột Sep - Pak chuẩn bị Tráng rửa bình chứa 2,0 ml dung dịch đệm Trong giai đoạn này, kháng sinh nhóm tetracyclin hấp phụ lên bề mặt hạt rắn chứa cột Chú thích: Khơng cột Sep - Pak khô hai giai đoạn chuẩn bị cột làm dịch chiết Ðiều chỉnh cho dịch chảy khỏi cột giọt 5.4.2.2 Cho 20 ml nước cất vào xi lanh thủy tinh cho chảy qua cột Loại bỏ dịch chảy khỏi cột Làm khơ cột dịng khơng khí phút 5.4.2.3 Giải hấp kháng sinh nhóm tetracyclin cách cho 6,0 ml dung dịch axít oxalicmetanol chảy qua cột với tốc độ 1,5 ml/phút Thu dịch khỏi cột vào bình định mức 10 ml Ðịnh mức tới vạch (thể tích V) nước cất Tiến hành phân tích dịch thu HPLC theo qui định Ðiều 5.5 5.5 Tiến hành phân tích HPLC 5.5.1 Ðiều kiện phân tích a Cột sắc ký : Cột pha đảo C8, L x ID : 250 x 4,6 mm, kích thước hạt µm b Nhiệt độ cột: Nhiệt độ phòng c Pha động: Hỗn hợp dung dịch axit oxalic-metanolaxetonitrile d Tốc độ dòng: 1,2 ml/phút đ Bước sóng cài đặt cho đầu dị UV 350 nm e Thể tích tiêm: 60 µl 5.5.2 ổn định cột sắc ký 30 phút pha động 5.5.3 Tiêm dung dịch chuẩn vào máy HPLC theo thứ tự nồng độ từ thấp đến cao Mỗi dung dịch tiêm lần, tính chiều cao pic trung bình Dựng đường chuẩn biểu thị mối quan hệ chiều cao pic thu nồng độ (µg/ml) loại kháng sinh theo quan hệ tuyến tính bậc (phương trình y = ax + b) 5.5.4 Tiêm dung dịch mẫu thử, dung dịch mẫu trắng, dung dịch xác định độ thu hồi theo qui định vào hệ thống HPLC Mỗi dung dịch mẫu tiêm lần Tính giá trị trung bình Chú thích: Sau phân tích xong, làm hệ thống HPLC (bao gồm cột sắc ký) hỗn hợp: nước cất- metanol - axetonitrile theo tỷ lệ thể tích 7-1-2 30 phút III.Đánh giá kết 5.6.1 Ðộ lặp lại lần tiêm Ðộ lệch chuẩn (CVS) tính theo chiều cao pic sắc ký lần tiêm dung dịch chuẩn phải nhỏ 0,5 % 5.6.2 Ðộ thu hồi (R) Ðộ thu hồi xác định cho lần chạy mẫu phải lớn 80 % 5.6.3 Giới hạn phát hiện: Tín hiệu thu từ mẫu trắng B Tín hiệu thu từ mẫu thử S S B 5.6.3 Ðường chuẩn kháng sinh phải có độ tuyến tính tốt, hệ số tương quan quy hồi tuyến tính (R2) phải lớn 0,995 5.6.4 Ðối với mẫu chứa 0,5 µg/g kháng sinh nhóm TC, phải kiểm tra xác nhận kết cách tiêm lại dịch chiết mẫu dung dịch chuẩn cột C18 chạy chế độ cột C8 so sánh thời gian lưu píc mẫu píc chuẩn 6.Tính kết Hàm lượng kháng sinh có mẫu tính sở đường chuẩn thu (5.5.3) Với đường chuẩn dạng y = ax + b, hàm lượng kháng sinh có mẫu tính theo cơng thức sau: (Y  b) C (  g / kg )   F 1000 a Trong đó: - C nồng độ kháng sinh có mẫu, tính theo µg/kg - Y hiệu số chiều cao pic dịch chiết chiều cao pic có mẫu trắng tiêm vào HPLC, tính theo đơn vị độ dài - a, b thông số đường chuẩn y = ax + b, xác định theo Ðiều 5.5.3 - F hệ số pha lỗng mẫu có giá trị tỉ số thể tích dịch chiết thu sau làm V ( 5.4.2.3) khối lượng mẫu m ( 5.1.1) sử dụng IV.Tài liệu tham khảo • Quyết định 10/2002/QĐ-BTS tiêu chuẩn cấp ngành Bộ trưởng Bộ Thủy sản ban hành • Căn Nghị định số 50/CP ngày 21 tháng năm 1994 Chính phủ nhiệm vụ quyền hạn tổ chức máy Bộ Thuỷ sản • TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN CHĂN NUÔI- THÚ Y, Chuyên đề dược lý thú y THUỐC KHÁNG SINH NHÓM PHENICOLS THUỐC KHÁNG SINH NHÓM CYCLINES ... thực phẩm sản phẩm cá khơ mắm cá An Giang II.Phương pháp phân tích 1.Phạm vi áp dụng: Tiêu chuẩn qui định phương pháp xác định hàm lượng kháng sinh nhóm tetracyclin thủy sản sản phẩm thủy sản. .. chức máy Bộ Thuỷ sản • TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN CHĂN NUÔI- THÚ Y, Chuyên đề dược lý thú y THUỐC KHÁNG SINH NHÓM PHENICOLS THUỐC KHÁNG SINH NHÓM CYCLINES... CHẤT, KHÁNG SINH HẠN CHẾ SỬ DỤNG TRONG SẢN XUẤT KINH DOANH THUỶ SẢN Ban hành kèm theo Quyết định số 07/2005/QĐ-BTS ngày 24 tháng năm 2005 Bộ trưởng Bộ Thuỷ sản) TT Tên hoá chất, kháng sinh? ?Dư lượng