ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC MAI THỊ HUYỀN TRANG PHÂN TÍCH TRÌNH TỰ GEN MÃ HÓA FLAVONOL SYNTHASE TỪ CÂY CHÈ BẢN ĐỊA Ở THÁI NGUYÊN (Camellia sinensis) LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG[.]
ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC MAI THỊ HUYỀN TRANG PHÂN TÍCH TRÌNH TỰ GEN MÃ HĨA FLAVONOL SYNTHASE TỪ CÂY CHÈ BẢN ĐỊA Ở THÁI NGUYÊN (Camellia sinensis) LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG THÁI NGUYÊN - 2016 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC MAI THỊ HUYỀN TRANG PHÂN TÍCH TRÌNH TỰ GEN MÃ HÓA FLAVONOL SYNTHASE TỪ CÂY CHÈ BẢN ĐỊA Ở THÁI NGUYÊN (Camellia sinensis) Chuyên nghành: Công nghệ Sinh học Mã số: 60.42.02.01 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG Người hướng dẫn khoa học: TS Hoàng Thị Thu Yến THÁI NGUYÊN - 2016 i LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu kết trình bày luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Mọi trích dẫn luận văn ghi rõ nguồn gốc Tác giả Mai Thị Huyền Trang ii LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS Hoàng Thị Thu Yến - Giảng viên, phó trưởng khoa - Khoa Khoa học Sự sống - Trường Đại học Khoa học - người tận tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm q báu để tơi hồn thành luận văn Tôi xin cảm ơn thầy cô tập thể cán phịng thí nghiệm Khoa Khoa học Sự sống, cảm ơn lãnh đạo Trường Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên cán công tác Viện Nghiên cứu hệ gen - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam nhiệt tình hướng dẫn tơi q trình làm đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn Cử nhân Phạm Thị Hằng, TS Huỳnh Thị Thu Huệ, Phòng đa dạng sinh học hệ gen, Viện Nghiên cứu hệ gen, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, tận tình dẫn giúp đỡ tơi hồn thành đề tài nghiên cứu khoa học Nhân dịp xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS Dương Trung Dũng – Khoa Nông học – Trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên giúp đỡ thời gian thu thập vật liệu nghiên cứu làm đề tài Cuối cùng, xin bày tỏ lịng biết ơn tới tồn thể gia đình, bạn bè đồng nghiệp cổ vũ, động viên suốt thời gian qua Tác giả Mai Thị Huyền Trang iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN .ii MỤC LỤC .iii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT .v DANH MỤC CÁC BẢNG vi DANH MỤC CÁC HÌNH vii MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Chương 1: TỔNG QUAN VỀ CÂY CHÈ .3 1.1 Giới thiệu chung chè 1.1.1 Nguồn gốc phân loại chè 1.1.2 Đặc điểm sinh học chè 1.1.3 Thành phần hóa học chè 1.1.4 Giá trị chè 1.2 Tình hình sản xuất chè giới Việt Nam 1.2.1 Tình hình sản xuất chè giới 1.2.2 Tình hình sản xuất chè Việt Nam 11 1.3 Tình hình nghiên cứu chè giới Việt Nam .12 1.3.1 Tình hình nghiên cứu chè giới .12 1.3.2 Tình hình nghiên cứu chè Việt Nam 13 1.4 Flavonol synthase đường sinh tổng hợp polyphenol chè 14 1.4.1 Polyphenol chè 14 1.4.2 Con đường sinh tổng hợp polyphenol chè 16 1.4.3 Flavonol synthase chè 17 Chương 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .18 iv 2.1 Vật liệu nghiên cứu .18 2.1.1 Nguyên liệu 18 2.1.2 Hóa chất 18 2.1.3 Thiết bị 19 2.2 Phương pháp nghiên cứu 19 2.2.1 Phương pháp tách chiết RNA tổng số .19 2.2.2 Điện di RNA tổng số 20 2.2.3 Tổng hợp cDNA .20 2.2.4 Nhân gen FLS kỹ thuật PCR 21 2.2.5 Tinh sản phẩm PCR 23 2.2.6 Tách dòng gen FLS 24 2.2.7 Xác định trình tự gen 27 2.2.8 Xử lý số liệu phần mềm chuyên dụng .28 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .29 3.1 Tách RNA tổng số từ mẫu chè nghiên cứu 29 3.2 Nhân gen mã hóa Flavonol synthase từ mẫu chè nghiên cứu 31 3.3 Tạo dòng gen FLS 32 3.4 Xác định phân tích trình tự gen mã hóa Flavonol synthase 34 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 41 KẾT LUẬN 41 KIẾN NGHỊ 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO 42 v DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Từ viết tắt Nghĩa tiếng Việt Nghĩa tiếng Anh cDNA cDNA Complementary DNA DNA Axit Deoxiribonucleic Deoxyribonucleic Acid dNTP dNTP Deoxynucleoside triphosphate Đtg Đồng tác giả et al EDTA EDTA Ethylene Diamine Tetraacetic Acid EST Đoạn trình tự biểu Expressed Sequence Tag EtBr EtBr Ethidium Bromide Kb Kilô bazơ Kilo base LB Môi trường LB Luria Bertani PCR Phản ứng chuỗi trùng hợp Polymerase Chain Reaction Primer F Mồi xuôi Primer forward Primer R Mồi ngược Primer reverse RNA Axit Ribonucleic Ribonucleic Acid Rnase Enzyme phân hủy RNA Ribonuclease SDS SDS Natri Dodexyl Sulfat TAE TAE Tris Acetate EDTA Taq Vi khuẩn chịu nhiệt Thermus aquaticus HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao High Performance Liquid Chromatography FLS Flavonol synthase Flavonol synthase vi DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Diện tích, suất, sản lượng chè giới giai đoạn 2001- 2010 Bảng 1.2 Diện tích, suất, sản lượng số nước trồng chè giới năm 2010 10 Bảng 1.3 Tình hình diện tích, suất, sản lượng chè Việt Nam năm gần 12 Bảng 2.1 Thành phần phản ứng tổng hợp cDNA 21 Bảng 2.2 Chu trình nhiệt thực phản ứng tổng hợp cDNA 21 Bảng 2.3 Trình tự đoạn oligonucleotide sử dụng nhân gen FLS .21 Bảng 2.4 Thành phần phản ứng PCR nhân gen FLS 22 Bảng 2.5 Thành phần phản ứng nối đoạn gen FLS với vector pJET 1.2 .24 Bảng 2.6 Thành phần phản ứng ghép nối đoạn gen vector 25 Bảng 2.7 Phản ứng cắt tiến hành với thành phần 27 Bảng 3.1 Kết kiểm tra nồng độ RNA tổng số từ mẫu chè Trung Du .30 Bảng 3.2 Sự sai khác trình tự nucleotide gen FLS chè Trung du xanh chè Trung du tím với trình tự công bố Genbank 38 Bảng 3.3 Sự sai khác trình tự amino acid FLS với trình tự FLS chè Trung du xanh Trung du tím 38 vii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Một số giống chè trồng Thái Nguyên Hình 1.2 Sơ đồ đường sinh tổng hợp hợp chất polyphenol chè [26] 16 Hình 2.1 Chu kỳ nhiệt thực phản ứng nhân gen FLS .22 Hình 2.2 Sơ đồ vector tách dòng pJET 1.2 24 Hình 3.1 Kết điện di kiểm tra sản phẩm tách chiết RNA tổng số .30 Hình 3.2 Kết PCR nhân gen FLS từ cDNA hai mẫu chè Trung du xanh (chè xanh) chè Trung du tím (chè tím) 31 Hình 3.3 Hình ảnh điện di tách plasmid mẫu chè Trung du tím 32 Hình 3.4 Hình ảnh điện di tách plasmid mẫu chè xanh 33 Hình 3.5 Hình ảnh điện di kiểm tra dịng plasmid 34 Hình 3.6 Kết phân tích trình tự gen FLS phân lập từ mẫu chè xanh chè tím 37 Hình 3.7 So sánh trình tự amino acid suy diễn FLS công bố (DQ198089.1) với FLS chè Trung du xanh (FLS CX) chè Trung du tím (FLS CT) 40 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Chè (Camellia sinensis (L) O Kuntze) loại cơng nghiệp lâu năm, có nguồn gốc vùng nhiệt đới Á nhiệt đới Cây chè sinh trưởng phát triển tốt điều kiện khí hậu nóng ẩm, tập trung chủ yếu Châu Á Châu Phi Chè thứ nước uống tự nhiên lâu đời nhất, tiêu thụ rộng rãi với chi phí thấp Sản phẩm từ chè sử dụng rộng rãi khắp giới nhiều công dụng khác phổ biến đồ uống Uống chè chống lạnh, khắc phục mệt mỏi bắp hệ thần kinh trung ương, kích thích vỏ đại não làm cho tinh thần minh mẫn sảng khoái, hưng phấn thời gian lao động căng thẳng trí óc chân tay Lá chè có khả chữa số bệnh đường ruột kiết lị, tiêu chảy (do chứa tamin), lợi tiểu (do chứa theofilin, theobromin), chống lão hóa Hơn nữa, cịn kích thích tiêu hố mỡ, chống béo phì, chống sâu răng, miệng, phịng ngừa ung thư (do chứa catesin), phòng ngừa bệnh tăng huyết áp, tiểu đường ngăn ngừa cholesteron tăng cao… Trong chè chứa nhiều loại vitamin C, B2, PP, K, E, F… amino acid cần thiết cho thể Ngồi ra, chè cịn có khả bảo vệ da khỏi tác hại tia cực tím, chè cho ức chế xâm nhiễm sinh sản HIV Hầu hết đặc tính có lợi cho sức khỏe liệt kê chứng minh hợp chất polyphenol có chè Thành phần hóa học chất rắn chiết xuất từ chè xanh polyphenol, thành phần chất hóa học chè đen giống với chè xanh Tuy nhiên, hàm lượng số hợp chất polyphenol thay đổi q trình oxi hóa Hàm lượng polyphenol định đến màu sắc, độ chát nước chè góp phần tạo hương vị chè Có nhiều hợp chất polyphenol tìm thấy chè Tuy nhiên, tùy vào loại sản phẩm chè mà thành phần hóa học polyphenol khác nhau, polyphenol phức tạp tạo trình sản xuất từ trùng hợp polyphenol đơn giản Bằng kỹ thuật HPLC xác định nhanh chóng số polyphenol quan trọng chè bao gồm catechin, f1avonols, glycosides flavonol theaflavins… Ở Việt Nam, chè mang lại nhiều lợi ích kinh tế xã hội như: giải công ăn việc làm, đem lại nguồn thu nhập ổn định cho người dân, thúc đẩy q trình cơng nghiệp hóa đại hóa nơng thơn Hiện nay, hoạt tính sinh học chế tổng hợp polyphenol mức độ phân tử nhà khoa học giới tập trung nghiên cứu, đặc biệt gen thực chức tổng hợp polyphenol Trong đó, Flavonol synthase enzyme quan trọng chế tổng hợp polyphenol Ở chè Việt Nam, gen mã hóa Flavonol synthase chưa phân lập Xuất phát từ thực tế trên, tiến hành thực đề tài: “Phân tích trình tự gen mã hóa Flavonol synthase từ chè địa Thái Nguyên” Mục tiêu nghiên cứu Tạo dòng, xác định phân tích trình tự gen mã hóa Flavonol synthase từ chè địa Thái Nguyên Nội dung nghiên cứu + Tách chiết RNA tổng số từ chè số mẫu nghiên cứu + Nhân gen mã hóa Flavonol synthase kỹ thuật PCR tạo dòng gen + Xác định phân tích trình tự gen mã hóa Flavonol synthase 3 Chương TỔNG QUAN VỀ CÂY CHÈ 1.1 Giới thiệu chung chè 1.1.1 Nguồn gốc phân loại chè Nguồn gốc chè vấn đề phức tạp, có nhiều quan điểm khác nguồn gốc chè, dựa sơ lịch sử, khảo cổ học thực vật học Một số quan điểm nhiều nhà khoa học công nhận là: + Cây chè có nguồn gốc Vân Nam Trung Quốc: Nhiều cơng trình nghiên cứu, khảo sát trước cho nguồn gốc chè Vân Nam – Trung Quốc, nơi có khí hậu ẩm ướt ấm Theo tài liệu Trung Quốc cách 4000 năm, người Trung Quốc biết dùng chè làm dược liệu sau để uống [35] Theo Daraselia Gruzia (1989) nhà khoa học Trung Quốc như: Schenpen, Jaiding, …đã giải thích chè mẹ Trung Quốc: Tỉnh Vân Nam nơi bắt đầu hàng loạt sông lớn đổ sông Việt Nam, Lào, Campuchia, Mianma Đầu tiên chè mọc Vân Nam, sau hạt chè di chuyển theo đường nước đến nước nói sau lan dần nơi khác, dọc theo cao nguyên Tây Tạng [7], [11] + Cây chè có nguồn gốc vùng Atxam (Ấn Độ): Năm 1823, Bruce phát chè dại to vùng Atxam (Ấn Độ), từ học giả người Anh cho rằng: Nguyên sản chè vùng Atxam Vân Nam – Trung Quốc [7] + Cây chè có nguồn gốc Việt Nam: Những cơng trình nghiên cứu Djemukhatze (1961 – 1976) phức catechin chè từ nguồn gốc khác nhau, so sánh thành phần chất catechin loại chè trồng chè mọc hoang dại nêu lên luận điểm tiến hóa sinh hóa chè, sở xác minh nguồn gốc chè Djemukhatze kết luận chè mọc hoang dại từ cổ xưa, tổng hợp chủ yếu (-) - epicatechin galat, chúng có khả tổng hợp (-) - epigalocatechin galat để tạo (+) galocatechin chậm Nghiên cứu chè dại Việt Nam cho thấy chủ yếu tổng hợp (-) – epicatechin (-) – epicatechin galat (chiếm 70 % tổng loại catechin) Khi di thực chè dại lên phía Bắc với điều kiện khí hậu khắc nghiệt hơn, chúng thích hợp dần với điều kiện sinh thái cách có thành phần catechin phức tạp hơn, với tạo thành (-) epigalocatechin galat Điều có nghĩa trao đổi chất hướng phía tăng cường q trình hidroxil hóa galil hóa Từ biến đổi hóa sinh chè dại chè trồng trọt, chăm sóc cho phép tới kết luận “Nguồn gốc chè Việt Nam” Từ có sơ đồ tiến hóa chè giới: Camellia → Chè Việt Nam → Chè Vân Nam to → Chè Trung Quốc → Chè Assam (Ấn Độ) [7], [11] Tuy có khác quan điểm nêu có thống rằng: Cây chè có nguồn gốc từ Châu Á, nơi có điều kiện khí hậu nóng, ẩm 1.1.2 Đặc điểm sinh học chè Đặc điểm hình thái Thân: Thẳng tròn, phân nhánh liên tục thành hệ thống cành chồi Trên thân có mấu chia thành nhiều lóng Cành: Do mầm dinh dưỡng biến đổi thành Trên cành chia làm nhiều đốt, chiều dài đốt cành biến đổi từ - 10 cm tùy theo giống điều kiện sinh trưởng Tùy theo lứa tuổi mà màu sắc cành chè biến đổi từ màu xanh thẫm, xanh nhạt, màu đỏ, màu nâu cành già có màu xám Chồi: Mọc từ nách lá, chia theo biệt hóa chồi có chồi dinh dưỡng mọc chồi sinh thực mọc nụ, hoa, Chia theo vị trí cành có: Chồi (đỉnh), chồi nách, chồi ngủ (trong cành) 5 Lá: Lá chè loại hình đơn nguyên, có hệ gân rõ, rìa có cưa, chiều dài từ - 15 cm, rộng từ - cm Mặt phiến nhẵn, lồi lõm, láng bóng Hệ gân hình mạng lơng chim Lá chè có hình thn, mũi mác, ô van, trứng gà, gần tròn Gốc nhọn, tròn đến tù; chóp nhọn tù Lá chè thường thay đổi hình dạng, màu sắc kích thước tùy theo giống, điều kiện tự nhiên điều kiện canh tác Các độ tuổi khác chè tạo các sản phẩm chè có chất lượng khác thành phần hóa học khác Hoa: Hoa chè loại hoa lưỡng tính, hoa có - cánh màu trắng, có lại phớt hồng Tràng có - cánh màu trắng hay phớt hồng, nhị đực trung bình có 200 - 300 cái; bao phấn có hai nửa bao, chia túi phấn, hạt phấn hình tam giác màu vàng nhạt (khi chín màu hồng kim) Bầu nhị có - ơ, chứa - nỗn, ngồi phủ lớp lơng tơ, núm nhị chẻ ba Ở gốc bầu nhụy có tuyến mật làm thành vòng tròn gọi đĩa Quả: Quả chè loại nang có từ 1- hạt Quả chè có dạng hình trịn, tam giác, vng tùy theo số hạt Khi cịn non chè có màu xanh, chín chuyển sang màu xanh thẫm nâu Khi chín vỏ nứt giải phóng hạt chè Kích thước hạt phụ thuộc vào giống, kỹ thuật canh tác Hạt chè có khối lượng từ 0,6 - 2g thường từ 1- 1,6g Hạt: Hình cầu, bán cầu, tam giác tùy giống chè; vỏ sành thường màu nâu, cứng, bên lớp vỏ mỏng Hệ rễ: Gồm rễ cọc (trụ), rễ dẫn (hay rễ nhánh, rễ bên) màu nâu hay nâu đỏ rễ hút hay rễ hấp thụ màu vàng ngà Đặc tính sinh lý, sinh thái chè Nhiệt độ khơng khí thuận lợi cho sinh trưởng phát triển chè 22 - 28oC, độ ẩm khơng khí tương đối thích hợp 80 - 85 % Hàm lượng nước cần thiết cho chè biến động tùy giống chè Loại đất thích hợp cho trồng chè dày 60 - 100 cm; mực nước ngầm 100 cm; độ chua pH: 4,5 - 5,5; tỷ lệ mùn - % 6 Sinh trưởng phát triển chè Sự phát triển chè chia làm hai chu kỳ: Chu kì phát triển lớn gồm suốt đời sống chè từ hạt nảy mầm đến chết chu kì phát triển nhỏ bao gồm giai đoạn sinh trưởng, phát triển lặp lại nhiều lần năm 1.1.3 Thành phần hóa học chè Cây chè trồng chủ yếu để lấy búp lá, thành phần hóa học chè có liên quan chặt chẽ với quy trình sản xuất chế biến chè thành phẩm, gồm chủ yếu nước, hợp chất vô hữu Nước thành phần quan trọng chủ yếu búp chè, chiếm 75 - 80 % khối lượng chè, hàm lượng phụ thuộc vào giống chè, thời vụ độ non già chè Nước nguyên liệu chè tham gia trực tiếp vào nhiều phản ứng thủy phân, oxi hóa khử, liên quan trực tiếp đến q trình hóa sinh búp chè có ảnh hưởng đến hoạt động enzyme.Trong chế biến chè, nước có vai trị quan trọng trình biến đổi, tạo nên mùi vị ngoại hình búp chè, có liên quan trực tiếp đến chất lượng chè nguyên liệu chất lượng chè thành phẩm Chất khô chiếm 18 - 25 % khối lượng chè, gồm có polyphenol, pectin, chất xơ (xenlulo), protein, amino acid, alcoloit (cafein, theofilin, theobromin), enzyme (enzyme oxi hóa enzyme thủy phân) chất tro Các hợp chất polyphenol chiếm 28 - 37 % chất khơ, định tính chất, chất lượng chè tươi sản phẩm Polyphenol tạo màu, mùi, vị cho chè, có vị chát đắng tác dụng enzyme thủy phân có nước bọt Hợp chất polyphenol chè thành phần quan trọng xúc tác enzyme polyphenol oxidase có chè, có tính chất định đến màu sắc nước pha, hương thơm vị chát chè (các polyphenol chứa 70% dạng catechin) [33] 7 Hợp chất alkaloid: chè có nhiều loại nhiều loại cafein Hàm lượng cafein chè chiếm từ - 5% chất khô Hàm lượng cafein chè thay đổi phụ thuộc vào giống, kỹ thuật canh tác, mùa vụ thu hái thay đổi theo phận Protein amino acid: hợp chất phức tạp có chứa N, phân bố không phần búp chè thay đổi tùy theo giống thời vụ, điều kiện canh tác yếu tố khác Protein kết hợp trực tiếp với tanin, polyphenol tạo nên phẩm chất chè Thái Nguyên đen Do đặc điểm của việc chế biến chè xanh dệt men từ đầu, nên hàm hượng tanin bị thay đổi cịn q cao làm cho chè có vị đắng Protein kết hợp với phần tanin làm cho có vị chát đắng giảm Vì trừng mực đó, protein có lợi cho phẩm chất chè xanh Ngồi ra, chè cịn có amino acid, gluxit pectin, dầu thơm, loại vitamin chè, enzyme, chất tro… 1.1.4 Giá trị chè Cây chè loại công nghiệp lâu năm, mau cho sản phẩm, cho hiệu kinh tế cao, có đời sống kinh tế lâu dài Chè trồng lần, thu hoạch 30 - 40 năm lâu Chè dùng làm nước uống từ thời xa xưa, đến trở thành thức uống lý tưởng nhân dân giới ưa dùng Có giá trị nhiều mặt như: Thực phẩm, dược liệu, kinh tế xã hội, văn hóa… Giá trị mặt thực phẩm: Trong chè có thành phần hóa học giàu chất dinh dưỡng, có tác dụng tốt thể người hỗn hợp tanin chè có khả giải khát, chữa số bệnh đường ruột (tả lỵ, thương hàn), loại protein, vitamin, muối khoáng… Cafein số alkanoit khác chất kích thích hệ thần kinh trung ương, vỏ cầu đại não, giúp tăng cường hoạt động thể, giảm mệt nhọc [34] 8 Giá trị y học: Nước chè tươi cịn giảm q trình viêm viêm khớp, viêm gan mãn tính, tăng cường tính đàn hồi thành mạch máu Uống chè giảm nguy tim mạch, chống lão hóa, chống nhiễm độc Mới nhất, nhà khoa học phát chè cịn có tác dụng chống khả gây ung thư chất phóng xạ Người ta trích ly chất chè để điều chế thuốc trợ tim, cầm máu, lợi tiểu… Những giá trị tiềm ẩn chè quan tâm nghiên cứu [34] Giá trị mặt kinh tế xã hội: Cây chè giữ vai trò quan trọng cấu trồng nông nghiệp, sản phẩm chè mặt hàng xuất quan trọng ngành nông nghiệp Việt Nam Sản xuất chè góp phần tạo cơng ăn việc làm, xóa đói giảm nghèo, tạo nguồn thu nhập ổn định cho người dân thúc đẩy trình cơng nghiệp hóa, đại hóa nơng thơn, vùng Trung du miền núi [34] Ngoài ra, trồng chè giúp phủ xanh đất trống đồi trọc, chống sói mịn đất, bảo vệ mơi trường… Giá trị mặt văn hóa: Lá chè sử dụng khơng để chế biến thức uống phục vụ nhu cầu người, mà từ lâu chè thành phẩm trở thành nét văn hóa đặc trưng nhiều quốc gia Uống chè nét văn hóa lâu đời người Việt Nam, mang giá trị thiêng liêng, cao quý đời sống tinh thần người Thưởng thức chè thú vui tao nhã, tạo cảm hứng văn thơ, hội họa… Ở Việt Nam chè thiếu lễ nghi giao tiếp, giáo dục, cưới xin, ma chay, hội hè 9 Hình 1.1 Một số giống chè trồng Thái Nguyên 1.2 Tình hình sản xuất chè giới Việt Nam 1.2.1 Tình hình sản xuất chè giới Cây chè sinh trưởng phát triển tốt điều kiện nóng ẩm, tập trung chủ yếu Châu Á Châu Phi, nhiên ngày chè trồng phổ biến 58 quốc gia với quy mô khác nhau, phân bố rộng khắp Châu Nhu cầu mặt hàng chè thành phẩm cao cấp ngày tăng sản xuất chè giới tăng nhanh diện tích, suất sản lượng Bảng 1.1 Diện tích, suất, sản lượng chè giới giai đoạn 2001- 2010 Năm Diện tích (ha) Năng suất (Tạ khô/ ha) Sản lượng (Tấn khô) 2001 2.395.093 12.928 3.096.274 2002 2.448.862 13.039 3.192.978 2003 2.449.723 13.035 3.258.426 2004 2.578.977 13.380 3.450.569 2005 2.686.924 13.624 3.660.637 2006 2.738.701 13.524 3.703.751 2007 2.905.768 13.678 3.974.514 2008 2.967.935 14.190 4.211.397 2009 2.997.607 14.152 4.242.280 2010 3.123.561 14.464 4.518.060 Nguồn: http:// FAOSTAT.FAO.ORG (23/02/2012) 10 Từ bảng 1.1 ta thấy: diện tích, suất, sản lượng chè giới đạt 10 năm qua tăng đều, đến năm 2010 diện tích chè giới đạt 3.123.561 ha, suất đạt 14,464 tạ khô/ha, sản lượng đạt 4.242.280 chè búp khơ Bảng 1.2 Diện tích, suất, sản lượng số nước trồng chè giới năm 2010 STT Nước Xuất Diện tích Năng suất Sản lượng (ha) (tạ khô/ha) (tấn khô) 1.419.530 10,338 1.467.467 305.352 năm 2009 (tấn) Trung Quốc Ân Ðộ 583.000 17,001 991.180 203.863 Srilanca 218.300 12,932 282.300 228.528 Kênia 171.900 23,211 399.000 331.594 Việt nam 113.200 17,532 198.466 82.416 3.123.561 14,464 4.518.060 1.774.815 Toàn giới Nguồn: http:// FAOSTAT.FAO.ORG (23/02/2012) Từ bảng số liệu trên, ta thấy có tới 58 quốc gia trồng chè giới, sản suất chè tập trung số nước Trung Quốc, Ấn Độ, Srilanca, Kênia Việt Nam, đó: Trung quốc quốc gia đứng đầu giới diện tích đạt 1.419.530 ha, chiếm 45,45% diện tích chè giới, suất chè Trung Quốc không cao, đạt 10.338 tạ khô/ha, diện tích cao nên sản lượng chè Trung Quốc đứng đầu giới đạt 1.467.467 tấn, chiếm 32,48 % sản lượng chè giới Ấn Độ đứng thứ diện tích chè, đạt 583.000 ha, chiếm 17,22 % diện tích giới, suất đạt 17.001 tạ/ha, sản lượng đứng thứ sau Trung Quốc, đạt 991.180 tấn, chiếm 21,94 % sản lượng chè giới 11 Srilanca đứng thứ giới diện tích 218.300 ha, sản lượng đạt 282.300 Kênia nước đứng thứ diện tích chè đạt 171.900 tấn, lại nước có suất chè cao nhất, chiếm 8,83 % sản lượng chè toàn giới Việt Nam có diện tích trồng chè đứng thứ giới suất lại đứng thứ (17.532 tạ khô/ha) sau Kênia Tuy nhiên xuất khẩu, nước ta đạt 82.416 (đứng thứ 8) 1.2.2 Tình hình sản xuất chè Việt Nam Tại Việt Nam, chè sản phẩm chè người dân sản xuất, chế biến sử dụng từ lâu Theo Nguyễn Ngọc Kính, lịch sử ngành sản xuất chè Việt Nam chia làm giai đoạn: Giai đoạn từ 1890 đến 1945: giai đoạn móng, sơ khai ngành sản xuất chè, đồn điền thiết lập Năm 1938 diện tích trồng chè 13 nghìn ha, sản lượng đạt 6100 chè khô Giai đoạn 1945 đến 1954: ảnh hưởng chiến tranh, ngành sản xuất chè suy giảm rõ rệt, tổng sản lượng chè khô năm 1946 đạt 300 Giai đoạn từ năm 1954 đến nay: giai đoạn phát triển không ngừng ngành chè, không đáp ứng nhu cầu nội địa mà hướng tới xuất Năm 2013 tổng sản lượng chè xuất nước đạt 145 nghìn Hiện chè trồng 35 tỉnh thành nước, tập trung chủ yếu tỉnh phía Bắc (cả diện tích sản lượng) Với lợi giống, đất đai nguồn lao động, chè xác định ngành kinh tế chủ đạo tỉnh trung du miền núi nước ta Phát triển chè nước ta 10 chương trình trọng điểm phát triển nơng nghiệp nơng thôn Đến nay, chè xác định có giá trị kinh tế cao, thực trồng mũi nhọn, có tầm quan trọng chiến lược phát triển kinh tế, xã hội vùng trung du miền núi phía Bắc ...ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC MAI THỊ HUYỀN TRANG PHÂN TÍCH TRÌNH TỰ GEN MÃ HĨA FLAVONOL SYNTHASE TỪ CÂY CHÈ BẢN ĐỊA Ở THÁI NGUYÊN (Camellia sinensis) Chuyên nghành: Công nghệ Sinh. .. polyphenol Ở chè Việt Nam, gen mã hóa Flavonol synthase chưa phân lập Xuất phát từ thực tế trên, chúng tơi tiến hành thực đề tài: ? ?Phân tích trình tự gen mã hóa Flavonol synthase từ chè địa Thái Nguyên? ??... dịng, xác định phân tích trình tự gen mã hóa Flavonol synthase từ chè địa Thái Nguyên Nội dung nghiên cứu + Tách chiết RNA tổng số từ chè số mẫu nghiên cứu + Nhân gen mã hóa Flavonol synthase kỹ