PCR NHỮNG VẤN ĐỀ CƠ BẢN pptx

PCR NHỮNG VẤN ĐỀ CƠ BẢN NỘI DUNG NỘI DUNG  Nguyên tắc PCR  Phản ứng PCR  Các loại PCR  Real-time PCR  Ứng dụng của PCR  PCR chẩn đoán tác nhân vi sinh vật NGUYÊN TẮC CỦA PCR NGUYÊN TẮC CỦA PCR Thử nghiệm nhân bản một đoạn DNA trong ống nghiệm dựa vào các chu kỳ nhiệt 1 2 3 4 n 2 n NGUYÊN TẮC CỦA PCR NGUYÊN TẮC CỦA PCR Chu kỳ nhiệt 3 giai đoạn :  Biến tính  Bắt cặp  Kéo dài DNA đích 1 Biến tính (94 o C ) 2 Bắt cặp (55-65 o C) 3 Kéo dài (72 o C) 5’ 3’ 3’ 5’ Mồi Taq polymerase dNTP PCR buffer + MgCl 2 PCR MIX DNA đích (Template) PHẢN ỨNG PCR PHẢN ỨNG PCR PCR mix 30X-40X 94 o C/15s-1min 55-65 o C/15s-1min 72 o C/30s-3min PHẢN ỨNG PCR PHẢN ỨNG PCR Máy luân nhiệt  Tạo chu kỳ nhiệt  Buồng ủ nhiệt  Nhiệt độ lên xuống chính xác, đồng nhất  Tốc độ tăng giảm nhiệt độ cực nhanh theo chu kỳ PHẢN ỨNG PCR PHẢN ỨNG PCR Men polymerase chịu nhiệt  Tách chiết từ VK Thermus aquaticus (Taq polymerase)  Tái tổ hợp từ VK E. coli / VK không chịu nhiệt PHẢN ỨNG PCR PHẢN ỨNG PCR Kỹ thuật chống ngoại nhiễm sản phẩm khuếch đại Nguyên tắc  PCR mix có thêm dUTP và men UNG (Uracil DNA glycosidase)  Sản phẩm khuếch đại có T bị thay thế bởi U  Sản phẩn khuếch đại nếu ngoại nhiễm vào PCR mix sẽ bị men UNG phá hủy trước khi thực hiện PCR CÁC LOẠI PCR CÁC LOẠI PCR Monoplex PCR Monoplex PCR PCR 94 0 C for 30” 55 0 C for 30” 72 0 C for 01’ 40X . PCR NHỮNG VẤN ĐỀ CƠ BẢN NỘI DUNG NỘI DUNG  Nguyên tắc PCR  Phản ứng PCR  Các loại PCR  Real-time. PCR chẩn đoán tác nhân vi sinh vật NGUYÊN TẮC CỦA PCR NGUYÊN TẮC CỦA PCR Thử nghiệm nhân bản một đoạn DNA trong ống nghiệm dựa vào các chu kỳ nhiệt 1 2 3 4 n 2 n NGUYÊN TẮC CỦA PCR NGUYÊN