TẠP CHÍ Y DƯỢC LÂM SÀNG 108 Hội nghị Khoa học Ung thư Gan toàn quốc lần thứ 2 DOI Biểu hiện của tín hiệu protein STAT 1 và STAT 3 trong ung thư biểu mô tế bào gan Dislay of STAT 1 and STAT 3 protein s[.]
TẠP CHÍ Y DƯỢC LÂM SÀNG 108 Hội nghị Khoa học Ung thư Gan toàn quốc lần thứ DOI:… Biểu tín hiệu protein STAT STAT ung thư biểu mô tế bào gan Dislay of STAT and STAT protein signals in hepatocellular carcinoma Từ Minh Thành*, Lư Bạch Kim**, Nguyễn Vân Hương*, Trần Thủy Tiên*, Nguyễn Thị Thanh Ngân**, Trần Thanh An***, Ngô Nguyễn Mai Linh***, Nguyễn Thị Minh Châu****, Phạm Huỳnh Lộc***, Phạm Thị Khánh Chi***, Nguyễn Ngọc Hiếu*** *Trường Đại học Nguyễn Tất Thành, **Bệnh viện Ung Bướu, ***Trường Đại học Duy Tân, ****Viện Sốt rét ký sinh trùng Tóm tắt Ung thư gan đặc trưng nhiều yếu tố khác nhau, bất thường đường tín hiệu thông qua hoạt quá mức gen dấu ấn sinh học ung thư HCC đặc trưng yếu tố khác nhau, có kích hoạt bất thường đường tín hiệu STAT STAT qua hoạt hóa mức gen STAT rối loạn kiểm soát miễn dịch Mục tiêu: Đánh giá biểu STAT1 STAT3 bệnh nhân ung thư biểu mô tế bào gan Đối tượng phương pháp: Xác định mức độ biểu hau tín hiệu SAT STAT3 bệnh nhân HCC phương pháp Western blot Kết quả: Trong tế bào HCC biểu hai protein STAT1 STAT3 nồng độ STAT giảm cho thấy phosphoryl hóa Tyr 705 STAT3 (pSTAT3 Tyr705) mạnh sau tiếp xúc IFN-γ không kéo dài nồng độ STAT3 giảm, IL-6 gây tín hiệu STAT1 kéo dài có tác động lẫn tín hiệu STAT1 STAT3 có mặt IL-6 tiền viêm Kết luận: STAT1 STAT3 dấu ấn sinh học quan trọng tiềm chẩn đốn HCC sớm Từ khóa: Ung thư tế bào biểu mô gan, STAT 1, STAT 3, AFP Summary Hepatocellular carcinoma (HCC) is characterized by many different factors, the inactivation of signaling pathways through overactivation of genes is one of the biomarkers in cancer HCC is characterized by various factors, including inactivation of the STAT and STAT signaling pathways through overactivation of the STAT genes and disturbances in immune control Objective: To evaluate the dislay of STAT and STAT protein signals in hepatocellular carcinoma Subject and method: Determined the expression levels of two signals SAT and STAT3 in HCC patients by Western blot method Result: Both STAT1 and STAT3 proteins were expressed in HCC cells, and when STAT1 levels decreased, there was strongly phosphorylation of STAT3 Ngày nhận bài: 30/5/2022, ngày chấp nhận đăng: 5/7/2022 Người phản hồi: Nguyễn Ngọc Hiếu, Email: ngochieu0707@gmail.com - Trường Đại học Duy Tân JOURNAL OF 108 - CLINICAL MEDICINE AND PHARMACY The 2nd National Scientific Conference on Liver Cancer DOI: … Tyr 705 (pSTAT3 Tyr705) after h of IFN-γ exposure but not long When STAT3 levels decreased, IL-6 induced prolonged STAT1 signaling and interplay of STAT1 and STAT3 signaling in the presence of proinflammatory IL-6 Conclusion: STAT1 and STAT3 are important and potential biomarkers in early HCC diagnosis Keywords: Hepatocellular carcinoma, STAT 1, STAT 3, AFP Đặt vấn đề mạnh dòng tế bào ung thư; ngăn cản STAT yếu tố phiên mã tế bào chất hoạt hóa protein STAT1 gây chết chu làm trung gian truyền tín hiệu từ yếu trình tế bào làm giảm mạnh hoạt tố tăng trưởng khác cytokine động gen chống chết chu trình đến nhân Tín hiệu STAT3 chứng tế bào IAP-1, IAP-2, Bcl-xL, Bfl1 minh nhiều khối u mơ hình chuột TraF1 Ung thư tế bào biểu mô gan (HCC) có khối u HCC, hoạt hóa STAT3 thường thoáng qua tế bào đứng vị trí thứ tỉ lệ tử vong khỏe mạnh. Tuy nhiên, tế bào ung bệnh ung thư toàn cầu gây Tại Việt thư kích hoạt STAT3 phụ thuộc vào Nam, HCC đứng đầu tỉ lệ mắc đa số đường tín hiệu SphK1, sphingosine-1- bệnh chẩn đốn giai đoạn tiến triển phosphate S1PR1 [1] Biểu STAT3 (> 40%) HCC thường tiến triển nhanh có vai trị quan trọng sống tế có tiên lượng xấu không phát bào ung thư STAT3 hoạt hóa protein điều trị kịp thời Vì vậy, việc tìm chống chết chu trình tế bào Survivin phương pháp tầm soát, chẩn đoán và thành viên họ Bcl hay điều trị quan trọng mà nhà protein liên quan đến q trình kiểm sốt khoa học cận lâm sàng lâm sàng chu trình tế bào cyclin D1, c-Myc quan tâm Tín hiệu STAT1 pim-1/2 tăng sinh khả xâm lấn STAT3 yếu tố phiên mã quan trọng khối u. Hơn nữa, STAT3 chất đối kích hoạt cytokine tiền viêm kháng yếu tố phiên mã STAT1 có interferon-γ (IFN-γ) interleukin-6 (ILliên quan chặt chẽ, hoạt động 6) Đây gen quan trọng chất ức chế khối u [2]. STAT1 thường được nghiên cứu ứng dụng lâm sàng điều hòa nhiều dạng khối u làm trung cho chẩn đoán điều trị nhiều loại ung gian cho hoạt động trước tăng sinh thư, có HCC Trong nghiên cứu chống tăng sinh interferon này, đánh giá biểu STAT1 (IFN) [2]. Tuy nhiên, STAT1 thúc đẩy STAT3 bệnh nhân HCC để làm rõ thêm trình gây ung thư phát triển vai trò tiềm gen nhằm khối u có hoạt hóa biểu bất cung cấp sở khoa học giúp tầm thường Sự hoạt hóa bất thường STAT1 sốt sớm, chẩn đốn điều trị HCC Ngồi quan sát thấy nhiều loại tế bào ác ra, kết nghiên cứu giúp nhà tính ung thư vú, ung thư hạch ung nghiên cứu có thêm liệu để tìm thư biểu mơ Điều cho thấy biểu liệu pháp điều trị HCC thơng bất thường STAT1 góp phần tăng qua hai đường tín hiệu sinh khối u thay ức chế chuyển hóa ác tính [2] Mức độ biểu mức protein STAT1 tăng cao hoạt hóa 2 Đối tượng phương pháp 2.1 Đối tượng TẠP CHÍ Y DƯỢC LÂM SÀNG 108 Hội nghị Khoa học Ung thư Gan toàn quốc lần thứ DOI:… Nghiên cứu thực tổng số 75 đối tượng, bao gồm người bình khỏe mạnh (25 người), bệnh nhân viêm gan B mạn tính (25 người) ung thư tế bào biểu mô gan (25 người) từ tháng 01/2022 đến tháng 05/2022 Bệnh viện Ung Bướu thành phố Hồ Chí Minh Những bệnh nhân viêm gan B mạn tính xét nghiệm kháng thể bệnh viện cho kết dương tính với HBsAg Bệnh nhân ung thư gan làm xét nghiệm giải phẫu bệnh để chứng minh Những người khỏe mạnh xét nghiệm cho số hóa sinh, huyết học bình thường, âm tính với HBsAg khơng có khối u gan Tất bệnh nhân đồng ý tham gia nghiên cứu thông qua Hội đồng Y đức bệnh viện 2.2 Xét nghiệm sinh hóa Lấy 5ml máu tĩnh mạch vào ống khơng có chất chống đơng, bảo quản 4℃ Để lắng mẫu nhiệt độ phòng khoảng 20 phút, sau ly tâm phút với tốc độ 3000 vịng/phút, thu huyết Sau tiến hành xét nghiệm số: Bilirubin toàn phần, AFP, AST, ALT, albumin protein tồn phần 2.3 Thu nhận ni cấy tế bào Mẫu mô tế bào khỏe mạnh thu từ bệnh nhân viêm gan B sinh thiết, mẫu mô tế bào ung thư thu từ khối u cắt bỏ bệnh nhân HCC Khối mô xử lí sơ để loại bỏ mơ mỡ thừa, mô hoại tử; cắt nhỏ thành mảnh mô × × mm3 Các mẫu mơ sau thu rửa PBS + 1% penicillin lần, sau dùng dao băm nhỏ mẫu vào cho vào 1ml DMEM/collagenase (mg/mL), ủ 15 phút nhiệt độ phòng 30 phút nhiệt độ 37 0C, khuấy nhẹ sau 10 phút lọc màng lọc 70μm thu dịch Dịch lọc ly tâm với 2.500 vòng/phút phút 37ºC Loại bỏ dịch nổi, thêm 1ml PBS ly tâm 2.500 vòng/phút phút 37ºC Loại bỏ dịch thu tế bào nuôi môi trường mơi trường DMEM có bổ sung kháng sinh 1% penicillin 10% FBS với mật độ ban đầu 50.000 tế bào/cm điều kiện 370C 5% CO2 2.4 Tách chiết protein Protein toàn phần tách chiết The Thermo Scientific Mem-PER Plus Membrane Protein Extraction Kit từ tế bào ung thư gan tế người viêm gan B cách thu 100mg tế bào vào 3ml dung dịch rửa ly tâm loại bỏ dịch Bổ sung 1,5ml dung dịch rửa, ly tâm 3000 vịng/phút sau thêm 0,75mL đệm ly giải, Vortex, ủ 10 phút 4°C, ly tâm 15 phút 16,000 vòng/phút 4°C, thu dịch Thêm 0,5mL đệm hòa tan ủ 30 phút 4°C, ly tâm 16,000 vòng/phút 15 phút 4°C, thu dịch nổi, bảo quản 20oC 2.5 Nhận diện protein Western blot Các mẫu protein phối trộn nước loading buffer 4X (250mM Tris pH 6,8, 8% SDS, 40% glycerol, 100mM DTT, 0,04% bromophenol blue). 20µg protein tách gel polyacrylamide 8% chuyển sang màng nitrocellulose bổ sung 5% albumin huyết bò (BSA) TBST ủ qua đến với kháng thể 4°C đọc kết Mẫu thử nghiệm so sánh với mẫu chứng dương Tubulin chứng âm - STAT người có tế bào khỏe mạnh người mắc bệnh HCC 2.6 Đánh giá tác động bệnh nhân ung thư gan Để phân tích tác động IL-6 lên hoạt động STAT1, STAT3, tế bào ung thư gan đưa nuôi thứ cấp vào đĩa 24 giếng mơi trường DMEM có bổ sung kháng sinh 1% penicillin 10% FBS với JOURNAL OF 108 - CLINICAL MEDICINE AND PHARMACY The 2nd National Scientific Conference on Liver Cancer mật độ 5.103 tế bào/giếng trộn với siRNA ủ 24 thêm Firefly luciferase pGL4, ủ tiếp tục 24 với 20ng/ mL IL-6 370C 5% CO2 2.7 Phân tích thống kê Tất phân tích thống kê thực phần mềm SPSS, giá trị p