Đại học y dược Hồ Chí Minh Khoa Y học cổ truyền BÁO CÁO THỰC HÀNH MÔ HÌNH DƯỢC LÝ KHÁNG VIÊM GIẢM ĐAU MEN GAN Học viên Hoàng Thị Hồng Nhung Chuyên khoa I YHCT21 Tp Hồ Chí Minh, tháng 5/2022 MỤC LỤC MỤ[.]
Đại học y dược Hồ Chí Minh Khoa Y học cổ truyền BÁO CÁO THỰC HÀNH MƠ HÌNH DƯỢC LÝ KHÁNG VIÊM-GIẢM ĐAU-MEN GAN Học viên: Hoàng Thị Hồng Nhung Chuyên khoa I YHCT21 Tp Hồ Chí Minh, tháng 5/2022 MỤC LỤC MỤC LỤC Chương I TỔNG QUAN 1 Dược liệu nghiên cứu: Hà thủ ô đỏ Phản ứng viêm Giới thiệu mô hình gây viêm Carrageenan Chương II PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu 2.1 Chiết xuất cao hà thủ ô 2.2 Tiêu chuẩn cao 2.3 Mơ hình thực nghiệm 2.4 Cách tiến hành 10 Chương III KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 12 Cao thuốc 12 1.1 Độ ẩm 12 1.2 Hiệu suất chiết 12 Định tính hoạt chất có dược liệu cao thuốc 13 Kết mô hình giảm đau – chống viêm – men gan .15 3.1 Tình trạng sức khỏe chuột thời gian thí nghiệm 15 3.2 Đánh giá tác dụng giảm đau 15 3.3 Đánh giá tác dụng chống viêm 16 3.4 Đánh giá ảnh hưởng đến men gan .16 Chương IV KẾT LUẬN 18 TÀI LIỆU THAM KHẢO 19 Chương I TỔNG QUAN Dược liệu nghiên cứu: Hà thủ ô đỏ Tên khoa học vị thuốc[1]: Radix Fallopiae multiflorae Tên gọi khác: giao đằng, địa tinh Bộ phận dùng: Rễ củ phơi hay sấy khô Hà thủ ô đỏ Fallopia multiflora (Thunb.), thuộc họ Rau răm Polygonaceae Phương pháp bào chế[2] Sơ chế: Đỗ đen, Hà thủ ô với tỉ lệ 50:50 Đỗ đen: chọn đỗ đen xanh lòng, ngâm nước, loại bỏ hạt lép, chất lượng ngâm khoảng thời gian 30 phút Hà thủ ô: rửa sạch, cạo vỏ, ngâm nước vo gạo cho mềm thái thành miếng Các miếng lát hà thủ ô lại tiếp tục ngâm nước vo gạo ngày đêm Bào chế: Cửu chưng cửu sái Đâu đen ninh nhừ lấy nước Hà thủ ô ninh nhỏ lửa với nước đậu đen (chưng), đun đến cạn mang phơi cho khô (sái) Lập lại lần, gọi cửu chưng cửu sái Thành phần hóa học[7],[8],[4] Lecithin thành phần chính, chiếm 3.7%, Lecithin phosphatid, kết hợp acid glycerophosphoric với phân tử cholin hai phân tử acid béo Nhóm antraquinon (1.1%) chủ yếu emodin, physcion chrysophanol emodin nhiều Các hoạt chất khác: physcion, chrysophanol, citreorosein, chrysophanol-8-O-β-D-glucopyranoside, physcion-8-O-β-D-glucopyranoside, emodin8-O-β-Dglucopyranoside, emodin-1,6-dimethylether, questin, questinol, 2- acetylemodin, 2-methoxy-6-acetyl-7-methyljuglone, emodin-8-O-(6’- O-malonyl)glucoside Page of 19 Nhóm glycosid (1.2%) chủ yếu stilben glycoside, ngồi cịn có (2,3,5,4’tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucopyranoside, 2,3,5,4’- tetrahydroxystilbene-2,3-Oβ-D-glucopyranoside Nhóm Flavonoids gồm tricin, quercetin-3-O-galactoside, quercetin-3-Oarabinoside Ngồi cịn có gallic acid, catechin, torachrysone-8-O-β-Dglucopyranoside, N-transferuloyl tyramine, N-transferuloyl-3- methyldopamine and 1,3-dihydroxy-6,7dimethylxanthone-1-O-βD-glucopyranoside Anthraquinones stilben glycoside nhóm hoạt chất có tác dụng dược lý Sau bào chế, hai anthraquinon, cụ thể emodin-8-O- (6'-O-malonyl) glucoside Physcion-8-O- (6'-O-malonyl) -glucoside biến giảm đáng kể 2,3,5,4'-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucopyranoside, emodin-8-O-β-D- glucopyranoside Physcion-8-O-β-D-glucopyranoside giảm sau chế biến dược liệu Mặt khác, hàm lượng emodin physcion thường tăng lên sau bào chế Tác dụng theo dược lý cổ truyền[3] [Tính vị] Vị đắng, ngọt, chát Tính ấm [Quy kinh] Can, Thận, Tâm [Cơng năng] Hà thủ ô sống: giải độc tiêu thũng, nhuận tràng thơng tiện Hà thủ chế: ích tinh huyết, bổ huyết tư âm, bổ Can Thận, làm đen tóc, nhuận tràng thông tiện [Chủ trị] Huyết hư: điều trị huyết hư thiếu máu, thể mệt nhọc, vô lực, thở ngắn, da xanh, gầy, khơ sáp, chóng mặt, nhức đầu, râu tóc bạc sớm, mồ trộm, tim loạn nhịp, ngủ Can thận âm hư: điều trị thận âm hư dẫn đến lưng đau, di tinh, liệt dương, phụ nữ bạch đới, kinh nguyệt không đều, tóc bạc sớm Page of 19 Nhuận tràng thơng tiện: đại tiện táo huyết hư, ngồi cịn điều trị trĩ, đại tiện máu, Giải độc, chống viêm: trị mụn nhọt, thấp chẩn, lở ngứa, tràng nhạc, viêm gan mạn An thần: dây giao đằng có tác dụng an thần, gây ngủ Tác dụng theo dược lý đại[4] Chống lão hóa: hà thủ kéo dài tuổi thọ chim cút già, kéo dài thời gian sinh truwognr ruồi giấm hà thủ ô cải thiện rõ rệt chức TKTW chuột, làm tăng hoạt tính SOD, giảm MDA não gan vật thí nghiệm, tăng hàm lượng monoamine dẫn truyền thần kinh, giảm hoạt tính MAO-B não Thúc đẩy q trình trao đổi chất, dịch chiết hà thủ làm tăng hàm lượng protein não chuột, tăng khả sửa chữa DNA, cắn chiết ethanol dịch chiết nước hà thủ có tác dụng tăng cường hàm lượng protein acid nucleic bào tương chuột nhắt già Tăng cường khả miễn dịch: tăng lượng tuyến ức chuột, đối kháng thuốc ức chế miễn dịch prednisolone cyclophosphamide gây teo tuyến ức lách chuột nhắt già, tăng tỷ lệ thực bào đại thực bào, tăng chức tế bào lympho T lympho B Hạ lipid máu, chống xơ vữa động mạch: làm giảm cholesterol toàn phần triglyceride huyết chuột cống mỡ máu cao thực nghiệm, làm giảm rõ rệt hàm lượng TC, tăng tỷ lệ HDL-C/TC chim cút mowxmaus cao thực nghiệm, làm giảm hình thành mảng xơ vữa mơ hình thỏ lipid máu cao Hoạt chất có tác dụng hạ lipid máu hà thủ ô bao gồm: anthraquinone, diphenylene lecithin Cơ chế hạ mỡ máu hà thủ ô: (1) anthraquinone nhuận tràng, làm giảm hấp thu chất béo, tăng thải trừ acid mật qua đường ruột (2) ảnh hưởng đến hoạt tính coenzyme 3-hydroxy–3 methyl amylase (HMG-CoA) 7α-hdroxylase, ức chế tổng hợp cholesterol nội sinh tăng chuyển hóa cholesterol thành acid mật Kích thích khả tạo máu tủy xương: dịch chiết nước hà thủ ô làm tăng số lượng tế bào gốc tạo máu tủy xương, tăng số lượng hồng cầu, số lượng bạch cầu hạt máu ngoại vi chuột nhắt trắng Page of 19 Tác dụng đến hệ tiêu hóa: (1) nhuận tràng: hà thủ sống có tác dụng nhuận tràng thông tiện mạnh, hoạt chất gây tác dụng anthraquinone, sau chế biến, anthraquinone dạng kết hợp chuyển hóa thành dạng tự do, tác dụng tả hạ, nhuận tẩy giảm đi, tác dụng bổ tăng lên (2) bảo vệ gan: stilbene glucoside hà thủ ức chế dầu ngơ peroxy hóa gây gan nhiễm mỡ tổn thương gan chuột, giảm hàm lượng AST, ALT, acid béo tự nồng độ lipoperoxid gan Trong hà thủ có chứa hàm lượng lecithin cao có tác dụng bảo vệ gan Tác dụng đến chức nội tiết: hà thủ ô kích thích vỏ thượng thận, cải thiện tình trạng suy thận chuột nhắt trắng cắt bỏ hai tuyến thượng thận dùng dịch chiết hà thủ ô lâu dài làm tặng trọng lượng tuyến thượng thận chuột nhắt trắng, đồng thời làm tăng hàm lượng T4 máu chuột đực già Phản ứng viêm Viêm phản ứng bảo vệ bình thường thể trước tổn thương tác nhân gây bệnh Viêm xảy tế bào bạch cầu thể tăng cường hoạt động để bảo vệ thể khỏi bị đả kích tác nhân gây bệnh Phản ứng viêm thể cấp tính (kéo dài vài ngày) gọi phản ứng viêm cấp, mãn tính (phản ứng lại xúc phạm liên tục khơng giải quyết) Tình trạng viêm phát triển thành tổn thương mơ vĩnh viễn xơ hóa Giới thiệu mơ hình gây viêm Carrageenan Carrageenan tên chung họ polysaccharid tạo gel làm nhớt, thu cách chiết xuất từ số loài tảo biển đỏ Carrageenan có nguồn gốc từ số lồi rong biển thuộc lớp Rhodophyceae Loại rong biển đặc biệt phổ biến Đại Tây Dương gần Anh, Châu Âu Bắc Mỹ Hàm lượng carrageenan rong biển thương mại thường 30-60% trọng lượng khơ lên tới 70–80% Carrageenan nằm thành tế bào chất gian bào mô thực vật Sự tổng hợp carrageenan thay đổi số họ tảo đỏ quan trọng tùy theo giai đoạn sinh sản Carrageenan giá trị dinh dưỡng sử dụng chế biến thực phẩm đặc tính tạo bọt, làm đặc tạo nhũ tương (Van de Velde et al 2002) ứng dụng dược phẩm (Takamatsu Tosa 1993, trích dẫn Van de Velde et al 2002) thử nghiệm thuốc chất thường sử dụng để thử nghiệm chống viêm Page of 19 Mô hình gây phù chân chuột carrageenan gây thử nghiệm để xác định hoạt động chống viêm tạo thành mơ hình động vật đơn giản thường quy để đánh giá đau vị trí viêm mà khơng có tổn thương tổn thương bàn chân bị viêm Phù chân chuột ngày sử dụng nhiều để thử nghiệm loại thuốc chống viêm nghiên cứu chế liên quan đến chứng viêm Quá trình phù nề chân sau chuột sau tiêm carrageenan xảy giai đoạn, phụ thuộc vào đại lượng trọng lượng tuổi, chất trung gian khác hoạt động theo trình tự để tạo phản ứng viêm Histamine, serotonine bradykinin chất trung gian phát giai đoạn đầu trình viêm carrageenan; prostaglandin (PGs) tham gia vào trình tăng tính thấm thành mạch phát giai đoạn muộn trình viêm Viêm chỗ / tồn thân có liên quan đến mức độ tăng cường cytokine tiền viêm TNF-α, IL-1 IL-6 (Cuzzocrea et al 1999) Giai đoạn ban đầu phù nề, không bị ức chế thuốc chống viêm không steroid (NSAID) indomethacin aspirin, cho giải phóng histamine, 5hydroxytryptamine (5-HT) bradykinin Giai đoạn tăng tốc thứ hai sưng tấy không liên quan đến việc sản xuất tăng cao prostaglandin, mà cho cảm ứng cyclooxygenase (COX-2) chân sau (Nantel cộng 1999) Nó bị chặn NSAID (Handy Moore 1998) Sự xâm nhập hoạt hóa bạch cầu trung tính chỗ góp phần vào phản ứng viêm cách tạo ra, số chất trung gian khác, gốc tự có nguồn gốc oxy anion superoxide (O2 -) gốc hydroxyl (Salvemini et al 1996; Posadas et al 2004) Một chất trung gian quan trọng khác viêm cấp tính nitric oxide (NO) tạo tình trạng bệnh lý ba dạng đồng dạng riêng biệt nitric oxide synthase (NOS): NOS nội mô (eNOS), NOS tế bào thần kinh (nNOS) NOS cảm ứng (iNOS) Carrageenan tạo giải phóng NO vị trí bị thương Việc truyền chất ức chế NOS không chọn lọc, NG monomethyl-larginine acetate (L-NMMA), thể số tính chọn lọc để ức chế đồng dạng tế bào thần kinh nội mô, ngăn chặn giải phóng NO sau tiêm carrageenan nghiên cứu Truyền chất ức chế NOS cảm ứng, aminoguanidine hemisulfate (AG), ngăn chặn giải phóng NO Page of 19 2,5–8 sau tiêm carrageenan Cắt dây thần kinh ức chế hồn tồn giải phóng NO tối đa ức chế phần giải phóng NO 4,5–8 sau tiêm carrageenan Những phát nNOS góp phần tạo NO giai đoạn đầu giai đoạn cuối, iNOS góp phần vào giai đoạn muộn Việc sản xuất giải phóng NO NOS góp phần gây tổn thương mô phù nề viêm tăng nhạy cảm đau[5],[6] Mơ hình gây viêm Carrageenan thực sau: Gây phù bàn chân sau chuột cách tiêm da bề mặt gan bàn chân sau chuột 0,1ml dịch treo 1% carragenin, pha nước cất hay dung dịch NaCl đẳng trương Chỉ pha trước dùng, để lâu carragenin lắng xuống Trong trình viêm gây carragenin, mức độ viêm tối đa khoảng thời gian – 4h Độ phù chân chuột tính theo cơng thức: Vx = | Vx – V0 | Trong đó: Vx : độ phù chân chuột đo sau x V0 : thể tích chân chuột bình thường Vx: thể tích chân chuột đo sau x Page of 19 Chương II PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu - Cao thuốc hà thủ ô - Chuột nhắt trắng, chủng Swiss albino, khỏe mạnh, cung cấp viện Pasteur Tp Hồ Chí Minh ni đầy đủ với thực phẩm viên dành cho lồi, ổn định tuần trước tiến hành thí nghiệm Phương pháp nghiên cứu 2.1 Chiết xuất cao hà thủ Phương pháp chiết xuất: chiết nóng với dung môi nước Tiến hành: Cân 250 gram hà thủ ơ, cho vào 2,5 lít nước (tỷ lệ 1:10) Đun đến sơi, trì nhiệt độ khoảng 80°c 60 phút Thu dung dịch (1) Đun lần 2, pha dược liệu với dung môi nước theo tỷ lệ 1:10 trên, đun đến sơi, trì 80°c 45 phút, thu dung dịch (2) Trộn dung dịch (1) (2) với nhau, tiếp tục cô dịch chiết đến thu dung dịch sệt mang đun cách thủy đến đạt độ ẩm mong muốn Xác định khối lượng cao thu được: đo khối lượng cốc đựng cao thu được, trừ khối lượng riêng cốc chưa đựng cao thuốc, thu khối lượng riêng cao chiết 2.2 Tiêu chuẩn cao a Độ ẩm Tiến hành đo độ ẩm dược liệu khô cao thuốc cân sấy ẩm Metler Toledo HB43 Halogen lần, lấy số liệu trung bình b Phương pháp định tính hoạt chất có dược liệu cao thuốc Định tính Flavonoid Lấy 5g dược liệu pha với 30ml cồn 96°, đun nóng phút, lọc qua giấy lọc, thu dịch lọc A Chia vào ống nghiệm Page of 19 Ống 1: pha 2ml dịch lọc với giọt thuốc thử FeCl3 Ống 2: pha 2ml dịch lọc với giọt thuốc thử PbCl2 Ống 3: pha 2ml dịch lọc với giọt thuốc thử NaOH Đối với cao thuốc: cho 0,1 gam cao vào cốc có mỏ, thêm 30ml cồn có chưa 5% acid, thu hỗn hợp D => Đun cách thủy phút, lọc qua giấy thu dịch lọc D1 => Cơ cắn => hịa cắn với 10ml nước nóng => lọc qua giấy => thu D2 Chia D2 vào ống nghiệm làm thí nghiệm tương tự Quan sát ghi nhận kết Định tính Tanin Lấy 5g dược liệu pha với 20ml nước cất, đun nóng phút, lọc qua giấy lọc, thu dịch lọc A o Ống 1: pha 2ml dịch lọc với giọt thuốc thử FeCl3 o Ống 2: pha 2ml dịch lọc với giọt thuốc thử PbCl2 Đối với cao thuốc: cho 0,1 gam cao vào cốc có mỏ, thêm 30ml cồn có chưa 5% acid, thu hỗn hợp D => Đun cách thủy phút, lọc qua giấy thu dịch lọc D1 => Cô cắn => hịa cắn với 10ml nước nóng => lọc qua giấy => thu D2 Chia D2 vào ống nghiệm làm thí nghiệm tương tự Quan sát ghi nhận kết Định tính Saponin Thử nghiệm tạo bọt Lấy 5g dược liệu pha với 30ml cồn 70°, đun nóng phút, lọc qua giấy lọc thu dịch lọc Cô cắn dịch lọc đến 2ml + 10ml nước cất => lắc mạnh phút để tạo bọt Đối với cao thuốc: cho 0,1 gam cao vào cốc có mỏ, thêm 30ml cồn có chưa 5% acid, thu hỗn hợp D => Đun cách thủy phút, lọc qua giấy thu dịch lọc D1 => Cơ cắn => hịa cắn với 10ml nước nóng => lọc qua giấy => thu D2 Chia D2 vào ống nghiệm làm thí nghiệm tương tự Quan sát ghi nhận kết quả: Để yên quan sát, bọt bền vững 15p kết luận có saponin Page of 19 Định tính Alcaloid Lấy 5g dược liệu pha với 30ml cồn acid, đun nóng phút, lọc qua giấy lọc, thu dịch lọc B Cô cắn dịch lọc B đến cịn 2ml + 10ml nước nóng => lọc qua giấy, thu dịch lọc C Chia làm ống: Ống 1: pha 2ml dịch lọc với giọt thuốc thử Bouchardat Ống 2: pha 2ml dịch lọc với giọt thuốc thử Valmayer Ống 3: pha 2ml dịch lọc với giọt thuốc thử Dragendroff Đối với cao thuốc: cho 0,1 gam cao vào cốc có mỏ, thêm 30ml cồn có chưa 5% acid, thu hỗn hợp D => Đun cách thủy phút, lọc qua giấy thu dịch lọc D1 => Cô cắn => hịa cắn với 10ml nước nóng => lọc qua giấy => thu D2 Chia D2 vào ống nghiệm làm thí nghiệm tương tự Quan sát ghi nhận kết 2.3 Mơ hình thực nghiệm Mơ hình kháng viêm – giảm đau – men gan a Mơ hình giảm đau Đánh giá khả chịu đau chuột thí nghiệm mâm nhiệt Thiết bị: mâm nóng Ugo – Basile, Italia, model 35100-001 Tính thời gian từ lúc chuột bắt đầu tiếp xúc với mân nhiệt chuột nhảy lên vượt ngưỡng chịu đau So sánh kết lơ chuột b Mơ hình kháng viêm Tiêm da, gan bàn chân chuột dung dịch Carrageenan 1% (pha với nước muối sinh lý, thể tích 0,05ml/con) Sau 30 phút tiêm, cho chuột uống thuốc theo lô, theo liều định Sau tiêm, đo thể tích chân chuột V2 So sánh kết lô chuột Page of 19 c Đánh giá ảnh hưởng thuốc men gan Thiết bị: máy quay ly tâm, máy xét nghiệm sinh hóa bán tự động, pipet, hóa chất xét nghiệm AST (R1 R2) Lấy máu đuôi chuột, lô ống, quay ly tâm 10 phút để tách huyết tương Xét nghiệm số AST máy xét nghiệm sinh hóa bán tự dộng So sánh kết lô chuột 2.4 Cách tiến hành a Tiến trình thực Chia chuột nhắt thành lô, lô Lơ 1: cho chuột uống nước cất (nhóm chứng) Lô 2: cho chuột uống paracetamol Lô 3: cho chuột uống cao hà thủ ô paracetamol Lô 4: cho chuột uống cao hà thủ ô Tiến hành nuôi ngày: Ngày Đánh dấu, cân trọng lượng, chia lô Đo V0 thể tích chân chuột ban đầu Cho uống thuốc theo liều/ cân nặng Ngày Cho uống thuốc theo liều/ cân nặng Ngày Cho uống thuốc theo liều/ cân nặng Đánh giá khả chịu đau mân nhiệt Ngày Cho uống thuốc theo liều/ cân nặng Gây viêm carrageenan 1% Đo V2 thể tích chân chuột sau gây viêm Ngày Cho uống thuốc theo liều/ cân nặng Lấy máu đuôi, làm xét nghiệm AST (SGOT) Page 10 of 19 b Xác định liều thuốc cho chuột Liều hà thủ ô Liều paracetamol Liều người: 44g/ kg, hiệu suất chiết Liều chuột: 150mg/kg chuột = 11,1% 0,15g/ 100g chuột Liều chuột: 44 × 12×11 % = 0,968g/ 60 kg chuột/10ml Thể tích dung dịch cho uống chuột 0,1ml/10g chuột/ ngày Cách pha thuốc: Cách pha thuốc: Pha 1ml nước cất với 0,15g thuốc / 100g Pha 1ml nước cất với 0,0968g thuốc / chuột 100g chuột Cho uống theo tỷ lệ cân nặng Cho uống theo tỷ lệ cân nặng Page 11 of 19 Chương III KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Cao thuốc 1.1 Độ ẩm Bảng 1: Độ ẩm dược liệu cao chiết Lần Lần Lần Trung bình Dược liệu khô 9,56% 8,44% 7,9% 8,63% Cao chiết 12,77% 10,49% 10,04% 11,1% Tiêu chuẩn phân loại cao thuốc[2] Cao mềm: thể chất lỏng, sánh, mật đặc, độ ẩm 20-25% Cao đặc: thể chất dẻo đặc quánh, sờ không dính tay, độ ẩm 10-15% Cao khơ: khối xốp bột khô đồng nhất, độ ẩm không 5% => Như vậy, cao thu cao đặc với độ ẩm 11,1% 1.2 Hiệu suất chiết Sau cô đặc dịch chiết 250g dược liệu khô, thu 28.26g cao hà thủ ô Dược liệu khô Cao chiết Khối lượng (gam) 250 28,26 Độ ẩm (%) 8,63 11,1 Hiệu suất chiết: H= mcao−m cao × độ ẩm cao 28,26−28,26× 11,1 % ×100 %= ×100 %= 11% m DL−m DL ×độ ẩm DL 250−250 ×8,63 % Page 12 of 19 Định tính hoạt chất có dược liệu cao thuốc Bảng 2: Kết định tính hoạt chất có dược liệu cao thuốc Hoạt chất Dược liệu Cao thuốc Saponin Hiện tượng: Sau lắc mạnh 5p, có Hiện tượng: Sau lắc mạnh 5p, có xảy tượng tạo bọt, bọt xảy tượng tạo bọt, bọt bền vững sau 15p bền vững sau 15p KL: dược liệu có chứa KL: cao thuốc có chứa saponin saponin Tannin Hiện tượng: dịch lọc dược liệu tạo Hiện tượng: dịch chiết cao tạo kết kết tủa đen với FeCl3 tủa trắng tủa đen với FeCl3 tủa trắng đục đục với PbCO3 với PbCO3 Page 13 of 19 KL: dược liệu có chứa tannin KL:trong cao thuốc có chứa tannin Flavonoi d Hiện tượng: dịch lọc dược liệu tạo kết tủa màu đen với FeCl 3, kết tủa màu vàng với PbCO3, kết tủa màu nâu với NaOH tạo kết tủa màu đen với FeCl3, kết tủa màu vàng với PbCO3, kết tủa màu nâu với NaOH KL: dược liệu có chứa flavonoid Hiện tượng: dịch chiết cao thuốc KL: cao thuốc có chứa flavonoid Alcaloid Hiện tượng: dịch lọc dược liệu Hiện tượng: dịch chiết cao thuốc không tạo kết tủa với thuốc không tạo kết tủa với thuốc thử Bouchardat, Dragendroff thử Bouchardat, Dragendroff Valmayer Valmayer KL: dược liệu chứa KL: cao thuốc khơng có Page 14 of 19 alcaloid chứa alcaloid Như vậy, dược liệu cao thuốc có chứa hoạt chất: saponin, tannin, flavonoid không chứa alcaloid Kết mô hình giảm đau – chống viêm – men gan 3.1 Tình trạng sức khỏe chuột thời gian thí nghiệm Tiến hành nuôi chuột nhắt trắng khỏe mạnh, chia làm lô, nuôi thức ăn chuyên dụng cho uống thuốc ngày Sau ngày 1, lô (chuột chuột 6) thí nghiệm cho uống paracetamol cao thuốc hà thủ ô chết Nguyên nhân tử vong trình thực thí nghiệm pha sai hàm lượng paracetamol cho lơ uống Các lô 1,2,4 chuột sống khỏe suốt q trình thí nghiệm 3.2 Đánh giá tác dụng giảm đau Bảng 3: Thời gian chịu đau chuột mâm nhiệt Chuột Thời gian chịu đau (giây) 76.7 Lô 59.1 41.5 42.4 Lô 49.2 56.0 26.7 Lô 29.8 Lô Trung bình (giây) 5,6 32.9 Chết Nhận xét: thời gian chịu đau lô (lô hà thủ ô) ngắn nhất, với trung bình 29.8 giây, lô (lô chứng) 59.1 giây lô (lô paracaetamol) 49.2 giây Page 15 of 19 Sự khác biệt lơ khơng có ý nghĩa thống kê cỡ mẫu nghiên cứu nhỏ ảnh hưởng khả chịu đau khác cá thể chuột 3.3 Đánh giá tác dụng chống viêm Bảng 4: Kết đo thể tích chân chuột bình thường sau gây viêm Carrageenan 1% V0 V2 V 0.28 0.51 0.23 Lô 0.795 0.12 1.56 1.36 0.15 1.49 1.34 Lô 1.04 Lơ Trung bình 0.24 0.98 5,6 0.74 Chết 0.16 1.12 0.96 Lô 0.92 0.18 1.06 0.88 Nhận xét: Sau 2h tiêm Carrageenan 1%, thể tích chân chuột nhóm phù lên nhiều nhóm nhiều nhóm chứng Chứng minh tác dụng chống viêm Hà thủ ô paracetamol 3.4 Đánh giá ảnh hưởng đến men gan Bảng 5: Kết men AST lô chuột AST (U/l) Lô 0.4099 Lô 3.4272 Lô 0.9890 Lô Chết Page 16 of 19 Nhận xét: men AST nhóm tăng nhiều nhất, gấp gần lần nhóm gấp 8.36 lần nhóm chứng Điều chứng tỏ paracetamol ảnh hưởng đến men gan nhiều cao thuốc hà thủ ô Tuy vậy, cao thuốc hà thủ ô làm tăng men gan gấp đôi so với nhóm chứng, chứng tỏ hà thủ gây độc tính gan Page 17 of 19 ... thí nghiệm tương tự Quan sát ghi nhận kết 2.3 Mơ hình thực nghiệm Mơ hình kháng viêm – giảm đau – men gan a Mơ hình giảm đau Đánh giá khả chịu đau chuột thí nghiệm mâm nhiệt Thiết bị: mâm nóng... tính hoạt chất có dược liệu cao thuốc 13 Kết mô hình giảm đau – chống viêm – men gan .15 3.1 Tình trạng sức khỏe chuột thời gian thí nghiệm 15 3.2 Đánh giá tác dụng giảm đau 15 3.3... phóng NO NOS góp phần gây tổn thương mô phù nề viêm tăng nhạy cảm đau[ 5],[6] Mơ hình gây viêm Carrageenan thực sau: Gây phù bàn chân sau chuột cách tiêm da bề mặt gan bàn chân sau chuột 0,1ml dịch