Nghiên cứu thành phần hóa học và đánh giá hoạt tính kháng viêm của cây kê huyết đằng (millettia reticulata) ở việt nam

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - NGÔ THỊ TRANG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH KHÁNG VIÊM CỦA CÂY KÊ HUYẾT ĐẰNG (MILLETTIA RETICULATA) Ở VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Hà Nội – 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - NGƠ THỊ TRANG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH KHÁNG VIÊM CỦA CÂY KÊ HUYẾT ĐẰNG (MILLETTIA RETICULATA) Ở VIỆT NAM Chuyên ngành: Hóa hữu Mã số: 8440114 LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS Đỗ Tiến Lâm TS Vũ Thị Thu Lê Ký xác nhận Hướng dẫn khoa học Hướng dẫn khoa học Đỗ Tiến Lâm Vũ Thị Thu Lê Hà Nội – 2022 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu cá nhân tơi hướng dẫn TS Đỗ Tiến Lâm TS Vũ Thị Thu Lê Các số liệu nghiên cứu khoa học, kết nghiên cứu luận văn trung thực tài liệu tham khảo ghi rõ nguồn trích dẫn Kết nghiên cứu khơng trùng với cơng trình cơng bố trước Nếu phát chép từ kết nghiên cứu khác sai sót số liệu nghiên cứu, tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trước nhà trường hội đồng Hà Nội, ngày tháng năm 2022 Tác giả Ngô Thị Trang ii LỜI CẢM ƠN Sau năm học tập Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, tơi hồn thành chương trình học tập Để hồn thành luận văn thạc sĩ này, tơi xin chân thành bày tỏ lời cảm ơn đến Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam quý thầy giáo khoa Hóa học tận tình giảng dạy, truyền đạt cho kiến thức, kinh nghiệm quý báu suốt thời gian học tập vừa qua Đặc biệt hơn, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến TS Đỗ Tiến Lâm (Viện hóa học hợp chất thiên nhiên) TS Vũ Thị Thu Lê (Trường Đại học Nông Lâm – Đại học Thái Ngun) tận tình hướng dẫn, hết lịng bảo, tạo điều kiện giúp đỡ suốt thời gian thực đề tài luận văn Trong trình học tập làm việc, không tiếp thu thêm nhiều kiến thức chun mơn bổ ích mà cịn học tập tinh thần làm việc, thái độ nghiên cứu khoa học nghiêm túc, hiệu quả, điều q tơi có q trình học tập làm việc vừa qua Những điều giúp tơi nhiều q trình cơng tác sau Bên cạnh đó, tơi xin cảm ơn hợp tác từ cộng sự, anh, chị, em Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, đơn vị phối hợp giúp tơi hồn thành tốt luận văn Sau xin gửi lời cảm ơn chân thành tới gia đình, bạn bè khích lệ tinh thần, đóng góp ý kiến, giúp đỡ tơi q trình học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn tốt nghiệp Tơi xin chân thành cảm ơn! HỌC VIÊN CAO HỌC Ngô Thị Trang iii MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN NGHIÊN CỨU 1.1 Giới thiệu thực vật chi Thàn mát (Millettia) 1.2 Thành phần hóa học thực vật chi Thàn mát (Millettia) .4 1.2.1 Các hợp chất isoflavone .4 1.2.2 Các hợp chất flavone 12 1.2.3 Các hợp chất flavanone 14 1.2.4 Các hợp chất flavanonol 16 1.2.5 Các hợp chất chalcone 16 1.2.6 Các hợp chất khác 18 1.3 Hoạt tính sinh học 22 1.3.1 Hoạt tính chống co thắt 22 1.3.2 Hoạt tính chống kí sinh trùng 22 1.3.3 Hoạt tính gây độc tế bào 22 1.3.4 Hoạt tính kháng khuẩn 23 1.3.5 Hoạt tính chống oxi hóa 23 1.3.6 Hoạt tính kháng viêm 23 1.3.7 Hoạt tính giảm đau 23 1.4 Cây Kê huyết đằng (Millettia reticulata) 24 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG, PHƯƠNG PHÁP VÀ THỰC NGHIỆM 27 2.1 Đối tượng nghiên cứu 27 2.2 Phương pháp nghiên cứu 27 2.2.1 Phương pháp xử lý chiết mẫu 27 2.2.2 Phương pháp phân lập hợp chất 27 2.2.3 Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất 27 iv 2.2.4 Phương pháp thử hoạt tính kháng viêm 28 2.3 Thực nghiệm 28 2.3.1 Thu nhận cặn chiết từ Kê huyết đằng 28 2.3.2 Phân lập tinh chế hợp chất từ cặn chiết Kê huyết đằng 29 2.3.3 Khảo sát hoạt tính kháng viêm in vitro cặn chiết chất 32 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 33 3.1 Nhận dạng số hợp chất từ cặn chiết Kê huyết đằng 33 3.1.1 Các hợp chất flavonoid 33 3.1.1.1 Hợp chất 5-hydroxy-6,7-dimethoxyflavanone (MR1) 33 3.1.1.2 Hợp chất 4′-methoxytectochrysin (MR2) 36 3.1.1.3 Hợp chất chalcone: pashanone (MR3) 40 3.1.1.4 Hợp chất apigenin 8-C-glucoside (MR5) 43 3.1.2 Hợp chất triterpenoid: β-amyrin trans-cinnamate (MR4) 46 3.2 Đánh giá hoạt tính kháng viêm in vitro cặn chiết hợp chất 51 KẾT LUẬN 54 CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN .55 TÀI LIỆU THAM KHẢO 56 v DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Các loài chi Millettia sử dụng y học cổ truyền Bảng 1.2 Các hợp chất isoflavone phân lập từ chi Thàn mát (Millettia) Bảng 1.3 Các hợp chất flavone phân lập từ chi (Millettia) 12 Bảng 1.4 Một số hợp chất flavanone phân lập từ chi Millettia 14 Bảng 1.5 Một số hợp chất flavanonol phân lập từ chi Millettia 16 Bảng 1.6 Một số hợp chất chalcone phân lập từ chi Millettia .16 Bảng 1.7 Một số hợp chất khác phân lập từ chi Thàn mát (Millettia) 18 13 C-NMR chất MR1 chất tham khảo .35 13 C-NMR chất MR2 chất tham khảo .39 Bảng 3.1 Dữ liệu phổ H- Bảng 3.2 Dữ liệu phổ H- Bảng 3.3 Dữ liệu phổ chất MR3 chất tham khảo 42 Bảng 3.4 Dữ liệu phổ H- 13 C-NMR chất MR5 chất tham khảo .45 Bảng 3.5 Dữ liệu phổ chất MR4 chất tham khảo 49 Bảng 3.6 Kết thử khả ức chế sản sinh NO tế bào RAW264.7 51 vi DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Các hợp chất isoflavone 12 Hình 1.2 Các hợp chất flavone 14 Hình 1.3 Các hợp chất flavanone 15 Hình 1.4 Các hợp chất flavanonol 16 Hình 1.5 Các hợp chất chalcone 18 Hình 1.6 Các hợp chất khác 21 Hình 1.7 Cây Kê huyết đằng (Milletia reticulata) (nguồn internet) 24 Hình 1.8 Một số hợp chất phân lập từ loài Kê huyết đằng 26 Hình 2.1 Quy trình ngâm chiết thu nhận cặn chiết từ Kê huyết đằng .29 Hình 2.2 Phân lập hợp chất từ cặn n-hexane Kê huyết đằng .30 Hình 2.3 Phân lập hợp chất từ cặn ethyl acetate Kê huyết đằng 31 Hình 3.1 Phổ H-NMR MR1 33 Hình 3.2 Phổ 13 C-NMR MR1 34 Hình 3.3 Phổ HSQC MR1 34 Hình 3.4 Phổ HMBC MR1 35 Hình 3.5 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC (HC) MR1 .35 Hình 3.6 Phổ H-NMR MR2 36 Hình 3.7 Phổ 13 C-NMR MR2 37 Hình 3.8 Phổ HSQC MR2 38 Hình 3.9 Phổ HMBC MR2 38 Hình 3.10 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC (HC) MR2 39 Hình 3.11 Phổ H-NMR MR3 40 Hình 3.12 Phổ 13 C-NMR MR3 41 Hình 3.13 Phổ HSQC MR3 41 Hình 3.14 Phổ HMBC MR3 42 Hình 3.15 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC (HC) MR3 42 Hình 3.16 Phổ H-NMR MR5 43 vii Hình 3.17 Phổ 13 C-NMR MR5 44 Hình 3.18 Phổ HMBC MR5 44 Hình 3.19 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC (HC) MR5 44 Hình 3.20 Phổ H-NMR MR4 46 Hình 3.21 Phổ 13 C-NMR MR4 47 Hình 3.22 Phổ DEPT MR5 47 Hình 3.23 Phổ HSQC MR5 48 Hình 3.24 Phổ HMBC MR5 48 Hình 3.25 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC (HC) MR4 49 Hình 3.26 Các hợp chất phân lập từ Kê huyết đằng 50 viii DANH MỤC CÁC CHỮ CÁI VIẾT TẮT Viết tắt NMR Tiếng Anh Nuclear Magnetic Resonance Tiếng Việt Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Proton Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton Phổ cộng hưởng từ hạt nhân cacbon 13 EtOAc EtOH MeOH DMSO Carbon 13- Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer Heteronuclear Multiple Bond Correlation Heteronuclear Single Quantum Coherence Ethyl acetate Ethanol Methanol Dimethyl sulfoxide δH Proton chemical shift Độ chuyển dịch hóa học proton δC Carbon chemical shift ppm TMS TLC Part per million Tetramethylsilane Thin Layer Chromatography Colum Chromatography Độ chuyển dịch hóa học cacbon Phần triệu H-NMR 13 C-NMR DEPT HMBC HSQC CC Phổ DEPT Phổ tương tác dị hạt nhân qua nhiều liên kết H-C Phổ tương tác dị hạt nhân trực tiếp H-C Ethyl acetat Ethanol Methanol Dimethyl sunfoxit Sắc ký lớp mỏng Sắc ký cột