Đang tải... (xem toàn văn)
ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC LÝ THỊ HUYỀN TỐI ƯU MỘT SỐ ĐIỀU KIỆN MÔI TRƯỜNG ẢNH HƯỞNG ĐẾN KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP PROTEASE CỦA CHỦNG NẤM ASPERGILLUS ORYZAE VTCC – F 0187 LUẬN VĂN THẠC S[.]
ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC LÝ THỊ HUYỀN TỐI ƯU MỘT SỐ ĐIỀU KIỆN MÔI TRƯỜNG ẢNH HƯỞNG ĐẾN KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP PROTEASE CỦA CHỦNG NẤM ASPERGILLUS ORYZAE VTCC – F - 0187 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG THÁI NGUYÊN - 2018 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC LÝ THỊ HUYỀN TỐI ƯU MỘT SỐ ĐIỀU KIỆN MÔI TRƯỜNG ẢNH HƯỞNG ĐẾN KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP PROTEASE CỦA CHỦNG NẤM ASPERGILLUS ORYZAE VTCC – F - 0187 Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Mã số: 42 02 01 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG Người hướng dẫn khoa học: TS Trịnh Đình Khá THÁI NGUYÊN - 2018 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi nhóm nghiên cứu Các số liệu kết trình bày luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Mọi trích dẫn luận văn ghi rõ nguồn gốc Mọi giúp đỡ cá nhân tập thể ghi nhận lời cám ơn Tôi xin chịu hồn tồn trách nhiệm cam đoan Tác giả Lý Thị Huyền ii LỜI CẢM ƠN Trước hết, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS Trịnh Đình Khá giảng viên trường Đại học Khoa học, định hướng ý tưởng nghiên cứu, tận tình hướng dẫn nghiên cứu, sửa luận văn tạo điều kiện hóa chất trang thiết bị nghiên cứu để tơi hồn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn thầy, cô giáo khoa Công nghệ sinh học trường Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên giảng dạy tạo điều kiện chu đáo cho suốt q trình học tập hồn thành luận văn Bên cạnh đó, tơi xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè đồng nghiệp động viên giúp đỡ tơi suốt q trình học tập để tơi có kết ngày hơm Với lịng biết ơn sâu sắc, tơi xin chân thành cảm ơn tất giúp đỡ quý báu ! Thái Nguyên, tháng 10 năm 2018 Học viên Lý Thị Huyền iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤCDANH MỤC CÁC BẢNG iii DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH vi DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT vii MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài .1 Mục tiêu đề tài Nội dung nghiên cứu .2 Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Protease 1.1.1 Khái niệm 1.1.2 Phân loại protease .4 1.1.3 Cơ chế xúc tác 1.1.4 Nguồn thu protease 1.1.5 Ứng dụng 11 1.2 Sinh tổng hợp protease .14 1.2.1 Chủng giống 14 1.2.2 Môi trường nuôi cấy 14 1.2.3 Các phương pháp nuôi cấy 14 1.2.4 Thu nhận protease 15 1.2.5 Các điều kiện môi trường ảnh hưởng đến khả tổng hợp protease A oryzae .17 1.3 Sản xuất protease từ Aspergillus oryzae 19 1.3.1 Aspergillus oryzae 19 1.3.2 Sản xuất chế phẩm protease 20 CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1 Nguyên liệu nghiên cứu .24 iv 2.1.1 Chủng giống 24 2.1.2 Môi trường nuôi cấy 24 2.1.3 Hóa chất 24 2.1.4 Thiết bị, dụng cụ .25 2.1.5 Dung dịch đệm 25 2.2 Địa điểm thời gian 26 2.3 Phương pháp nghiên cứu 26 2.3.1 Nuôi cấy sinh tổng hợp protease .26 2.3.2 Xác định hoạt độ protease .26 2.3.3 Tối ưu số yếu tố môi trường nuôi cấy ảnh hưởng đến khả sinh tổng hợp protease 29 2.3.4 Nghiên cứu ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy đến khả sinh tổng hợp protease .30 2.3.5 Xử lý số liệu 31 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 32 3.1 Khả sinh tổng hợp protease chủng A oryzae VTCC-F-0187 .32 3.2 Tối ưu điều kiện sinh tổng hợp protease 33 3.2.1 Tối ưu tỉ lệ bột lõi ngô bột đậu tương 33 3.2.2 Tối ưu tỉ lệ cám gạo bổ sung 34 3.2.3 Tối ưu độ ẩm 35 3.2.4 Tối ưu nhiệt độ nuôi cấy 36 3.2.5 Tối ưu pH nuôi cấy 37 3.2.6 Tối ưu thời gian lên men 39 3.3 Sản xuất chế phẩm .40 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO 44 PHỤ LỤC 48 v DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Phân loại protease theo pH hoạt động tối ưu Bảng 2.1 Các hóa chất sử dụng thí nghiệm 24 Bảng 2.2 Thiết bị sử dụng thí nghiệm 25 Bảng 2.3 Danh sách dung dịch đệm sử dụng thí nghiệm 25 Bảng 2.4 Nồng độ pha loãng Tyrosine 27 Bảng 2.5 Tỉ lệ tương ứng bột đậu tương bột lõi ngô 29 Bảng 2.6 Tỉ lệ tương ứng bột đậu tương, bột lõi ngô bột cám gạo .30 vi DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.2 Sơ đồ phân loại protease Hình 1.3 Mơ hình phân tử enzyme protease (papain) .6 Hình 1.4 Mơ hình phân tử enzyme protease (renin) Hình 2.1 Đường chuẩn Tyrosine 28 Hình 3.1 Hoạt tính phân giải casein dịch chiết enzyme ngoại bào từ chất lên men xốp chủng A oryzae VTCC-F-0187 32 Hình 3.2 Ảnh hưởng tỷ lệ chất bột đậu tương/lõi ngô đến khả sinh tổng hợp protease chủng A oryzae VTCC-F-0187 33 Hình 3.3 Ảnh hưởng nồng độ cám gạo đến khả sinh tổng hợp protease chủng A oryzae VTCC-F-0187 35 Hình 3.4 Ảnh hưởng độ ẩm tới khả sinh tổng hợp protease chủng A oryzae VTCC-F-0187 36 Hình 3.5 Ảnh hưởng nhiệt độ tới khả sinh tổng hợp enzyme protease chủng A oryzae VTCC-F-0187 .37 Hình 3.6 Ảnh hưởng pH mơi trường tới khả sinh tổng hợp protease chủng A oryzae VTCC-F-0187 .38 Hình 3.7 Khả sinh protease theo thời gian chủng A oryzae VTCC-F0187 39 Hình 3.8 Lên men chủng A oryzae VTCC-F-0187 sản xuất chế phẩm protease .41 Hình 3.9 Khả sinh tổng hợp protease chủng A oryzae VTCC-F-0187 điều kiện tối ưu sau lần lên men 42 vii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Tên đầy đủ Tên viết tắt BĐT Bột đậu tương LN Lõi ngô CG Cám gạo TCA Tricloacetic acid OD Optical density (Độ hấp thụ ánh sáng) Hdp Hoạt độ protease hspl Hệ số pha lỗng HT Hoạt tính HTtb Hoạt tính trung bình SS Sai số MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Enzyme chất xúc tác sinh học tổng hợp tế bào sống thể sinh vật Enzyme tham gia phản ứng sinh hóa thể làm tăng tốc độ phản ứng không bị thay đổi sau phản ứng Enzyme khơng có ý nghĩa với q trình sinh trưởng, sinh sản sinh vật mà enzyme cịn có vai trị quan trọng với người cơng nghệ chế biến thực phẩm, y học, công nghệ gen bảo vệ môi trường Nhiều quốc gia sử dụng phổ biến enzyme sản xuất đời sống mang lại lợi nhuận kinh tế lớn cho người [2] Protease nhóm enzyme có khả thủy phân liên kết peptide úng dụng nhiều công nghiệp, nông nghiệp công nghệ sinh học [31] Protease có vai trị quan trọng ngành cơng nghiệp dược phẩm, y tế, thực phẩm công nghệ sinh học, chiếm gần 60% thị trường enzyme [27], protease từ vi sinh vật ước tính chiếm khoảng 40% tổng lượng enzyme bán toàn giới [28] Aspergillus oryzae loại nấm sợi liệt kê sinh vật "thường công nhận an toàn (GRAS)" Cục quản lý thực phẩm dược phẩm Hoa Kỳ A oryzae có lịch sử sử dụng lâu dài ngành công nghiệp thực phẩm sản xuất thực phẩm lên men truyền thống, hoạt tính phân giải protein cao [16, 24] A oryzae có khả sinh tổng hợp nhiều loại enzyme ngoại bào amylase, protease, pectinase, lipase, xylanase, cellulase, catalase, phytase, glucose oxidase [23] Sử dụng vi sinh vật nguồn cung cấp protease cải thiện đáng kể hiệu sản xuất, chế phẩm tạo nhiều Tuy nhiên, giá thành chế phẩm protease cao nhu cầu sử dụng enzyme ngày nhiều Để phát triển dây truyền sản xuất protease đạt hiệu cao, có nhiều cơng trình nghiên cứu tiến hành để chọn lọc chủng giống, tìm kiếm chất thích hợp cho sinh tổng hợp protease Bên cạnh việc tối ưu điều kiện mơi trường (nhiệt độ, độ pH, oxy hịa tan, thành phần môi trường) nhà nghiên cứu quan tâm, mục đích tìm điều kiện ni cấy phù hợp để thu lượng protease nhiều hạ giá thành sản phẩm Để chủ động sản xuất enzyme protease nguồn nguyên liệu sẵn có nước, chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài “Tối ưu số điều kiện môi trường ảnh hưởng đến khả sinh tổng hợp protease chủng nấm Aspergillus oryzae VTCC – F - 0187” Mục tiêu đề tài Tạo quy trình sản xuất protease ngoại bào chủng A oryzae VTCC F - 0187 từ nguyên liệu rẻ sẵn có nước Nội dung nghiên cứu - Khảo sát khả sinh protease chủng A oryzae VTCC - F – 0187 sau thời gian bảo quản chủng giống - Nghiên cứu ảnh hưởng số thành phần môi trường điều kiện lên men đến khả sinh tổng hợp protease A oryzae VTCC - F - 0187 - Thử nghiệm lên men sản xuất chế phẩm protease thô 3 Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Protease 1.1.1 Khái niệm Protease (peptide – hidrolase 3.4) nhóm enzyme xúc tác trình thuỷ phân liên kết liên kết peptide (-CO-NH-)n, polypeptide phân tử protein đến sản phẩm cuối amino acid Ngoài ra, nhiều protease có khả thuỷ phân liên kết este vận chuyển amino acid [1] Hình 1.1 Sơ đồ enzyme protease thủy phân phân tử Protein [7] Protease hay enzyme proteolytic xúc tác phản ứng thuỷ phân protein peptide Protease có nấm mốc, nấm men, vi khuẩn hạt ngũ cốc nảy mầm Protease có loại: proteinase peptidase Proteinase thuỷ phân protein thành peptide amino acid, peptidase thuỷ phân peptide thành amino acid Sự phân chia protease thành hai loại enzyme điều ước lệ protease thuỷ phân peptide [6] Protease phân bố rộng rãi nhiều đối tượng từ vi sinh vật (vi khuẩn, nấm virus) đến thực vật (đu đủ, dứa ) động vật (có gan, dày ) Hầu hết protease phân cắt protein liên kết đặc hiệu Q trình thủy phân protein đóng vai trò quan trọng sản xuất nhiều loại chế phẩm Q trình thực nhờ protease vi sinh vật đưa vào trình lên men thu protease để sản xuất chế phẩm [7] 4 1.1.2 Phân loại protease Theo ủy ban danh pháp Hiệp hội Hóa sinh Sinh học phân tử, protease (peptidase) thuộc phân lớp lớp thứ (E.C.3.4) hệ thống phân loại nhóm enzyme; Tuy nhiên, việc định tên cho protease không dễ dàng tuân theo cách định tên phổ biến hệ thống enzyme đa dạng cấu trúc khả hoạt động 1.1.2.1 Phân loại dựa vào pH hoạt động tối ưu Trước đây, protease phân loại cách đơn giản dựa vào pH hoạt động tối ưu thành ba nhóm: Protease acid, protease trung tính protease kiềm [1] Bảng 1.1 Phân loại protease theo pH hoạt động tối ưu Protease Protease acid Đặc điểm Hoạt động pH 2-6, gồm phần lớn aspartic protease, số cysteine protease metalloprotease Protease trung Hoạt động pH 7-8, gồm cysteine protease, tính metalloprotease số serine protease Protease kiềm Hoạt động pH 8-13, chủ yếu serine protease 1.1.2.2 Phân loại dựa vào tiêu chí Phân loại dựa ba tiêu chí bản: loại phản ứng xúc tác, chất hóa học trung tâm xúc tác mối quan hệ tiến hóa có liên quan đến cấu trúc, protease chia thành hai loại: endopeptidase exopeptidase [1] 5 Hình 1.2 Sơ đồ phân loại protease [7] * Exopeptidase Phân loại dựa vào vị trí tác động mạch polypeptide exopeptidase phân chia thành hai loại: Aminopeptidase: Xúc tác thủy phân liên kết peptide đầu N tự chuỗi polypeptide để giải phóng amino acid, dipeptide tripeptide; Carboxypeptidase: Xúc tác thủy phân liên kết peptide đầu C chuỗi polypeptide giải phóng amino acid dipeptide * Endopeptidase Dựa vào động học chế xúc tác endopeptidase chia thành bốn nhóm: Serin proteinase: Là protease chứa nhóm –OH gốc serine trung tâm hoạt động có vai trị đặc biệt quan trọng hoạt động xúc tác enzyme Nhóm bao gồm hai nhóm nhỏ: chymotrypsin subtilisin Nhóm chymotrypsin bao gồm enzyme động vật chymotrypsin, trypsin, elastase Nhóm subtilisin bao gồm hai loại enzyme vi khuẩn Subtilisin Carlsberg, Subtilisin BPN Các serine proteinase thường hoạt động mạnh vùng kiềm tính thể tính đặc hiệu chất tương đối rộng Cysteine proteinase: Các proteinase chứa nhóm –SH trung tâm hoạt động Cystein proteinase bao gồm protease thực vật papain, bromelin, vài protein động vật protease ký sinh trùng Các cystein proteinase thường hoạt động vùng pH trung tính, có tính đặc hiệu chất rộng Hình 1.3 Mơ hình phân tử protease (papain) [11] Aspartic proteinase: Hầu hết aspartic proteinase thuộc nhóm pepsin Nhóm pepsin bao gồm enzyme tiêu hóa như: pepsin, chymosin, cathepsin, rennin Các aspartic proteinase có chứa nhóm carboxyl trung tâm hoạt động thường hoạt động mạnh pH trung tính 7 Hình 1.4 Mơ hình phân tử protease (renin) [17] Metallo proteinase: Metallo proteinase nhóm proteinase tìm thấy vi khuẩn, nấm mốc vi sinh vật bậc cao Các metallo proteinase thường hoạt động vùng pH trung tính hoạt độ giảm mạnh tác dụng EDTA Trong bốn nhóm protease kể trên, cysteine proteinase proteasetiol có khả phân giải liên kết este liên kết amide dẫn suất acid amino acid Ngược lại protease kim loại, protease acid thường hoạt tính esterase amidase dẫn suất amino acid Nhiều protease ngoại bào vi sinh vật nghiên cứu tương đối kỹ câu tạo phân tử, số tính chất hóa lý chế tác dụng Kết nghiên cứu cho thấy trọng lượng phân tử enzyme tương đổi bé, cysteine proteinase Các cysteine proteinase có trọng lượng phân tử vào khoảng 20.000- 27.000 dalton Tuy nhiên, có số cysteine proteinase có trọng lượng phân tử lớn enzyme Penicillium cyoneo’fulvum (44.000), A oryzae OUT 5038 (52.000) (Martin 1962, Morihara Tsuzuki 1969) Trọng lượng phân tử protease kim loại lớn so với cysteine proteinase (khoảng 33.800 - 48.400) Protease tiol nhiều protease-acid có trọng lượng phân tử vào khoảng 30.000 - 40.000 [8] 8 1.1.3 Cơ chế xúc tác Một chất xúc tác dù hóa học hay sinh học có tác dụng làm tăng vận tốc phản ứng Vận tốc phản ứng enzyme lượng chất bị chuyển hóa lượng sản phẩm tạo thành đơn vị thời gian Thông thường, lượng chất lượng sản phẩm biểu diễn nồng độ phân tử (M) đơn vị thời gian giây [8] Sự xúc tác enzyme thường thực cách tạo phức hợp tạm thời enzyme chất Mơ hình đơn giản mơ hình Michaelis Mơ hình thừa nhận phản ứng xảy với chất tạo thành sản phẩm [8]: E + S → ES → P + E Trong đó: E Enzyme, S chất (Substrate), ES phức hợp enzyme - chất, P sản phẩm (Product) * Giai đoạn đầu: phức hợp enzyme chất dược tạo thành cách nhanh chóng thuận nghịch nhờ tương tác phi đồng hóa trị chất amino acid nhận biết tâm hoạt động enzyme [8] E (enzyme) + S (cơ chất)→ ES (hợp chất trung gian) * Giai đoạn (giai đoạn xúc tác ): gồm chuỗi phản ứng trung gian nhằm biến đổi phức ES thành trạng thái độ chất liên kết với gốc amino acid xúc tác tâm hoạt động enzyme (thường liên kết đồng hóa trị) Rồi trạng thái độ tự chuyển hóa thành phức enzyme - sản phẩm cuối phức enzyme - sản phẩm phân ly thành enzyme tự sản phẩm [8] Protease enzyme xúc tác thủy phân protein, cơ chế xúc tác sinh học enzyme người ta đề nhiều giả thuyết để giải thích, thống chỗ trình xúc tác bắt đầu kết hợp enzyme chất thành hợp chất trung gian [2] E (enzyme) + S (cơ chất)→ ES (hợp chất trung gian) 1.1.4 Nguồn thu protease 1.1.4.1 Protease động vật Tụy tạng: nguồn enzyme sớm nhất, lâu dài có chứa nhiều enzyme Dạ dày bê: Trong ngăn thứ tư dày bê có tồn enzyme thuộc nhóm protease tên renin Enzyme từ lâu sử dụng phổ biến công nghệ phomat Renin làm biến đổi casein thành paracasein có khả kết tủa mơi trường sữa có đủ nồng độ Ca2+ Đây q trình đơng tụ sữa điển hình, nghiên cứu ứng dụng đầy đủ Trong thực tế nhiều chế phẩm renin bị nhiểm pepsin (trong trường hợp thu chế phẩm renin bê Khi dày bê phát triển đầy đủ có khả tiết pepsin) khả đơng tụ sữa Gần có nghiên cứu sản xuất protease từ vi sinh vật có đặc tính renin loài Eudothia parasitica Mucor purillus [1] 1.1.4.2 Protease thực vật Có loại protease thực vật Bromelain, Papain Ficin Papain thu từ nhựa lá, thân, đu đủ (Carica papaya) Bromelain thu từ quả, chồi dứa, vỏ dứa (Pineapple plant) Các enzyme sử dụng để chống lại tượng tủa trắng bia làm lạnh (chilling proofing) kết tủa protein Những ứng dụng khác protease thực vật công nghệ làm mềm thịt mục tiêu tiêu hoá Ficin thu từ nhựa sung (Ficus carica) Enzyme sử dụng thuỷ phân protein tự nhiên [1] 1.1.4.3 Protease vi sinh vật Enzyme protease phân bố chủ yếu vi khuẩn, nấm mốc xạ khuẩn…gồm nhiều loài thuộc Aspergillus, Bacillus, Penicillium, Clotridium, Streptomyces số số loại nấm men 10 * Vi khuẩn: Lượng protease sản xuất từ vi khuẩn ước tính vào khoảng 500 tấn, chiếm 59% lượng enzyme sử dụng Protease động vật hay thực vật chứa hai loại endopeptidase exopeptidase, riêng vi khuẩn có khả sinh hai loại trên, protease vi khuẩn có tính đặc hiệu chất cao Chúng có khả phân hủy tới 80% liên kết peptide phân tử protein Trong chủng vi khuẩn có khả tổng hợp mạnh protease Bacillus subtilis, B mesentericus, B thermorpoteoliticus số giống thuộc chi Clostridium Trong đó, B subtilis có khả tổng hợp protease mạnh Các vi khuẩn thường tổng hợp protease hoạt động thích hợp vùng pH trung tính kiềm yếu Các protease trung tính vi khuẩn hoạt động khoảng pH hẹp (pH 5-8) có khả chịu nhiệt thấp Các protease trung tính có khả lực cao amino acid ưa béo thơm Chúng sinh nhiều B subtilis, B mesentericus, B thermorpoteoliticus số giống thuộc chi Clostridium Protease Bacillus ưa kiềm có điểm đẳng điện 11, khối lượng phân tử từ 20.000-30.000 Ổn định khoảng pH 6-12 hoạt động khoảng pH rộng 7-12 [1] * Nấm: Nhiều loại nấm mốc có khả tổng hợp lượng lớn protease ứng dụng công nghiệp thực phẩm chủng: Aspergillus oryzae, A terricola, A fumigatus, A saitoi, Penicillium chysogenum)… Các loại nấm mốc có khả tổng hợp ba loại protease: acid, kiềm trung tính Nấm mốc đen tổng hợp chủ yếu protease acid, có khả thủy phân protein pH 2,5-3 [1] Một số nấm mốc khác như: A candidatus, P cameberti, P roqueforti 11 có khả tổng hợp protease có khả đông tụ sữa sử dụng sản xuất mát * Xạ khuẩn: Về phương diện tổng hợp protease, xạ khuẩn nghiên cứu vi khuẩn nấm mốc Tuy nhiên, người ta tìm số chủng có khả tổng hợp protease cao như: Streptomyces grieus, S fradiae, S Trerimosus Các chế phẩm protease từ xạ khuẩn biết nhiều protease tách chiết từ S grieus, enzyme có tính đặc hiệu rộng, có khả thủy phân tới 90% liên kết peptide nhiều protein thành amino acid Từ S fradiae tách chiết keratinase thủy phân karetin Protease từ S fradiae có hoạt tính elastase cao nên cịn dùng cơng nghiệp chế biến thịt Như vậy, vi sinh vật coi nguồn nguyên liệu thích hợp để sản xuất enzyme quy mô lớn dùng công nghệ đời sống Dùng nguồn vi sinh vật có lợi ích sau: Chủ động nguyên liệu nuôi cấy vi sinh vật giống vi sinh vật; Chu kỳ sinh trưởng vi sinh vật ngắn: 16-100 nên thu nhiều lần quanh năm; Có thể điều khiển sinh tổng hợp enzyme dễ dàng theo hướng có lợi (định hướng sử dụng tăng hiệu suất tổng thu hồi); Giá thành tương đối thấp mơi trường tương đối rẻ, đơn giản, dể tổ chức sản xuất Tuy nhiên trường hợp cần lưu ý khả sinh độc tố (gây độc, gây bệnh) để có biện pháp phịng ngừa, xử lý thích hợp [1] Để sản xuất chế phẩm enzyme, người ta phân lập giống vi sinh vật có tự nhiên giống đột biến có lựa chọn theo hướng có lợi nhất, tổng hợp ưu loại enzyme định cần thiết [1] 1.1.5 Ứng dụng Protease sử dụng rộng rãi nhiều ngành công nghiệp công ...ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC LÝ THỊ HUYỀN TỐI ƯU MỘT SỐ ĐIỀU KIỆN MÔI TRƯỜNG ẢNH HƯỞNG ĐẾN KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP PROTEASE CỦA CHỦNG NẤM ASPERGILLUS ORYZAE. .. khả sinh tổng hợp enzyme protease chủng A oryzae VTCC- F- 0187 .37 Hình 3.6 Ảnh hưởng pH môi trường tới khả sinh tổng hợp protease chủng A oryzae VTCC- F- 0187 .38 Hình 3.7 Khả sinh protease. .. khả sinh tổng hợp protease chủng A oryzae VTCC- F- 0187 35 Hình 3.4 Ảnh hưởng độ ẩm tới khả sinh tổng hợp protease chủng A oryzae VTCC- F- 0187 36 Hình 3.5 Ảnh hưởng nhiệt độ tới khả