Đánh giá tác động chống oxy hoá in vitro và tác động hạ glucose huyết của cao khô vỏ bưởi (citrus grandis (l ) osbeck)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ TRỊNH THỊ HỒNG NGỌC ĐÁNH GIÁ TÁC ĐỘNG CHỐNG OXY HÓA IN VITRO VÀ TÁC ĐỘNG HẠ GLUCOSE HUYẾT CỦA CAO KHÔ VỎ BƯỞI (Citrus grandis (L.) Osbeck) LUẬN VĂN CHUYÊN KHOA CẤP II Cần Thơ-2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ TRỊNH THỊ HỒNG NGỌC ĐÁNH GIÁ TÁC ĐỘNG CHỐNG OXY HÓA IN VITRO VÀ TÁC ĐỘNG HẠ GLUCOSE HUYẾT CỦA CAO KHÔ VỎ BƯỞI (Citrus grandis (L.) Osbeck) Chuyên ngành: DƯỢC LÝ- DƯỢC LÂM SÀNG Mã số: 8720205.CK LUẬN VĂN CHUYÊN KHOA CẤP Người hướng dẫn khoa học: TS.DS Nguyễn Ngọc Quỳnh Cần Thơ – Năm 2022 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan chưa công bố nơi Tác giả luận văn Trịnh Thị Hồng Ngọc LỜI CẢM ƠN Em kính xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến TS DS Nguyễn Ngọc Quỳnh suốt thời gian học tập nghiên cứu đề tài Cô tận tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm quý báu, truyền cho em niềm đam mê nghiên cứu khoa học Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy, cô liên môn động viên, khích lệ tinh thần tạo điều kiện thuận lợi thời gian em học tập nghiên cứu trường Em xin cảm ơn nhóm nghiên cứu sinh viên Dược sĩ đại học khóa 43 Lưu Thái Quản, Ngô Anh Đức, Phan Minh Tú Đỗ Thị Hồng Xuyến đồng hành hỗ trợ em nhiệt tình Cuối em chân thành gửi lời cảm ơn đến anh chị thành viên lớp Chuyên Khoa II Dược lý Dược lâm sàng khóa 2020-2022 gia đình ln đồng hành, tiếp thêm cho em nhiều động lực để vượt qua khó khăn thử thách Tác giả luận văn Trịnh Thị Hồng Ngọc MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC HÌNH ẢNH ĐẶT VẤN ĐỀ Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan dược liệu 1.1.1 Đặc điểm hình thái 1.1.2 Phân bố, thu hái, chế biến 1.1.3 Thành phần hóa học 1.1.4 Tác dụng sinh học 1.2 Sơ lược thử nghiệm độc tính 1.2.1 Lịch sử nghiên cứu độc tính 1.2.2 Thử nghiệm độc tính cấp 1.3 Sơ lược mất cân bằng oxy hóa 10 1.3.1 Khái niệm cân bằng oxy hóa 10 1.3.2 Q trình chống oxy hóa 11 1.3.3 Phương pháp đánh giá hoạt tính chống oxy hố 12 1.4 Một số mô hình gây tăng glucose huyết 13 1.4.1 Sơ lược enzyme α-glucosidase 13 1.4.2 Mơ hình gây tăng glucose huyết bằng alloxan monohydrate 14 1.4.3 Mơ hình gây tăng glucose huyết bằng streptozotocin 16 1.5 Công trình nghiên cứu liên quan 18 1.5.1 Tình hình nghiên cứu vấn đề giới 18 1.5.2 Tình hình nghiên cứu vấn đề Việt Nam 19 Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 Đối tượng nghiên cứu 23 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 23 2.1.2 Động vật nghiên cứu 23 2.1.3 Tiêu chuẩn chọn mẫu 23 2.1.4 Tiêu chuẩn loại trừ 23 2.1.5 Địa điểm thời gian nghiên cứu 24 2.1.6 Dung môi, hóa chất 24 2.1.7 Trang thiết bị 24 2.2 Phương pháp nghiên cứu 25 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu 25 2.2.2 Cỡ mẫu 25 2.2.3 Phương pháp chọn mẫu 26 2.2.4 Nội dung nghiên cứu 26 2.3 Phương pháp kỹ thuật thu thập số liệu 27 2.3.1 Xử lý nguyên liệu điều chế cao khô vỏ Bưởi năm roi 27 2.3.2 Khảo sát độc tính cấp cao khơ vỏ Bưởi năm roi 28 2.3.3 Khảo sát tác dụng chống oxy hóa cao khơ vỏ Bưởi năm roi 29 2.3.4 Đánh giá tác động hạ glucose huyết in vitro in vivo cao khô vỏ Bưởi năm roi 31 2.4 Phương pháp hạn chế sai số 35 2.5 Xử lý phân tích sớ liệu 35 2.6 Đạo đức nghiên cứu 35 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 36 3.1 Đặc điểm chung đối tượng nghiên cứu 36 3.2 Kết quả đánh giá độc tính cấp tính cao khơ vỏ Bưởi năm roi 36 3.3 Kết quả khảo sát tác dụng chống oxy hóa cao khô vỏ Bưởi năm roi 38 3.3.1 Kết khảo sát tác dụng hướng chống oxy hóa cao khơ vỏ Bưởi năm roi bằng phương pháp DPPH 38 3.3.2 Khảo sát tác dụng hướng chống oxy hóa bằng phương pháp FRAP 41 3.4 Kết quả đánh giá tác động hạ glucose huyết in vitro in vivo cao khô vỏ Bưởi năm roi 44 3.4.1 Kết khảo sát hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase tinh chất acarbose cao khô vỏ Bưởi năm roi 44 3.4.2 Kết hạ glucose huyết cao khơ vỏ Bưởi năm roi mơ hình động vật 46 Chương 4: BÀN LUẬN 53 4.1 Đặc điểm chung đối tượng nghiên cứu 53 4.2 Đánh giá độc tính cấp tính cao khơ vỏ Bưởi năm roi 54 4.3 Tác dụng chống oxy hóa ức chế enzym α-glucosidase cao khô vỏ Bưởi năm roi 60 4.3.1 Tác dụng hướng chống oxy hóa bằng phương pháp DPPH 60 4.3.2 Tác dụng chống oxy hóa bằng phương pháp FRAP 61 4.4 Đánh giá tác động hạ glucose huyết in vitro in vivo cao khô vỏ Bưởi năm roi 63 4.4.1 Hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase tinh chất acarbose cao khô vỏ Bưởi năm roi 63 4.4.2 Hiệu hạ glucose huyết cao khơ vỏ Bưởi năm roi mơ hình động vật 65 KẾT LUẬN 73 KHUYẾN NGHỊ 74 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Ý nghĩa STT Chữ viết tắt Chữ nguyên Deoxyribonucleic Acid Phân tử mang thông tin di DNA truyền quy định hoạt động sống sinh vật nhiều loài virus AMP Adenosine nucleotide tham gia monophosphate vào trình tổng hợp RNA DPPH FRAP HAT 2,2-diphenyl-1- Thử nghiệm đánh giá khả picrylhydrazyl trung hòa Ferric Reducing Thử nghiệm đánh giá khả Antioxydant Power khử sắt Hydrogen Atom Chuyển nguyên tử Hydro Transfer HDL- High Density Cholesterol cholesterol Lipoprotein cholesterol lipoprotein tỉ trọng cao HMG-CoA Hydroxymethylglutaryl Enzym xúc tác chuyển đổi reductase coenzym A HMG-CoA thành acid mevalonic LDL- Low Density Cholesterol cholesterol Lipoprotein cholesterol lipoprotein tỉ trọng thấp MDA Malondialdehyd Sản phẩm sinh q trình peroxy hóa lipid STT Chữ viết tắt Chữ nguyên Ý nghĩa 10 Oxygen Radical Thử nghiệm đo khả Absorbance Capacity hấp thu gốc oxy Scavenging Activities Khả trung hòa gốc tự 11 ORAC SA 12 13 14 SET-PT SPLET TBARS single electron transfer Chuyển followed by proton electron-chuyển transfer proton sequential proton loss Mất proton-chuyển electron transfer electron Thiobarbituric Acid Thử nghiệm xác định hàm Reactive Substances lượng malondialdehyd assay 15 TNF-α Tumor necrosis factor Yếu tố hoại tử khối u alpha 16 TRAP Total Radical Trapping Thử nghiệm đo lường Antioxydant Parameter chất chống oxy hóa bẫy hồn tồn gốc 17 UV-Vis Utraviolet-visible Tử ngoại-khả kiến 18 VLDL Very-low-density Lipoprotein mật độ lipoprotein thấp DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Ưu điểm nhược điểm phương pháp DPPH 12 Bảng 2.1 Các loại dung môi sử dụng nghiên cứu 24 Bảng 2.2 Cỡ mẫu chuột nhắt thực nghiệm cho nghiên cứu 25 Bảng 3.1: Mô hình hành vi chuột đánh giá sử dụng cao khô vỏ Bưởi năm roi 36 Bảng 3.2: Các tiêu theo dõi độc tính cấp tính bán trường diễn cao khơ vỏ Bưởi năm roi 37 Bảng 3.3: Khả trung hòa gốc tự DPPH trolox 38 Bảng 3.4: Khả trung hòa gốc tự DPPH cao khô vỏ Bưởi năm roi 39 Bảng 3.5: Phương trình hồi quy theo hiệu suất loại bỏ gốc tự DPPH nồng độ trung hòa 50% gốc tự DPPH (giá trị EC50) 40 Bảng 3.6: Khả khử sắt tinh chất trolox 41 Bảng 3.7: Độ hấp thu quang phổ cao khô vỏ Bưởi năm roi 42 Bảng 3.8: Phương trình hồi quy theo lực khử sắt giá trị EC 50 42 Bảng 3.9: Khả ức chế hoạt động enzym α-glucosidase cao khô vỏ Bưởi năm roi 46 Bảng 3.10: Khối lượng chuột trước sau gây bệnh 47 Bảng 3.11: Khối lượng chuột sau 7, 14, 21 ngày điều trị bằng Glucophage cao khô vỏ Bưởi năm roi 48 Bảng 3.12: Ảnh hưởng cao chiết vỏ Bưởi năm roi đến hàm lượng glucose huyết chuột tăng glucose huyết 49 Bảng 3.13: Ảnh hưởng cao chiết vỏ Bưởi năm roi đến hàm lượng glucose huyết chuột tăng glucose huyết 50 Bảng 3.14: Hàm lượng lipid huyết nhóm chuột nghiên cứu 51 ... (Citrus grandis (L. ) Osbeck)? ?? Với mục tiêu sau: Đánh giá độc tính cấp cao khô vỏ Bưởi năm roi Đánh giá tác dụng chống oxy hố in vitro cao khơ vỏ Bưởi năm roi Đánh giá tác động hạ glucose in vitro in. ..BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ TRỊNH THỊ HỒNG NGỌC ĐÁNH GIÁ TÁC ĐỘNG CHỐNG OXY HÓA IN VITRO VÀ TÁC ĐỘNG HẠ GLUCOSE HUYẾT CỦA CAO KHÔ VỎ BƯỞI (Citrus grandis (L. ) Osbeck). .. dụng vỏ Bưởi năm roi ứng dụng bào chế cao khô y tế, nâng cao khả phòng điều trị bệnh Nghiên cứu tiến hành ? ?Đánh giá tác động chống oxy hóa in vitro tác động hạ glucose huyết cao khô vỏ Bưởi (Citrus