BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CÂY NHÂN TRẦN TÍA Ngành CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hư[.]
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CÂY NHÂN TRẦN TÍA Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn: TS Nguyễn Ngọc Hồng Sinh viên thực hiện: Lê Hoàng Khải MSSV: 1211100095 Lớp: 12DSH02 TP Hồ Chí Minh, 2016 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan toàn nội dung đồ án tốt nghiệp cơng trình nghiên cứu tơi hướng dẫn TS Nguyễn Ngọc Hồng - giảng viên Khoa Công nghệ sinh học – Thực phẩm – Môi trường, Trường Đại học Công nghệ TP.HCM Tất số liệu, kết đề tài thu qua nghiên cứu thực nghiệm hoàn toàn trung thực Tơi hồn tồn chịu trách nhiệm lời cam đoan Tp Hồ Chí Minh, ngày 18 tháng năm 2016 Lê Hoàng Khải LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu Trường Đại học Công nghệ TP.HCM tạo điều kiện cho em học tập trường Xin gửi lời cảm ơn chân thành đến quý thầy, cô Khoa Công nghệ sinh học – Thực phẩm – Môi trường, người tận tình dạy, truyền đạt kiến thức quý báu cho em, cho em thỏa sức tìm tịi học hỏi điều mới, dù có đâu làm gì, em ln tự hào đứa đại gia đình Cơng nghệ sinh học – Thực phẩm – Môi trường Con xin cảm ơn cha, mẹ em trai, người cho ngày hơm Gia đình ln hỗ trợ tài chính, động viên tinh thần suốt thời gian qua Em xin gửi lời cảm ơn đến cô Nguyễn Ngọc Hồng, người tận tình hướng dẫn, dạy cho em kiến thức tuyệt vời, truyền đạt kinh nghiệm quý báu kỹ sống Được làm việc nhóm nghiên cứu em niềm vinh dự hạnh phúc Xin cảm ơn bạn thể lớp 12DSH giúp đỡ trình học tập, nghiên cứu động viên tinh thần thời gian qua Tp Hồ Chí Minh, ngày 18 tháng năm 2016 Lê Hồng Khải MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT iv DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH ẢNH vi MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Tình hình nghiên cứu ngồi nước Mục đích nghiên cứu Nhiệm vụ nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu Các kết đạt đề tài Kết cấu ĐATN CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan chi Adenosma sp.và loài Adenosma bracteosum Bonati 1.1.1 Tổng quan chi Adenosma sp 1.1.2 Tổng quan Nhân trần tía Adenosma Bracteosum Bonati 1.1.2.1 Tên khoa học 1.1.2.2 Đặc điểm thực vật phân bố 1.1.2.3 Một số thành phần hóa học nghiên cứu 1.1.2.4 Hoạt tính sinh học 12 1.1.2.5 Một số thuốc từ Nhân trần 15 1.2 Định nghĩa gốc tự do, stress oxy hóa chất chống oxy hóa 15 1.2.1 Khái niệm gốc tự stress oxy hóa 15 1.2.2 Chất chống oxy hóa 17 1.2.3 Tác hại stress oxy hóa 18 i 1.3 1.2.3.1 Tác động lên DNA 18 1.2.3.2 Tác động lên protein 19 1.2.3.3 Tác động lên lipid 19 Hợp chất tự nhiên từ thực vật hoạt tính sinh học 20 1.3.1 Terpenoid 20 1.3.1.1 Định nghĩa, phân loại 20 1.3.1.2 Nguồn gốc ứng dụng 20 1.3.2 Steroid 22 1.3.2.1 Định nghĩa, phân loại 22 1.3.2.2 Nguồn gốc ứng dụng 23 1.3.3 Polyphenol 24 1.3.3.1 Định nghĩa, phân loại 24 1.3.3.2 Nguồn gốc, ứng dụng 25 1.3.3.3 Flavonoid 25 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 27 2.1 Địa điểm thời gian tiến hành đề tài 27 2.1.1 Địa điểm 27 2.1.2 Thời gian thực đề tài 27 2.2 Vật liệu 27 2.2.1 Nguyên liệu nghiên cứu 27 2.2.2 Đối tượng thí nghiệm 27 2.2.3 Dụng cụ, hóa chất thí nghiệm 27 2.3 Phương pháp nghiên cứu 29 2.3.1 Xác định độ ẩm 30 2.3.2 Quá trình chiết thu nhận cao chiết 31 2.3.3 Phương pháp xác định hàm lượng cao thu 33 2.3.4 Phương pháp định tính thành phần hóa học Nhân trần tía 33 ii 2.3.5 Phương pháp xác định hàm lượng polyphenol tổng số 36 2.3.6 Phương pháp định lượng flavonoid tổng số 36 2.3.7 Đánh giá hoạt tính kháng oxy hóa mơ hình DPPH 37 2.3.8 Phương pháp xác định lực khử 38 2.3.9 Phương pháp đánh giá hoạt tính kháng khuẩn cao chiết 39 2.3.10 Xác định độc tính cấp diễn 41 2.3.11 Đánh giá hoạt tính cao chiết chuột bạch ứng dụng mơ hình ổn định lượng đường máu 42 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 45 3.1 Thử độ ẩm dược liệu 45 3.2 Khảo sát hàm lượng cao chiết 45 3.3 Định tính thành phần hóa học có dịch chiết Nhân trần tía 47 3.4 Định lượng polyphenol tổng số dịch chiết 54 3.5 Định lượng flavonoid tổng số 56 3.6 Xác định hoạt tính kháng gốc tự DPPH 58 3.7 Xác định lực khử 60 3.8 Kết đánh giá hoạt tính kháng khuẩn 62 3.8.1 Hoạt tính kháng khuẩn sơ cao cồn cao nước 62 3.8.2 Hoạt tính kháng khuẩn sơ cao phân đoạn 63 3.9 3.10 Kết thử độc tính cấp diễn 64 Ảnh hưởng dịch chiết Nhân trần tía lên lượng đường máu 65 3.10.1 Ảnh hưởng việc uống glucose liều cao đến nồng độ đường máu chuột 66 3.10.2 Ảnh hưởng loại cao chiết đến nồng độ đường máu 66 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 69 4.1 Kết luận 69 4.2 Kiến nghị 70 TÀI LIỆU THAM KHẢO 71 iii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT AG: Acid Gallic AQ: aqueous (nước) BU: n-butanol CH: chloroform db: gam dược liệu khô DMSO: Dimethyl sulfoxyde DPPH: 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl EA: Ethyl acetate ET: ethanol (cồn) GE: Gallic acid equivalent HCTN: hợp chất tự nhiên IC50: half maximal inhibitory concentration RE: Rutin equivalent RNS: Reactive Nitrogen Species ROS: Reactive Oxygen Species TFC: Total Flavonoids Content (Hàm lượng flavonoid tổng số) TPC: Total Polyphenols Content (Hàm lượng polyphenol tổng số) TPHH: thành phần hóa học TSA: tryptone soya agar TSB: tryptone soya broth iv DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Các thành phần hóa học có tinh dầu Adenosma bracteosum Bonati 10 Bảng 1.2 Các ROS RNS thể sinh học 16 Bảng 1.3 Các bệnh liên quan đến oxy hóa DNA 18 Bảng 1.4 Các bệnh liên quan đến oxy hóa protein 19 Bảng 1.5 Các bệnh liên quan đến oxy hóa lipid 20 Bảng 2.1 Nồng độ khảo sát hoạt tính kháng khuẩn cao chiết 41 Bảng 2.2 Bảng tra nồng độ đường huyết 44 Bảng 3.1 Độ ẩm dược liệu 45 Bảng 3.2 Khảo sát hàm lượng cao chiết theo dung môi 45 Bảng 3.3 Khảo sát hàm lượng thu hồi sau chiết lỏng-lỏng cao cồn 46 Bảng 3.4 Kết phân tích sơ thành phần hóa học 47 Bảng 3.5 Hình ảnh định tính thành phần hóa học 48 Bảng 3.5 Kết đường chuẩn acid gallic 54 Bảng 3.6 Kết hàm lượng polyphenol tổng số cao chiết 55 Bảng 3.7 Bảng kết đường chuẩn Rutin 56 Bảng 3.8 Kết hàm lượng Flavonoid tổng số 57 Bảng 3.9 Độ hấp thụ quang bước sóng 700 nm nồng độ 25 g/ml 61 Bảng 3.10 Kết đánh giá hoạt tính kháng khuẩn sơ cao tổng cồn cao tổng cồn nồng độ 100 mg/ml 62 Bảng 3.11 Kết đánh giá hoạt tính kháng khuẩn sơ cao phân đoạn 63 Bảng 3.12 Kết thử độc tính cấp diễn 65 Bảng 3.13 Kết nồng độ lượng đường máu chuột 65 Bảng 3.14 Nồng độ đường máu nhóm uống glucose liều cao 66 Bảng 3.15 Khả làm giảm đường huyết dịch chiết Nhân trần tía lên đường huyết nhóm chuột uống đường glucose liều cao 67 v DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Cây Nhân trần tía Adenosma Bracteosum Bonati Hình 2.1 Sơ đồ tiến trình thí nghiệm 29 Hình 2.2 Sơ đồ quy trình chiết cao chiết Nhân trần tía 31 Hình 2.3 Phản ứng quét gốc tự DPPH 37 Hình 2.4 Phản ứng xác định lực khử 39 Hình 2.5 Chuột bạch dùng cho thí nghiệm 42 Hình 3.1 Dung dịch dựng đường chuẩn acid gallic 54 Hình 3.2 Đường chuẩn acid gallic 54 Hình 3.3 Dung dịch Rutin chuẩn 56 Hình 3.4 Đường chuẩn Rutin 57 Hình 3.6 Biểu đồ so sánh giá trị IC50 cao chiết thí nghiệm quét gốc tự DPPH 59 Hình 3.7 Biểu đồ thể lực khử cao chiết 61 vi Đồ án tốt nghiệp MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Gốc tự tạo trình trao đổi chất thể tác nhân oxy hóa gây nhiều bệnh nguy hiểm bệnh đường tim mạch, viêm gan, đục thủy tinh thể, lão hóa, đột biến gen gây ung thư Về mặt hóa học, gốc tự bền nên dễ dàng công đại phân tử sinh học protein, lipid, carbohydrate, DNA Điều dẫn đến rối loạn cân q trình sinh hóa ngun nhân gây nhiều loại bệnh tật Do đó, việc tìm hợp chất chống oxy hóa có khả ức chế gốc tự trình gián tiếp sinh gốc tự điều cần thiết Chất chống oxy hóa có nguồn gốc từ thiên nhiên tổng hợp hóa học Tuy nhiên, hợp chất có nguồn gốc từ thiên nhiên có nhiều lợi so với hợp chất tổng hợp hợp chất tổng hợp gây phản ứng phụ viêm gan ung thư Bên cạnh đó, hợp chất có nguồn gốc từ thiên nhiên tác dụng dược lý tốt Ngồi vấn đề liên quan đến đường huyết ln người quan tâm đến lượng đường máu dù tăng hay giảm so với mức bình thường tác động khơng tốt đến sức khỏe Chứng tăng đường huyết ảnh hưởng trực tiếp đến bệnh đái tháo đường, bệnh trước dân gian thường gọi “bệnh người giàu” Tăng đường huyết biểu triệu chứng lâm sàng vấn đề đường huyết nghiêm trọng Các thói quen ăn uống khơng điều độ, chế độ dinh dưỡng nhiều đồ ngọt, đồ béo uống loại thức uống có cồn rượu, bia hoạt động thể chất hay hoạt động lựa chọn ảnh hưởng đến lượng đường máu hình thành bệnh tiểu đường Cây Nhân trần tía Adenosma bracteosum Bonati từ lâu dân gian sử dụng vị thuốc với tác dụng hỗ trợ tiêu hóa, lợi mật, tiêu độc, lợi tiểu, chữa cảm cúm, táo bón, bệnh vàng da Ngồi có chứa nhiều hợp flavonoid Đồ án tốt nghiệp tinh dầu, hợp chất tự nhiên với nhiều hoạt tính sinh học bật Tuy nhiên, Nhân trần tía xem vị thuốc Đơng y, chưa có cơng trình nghiên cứu chứng minh cách cụ thể hoạt tính sinh học kháng oxy hóa, điều trị tiểu đường, kháng khuẩn… Do đề tài “Khảo sát hoạt tính sinh học Nhân trần tía” thực hiện, tạo tiền đề khoa học cho sản phẩm ứng dụng từ nguồn dược liệu Tình hình nghiên cứu ngồi nước ❖ Những nghiên cứu nước: Nguyễn Viết Tựu cộng (1975) phân tích hàm lượng tinh dầu Nhân trần tía Adenosma bracteosum Bonati Dương Thị Mộng Ngọc cộng (2006) chứng minh cao toàn phần phối hợp Đinh lăng Nhân trần tía thể tác động bảo vệ gan ba mơ hình gây tổn thương gan ethanol, tetraclorua paracetamol Nguyễn Đức Hạnh cộng (2008) phân lập số hợp chất polyphenol Nhân trần tía Vũ Mạnh Hùng Bùi Thị Bích Vân (2008) xác định khả chống nhiễm độc gan tác dụng phụ Rifampicin sản phẩm kết hợp cao Nhân trần tía Tảo Spirulina ❖ Những nghiên cứu ngồi nước: Tsankova cộng (1994) phân tích thành phần tinh dầu Adenosma bracteosum Bonati GS GC/MS Mục đích nghiên cứu Định tính thành phần hóa học Nhân trần tía Adenosma bracteosum Bonati Xác định hàm lượng polyphenol, flavonoid khả kháng oxy hóa cao chiết từ Nhân trần tía Xác định độc tính cấp diễn hoạt tính làm ổn định đường huyết cao chiết thô chuột bạch Đồ án tốt nghiệp Đánh giá sơ hoạt tính kháng khuẩn Nhân trần tía Nhiệm vụ nghiên cứu Nhiệm vụ 1: Nghiên cứu sở khoa học, tổng quan tài liệu vấn đề nghiên cứu, làm sở cho nhiệm vụ Nhiệm vụ 2: Tiến hành nghiên cứu thực nghiệm, thông qua phương pháp xác định, khảo sát, phân tích Nhiệm vụ 3: Thu nhận cao chiết toàn phần từ Nhân trần tía dung mơi nước dung mơi cồn; tách thu nhận cao phân đoạn từ cao chiết cồn Nhiệm vụ 4: Định tính sơ thành phần hóa học Nhiệm vụ 5: Xác định hàm lượng polyphenol tổng số, flavonoid tổng số cao chiết cao phân đoạn từ Nhân trần tía Nhiệm vụ 6: Đánh giá khả kháng oxy hóa thơng qua nồng độ ức chế 50% gốc tự DPPH, đánh giá lực khử cao chiết cao phân đoạn Nhiệm vụ 7: Xác định độc tính cấp diễn cao chiết nước cao chiết cồn Nhiệm vụ 8: Đánh giá hoạt tính cao chiết nước cao chiết cồn mơ hình động vật ổn định lượng đường máu Nhiệm vụ 9: Đánh giá sơ hoạt tính kháng khuẩn cao chiết cao phân đoạn Phương pháp nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu thu thập tài liệu: tài liệu Nhân trần tía, sơ thành phần hóa học Nhân trần tía, phương pháp xác định hàm lượng hợp chất thứ cấp, mơ hình đánh giá khả kháng oxy hóa, kháng khuẩn Phương pháp xác định độc tính cấp diễn, mơ hình thử nghiệm hoạt tính hạ đường huyết chuột bạch Phương pháp làm thí nghiệm: tiến hành làm thí nghiệm nhằm giải nhiệm vụ nghiên cứu Đồ án tốt nghiệp Phương pháp xử lý số liệu tốn học phân tích phương sai ANOVA phần mềm SAS 9.4: số liệu thu xử lý nhằm đưa kết luận cho đề tài Các kết đạt đề tài Thu nhận cao chiết nước cao chiết cồn từ Nhân trần tía phương pháp ngâm dầm, thu nhận cao phân đoạn từ cao tổng cồn qua trình chiết lỏng – lỏng Xác định hàm lượng cao chiết cao phân đoạn Định tính sơ thành phần hóa học Nhân trần tía Định lượng hàm lượng polyphenol tổng số, flavonoid tổng số cao chiết cao phân đoạn Tìm giá trị IC50 cao chiết mơ hình DPPH, xác định giá trị hấp thu cao chiết mô hình lực khử Xác định sử dụng cao chiết với liều 3000 mg/kg thể trọng không gây độc cho chuột bạch Chứng minh khả giúp làm ổn định đường huyết chuột bạch cao nước cao cồn Đánh giá sơ khả kháng khuẩn cao chiết từ Nhân trần tía Kết cấu ĐATN Mở đầu Chương 1: Tổng quan tài liệu Chương 2: Vật liệu phương pháp nghiên cứu Chương 3: Kết thảo luận Chương 4: Kết luận kiến nghị Đồ án tốt nghiệp CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan chi Adenosma sp.và loài Adenosma bracteosum Bonati 1.1.1 Tổng quan chi Adenosma sp Chi Adenosma sp (hay gọi Chi Tuyến hương, Nhân trần) xếp vào Họ Scrophulariaceae Là lồi cỏ mọc năm, có mùi thơm, có khoảng 15 loài phân bố khu vực Bắc Á, Đơng Nam Á, Trung Quốc quần đảo Thái Bình Dương Theo Phạm Hoàng Hộ (1999) Đỗ Tất Lợi (2004), Việt Nam có phân bố nhiều lồi chi Adenosma sp bao gồm: - Adenosma annamensis Yam (Tuyến hương Trung bộ) Cây thân cỏ cao khoảng 30-40 cm, phiến xoăn có lơng thưa, có hoa nách lá, mọc chủ yếu Quảng Nam Đà Nẵng - Adenosma bracteosum Bonati (Tuyến hương bắc, Nhân trần tía) Thân cành có màu tím đỏ, cụm hoa nằm có bắc lợp lên nhau, dạng màng, suốt Mọc nhiều miền nam Việt Nam rãi rác Campuchia , Lào - Adenosma caeruleum R Br (Nhân trần nam, Hoắc hương núi, Tuyến hương lam) Thân thảo cao tới gần m Lá phía mọc đối, phía có mọc so le, hình trái xoan nhọn Thân màu tía hay lam, chia mơi, nhị 4, bầu có vòi nhuỵ dãn đỉnh Quả nang dài hình trứng, có mỏ ngắn nở thành van Hạt nhiều, bé, hình trứng Mùa hoa tháng – Phân bố nhiều miền bắc Việt Nam, Trung Quốc, Lào, Thái Lan - Adenosma hirsuta (Miq.) Kurz (Tuyến hương phún) Thân thảo cao m, có nhiều lơng, hình bầu dục, hai mặt nhiều lơng Mọc nhiều vùng Tây Nguyên, rãi rác Đông Nam Bộ - Adenosma indiana (Lour.) Merr (Nhân trần hoa đầu, Nhân trần bồ bồ, Tuyến hương Ấn) Thân hình trụ, cành non mang nhiều lông sau nhẵn, lúc đầu thân màu xanh sau chuyển sang màu tím nhạt, chiều cao 70 cm đến 100 cm Lá mọc đối, phiến hình mác, đầu nhọn, mép có cưa, gân hình lơng chim, mặt mang Đồ án tốt nghiệp nhiều lông mặt dưới, chiều dài cm - cm, rộng cm - cm Rễ thuộc loại rễ chùm, có nhiều lơng tơ nhỏ màu trắng, rễ dài 10 - 18 cm Hoa nhỏ, màu tím, mọc tụ tập thành đầu nang, đài có lơng với hai mơi, mơi nguyên, môi xẻ bốn Tràng cánh hợp với hai môi, môi xẻ bốn, môi nguyên,bốn nhị có hai dài, hai ngắn Quả thuộc loại nang nằm gọn đài hoa Nhiều hạt nhỏ, hình trứng thn, có nhiều gai, màu cánh gián Lồi Adenosma indiana (Lour.) Merr phân bố chủ yếu Ấn Độ, Myanma, Nam Trung Quốc, Campuchia, Lào, Việt Nam, Thái Lan - Adenosma javanica (Bl.) Kds (Tuyến hương java) Loài cỏ cứng, bò mặt đất, nhánh dài 0,2 - 0,4 m Lá có phiến trịn, thon, dài - cm, có lơng phún Hoa mọc nách Mọc rãi rác số nơi Việt Nam Quảng Ninh, Kon Tum Trong ba lồi Adenosma bracteosum Bonati, Adenosma caeruleum R Br Adenosma indiana (Lour.) Merr mọc phổ biến Việt Nam Mặc dù ba loài dùng từ lâu Y học cổ truyền loại dược liệu giúp giải độc, mát gan lại có cơng trình nghiên cứu chúng Chỉ có số cơng trình nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học Adenosma caeruleum (De Abreu cộng sự, 2009; Adam cộng sự, 1992; Nguyễn Hoàng Tuấn, 2000) thành phần hóa học lồi Adenosma indiana (Dương Hồng Nhung, 2015) Hiện loài Adenosma bracteosum dừng lại việc khảo sát thành phần tinh dầu (Tsankova cộng sự, 1994) số hợp chất polyphenol (Nguyễn Đức Hạnh cộng sự, 2008) 1.1.2 Tổng quan Nhân trần tía Adenosma Bracteosum Bonati 1.1.2.1 Tên khoa học Giới: Plantae Ngành: Magnoliophyta Lớp: Magnoliopsida Bộ: Lamiales Họ: Scrophulariaceae Đồ án tốt nghiệp Chi: Adenosma Loài: Adenosma bracteosum Bonati (Nhân trần tía, Nhân trần Tây Ninh, Tuyến hương bắc) 1Hình 1.1 Cây Nhân trần tía Adenosma Bracteosum Bonati 1.1.2.2 Đặc điểm thực vật phân bố Theo Dược Điển Việt Nam III (2002), Đỗ Tất Lợi (2004) Phạm Hồng Hộ (1999) Nhân trần tía thuộc loại thân thảo, thơm, cao 20 – 30 cm; phân nhánh Thân có cạnh, nhẵn có lơng tuyến rải rác Cành màu tím đỏ Lá có hình phiến thon, dài – 2,5 cm, rộng – mm, nửa ôm thân, mép có nhọn nửa trên, mặt có lơng có tuyến, khơ dễ rụng Cụm hoa nhân trần Tía có hình trụ, mọc đầu cành Đài hoa có đài hình tim nhọn, kích thước khơng đều, rời nhau, có lơng rậm có tuyến mép Tràng hoa cao mm, màu lam, có lơng rải rác mặt ngồi, mơi trịn, mơi dài mơi chia thành thùy hình Đồ án tốt nghiệp trứng Cây có dạng nang, hình trứng, đơi thuôn dài, cao mm Quả không lông, màu nâu có nhiều hạt Nhân trần tía trồng mọc hoang Campuchia, Lào miền nam Việt Nam Cây thường mọc vào mùa mưa đất sét ẩm, bờ ruộng độ cao 300 800 m Cây thường mọc thành đám có tới hàng chục mét vuông bãi đất chăn đồi, thung lũng hay đám ruộng cao bỏ hoang Ở nơi đất dinh dưỡng cao 15 cm thấy có hoa Cây mọc tốt đất có phèn vùng thấp dọc đường số nơi từ Kontum, Đắk Lắk tới Tây Ninh, Thành phố Hồ Chí Minh (Đỗ Huy Bích cộng sự, 2004) Nhân trần tía gặp vào thời gian từ mùa mưa đến đầu mùa khô năm Cây bắt đầu mọc vào tháng hoa vào khoảng tháng 10 - 11, tàn lụi vào tháng 12 Cây ưa táng, ưa ẩm chịu khơ hạn sau hoa, kết Sau già, toàn tàn lụi So với loài khác thuộc chi Adenosma sp., Nhân trần tía có vịng đời ngắn hơn, tồn - tháng nên mức độ khai thác sử dụng 1.1.2.3 Một số thành phần hóa học nghiên cứu ❖ Thành phần hóa học số loài chi Adenosma sp ➢ Adenosma caeruleum Adenosma caeruleum R Br có chứa monoterpenoid peroxyde (Adam, 1992), betulinic acid, arbutin, aucubin, β-sitosterol, stigmasterol, campesterol, adenosmoside, crenatoside, verbascoside, cistanoside F, campneoside I, campneoside II, apigenin 7-Oβ-D-glucuronopyranoside, apigenin 7-O-β-D-glucopyranoside (De abreu, 2009) Năm 1975, Lê Tùng Châu cộng phân tích Adenosma caeruleum R.Br có saponin triterpenoid, flavonoid, acid nhân thơm, coumarin tinh dầu Cả có 1% tinh dầu, hoa có 1,86% tinh dầu tỷ trọng 0,8042 (25o) nD=1,4705 (20o) (trích dẫn Đỗ Tất Lợi, 2004) ➢ Adenosma indiana Đồ án tốt nghiệp Năm 1939, F Guichard J Clemensat phân tích lồi Adenosma indiana (Lour.) Merr định danh Nhân trần thấy 1,67% kali nitrat, saponin có số bọt 2.600, glucozit tan axeton, ete, không tan nước, khoảng 0,7% tinh dầu Tinh dầu loài Adenosma indiana (Lour.) Merr lỏng, màu vàng, mùi hăng gần giống mùi long não bạc hà, vị nóng; tan methanol, ethanol, chloroform dung môi hữu khác Thành phần chủ yếu tinh dầu 20% hợp chất oxy tan dung dịch reorcin Chỉ số acid 1,4; số xà phịng hóa 11,5; số axetyl hóa 38; số iot 121,4 (trích dẫn Đỗ Tất Lợi, 2004) Năm 1950, P.V Nair cộng chưng cất từ loài Adenosma indiana (Lour.) Merr 1% tinh dầu phân tích thấy có 5L.monoterpen 2D.secquiterpen có 38,5% cineol Ngồi cịn thấy saponin triterpenoid, flavonoid, acid nhân thơm, coumarin tinh dầu (trích dẫn Đỗ Tất Lợi, 2004) Vào năm 2015, Dương Hồng Nhung phân lập từ Adenosma indiana (Lour.) Merr hợp chất 2-(4’-hydroxyphenyl)etyl triacontanoat, β-sitosterol glucosid, acid betulinic ❖ Thành phần hóa học Nhân trần tía Adenosma bracteosum Bonati ➢ Tinh dầu: Nguyễn Viết Tựu cộng phân tích thấy Adenosma bracteosum Bonati có 0,25% tinh dầu, màu vàng sẫm, tỷ trọng 0,890, số khúc xạ 1,496, sắc ký khí thấy 19 peak có peak lớn cineol khoảng 18% (trích dẫn Đỗ Tất Lợi, 2004) Tsankova cộng (1994) phân tích tinh dầu Adenosma bracteosum Bonati GS GC/MS thấy số hợp chất gồm thymol (25.6%), linalool (13.1%) (E)-β-farnesene (9.5%) Ngồi cịn có diện carvacrol, tinh dầu kháng khuẩn mạnh có khả chống ung thư (Can Baser, 2008; Đỗ Huy Bích cộng sự, 2004) Đồ án tốt nghiệp Bảng 1.1 Các thành phần hóa học có tinh dầu Adenosma bracteosum Bonati (Tsankova cộng sự, 1994; Đỗ Tất Lợi, 2004) STT Tên chất -terpinene p-cymene menthone camphor Linalool Công thức 10 Đồ án tốt nghiệp Borneol α-humulene -caryophyllene (E)-β-farnesene 10 Thymol 11 ... flavonoid Đồ án tốt nghiệp tinh dầu, hợp chất tự nhiên với nhiều hoạt tính sinh học bật Tuy nhiên, Nhân trần tía xem vị thuốc Đông y, chưa có cơng trình nghiên cứu chứng minh cách cụ thể hoạt tính sinh. .. minh cách cụ thể hoạt tính sinh học kháng oxy hóa, điều trị tiểu đường, kháng khuẩn… Do đề tài ? ?Khảo sát hoạt tính sinh học Nhân trần tía? ?? thực hiện, tạo tiền đề khoa học cho sản phẩm ứng dụng từ... Định tính thành phần hóa học Nhân trần tía Adenosma bracteosum Bonati Xác định hàm lượng polyphenol, flavonoid khả kháng oxy hóa cao chiết từ Nhân trần tía Xác định độc tính cấp diễn hoạt tính