TẠP CHÍ Y DƯỢC LÂM SÀNG 108 Tập 17 Số 4/2022 DOI 153 Nghiên cứu sự đồng biểu hiện một số dấu ấn hóa mô miễn dịch của ung thư biểu mô tuyến dạ dày Co expression of some immunohistochemical markers of g[.]
TẠP CHÍ Y DƯỢC LÂM SÀNG 108 Tập 17 - Số 4/2022 DOI:… Nghiên cứu đồng biểu số dấu ấn hóa mơ miễn dịch ung thư biểu mô tuyến dày Co-expression of some immunohistochemical adenocarcinoma Nguyễn Khắc Tấn*, Lưu Thị Bình**, Phan Quốc Hồn***, Nguyễn Phú Hùng**** markers of gastric * Phòng khám đa khoa quan Đảng TW, ** Trường Đại học Y Dược Thái Nguyên, *** Bệnh viện Trung ương Quân đội 108, **** Trường ĐH Khoa học - Đại học Thái Nguyên Tóm tắt Mục tiêu: Đánh giá đồng biểu dấu ấn hóa mơ miễn dịch HER2, CD44 ALDH ung thư biểu mô tuyến dày (UTBMTDD) Đối tượng phương pháp: Nghiên cứu mô tả cắt ngang; thiết kế tiến cứu 107 bệnh nhân chẩn đoán xác định UTBMTDD phẫu thuật cắt bỏ khối u Bệnh viện K Đánh giá mức độ biểu marker HER2, CD44, ALDH mẫu ung thư mẫu đối chứng Kết quả: Tỷ lệ ung thư biểu mô tuyến dày nam cao so với nữ Tỷ lệ đồng biểu CD44 HER2 15,9% Tỷ lệ đồng biểu ALDH HER2 18,7% Tỷ lệ đồng biểu ALDH CD44 43,9% Tỷ lệ biểu dấu ấn đơn độc 29,9% Hai dấu ấn biểu đồng thời chiếm tỷ lệ cao với 47,7% Tỷ lệ biểu đồng thời HER2, CD44 ALDH 10,3% Kết luận: Các dấu ấn hóa mơ miễn dịch HER2, CD44, ALDH đơn độc đồng biểu bệnh nhân ung thư biểu mơ tuyến dày Từ khóa: Dấu ấn miễn dịch HER2, CD44, ALDH, hóa mơ miễn dịch, ung thư biểu mô tuyến dày Summary Objective: To evaluate the co-expression of immunohistochemical markers HER2, CD44 and ALDH in gastric adenocarcinoma Subject and method: A cross-sectional descriptive study; prospective design on 107 patients with confirmed diagnosis of gastric adenocarcinoma and surgical removal of the tumor at K Hospital Evaluation of expression levels of markers HER2, CD44, ALDH in cancer samples and control samples Result: The rate of gastric adenocarcinoma in men is higher than in women The CD44 and HER2 co-expression rate was 15.9% The rate of ALDH and HER2 co-expression was 18.7% The rate of ALDH and CD44 co-expression was 43.9% The expression rate of a single marker was 29.9% Two markers simultaneously expressed the highest rate with 47.7% The rate of expression of HER2, CD44 and ALDH concurrently was 10.3% Conclusion: Immunohistochemical markers HER2, CD44, ALDH can be expressed alone or co-expressed in patients with gastric adenocarcinoma Keywords: Immunomarkers HER2, CD44, ALDH, immunohistochemistry, gastric adenocarcinoma Ngày nhận bài: 23/5/2022, ngày chấp nhận đăng: 26/5/2022 Người phản hồi: Nguyễn Khắc Tấn, Email: drtanvptw@gmail.com - Phòng Khám ĐK quan Đảng Trung ương 153 JOURNAL OF 108 - CLINICAL MEDICINE AND PHARMACY Vol.17 - No4/2022 Đặt vấn đề Ung thư dày bệnh ung thư phổ biến, đứng thứ năm tỷ lệ mắc thứ tư tỷ lệ tử vong ung thư tồn cầu Ung thư biểu mơ tuyến dày (UTBMTDD) có tiên lượng xấu, đặc biệt bệnh nhân UTBMTDD di Phương pháp điều trị chủ yếu phẫu thuật kết hợp với hóa trị trước sau cắt bỏ khối u [1] Đánh giá biểu HER2 tiêu chí quan trọng để lựa chọn phương pháp hóa trị cho bệnh nhân Tuy nhiên, tỷ lệ HER2 dương tính UTBMTDD thấp, hiệu hóa trị với trường hợp HER2 âm tính chưa rõ [2] Do đó, cần có thêm hiểu biết dấu ấn khác UTBMTDD bên cạnh HER2 để cải thiện hiệu hóa trị cho bệnh nhân UTBMTDD Đối với ung thư dày, tồn Cancer Stem Cell (CSC) khối u lần dựa vào biểu marker CD44 [3], sau phát thêm ALDH marker dùng để xác định CSC dày người Các nghiên cứu cho thấy marker gây thải loại thuốc điều trị UTBMTDD Từ liệu pháp điều trị nhắm đến đích marker UTBMTDD acid retinoic (AR) ức chế mạnh mẽ tăng trưởng tế bào ung thư dày, giúp cải thiện hiệu điều trị [4] Nghiên cứu biểu HER2 tế bào gốc ung thư dày CD44, ALDH mở triển vọng lớn điều trị tận gốc loại ung thư tiên lượng kết điều trị tình trạng di UTBMTDD Sự biểu HER2, CD44 ALDH bệnh nhân UTBMTDD Việt Nam chưa có nghiên cứu cơng phu cơng bố Từ thực tiễn đó, nghiên cứu tiến hành với mục tiêu: Đánh giá đồng biểu dấu ấn hóa mơ miễn dịch HER2, CD44 ALDH ung thư biểu mô tuyến dày Đối tượng phương pháp 2.1 Đối tượng Đối tượng nghiên cứu 107 bệnh nhân chẩn đoán xác định UTBMTDD phẫu thuật cắt bỏ khối u từ tháng 7/2016 đến tháng 4/2022, Bệnh viện K (Cơ sở Tân Triều Quán Sứ) 154 DOI: … Tiêu chuẩn chọn đối tượng: Bệnh nhân chẩn đoán xác định UTBMTDD dựa kết mô bệnh học nhuộm Hematoxylin-Eosin (HE) theo tiêu chuẩn ESMO năm 2016, bệnh phẩm khối u dày sau phẫu thuật [5] Tiêu chuẩn loại trừ: Ung thư dày di từ quan khác, ung thư dày điều trị hoá trị xạ trị 2.2 Phương pháp Phương pháp nghiên cứu mô tả cắt ngang; thiết kế tiến cứu Nội soi dày sinh thiết: Bệnh nhân xịt gây tê vùng hầu họng xylocain 2% lidocain 10% Đưa máy soi vào dày quan sát kỹ tất vùng dày, hành tá tràng xuống tận DII tá tràng để tránh bỏ sót tổn thương Khi phát tổn thương, bơm rửa sạch, sau quan sát kỹ chế độ NBI near focus để đánh giá, sinh thiết tổn thương làm giải phẫu bệnh Vị trí sinh thiết ổ loét niêm mạc rìa xung quanh ổ loét, khối u vị trí khác Bệnh phẩm lấy cố định vào ống có chứa formol 20% đệm trung tính Khi có kết giải phẫu bệnh ung thư dày Bệnh nhân hội chẩn chuyển sang Khoa Ngoại bụng 1,2, Bệnh viện K để thực thủ thuật cắt khối u dày Sau phẫu thuật, khối u bảo quản đưa làm xét nghiệm giải phẫu bệnh Bệnh viện K Sau mẫu bệnh phẩm gửi sang Pháp để làm hóa mơ miễn dịch Phương pháp nhuộm đọc hóa mơ miễn dịch: Xét nghiệm hóa mơ miễn dịch thực tay phịng thí nghiệm Inserm U1035 (Đơn vị nghiên cứu Helicobacter pylori ung thư dày), Viện Sức khỏe Nghiên cứu Y học Quốc gia, Bordeaux, Pháp Các kháng thể: Kháng thể đơn dịng dùng cho phân tích marker CSC dày gồm: mouse monoclonal antihuman CD44 (clone G44-26, BD) độ pha loãng 1:100; mouse monoclonal anti-human ALDH1 (clone 44/ALDH, BD) độ pha lỗng 1:300 Kháng thể đơn dịng dùng cho phân tích marker tiên lượng gồm: mouse monoclonal anti-HER2 (clone EP1045Y, abcam) độ pha loãng 1:100 TẠP CHÍ Y DƯỢC LÂM SÀNG 108 Tập 17 - Số 4/2022 Hố chất phân tích hố mơ miễn dịch: Sử dụng kít anti-mouse Labelled Polymer-HRP DAKO Envision system (DAKO); Eukitt-mounting medium (Labonord, Templemars, France) Các dụng cụ phục vụ cho hố mơ miễn dịch: Máy cắt mơ từ mẫu đúc paraffin, hệ thống ổn nhiệt nước, hệ thống khay rửa, lam kính, lam men, hệ thống kính hiển vi ánh sáng trắng Kỹ thuật: Quy trình nhuộm HMMD HER2, CD44 ALDH theo phương pháp phức hợp Avidin-Biotin tiêu chuẩn Chỉ tiêu nghiên cứu Đánh giá mức độ biểu marker HER2 mẫu ung thư mẫu đối chứng theo mức độ: 0, 1+, 2+, 3+ Mức độ biểu HER2 1+ đánh giá DOI:… âm tính, mức độ biểu HER2 2+ 3+ đánh giá dương tính Đánh giá mức độ biểu marker CD44 ALDH mẫu ung thư mẫu đối chứng theo mức độ: Âm tính, dương tính 2.3 Xử lý số liệu Phần mềm thống kê y học SPSS 22.0 Phân tích số liệu thuật tốn thống kê mô tả tần số biến Frequencies, Descriptive, Crosstabs Kết Chúng thu thập 107 bệnh nhân chẩn đoán xác định ung thư biểu mô tuyến dày, kết nghiên cứu sau: Bảng Đặc điểm tuổi, giới Đặc điểm Giới Tuổi trung bình Số lượng (n = 107) Tỷ lệ % Nam 72 67,3 Nữ 35 32,7 Nam 57,31 ± 10,56 Nữ 54,57 ± 11,34 Nhận xét: Tỷ lệ UTBMTDD nam cao so với nữ Bảng Đồng biểu dấu ấn HER2 CD44 UTBMTDD Âm tính Biểu HER2 Dương tính Biểu CD44 n Tỷ lệ % n Tỷ lệ % Âm tính 24 22,4 11 10,3 Dương tính 55 51,4 17 15,9 p 0,3 Nhận xét: Có 15,9% số trường hợp đồng biểu CD44 HER2 Có 10,3% bệnh nhân dương tính với HER2 mà âm tính với CD44 Có 51,4% bệnh nhân dương tính với CD44 mà âm tính với HER2 Bảng Đồng biểu dấu ấn HER2 ALDH UTBMTDD Âm tính Biểu HER2 Dương tính Biểu ALDH n % n % Âm tính 32 29,9 7,5 Dương tính 47 43,9 20 18,7 p 0,2 Nhận xét: Có 18,7% số trường hợp đồng biểu ALDH HER2 Có 7,5% bệnh nhân dương tính với HER2 mà âm tính với ALDH Có 43,9% bệnh nhân dương tính với ALDH mà âm tính với HER2 155 JOURNAL OF 108 - CLINICAL MEDICINE AND PHARMACY Vol.17 - No4/2022 DOI: … Bảng Đồng biểu dấu ấn CD44 ALDH UTBMTDD Âm tính Biểu CD44 Dương tính Biểu ALDH n % n % Âm tính 15 14,0 25 23,4 Dương tính 20 18,7 47 43,9 p 0,4 Nhận xét: Có 43,9% số trường hợp đồng biểu ALDH CD44 Có 23,4% bệnh nhân dương tính với CD44 mà âm tính với ALDH Có 18,7% bệnh nhân dương tính với ALDH mà âm tính với CD44 Bảng Đồng biểu dấu ấn HER2, CD44 ALDH Số dấu ấn Số lượng (n = 107) Tỷ lệ % dấu ấn 13 12,1 dấu ấn dấu ấn dấu ấn 32 51 11 29,9 47,7 10,3 Nhận xét: Tỷ lệ biểu dấu ấn đơn độc 29,9% Hai dấu ấn biểu đồng thời chiếm tỷ lệ cao với 47,7% Tỷ lệ biểu đồng thời HER2, CD44 ALDH 10,3% Bàn luận Nghiên cứu đồng biểu dấu ấn sinh học khối u có ý nghĩa quan trọng nghiên cứu cứu sinh học ung thư nói chung đặc biệt nghiên cứu phát triển liệu pháp nhắm đích phối hợp Ở ung thư dày số ung thư biểu mô tuyến khác HER2 dấu ấn miễn dịch quan trọng ỏi dùng điều trị bệnh Tuy nhiên, tỷ lệ biểu dấu ấn thường thấp trung bình 25% ung thư dày Mặt khác, liệu điều trị thu cho thấy, phận trường hợp biểu HER2 không đáp ứng đáp ứng yếu với liệu pháp nhắm đích trastuzumab Một số nghiên cứu tượng kháng lại trastuzumab số trường hợp dương tính với HER2 Sự kháng liệu pháp liên quan tới nhiều chế sinh học phân tử khác 156 Số lượng (n = 107) Tỷ lệ % 13 12,1 HER2 1,9 CD44 19 17,8 ALDH 11 10,3 HER2, CD44 5,6 HER2, ALDH 8,4 CD44, ALDH 36 33,6 HER2, CD44, ALDH 11 10,3 Dấu ấn biểu đồng thời tế bào, trong vấn đề đưa gần có liên quan tới tế bào gốc ung thư Bên cạnh đó, đồng biểu dấu ấn liên quan tới chế phát sinh di tế bào khối u Ở chúng tơi trình bày kết phân tích đồng biểu HER2 với CD44 trường hợp ung thư biểu mô dày nghiên cứu Kết cho thấy rằng, tỷ lệ đồng biểu HER2 CD44 15,9% tổng số tất bệnh nhân Có 10,3% bệnh nhân dương tính với HER2 mà âm tính với CD44 (Bảng 2) Điều cho thấy xấp xỉ 2/3 trường hợp biểu HER2 có liên quan tới quần thể tế bào gốc ung thư dày Một nghiên cứu Bao W cộng HER2 tương tác với CD44 để điều hòa tăng biểu CXCR4 cách ức chế biểu miR-139 mức độ di truyền biểu sinh tế bào ung thư dày điều thúc đẩy khởi phát di ung thư dày [6] Như trình bày trên, biểu ALDH nhiều nghiên cứu có mối liên quan tới di căn, tái phát khối u sau điều trị đặc biệt tượng kháng liệu pháp điều trị Phân tích đồng thời TẠP CHÍ Y DƯỢC LÂM SÀNG 108 Tập 17 - Số 4/2022 CD44 với ALDH xác định tỷ lệ đồng biểu dấu ấn mẫu mô ung thư dày Ở đây, xác định mức độ đồng biểu hai dấu ấn 43,9% tổng số tất bệnh nhân, có 23,4% bệnh nhân dương tính với CD44 mà âm tính với ALDH (Bảng 4) Các nghiên cứu tượng kháng lại liệu pháp trastuzumab báo cáo nhiều trường hợp ung thư dày, ung thư vú số loại ung thư khác, đồng thời số chế phân tử liên quan tới tính kháng [7] Đáng lưu ý, nghiên cứu Huang cộng rằng, chuyển dịch biểu mô trung mô ung thư vú dẫn tới tăng kiểu hình tế bào gốc ung thư biểu ALDH có kháng lại liệu pháp trastuzumab [8] Trong báo báo gần đây, flubendazole có khả giúp vượt qua kháng liệu pháp trastuzumab cách giảm đặc tính tế bào gốc ung thư vú biểu ALDH [9] Như vậy, thấy rằng, xác định tỷ lệ ung thư dày đồng biểu CD44 ALDH bổ sung thông tin cho việc phát triển lựa chọn liệu pháp điều trị đích ung thư dày, đem lại hiệu tốt điều trị Các tế bào gốc ung thư khối u phát có khả trì tự đổi khối u, bắt đầu tiến triển khối u góp phần vào việc di ung thư Wakamatsu Y kiểm tra hóa mơ miễn dịch biểu phân bố dấu ấn CSC đại diện ALDH, CD44 CD133 khối u nguyên phát di hạch bạch huyết ung thư dày Trong số 190 khối u nguyên phát ung thư dày, 104 (55%) dương tính với ALDH, 117 (62%) dương tính với CD44 18 (9%) dương tính với CD133 Sự biểu ba dấu ấn CSC có liên quan đáng kể với yếu tố bệnh học lâm sàng nâng cao Bệnh nhân có ung thư dày dương tính với CD44 CD133 có tỷ lệ sống sót so với bệnh nhân có ung thư dày âm tính với CD44 CD133 (CD44: p