Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật gap pcr phát hiện đột biến mất đoạn gen alpha globin và mối liên quan giữa kiểu gen và kiểu hình huyết học của các thể bệnh alpha thalassemia

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ VÕ THÀNH TRÍ NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG KỸ THUẬT GAP-PCR PHÁT HIỆN ĐỘT BIẾN MẤT ĐOẠN GEN ALPHA GLOBIN VÀ MỐI LIÊN QUAN GIỮA KIỂU GEN VÀ KIỂU HÌNH HUYẾT HỌC CỦA CÁC THỂ BỆNH ALPHA THALASSEMIA LUẬN VĂN THẠC SĨ CẦN THƠ – 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ VÕ THÀNH TRÍ NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG KỸ THUẬT GAP-PCR PHÁT HIỆN ĐỘT BIẾN MẤT ĐOẠN GEN ALPHA GLOBIN VÀ MỐI LIÊN QUAN GIỮA KIỂU GEN VÀ KIỂU HÌNH HUYẾT HỌC CỦA CÁC THỂ BỆNH ALPHA THALASSEMIA Chuyên ngành: Kỹ Thuật Xét Nghiệm Y Học Mã số: 8720601 LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS.BS LÊ THỊ HOÀNG MỸ CẦN THƠ - 2022 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tôi, kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan chưa công bố nơi Tác giả luận văn Võ Thành Trí LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin tri ân bệnh nhân đồng ý tham gia vào nghiên cứu bệnh nhân chiến đấu với bệnh tật, với đau đớn với số phận khơng may đời Chính họ tạo nguồn động lực lịng nhiệt huyết để tơi mang vào công tác chuyên môn hoạt động nghiên cứu khoa học Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành đến Cơ TS.BS Lê Thị Hồng Mỹ, Trưởng môn Huyết Học, Trường Đại học Y Dược Cần Thơ tận tình dạy tơi suốt q trình nghiên cứu để hồn thành luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn Q Thầy Cơ Phịng Sinh Học Phân Tử, Bộ môn Sinh Lý Bệnh-Miễn Dịch, Trường Đại học Y Dược Cần Thơ hướng dẫn kỹ thuật tạo điều kiện giúp tơi hồn thành nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo tập thể cán Khoa Điều Trị, Khoa Xét Nghiệm, Bệnh viện Huyết Học-Truyền Máu Cần Thơ Bệnh viện Trường Đại học Y Dược Cần Thơ hỗ trợ giúp đỡ tơi hồn thành nghiên cứu Cuối cùng, cho phép gửi lời cảm ơn tới gia đình, bạn bè đồng nghiệp ln quan tâm, động viên giúp thêm vững bước đường học tập nghiên cứu Tác giả luận văn Võ Thành Trí MỤC LỤC Trang Lời cam đoan Lời cảm ơn Danh mục chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục biểu đồ Danh mục sơ đồ, hình MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Bệnh α-thalassemia 1.2 Đặc điểm lâm sàng, huyết học thể bệnh α-thalassemia 1.3 Cấu trúc gen α-globin loại đột biến gây bệnh α-thalassemia 1.4 Các kỹ thuật sàng lọc chẩn đoán bệnh α-thalassemia 12 1.5 Tình hình nghiên cứu bệnh α-thalassemia giới Việt Nam 15 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Đối tượng nghiên cứu 20 2.2 Phương pháp nghiên cứu 20 2.3 Đạo đức nghiên cứu 37 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 38 3.1 Đặc điểm chung đối tượng nghiên cứu 38 3.2 Tỷ lệ số loại đột biến đoạn gen α-globin kiểu gen thể bệnh α-thalassemia 40 3.3 Đặc điểm huyết học thể bệnh α-thalassemia 42 3.4 Mối liên quan kiểu gen kiểu hình huyết học thể bệnh α-thalassemia 46 Chương BÀN LUẬN 53 4.1 Đặc điểm chung đối tượng nghiên cứu 53 4.2 Tỷ lệ số loại đột biến đoạn gen α-globin kiểu gen thể bệnh α-thalassemia 55 4.3 Đặc điểm huyết học thể bệnh α-thalassemia 58 4.4 Mối liên quan kiểu gen kiểu hình huyết học thể bệnh α-thalassemia 64 KẾT LUẬN 69 KIẾN NGHỊ 71 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt Ý nghĩa -α3.7 Đột biến xóa đoạn 3,7 kb α+-thalassemia -α4.2 Đột biến xóa đoạn 4,2 kb α+-thalassemia -αHbCS Đột biến điểm Hb Constant Spring (TAA>CAA) -αHbQS Đột biến điểm Hb Quong Sze (CTG>CCG) MED Đột biến xóa đoạn α0-thalassemia Mediterranean FIL Đột biến xóa đoạn α0-thalassemia Philipine SEA Đột biến xóa đoạn α0-thalassemia South East Asia THAI Đột biến xóa đoạn α0-thalassemia Thailand -α/αα Dị hợp tử α+-thal, người mang gen α+-thalassemia (Silent Carrier) /αα Dị hợp tử α0-thal, người mang gen α0-thalassemia (Cis) (α-thalassemia trait) -α/-α Đồng hợp tử α+-thal, người mang gen α0-thalassemia (Trans) (α-thalassemia trait) αα/αα gen hoạt động, người bình thường ααT Đột biến điểm gen globin α1 αT α Đột biến điểm gen globin α2 ARMS-PCR Amlification Refractory Mutation System-Polymerase Chain Reaction, phản ứng khuyếch đại đột biến điểm CE Capillary Electrophoresis, điện di mao quản CO2 Carbon dioxide DNA Deoxynucleotide acid ĐBMĐG Đột biến đoạn gen ĐLC Độ lệch chuẩn Gap-PCR Gap-Polymerase Chain Reaction, phản ứng khuyếch đại chuỗi có khoảng cách GTLN Giá trị lớn GTNN Giá trị nhỏ Hb Hemoglobin, huyết sắc tố Hgb Nồng độ huyết sắc tố HPFH Hereditary persistence of fetal hemoglobin, hội chứng tồn dư huyết sắc tố thai di truyền MCV Mean Corpuscular Volume, thể tích trung bình hồng cầu MCH Mean Corpuscular Hemoglobin, nồng độ huyết sắc tố trung bình hồng cầu NST Nhiễm sắc thể O2 Oxygen PCR Polymerase Chain Reaction, phản ứng khuyếch đại chuỗi RBC Red Blood Cells, số lượng hồng cầu RDB-PCR Reverse Dot Blot-Polymerase Chain Reaction, phản ứng khuyếch đại chuỗi lai phân tử ngược RDW-CV Red cell distribution width, độ rộng dải phân bố kích thước hồng cầu SLHC Số lượng hồng cầu TB Giá trị trung bình WHO World Health Organization, Tổ chức Y tế giới DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1: Các loại alen đột biến bệnh α-thalassemia 10 Bảng 2.1: Tiêu chuẩn chẩn đoán thiếu máu WHO 23 Bảng 2.2: Mức độ thiếu máu phân loại theo WHO 23 Bảng 2.3: Các đoạn mồi kích thước sản phẩm gap-PCR 29 Bảng 2.4: Thể tích thành phần tham gia phản ứng gap-PCR 30 Bảng 2.5 Chu trình nhiệt phản ứng gap-PCR 30 Bảng 3.1: Đặc điểm tuổi đối tượng nghiên cứu 38 Bảng 3.2: Đặc điểm nghề nghiệp đối tượng nghiên cứu 39 Bảng 3.3: Kiểu gen bệnh nhân α-thalassemia thể trung bình 41 Bảng 3.4: Kiểu gen bệnh nhân α-thalassemia thể ẩn thể nhẹ 42 Bảng 3.5: Đặc điểm số hồng cầu thể bệnh α-thalassemia 42 Bảng 3.6: Đặc điểm thành phần hemoglobin thể bệnh α-thalassemia 43 Bảng 3.7: Đặc điểm nồng độ ferritin thể bệnh α-thalassemia 45 Bảng 3.8: Đặc điểm tế bào hồng cầu thể bệnh α-thalassemia 44 Bảng 3.9: Tỷ lệ thể vùi HbH thể bệnh α-thalassemia 46 Bảng 3.10: Đặc điểm số hồng cầu kiểu gen α-thalassemia 47 Bảng 3.11: Đặc điểm thành phần Hb các kiểu gen α-thalassemia 48 Bảng 3.12: Đặc điểm nồng độ ferritin kiểu gen α-thalassemia 49 Bảng 3.13: Đặc điểm tế bào hồng cầu kiểu gen α-thalassemia 50 Bảng 3.14: Tỷ lệ hồng cầu lưới kiểu gen α-thalassemia 51 Bảng 3.15: Tỷ lệ thể vùi HbH kiểu gen α-thalassemia 52 Bảng 4.1: So sánh thành phần hemoglobin bệnh nhân HbH 60 DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ Trang Biểu đồ 3.1: Đặc điểm giới tính đối tượng nghiên cứu 38 Biểu đồ 3.2: Đặc điểm nơi cư trú đối tượng nghiên cứu 40 Biểu đồ 3.3: Tỷ lệ bệnh nhân đột biến đoạn gen α-globin 40 Biểu đồ 3.4: Tỷ lệ số loại đột biến đoạn gen α-globin 40 Biểu đồ 3.5: Tỷ lệ thể bệnh α-thalassemia 41 Biểu đồ 3.6: Tỷ lệ hồng cầu lưới thể bệnh α-thalassemia 46 ... DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ VÕ THÀNH TRÍ NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG KỸ THUẬT GAP- PCR PHÁT HIỆN ĐỘT BIẾN MẤT ĐOẠN GEN ALPHA GLOBIN VÀ MỐI LIÊN QUAN GIỮA KIỂU GEN VÀ KIỂU HÌNH HUYẾT... phát đột biến đoạn gen alpha globin mối liên quan kiểu gen kiểu hình huyết học thể bệnh alpha thalassemia? ?? với mục tiêu sau: Xác định tỷ lệ số loại đột biến đoạn gen alpha globin kiểu gen thể bệnh. .. loại đột biến đoạn gen α -globin kiểu gen thể bệnh α -thalassemia kỹ thuật gap- PCR Tỷ lệ số loại đột biến đoạn gen α -globin, bao gồm biến số: đột biến -α3.7, đột biến -α4.2, đột biến SEA đột biến