Xác định khả năng kháng staphylococcus aureus kháng methicillin (mrsa) atcc 43300 từ cao chiết chủng pseudomonas sp p20 nội sinh sâm đại hành (eleutherine subaphylla gagnep )

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - - BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP Tên đề tài: XÁC ĐỊNH KHẢ NĂNG KHÁNG Staphylococcus aureus kháng methicillin (MRSA) ATCC 43300 TỪ CAO CHIẾT CHỦNG Pseudomonas sp P20 NỘI SINH SÂM ĐẠI HÀNH (Eleutherine Subaphylla Gagnep.) KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC CHUYÊN NGÀNH: Y DƯỢC GVHD: ThS Dương Nhật Linh ThS Nguyễn Văn Minh BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - - BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP Tên đề tài: XÁC ĐỊNH KHẢ NĂNG KHÁNG Staphylococcus aureus kháng methicillin (MRSA) ATCC 43300 TỪ CAO CHIẾT CHỦNG Pseudomonas sp P20 NỘI SINH SÂM ĐẠI HÀNH (Eleutherine Subaphylla Gagnep.) KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC CHUYÊN NGÀNH: Y DƯỢC GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH ThS NGUYỄN VĂN MINH THỰC TẬP TỐT NGHIỆP LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành thời gian thực tập tốt nghiệp nhận nhiều hỗ trợ từ gia đình, nhà trường, thầy cô, bạn bè anh chị Đầu tiên, xin cảm ơn Bố Mẹ nuôi nấng, dạy dỗ tạo điều kiện cho học tập, tạo động lực để cố gắng ngày Cảm ơn Bố mẹ ln ủng hộ, cổ vũ trước định Em xin cảm ơn Ban Giám Hiệu nhà trường quý thầy cô khoa Công nghệ sinh học trường Đại học Mở Thành phố Hồ Chí Minh truyền đạt cho em vốn kiến thức quý báu, tạo điều kiện cho em học tập nghiên cứu Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến cô Dương Nhật Linh thầy Nguyễn Văn Minh tận tình hướng dẫn, bảo cho em kiến thức chuyên ngành học sống Thầy cô người tiếp cho em động lực để vượt qua khó khăn suốt trình thực đề tài Em xin cảm ơn chị Trần Thị Á Ni chị Nguyễn Thị Thảo Nguyên, anh chị bạn phịng thí nghiệm ủng hộ, giúp đỡ tạo điều kiện để em hoàn thành tốt đề tài Kính chúc tất q thầy cơ, anh chị, bạn bè gia đình ln dồi sức khỏe, niềm vui, bình an hạnh phúc Xin trân thành cảm ơn! i THỰC TẬP TỐT NGHIỆP GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH ThS NGUYỄN VĂN MINH MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i DANH MỤC BẢNG VÀ BIỂU ĐỒ v DANH MỤC HÌNH ẢNH vi DANH MỤC VIẾT TẮT vii ĐẶT VẤN ĐỀ PHẦN I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU SƠ LƯỢC VỀ CÂY SÂM ĐẠI HÀNH (Eleutherine subaphylla Gagnep.) 1.1 Phân loại khoa học 1.2 Công dụng TỔNG QUAN VỀ VI SINH VẬT NỘI SINH 2.1 Khái niệm 2.2 Nguồn gốc, phân bố đa dạng sinh học vi sinh vật nội sinh 2.3 Vai trò vi sinh vật nội sinh 2.4 Tình hình nghiên cứu vi sinh vật nội sinh TỔNG QUAN VỀ VI KHUẨN Pseudomonas sp 10 3.1 Phân loại khoa học 10 3.2 Hình dạng kích thước 11 3.3 Ứng dụng nghiên cứu hợp chất từ Pseudomonas 11 TỔNG QUAN VỀ VI KHUẨN Staphylococcus aureus (MRSA) 12 PHƯƠNG PHÁP CHIẾT 13 5.1 Khái niệm 13 ii THỰC TẬP TỐT NGHIỆP 5.2 GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH ThS NGUYỄN VĂN MINH Phương pháp chiết lỏng – lỏng 14 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRÊN THẾ GIỚI VÀ TRONG NƯỚC 14 PHẦN 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 17 VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 17 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 3.1 Sơ đồ bố trí thí nghiệm 18 3.2 Hoạt hóa chủng vi khuẩn Pseudomonas sp P20 18 3.3 Khảo sát khả huyết giải chủng Pseudomonas sp P20 19 3.4 Xác định khả kháng MRSA từ dịch bào dịch nội bào chủng Pseudomonas sp P20 19 3.5 Thu nhận cao chiết từ chủng Pseudomonas sp P20 có khả kháng MRSA từ hệ dung môi khác 20 3.6 Khảo sát khả kháng MRSA từ cao chiết chủng Pseudomonas sp P20 20 3.7 Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) cao chiết chủng Pseudomonas sp P20 phương pháp pha loãng 21 3.8 Xác định nồng độ diệt khuẩn tối thiểu (MBC) cao chiết chủng Pseudomonas sp P20 21 PHẦN 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 22 Hình ảnh đại thể vi thể chủng Pseudomonas sp P20 23 Khảo sát khả huyết giải chủng Pseudomonas sp P20 24 Khảo sát khả kháng MRSA chủng Pseudomonas sp P20 24 iii THỰC TẬP TỐT NGHIỆP GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH ThS NGUYỄN VĂN MINH Thu nhận cao chiết từ chủng Pseudomonas sp P20 25 Khảo sát khả kháng MRSA từ cao chiết chủng Pseudomonas sp P20 27 Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) cao chiết chủng Pseudomonas sp P20 29 Xác định nồng độ diệt khuẩn tối thiểu (MBC) cao chiết chủng Pseudomonas sp P20 30 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 31 KẾT LUẬN 32 KIẾN NGHỊ 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO 33 iv THỰC TẬP TỐT NGHIỆP GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH ThS NGUYỄN VĂN MINH DANH MỤC BẢNG VÀ BIỂU ĐỒ Bảng Kết khảo sát vòng kháng khuẩn dịch nội bào ngoại bào chủng Pseudomonas sp P20 25 Bảng Kết khối lượng cao chiết thu từ loại dung môi khác 26 Bảng 3 Kết khảo sát khả kháng MRSA cao chiết chủng Pseudomonas sp P20 27 Bảng Kết MIC loại cao chiết từ chủng Pseudomonas sp P20 chủng vi khuẩn gây bệnh MRSA 29 Biểu đồ Mức độ ảnh hưởng dung môi đến cao chiết 26 v THỰC TẬP TỐT NGHIỆP GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH ThS NGUYỄN VĂN MINH DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1 Cây Sâm đại hành (Eleutherine subaphylla Gagnep.) Hình Kết quan sát đại thể vi thể chủng Pseudomonas sp P20 23 Hình Khả huyết giải chủng Pseudomonas sp P20 24 Hình 3 Khả kháng MRSA dịch ngoại bào chủng Pseudomonas sp P20 25 Hình Cao chiết thu nhận từ dung mơi 27 Hình Kết khảo sát khả kháng MRSA cao chiết chủng Pseudomonas sp P20 28 vi GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH ThS NGUYỄN VĂN MINH THỰC TẬP TỐT NGHIỆP DANH MỤC VIẾT TẮT Cộng sự: cs Nutrient broth: NB Nutrient broth: NA Mueller Hinton Agar: MHA Đối chứng: ĐC Dimethyl sulfoxide: DMSO Chloroform: Chlo Dichlomethane: Di Hexan: He Methanol: Me Ethyl acetate: EA vii THỰC TẬP TỐT NGHIỆP GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH ThS NGUYỄN VĂN MINH ĐẶT VẤN ĐỀ Staphylococcus aureus nguyên nhân hàng đầu viêm nội tâm mạc, nhiễm khuẩn huyết, viêm tủy xương, nhiễm trùng da mô mềm Với phát triển y học bệnh viện, S aureus nhanh chóng trở thành nguyên nhân hàng đầu bệnh nhiễm trùng liên quan đến chăm sóc sức khỏe Sự gia tăng chủng S aureus có độc lực kháng thuốc, đặc biệt Staphylococcus aureus kháng methicillin (MRSA) gây gánh nặng kinh tế đáng kể lo ngại sức khỏe cộng đồng liệu pháp điều trị nhiễm trùng MRSA cịn hạn chế Các chủng MRSA mơ tả lần vào năm 1961 – đặc trưng protein liên kết penicillin bị thay đổi (PBP2a) khả kháng tất penicillin, cephalosporin carbapenem, điểu làm cho thuốc cung cấp β-lactam không đạt hiệu mặt lâm sàng (Turner cs., 2019) Những nghiên cứu gần cho thấy MRSA bắt đầu kháng với số nhóm kháng sinh khác như: linezolid (Caballero cs., 2015), daptomycin (Roch cs., 2017) vancomycin (Ghahremani cs., 2018) Các liệu pháp điều trị có hiệu MRSA ngày bị hạn chế tác động mạnh mẽ đến việc nghiên cứu tìm hợp chất có khả kháng MRSA Nhiều nghiên cứu chứng minh chiết xuất từ vi sinh vật nội sinh dược liệu tạo thành nguồn hợp chất có hoạt tính sinh học vượt trội, số chứng minh tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm chống virus (Makuwa cs., 2021) Vi sinh vật nội sinh vi sinh vật tồn bên mơ thực vật mà khơng có tác động tiêu cực đến vật chủ chúng, có tiềm lớn việc tổng hợp nhiều hợp chất để khai khác y học đại, nông nghiệp công nghiệp Hệ vi sinh vật nội sinh dược liệu tạo chất chuyển hóa có hoạt tính sinh học đa dạng, chúng bao gồm enzym thiết yếu, alkaloid, flavonoid, axit phenolic, quinin, steroid terpenoid (Nxumalo cs., 2020) Sâm đại hành (Eleutherine subaphylla Gagnep.) trồng rộng rãi khắp giới, đặc biệt Châu Phi Châu Á đặc tính chữa bệnh Từ thời xa xưa, sâm đại hành sử dụng để THỰC TẬP TỐT NGHIỆP GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH ThS NGUYỄN VĂN MINH Khảo sát khả huyết giải chủng Pseudomonas sp P20 Sau quan sát đại thể vi thể, tiến hành khảo sát khả huyết giải chủng Pseudomonas sp P20 phương pháp cấy ria mơi trường thạch máu BA Hình Khả huyết giải chủng Pseudomonas sp P20 Khả tiêu huyết chủng Pseudomonas sp P20 thể theo kiểu γ (không tiêu huyết): hồng cầu không bị ly giải nên không tạo vùng tiêu huyết Qua đó, cho thấy chủng Pseudomonas sp P20 nội sinh sâm đại hành có tiềm ứng dụng nghiên cứu hợp chất kháng MRSA Từ kết thử nghiệm tiêu huyết, tiến hành khảo sát khả kháng MSRA chủng Pseudomonas sp P20 phương pháp khuếch tán giếng thạch Khảo sát khả kháng MRSA chủng Pseudomonas sp P20 Dịch ngoại bào nội bào chủng Pseudomonas sp P20 sau qua xử lý, tiến hành thí nghiệm khảo sát khả kháng MRSA cách đo đường kính vịng kháng Tiến hành thí nghiệm theo mục 3.4 Kết trình bày bảng 3.1 SVTH: MAI THỊ THÙY TRANG 24 GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH ThS NGUYỄN VĂN MINH THỰC TẬP TỐT NGHIỆP Bảng Kết khảo sát vòng kháng khuẩn dịch nội bào ngoại bào chủng Pseudomonas sp P20 Đường kính vịng kháng (mm) Tên chủng Dịch ngoại bào Dịch nội bào Pseudomonas sp P20 23,33 ± 1,52 - Đối chứng 0 ĐC Hình 3 Khả kháng MRSA dịch ngoại bào chủng Pseudomonas sp P20 Dựa vào kết bảng 3.1 cho thấy dịch nội bào chủng Pseudomonas sp P20 khơng có khả kháng MRSA, dịch ngoại bào có khả kháng chủng vi khuẩn gây bệnh MRSA với đường kính 23,33 ± 1,52 mm Thu nhận cao chiết từ chủng Pseudomonas sp P20 Độ phân cực dung môi khác ảnh hưởng đến khả hòa tan chất khác Để xác định dung mơi thích hợp cho việc tách chiết hợp chất kháng khuẩn vi khuẩn Pseudomonas sp P20 tiến hành nuôi vi khuẩn thử nghiệm môi trường lên men tối ưu đem lọc thu dịch vi khuẩn thử nghiệm Dịch vi khuẩn thử nghiệm sau chiết phương pháp chiết lỏng - lỏng với loại dung môi SVTH: MAI THỊ THÙY TRANG 25 GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH ThS NGUYỄN VĂN MINH THỰC TẬP TỐT NGHIỆP theo tỷ lệ 1:1: n-hexan, chloroform, dichlomethane, ethyl acetate methanol Sau tiến hành thu cao chiết Kết thể qua bảng 3.2 Bảng Kết khối lượng cao chiết thu từ loại dung môi khác Thể tích (ml) Khối lượng (g) Hiệu suất (%) Methanol 50 0.10 0.20 Ethyl acetate 50 0.61 1.22 Chloroform 50 0.57 1.14 Dichlomethane 50 0.48 0.96 Hexan 50 0.59 1.18 Cao chiết 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 Me EA Chlo Di Khối lượng cao chiết thu (g) He Biểu đồ Mức độ ảnh hưởng dung môi đến cao chiết Kết từ bảng số liệu 3.2 biểu đồ 3.1 so sánh khối lượng cao chiết thu từ dung môi khác cho thấy dung môi cho lượng cao chiết cao Ethyl acetate (m=0.61 g; H=1.22 %) Hexan (m=0.59 g; H=1,18 %) Dung môi Chloroform Dichlomethane cho khối lượng cao chiết 0.57 g (H=1,14 %) 0.48 g (H=0,96 %) Dung môi Methanol cho khối lượng cao chiết thấp (m=0.1 g; H=0,20 %) so với dung môi khác SVTH: MAI THỊ THÙY TRANG 26 GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH ThS NGUYỄN VĂN MINH THỰC TẬP TỐT NGHIỆP A B Hình Cao chiết thu nhận từ dung môi A) Cao chiết từ dung môi Hexan B) Cao chiết từ dung môi Ethyl acetate Khảo sát khả kháng MRSA từ cao chiết chủng Pseudomonas sp P20 Sau thu nhận cao chiết, tiến hành khảo sát khả kháng MRSA cao chiết thu từ loại dung môi khác theo phương pháp khuếch tán giếng thạch ghi nhận kết cách đo đường kính vịng vơ khuẩn Kết thể qua bảng 3.3 hình 3.5 Bảng 3 Kết khảo sát khả kháng MRSA cao chiết chủng Pseudomonas sp P20 Đường kính vịng kháng vi khuẩn gây bệnh (mm) Methanol 14,67 ± 3,06b Ethyl acetate 15,00 ± 0,00b Chloroform 10,33 ± 0,58c Dichlomethane 12,00 ± 0,00c Hexan 20,00 ± 0,00a Trong cột giá trị có mẫu tự khơng khác biệt mức ý nghĩa % qua phép thử Duncan (a, b, c thể mức độ khác qua thống kê) SVTH: MAI THỊ THÙY TRANG 27 GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH ThS NGUYỄN VĂN MINH THỰC TẬP TỐT NGHIỆP ĐC ĐC Chlo 10 mm Di EA 12 mm 15 mm Me 18 mm ĐC He 20 mm Hình Kết khảo sát khả kháng MRSA cao chiết chủng Pseudomonas sp P20 Từ bảng 3.3 cho thấy có khác biệt có ý nghĩa đường kính kháng MRSA cao chiết từ loại dung môi khác Trong đó, cao chiết n – hexan cho kết vòng kháng MRSA cao (20,00 ± 0,00a mm) 15,00 ± 0,00b mm cao chiết Ethyl acetate Cao chiết Chloroform có kết đường kính vòng kháng thấp (10,33 ± 0,58c mm) cao Dicholomethane 12,00 ± 0,00c mm Một nghiên cứu thực Harlita Oedjijono (2018) chứng minh n – hexane, ethyl acetate 96 % ethanol chiết xuất từ củ sâm đại hành có khả kháng vi khuẩn gây bệnh MRSA, Bacillus cereus, Shigella sp Pseudomonas aeruginosa phương pháp khuếch tán đĩa thạch Hoạt tính kháng MRSA cao SVTH: MAI THỊ THÙY TRANG 28 GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH ThS NGUYỄN VĂN MINH THỰC TẬP TỐT NGHIỆP chiết xuất ethyl acetate (10 mg/ml, ức chế 91,67 %) Đường kính vòng kháng bốn lần lặp lại 12 mm, 12 mm, 11 mm, 11 mm (Harlita cs., 2018) Kết nghiên cứu tiền đề để xác định khả kháng MRSA cao chiết chủng Pseudomonas sp P20 từ hệ dung môi khác Sau khảo sát khả kháng MRSA cao chiết chủng Pseudomonas sp P20 tiến hành xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) cao chiết thu Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) cao chiết chủng Pseudomonas sp P20 Kết thí nghiệm khảo sát khả kháng MRSA cao chiết chủng Pseudomonas sp P20 cho thấy cao chiết từ loại dung mơi có khả kháng MRSA Do tiến hành thực phương pháp MIC để kiểm tra lại khả kiềm hãm phát triển cao chiết chủng Pseudomonas sp P20 chủng vi khuẩn gây bệnh MRSA phương pháp pha loãng Kết trình bày bảng 3.4 Bảng Kết MIC loại cao chiết từ chủng Pseudomonas sp P20 chủng vi khuẩn gây bệnh MRSA Thứ tự giếng 10 11 12 512 256 128 64 32 16 0,5 0,25 μg/ μg/ µg/ μg/ μg/ μg/ μg/ μg/ μg/ μg/ μg/ μg/ mL mL mL mL mL mL mL mL mL mL mL mL Me + + + - - - - - - - - - Chlo + - - - - - - - - - - - Di + - - - - - - - - - - - EA + + - - - - - - - - - - He + + + + - - - - - - - - Cao chiết +: kháng; -: không kháng SVTH: MAI THỊ THÙY TRANG 29 THỰC TẬP TỐT NGHIỆP GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH ThS NGUYỄN VĂN MINH Từ kết trên, nhận thấy cao chiết chủng Pseudomonas sp P20 thu từ dung môi Methanol, Ethyl acetate, Chloroform, Dichlomethane, n-hexan có khả ức chế phát triển MRSA Kết MIC cho thấy giá trị MIC cao chiết Me 128 µg/mL, Chlo 512 µg/mL, Di 512 µg/mL, EA 256 µg/mL He 64 µg/mL Theo Harlita cs (2018) nghiên cứu củ sâm đại hành, kết cho thấy nồng độ ức chế tối thiểu chất chiết xuất n-hexan, ethyl acetate ethanol 96 % từ củ sâm đại hành vi khuẩn thử nghiệm: MRSA, B cereus, Shigella sp P aeruginosa mg/mL Hiệu suất thu hồi cao chiết dung môi EA (1.22 %) cao nhất, nhiên khả kháng MRSA (15,00 ± 0,00b mm) thấp cao chiết dung môi He (20,00 ± 0,00a mm), giá trị MIC (256 µg/mL) cao Di (512 µg/mL) Chlo (512 µg/mL) Cao chiết với dung mơi He có khả kháng MRSA cao (20,00 ± 0,00a mm), nồng độ ức chế tối thiểu cao (64 µg/mL) hiệu suất thu hồi thấp dung môi EA Vì chọn cao chiết từ dung mơi He để tiến hành thực sắc ký cột thu nhận phân đoạn chứa chất có hoạt tính kháng MRSA Xác định nồng độ diệt khuẩn tối thiểu (MBC) cao chiết chủng Pseudomonas sp P20 Vì tình hình dịch bệnh kéo dài điều kiện phịng thí nghiệm nên thời gian thực nghiên cứu bị giới hạn, chúng tơi chưa thể thực việc xác định giá trị MBC cao chiết chủng Pseudomonas sp P20 SVTH: MAI THỊ THÙY TRANG 30 THỰC TẬP TỐT NGHIỆP GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH ThS NGUYỄN VĂN MINH PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ SVTH: MAI THỊ THÙY TRANG 31 THỰC TẬP TỐT NGHIỆP GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH ThS NGUYỄN VĂN MINH KẾT LUẬN Với kết thực nghiệm thu trình bày trên, chúng tơi có kết luận sau: - Dịch ngoại bào chủng vi khuẩn Pseudomonas sp P20 có khả kháng S aureus ATCC 43300 kháng methicillin (MRSA) với đường kính 23,33 ± 1,52 mm - Khối lượng cao chiết thu dung môi Ethyl acetate cao (0,61 g) với hiệu suất 1,22 % - Cao chiết với dung môi thử nghiệm có khả kháng MRSA, đó, cao n – hexan có khả kháng MRSA mạnh với đường kính kháng 20,00 ± 0,00a mm Giá trị MIC cao chiết thu từ dung môi n-hexan cao (64 µg/mL) KIẾN NGHỊ Để hồn thiện cho đề tài thực tiếp việc thu nhận hợp chất có khả kháng MRSA từ chủng Pseudomonas sp P20, chúng tơi có kiến nghị nhằm củng cố phát triển thêm kết đề tài đạt được: - Khảo sát khả kháng MRSA cao chiết chủng Pseudomonas sp P20 từ loại dung mơi khác - Cơ lập hợp chất có khả kháng MRSA từ cao chiết chủng Pseudomonas sp P20 - Tinh chế hợp chất có khả kháng MRSA từ cao chiết chủng Pseudomonas sp P20 SVTH: MAI THỊ THÙY TRANG 32 THỰC TẬP TỐT NGHIỆP GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH ThS NGUYỄN VĂN MINH TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt 1) Đỗ Tất Lợi, (2006), Cây thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học 2) Hằng, C T T., Hiếu, V M N., Thịnh, P Đ., Linh, N N., Thuất, N Đ., & Vân, T T T (2021) Khảo sát điều kiện lên men chủng vi khuẩn biển Bacillus velezensis AlgSm1 để thu nhận alginate lyase Bản B Tạp chí Khoa học Công nghệ Việt Nam, 63(3) 3) Nguyễn Kim Phi Phụng (2007) Phương pháp cô lập hợp chất hữu Nhà xuất Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh 4) Nguyễn Thị Hồng Vân, Đỗ Thị Nguyệt Quế, Nguyễn Thu Hằng, Lê Thị Loan, Lưu Tuấn Anh, Nguyễn Văn Hoan (2014), “Nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn in vitro tác dụng điều trị chỗ chế phẩm EB chiết tách từ củ sâm đại hành bỏng thực nghiệm”, Tạp chí sinh học, 36(1), 81 – 87 5) Trương Minh Lương, Trần Văn Huy (2009), “Góp phần nghiên cứu Eleutherine sâm đại hành Việt Nam”, Tạp chí Khoa học ĐHSP TP HCM, 16, 69-79 Tài liệu Tiếng Anh 1) Bauer AW, Kirby WMM, Sherris JC, Turck M (1966) Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disk method Am J Clin Pathol 36:493–496 2) Christina A., Christapher V., Bhore S J (2013), “Endophytic bacteria as a source of novel antibiotics: An Overview”, Pharmacognosy Reviews, 7(13), pp 11-16 3) Clinical and Laboratory Standards Institute 2009 Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically; approved standard, 8th ed M07-A8 CLSI, Wayne, PA 4) Clinical and Laboratory Standards Institute 2006 Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically Approved SVTH: MAI THỊ THÙY TRANG 33 THỰC TẬP TỐT NGHIỆP GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH ThS NGUYỄN VĂN MINH Standard 7th ed CLSI Document M7-A7 Clinical and Laboratory Standards Institute, Wayne, PA 5) Dai, J J., Min, Q X., Zhong, C H., & Wang, H X (2013) Protective effect and antioxidant effect of red onions on acute gastric mucosal injury The Chinese Journal of Clinical Pharmacology, 6, 89-91 6) Dwivedi D, Johri BN Antifungal from fluorescent Pseudomonads: Biosynthesis and Regulation Curr Sci 2003; 85(12): 1693-1703 7) Ghahremani, M., Jazani, N H., & Sharifi, Y (2018) Emergence of vancomycinintermediate and-resistant Staphylococcus aureus among methicillin-resistant S aureus isolated from clinical specimens in the northwest of Iran Journal of global antimicrobial resistance, 14, 4-9 8) Harlita, T D., & Oedjijono, A A (2018) The antibacterial activity of dayak onion (Eleutherine palmifolia (L.) merr) towards pathogenic bacteria Tropical life sciences research, 29(2), 39 9) Ifesan, B O T., Joycharat, N., & Voravuthikunchai, S P (2009) The mode of antistaphylococcal action of Eleutherine americana FEMS Immunology & Medical Microbiology, 57(2), 193-201 10)Lesinger T, Margraff R: Secondary metabolites of fluorescent Pseudomonas Microbiol Rev 1979, 43:422–442 11)Luti KJK, Yonis RW Elicitation of Pseudomonas aeruginosa with live and dead microbial cells enhances phenazine production Rom Biotech Lett 2013; 18: 7169-7178 12)Makuwa, S C., & Serepa-Dlamini, M H (2021) The Antibacterial Activity of Crude Extracts of Secondary Metabolites from Bacterial Endophytes Associated with Dicoma anomala International Journal of Microbiology, 2021 13)McPhail KL, Armstrong DJ, Azevedo MD, Banowetz GM, Mills DI: 4Formylaminooxyvinylglycine, an herbicidal germination-arrest factor from Pseudomonas rhizosphere bacteria J Nat Prod 2010, 73:1853–1857 SVTH: MAI THỊ THÙY TRANG 34 GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH ThS NGUYỄN VĂN MINH THỰC TẬP TỐT NGHIỆP 14)Millette, M., Dupont, C., Archambault, D., & Lacroix, M (2007) Partial characterization of bacteriocins produced by human Lactococcus lactis and Pediococccus acidilactici isolates Journal of applied microbiology, 102(1), 274282 15)Mukhopadhyay, M., & Adhikari, M (2020) Endophytic of Catharathus roseus: A protential source of plant growth promoters and antimocrobial compounds Journal of Advanced Scientific Research, 11(2) 16)Nxumalo, C I., Ngidi, L S., Shandu, J S E., & Maliehe, T S (2020) Isolation of endophytic bacteria from the leaves of Anredera cordifolia CIX1 for metabolites and their biological activities BMC Complementary Medicine and Therapies, 20(1), 1-11 17)Roch, M., Gagetti, P., Davis, J., Ceriana, P., Errecalde, L., Corso, A., & Rosato, A E (2017) Daptomycin resistance in clinical MRSA strains is associated with a high biological fitness cost Frontiers in microbiology, 8, 2303 18)Roy, S., & Banerjee, D (2015) Broad spectrum antibacterial activity of granaticinic acid, isolated from Streptomyces thermoviolaceus NT1; an endophyte in Catharanthus roseus (L.) G Don Don J Appl Pharm Sci, 5, 6-11 19)Strobel G A., Daisy B (2003), Bioprospecting for Microbial Endophytes and Their Natural Products, Microbiology and Molecular”, Biology views, pp 491 20)Verma B et al (2015) Gas Chromatography - Mass Spectrometry Analysis and Antibacterial Activity of Bluish-Green Pigment from Pseudomonas sp JJTBVK (KF836502) Brazilian archives of biology and technology Vol.58, n.4: pp 628635 SVTH: MAI THỊ THÙY TRANG 35 THỰC TẬP TỐT NGHIỆP GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH ThS NGUYỄN VĂN MINH PHỤ LỤC Kết thống kê khả kháng MRSA chủng Pseudomonas sp P20 SVTH: MAI THỊ THÙY TRANG 36 GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH ThS NGUYỄN VĂN MINH THỰC TẬP TỐT NGHIỆP Kết thống kê khả kháng MRSA cao chiết chủng Pseudomonas sp P20 SVTH: MAI THỊ THÙY TRANG 37 THỰC TẬP TỐT NGHIỆP SVTH: MAI THỊ THÙY TRANG GVHD: ThS DƯƠNG NHẬT LINH ThS NGUYỄN VĂN MINH 38 ... TIÊU ĐỀ TÀI Xác định khả kháng Staphylococcus aureus kháng methicillin (MRSA) ATCC 43300 từ cao chiết chủng Pseudomonas sp P20 nội sinh sâm đại hành (Eleutherine subaphylla Gagnep. ) NỘI DUNG NGHIÊN... nhận cao chiết từ chủng Pseudomonas sp P20 25 Khảo sát khả kháng MRSA từ cao chiết chủng Pseudomonas sp P20 27 Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) cao chiết chủng Pseudomonas sp P20 ... tài: ? ?Xác định khả kháng Staphylococcus aureus kháng methicillin (MRSA) ATCC 43300 từ cao chiết chủng Pseudomonas sp P20 nội sinh sâm đại hành (Eleutherine subaphylla Gagnep. )? ?? THỰC TẬP TỐT NGHIỆP