Khảo sát hiệu suất sinh học và hàm lượng cordycepin, adenosine trong Cordyceps militaris theo thời gian nuôi cấy

Bài viết Khảo sát hiệu suất sinh học và hàm lượng cordycepin, adenosine trong Cordyceps militaris theo thời gian nuôi cấy trình bày khảo sát hàm lượng cordycepin và adenosine theo hiệu suất sinh học trong quả thể nấm Cordyceps militaris sau 40 ngày nuôi trên môi trường rắn và cảm ứng ánh sáng.

Tuyển tập Hội nghị Nấm học Toàn quốc lần thứ doi: 10.15625/vap.2022.0133 KHẢO SÁT HIỆU SUẤT SINH HỌC VÀ HÀM LƯỢNG CORDYCEPIN, ADENOSINE TRONG Cordyceps militaris THEO THỜI GIAN NUÔI CẤY Nguyễn Thái Thanh Ngân1, Đỗ Thành Nhân2, Lê Anh Duy1, Nguyễn Đăng Khoa1, Nguyễn Thị Liên Thương1* Viện Phát triển Ứng dụng, Trường Đại học Thủ Dầu Một Trường Đại học Công nghiệp thực phẩm TP HCM *Email: thuongntl@tdmu.edu.vn TĨM TẮT Đơng trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) loại dược liệu quý có chứa nhiều hợp chất sinh học quan trọng; đó, cordycepin adenosine hai hợp chất tập trung nghiên cứu có nhiều ứng dụng y học đại Hiện sản xuất, nỗ lực giúp cải thiện hàm lượng cordycepin, adenosine tăng sản lượng nấm ngày quan tâm; nhiên yếu tố thay đổi khác q trình ni cấy Vì khảo sát hàm lượng dược chất hiệu suất sinh học theo thời gian nuôi cấy cần thiết cho trình thu nhận nấm với suất hoạt tính cao Trong nghiên cứu này, chúng tơi khảo sát hàm lượng cordycepin adenosine theo hiệu suất sinh học thể nấm Cordyceps militaris sau 40 ngày nuôi môi trường rắn cảm ứng ánh sáng Kết cho thấy hiệu suất sinh học đạt cao 18,29 ± 0,15 % ngày thứ 45, hàm lượng cordycepin adenosine lại tăng đáng kể ngày cuối trình khảo sát Hàm lượng cordycepin cao ngày thứ 65 đạt 5.125,28 ± 742,53 μg/g; hàm lượng adenosine cao ngày thứ 60 đạt 1.668,85 μg/g sau giảm dần ngày thứ 65 Kết có ý nghĩa việc thu nhận nấm với hoạt tính cao, giúp tăng lợi ích sức khỏe sử dụng nấm xác định thời gian thu hoạch thích hợp giúp cải tạo thành công hiệu suất sinh học nấm Từ khóa: Cordyceps militaris, cordycepin, adenosine, hiệu suất sinh học, thời gian nuôi cấy ĐẶT VẤN ĐỀ Đơng trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) lồi nấm thuộc họ Cordycipitaceae, chúng Carl Linnaeus mô tả vào năm 1753 sử dụng loại dược liệu ngày [1] Hiện có 680 lồi Đơng trùng hạ thảo tìm thấy; đó, Cordyceps militaris ni trồng phổ biến có khả sản xuất cordycepin cao, thời gian sinh trưởng ngắn khả thích nghi với nhiều loại kí chủ [2, 3] Những nghiên cứu y học đại cho thấy Đơng trùng hạ thảo có chứa nhiều hợp chất sinh học có giá trị cao cordycepin, adenosine, acid cordyielic, polysaccarit, carotenoid, amino acid thiết yếu, vitamin, nguyên tố đa lượng vi lượng [4, 5, 6] Trong cordycepin adenosine hai hợp chất đáng ý, chúng nghiên cứu ứng dụng lâm sàng Một số công bố cordycepin có tác dụng kháng khuẩn [7], kháng nấm, chống ung thư [8], chống viêm, chống di [9], chữa lành vết bỏng [10] Nghiên cứu Verma cs cịn cho thấy cordycepin có tác dụng ức chế biểu gen virus cúm SARS-CoV-2 [11] Adenosine hợp chất quan trọng, giúp ngăn ngừa loạn nhịp tim, ức chế 25 Nguyễn Thái Thanh Ngân cs giải phóng chất dẫn truyền thần kinh, điều chỉnh hoạt động adenylate cyclase, có vai trị sinh lí quan trọng hệ tim mạch, toàn hệ thống thể nhiều tổ chức khác [12, 13] Hàm lượng cordycepin adenosine phân bố khác nấm, tập trung nhiều thể 0,97 % 0,18 % cao gấp ba lần so với hàm lượng chứa sinh khối (0,36 % 0,06 %) [14] Thời gian nuôi trồng yếu tố quan trọng việc cải thiện hàm lượng cordycepin adenosine thể Theo Calvo cs (2002), hầu hết chất chuyển hóa thứ cấp Cordyceps sản xuất sau nấm kết thúc giai đoạn tăng trưởng ban đầu [15] Jiaojiao cs (2018) nhận thấy cảm ứng ánh sáng giúp gia tăng sinh tổng hợp cordycepin giai đoạn tăng trưởng chậm Cordyceps [16] Nhiều nghiên cứu tối ưu hóa điều kiện nuôi trồng báo cáo [17, 18] Tuy nhiên việc theo dõi hàm lượng dược chất ni cấy Cordyceps militaris cịn hạn chế, tương quan nồng độ cordycepin adenosine theo thời gian chưa khảo sát rõ Do báo cáo này, tiến hành nhân giống nuôi trồng thể Cordyceps militaris nhằm khảo sát yếu tố: hiệu suất sinh học, hàm lượng cordycepin, hàm lượng adenosine theo thời gian ni cấy Từ đó, tìm mối tương quan hàm lượng dược chất đến suất sinh học tương quan hai dược chất với nhau, đồng thời giúp xác định thời gian thu hoạch thích hợp việc thu nhận nấm với sinh khối hoạt tính cao Q trình khảo sát thực sau ngày thứ 40 (giai đoạn nấm bắt đầu tổng hợp mạnh hợp chất thứ cấp) Quả thể nấm thu nhận chiết phương pháp hồi lưu sinh hàn với methanol, sau dịch chiết phân tích hàm lượng cordycepin adenosine phương pháp HPLC VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 2.1 Vật liệu Đối tượng nghiên cứu: Chủng nấm Đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) cung cấp Viện Phát triển Ứng dụng, Trường Đại học Thủ Dầu Một, loại giống lỏng chai 500 mL, bảo quản nhiệt độ 18 - 22 oC Môi trường nuôi cấy bao gồm thành phần: gạo lứt, dung dịch dinh dưỡng (10 g/L glucose, 10 g/L peptone, g/L MgSO4.7H2O, g/L K2HPO4 mg/L NAA với 1.000 mL nước cất, pH 6,0) [19] Thời gian địa điểm nghiên cứu: Nghiên cứu thực từ tháng 5/2020 đến tháng 12/2020 Trung tâm Nghiên cứu Thực nghiệm - Viện Phát triển Ứng dụng, Trường Đại học Thủ Dầu Một Nuôi thể Cordyceps militaris Quả thể Cordyceps militaris ni hộp nhựa trịn dung tích 500 mL với chất hộp 50 g gạo lứt 80 mL dung dịch dinh dưỡng 10 mL giống cấy vào mơi trường, sau tơ ủ khoảng ngày tối 20 ± oC, độ ẩm 80 - 85 % Khi tơ bao phủ toàn bề mặt chất, mầm chuyển sang nuôi ánh sáng trắng, 800 lux, 12 h chiếu sáng, nhiệt độ 20 ± oC độ ẩm 80 - 85 % Đến ngày thứ 18 tơ nấm bắt đầu cảm ứng hình thành mầm Quả thể nuôi đến ngày thứ 40, tiến hành thu thể lần với tần suất thu hoạch ngày/lần (ngày 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70) Mỗi lần thu hộp phơi/nghiệm thức, thí nghiệm lặp lại lần với tổng số phôi sử dụng 150 phôi 26 Khảo sát hiệu suất sinh học hàm lượng cordycepin, adenosine Cordyceps militaris… 2.2 Hiệu suất sinh học (Biological Efficiency - BE) Hiệu suất sinh học (BE) định nghĩa tỉ lệ phần trăm khối lượng khô thể sau thu hoạch so với khối lượng chất khô [16] Quả thể thu hoạch mốc thời gian khảo sát sau làm khơ 45 oC h, tiến hành cân khối lượng thể xác định hiệu suất sinh học 𝐵𝐸 = 𝑘ℎố𝑖 𝑙ượ𝑛𝑔 𝑞𝑢ả 𝑡ℎể 𝑘ℎô × 100 % 𝐾ℎố𝑖 𝑙ượ𝑛𝑔 𝑐ơ 𝑐ℎấ𝑡 𝑘ℎô 2.3 Phương pháp phân tích cordycepin adenosine 2.3.1 Quy trình chiết cordycepin adenosine Cordyceps militaris Quả thể Cordyceps militaris chiết dựa theo Kopalli [20] có điều chỉnh cho phù hợp với điều kiện thí nghiệm Quả thể làm khơ h 45 oC, sau nghiền thành bột Bột (1 g) chiết hồi lưu sinh hàn methanol 70 % (30 mL) h, sau lọc màng 0,45 μm Số lượng mẫu chiết tương ứng với số lượng thể thu nhận (3 mẫu/nghiệm thức) 2.3.2 Xác định hàm lượng cordycepin adenosine Cordyceps militaris HPLC Dịch chiết phân tích máy sắc kí lỏng hiệu cao HPLC Shimadzu (SPD-20A, JAPAN) gồm: buồng cấp dung môi LC-20AT, buồng ổn nhiệt cho cột CTO-10AS, cột sắc kí C18, đầu dò UV-Vis SPD-20A Điều kiện tiến hành đo thiết lập sau: pha động sử dụng phân tích bao gồm metanol nước theo tỉ lệ 20:80 Sự phân tách tiến hành rửa giải đẳng dịng với tốc độ dịng 1,0 mL/phút bước sóng 254 nm thể tích tiêm 10 µL [21] Số lượng mẫu mang xác định hàm lượng tương ứng với số lượng mẫu chiết 2.3.3 Phương pháp phân tích thống kê Các phân tích thực ba lần, kết tính trung bình Các số liệu thu thập phân tích liệu phần mềm Statgraphics XV.I Phân tích ý nghĩa khác biệt phương pháp phân tích phương sai (One-way ANOVA) phân tích tương quan phương pháp phân tích tương quan Pearson KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Sự phát triển nấm Cordyceps militaris Quá trình sinh trưởng phát triển Cordyceps militaris thể qua giai đoạn khác nhau: giai đoạn phát triển tơ nấm, giai đoạn cảm ứng hình thành mầm, giai đoạn phát triển thể giai đoạn già hóa Trong điều kiện thí nghiệm, q trình phát triển nấm theo dõi ghi nhận (Hình 1) Kết cho thấy sau cấy giống lỏng Cordyceps militaris sang môi trường rắn tiến hành ủ tối ngày, tơ lan kín bề mặt chất Khi nuôi cấy điều kiện ánh sáng trắng, sắc tố hình thành làm cho tơ nấm có màu vàng cam (ngày thứ 11), đến ngày thứ 18 nấm bắt đầu cảm ứng hình thành mầm Sau ngày thứ 18 nấm bước vào giai đoạn phát triển mạnh thể Ngày thứ 40 nấm gần hồn thiện hình thái bên ngồi Đến ngày thứ 70 hình thái nấm già hóa, giai đoạn bào tử thải hoàn toàn bên ngồi Q trình phát triển nấm ghi nhận tương tự báo cáo Oh cs (2019) [22] Ngoài ra, theo Jiaojiao cs (2018), sau giai đoạn phát triển thể, nấm kết thúc trình sinh trưởng ban đầu bắt đầu tổng hợp mạnh hợp chất thứ cấp [16] Do thu nhận 27 Nguyễn Thái Thanh Ngân cs thể nấm giai đoạn để khảo sát hàm lượng dược chất cordycepin adenosine Quả thể Cordyceps militaris thu hoạch sau ngày kể từ ngày 40, sấy khô, nghiền thành bột chiết với methanol 70 % (Hình 2) Ngày Ngày 11 Ngày 18 Ngày 25 Ngày 30 Ngày 40 Ngày 50 Ngày 60 Ngày 70 Hình Quá trình phát triển Cordyceps militaris theo thời gian A B C D Hình Kết xử lý tách chiết Cordyceps militaris (A) Quả thể tươi; (B) Quả thể sấy khô; (C) Bột Cordyceps militaris; (D) Dịch chiết Cordyceps militaris 28 Khảo sát hiệu suất sinh học hàm lượng cordycepin, adenosine Cordyceps militaris… 3.2 Hiệu suất sinh học (BE) Hiệu suất sinh học tiêu quan trọng để đánh giá phát triển nấm Kết nghiên cứu cho thấy hiệu suất sinh học Cordyceps militaris trồng ánh sáng trắng đạt cao ngày thứ 45 (24,07 ± 0,46 %); sau đó, giảm dần đến ngày thứ 70 cịn 15,66 ± 0,27 % (Bảng 1) Có thể già hóa tế bào, sụt giảm trọng lượng nấm dẫn đến hiệu suất sinh học giảm khoảng thời gian cuối trình khảo sát Nghiên cứu Jiaojiao cs (2018) cho thấy hiệu suất sinh học Cordyceps militaris dao động từ 13,8 - 17,48 % nấm chịu tác động điều kiện nhiệt độ cường độ ánh sáng khác sau ngày thứ 45 [16] Shrestha cs (2012) cho kết tương tự báo cáo hiệu suất sinh học dao động từ 13,68 - 23,25 % dòng phân lập từ bào tử dòng chúng qua ba hệ [23] Bảng Hiệu suất sinh học Cordyceps militaris theo thời gian Thời gian chiếu sáng (ngày) BE (%) 40 18,29 ± 0,15 45 24,07 ± 0,46 50 23,15 ± 0,24 55 21,06 ± 0,24 60 18,06 ± 0,24 65 16,51 ± 0,13 70 15,66 ± 0,27 3.3 Hàm lượng cordycepin Cordyceps militaris theo thời gian Hàm lượng cordycepin dịch chiết phân tích phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC) Kết phân tích cho thấy hàm lượng cordycepin tăng giai đoạn muộn trình sinh trưởng (Biểu đồ 1) 6000 5000 4000 Hàm lượng cordycepin (μg/g) 3000 2000 1000 40 45 50 55 Thời gian (ngày) 60 65 70 Biểu đồ Hàm lượng cordycepin Cordyceps militaris theo thời gian 29 Nguyễn Thái Thanh Ngân cs Sự tăng mạnh hàm lượng cordycepin thể rõ sau ngày thứ 40 Hàm lượng cordycepin cao thu ngày thứ 65 đạt 5125,28 ± 742,53 μg/g tăng gấp 3,8 lần so với ngày thứ 40 bắt đầu giảm thu nhận ngày thứ 70 Sự tăng mạnh hàm lượng dược chất diễn sau nấm gần kết thúc trình phát triển thể bắt đầu tiến hành trình tổng hợp mạnh hợp chất thứ cấp Báo cáo Junsang Oh cs (2019) cho thấy giai đoạn (10 tuần sau cấy giống) hàm lượng hợp chất thứ cấp, glucose 20 loại acid amin tăng lên đáng kể so với giai đoạn (2 tuần sau cấy giống) [22] Theo báo cáo Raethong cs (2018), lên men lỏng glucose nguồn carbon thuận lợi để sản xuất adenosine tiền đề cho sản xuất cordycepin [24] Do đó, hàm lượng cordycepin tăng đáng kể sau kết thúc q trình sinh trưởng tăng tích tụ glucose giai đoạn này, Cụ thể nghiên cứu cho thấy ngày thứ 65 khoảng thời gian nuôi trồng hợp lý để đạt hiệu cao việc tối ưu hàm lượng cordycepin 3.4 Hàm lượng adenosine Cordyceps militaris theo thời gian Kết phân tích hàm lượng adenosine Cordyceps militaris thể Biểu đồ 1800 1600 1400 Hàm lượng adenosine (μg/g) 1200 1000 800 600 400 40 45 50 55 Thời gian (ngày) 60 65 70 Biểu đồ Hàm lượng adenosine Cordyceps militaris theo thời gian Kết cho thấy hàm lượng adenosine Cordyceps militaris tăng mạnh đạt cao ngày thứ 60 (1668,85 μg/g) tăng 3,79 lần so với ngày thứ 40 Khác với cordycepin hàm lượng adenosine giảm mạnh ngày thứ 65 Trong báo cáo Wen cs., 2014 tối ưu hóa điều kiện nuôi trồng Cordyceps militaris cho thấy kết tương tự, hàm lượng adenosine giai đoạn sinh trưởng ban đầu nhỏ đạt 230 μg/g (ngày thứ 16) sau tăng lên dần giai đoạn sau q trình sinh trưởng [19] Sự tích tụ cao hàm lượng glucose giai đoạn sinh trưởng muộn giúp tăng cường chuyển hóa adenosine tạo tiền chất cho trình tổng hợp cordycepin [22] Trong nghiên cứu thời gian 60 ngày kể từ ngày cấy giống thời gian thích hợp để thu hoạch Cordyceps militaris giúp đạt hàm lượng adenosine tối ưu 30 Khảo sát hiệu suất sinh học hàm lượng cordycepin, adenosine Cordyceps militaris… 3.5 Tương quan hàm lượng cordycepin adenosine hiệu suất sinh học Cordyceps militaris theo thời gian 6000 30 5000 25 4000 20 3000 15 2000 10 1000 Năng suất sinh học (%) Hàm lượng (μg/g) Sự tương quan hàm lượng cordycepin adenosine hiệu suất sinh học theo thời gian khảo sát từ ngày 40 đến ngày thứ 70, thể Biểu đồ 40 45 BE 50 55 60 Thời gian (ngày) Cordycepin 65 70 Adenosine Biểu đồ Tương quan hiệu suất sinh học, hàm lượng cordycepin adenosine theo thời gian Biểu đồ cho thấy hàm lượng cordycepin adenosine thúc đẩy tổng hợp ngày cuối trình khảo sát (70 ngày) Hàm lượng adenosine đạt cao vào ngày thứ 60 (1668,85 ± 263,88 μg/g) hàm lượng cordycepin 2796,75 ± 333,94 μg/g tăng so với ngày 55 (987,70 ± 107,71 μg/g) Ở ngày thứ 65, hàm lượng cordycepin đạt cao 5125,28 ± 742,53 μg/g, ngược lại hàm lượng adenosine giảm so với ngày thứ 60 (707,61 ± 98,70 μg/g) Hiệu suất sinh học đạt cao sau nấm hoàn thiện giai đoạn sinh trưởng ban đầu chiếm 24,07 % (ngày thứ 45) bắt đầu giảm dần đến ngày thứ 70, giai đoạn nấm chủ yếu tăng cường sản xuất hợp chất thứ cấp Qua phân tích tương quan tiêu theo dõi nhận thấy hàm lượng cordycepin adenosine không liên quan trực tiếp với theo thời gian nuôi trồng, q trình sinh tổng hợp cordycepin cịn thơng qua nhiều hợp chất trung gian Tuy nhiên, hàm lượng cordycepin adenosine tăng sinh khối giảm (hệ số tương quan r = - 0,7943 - 0,0302) Các nghiên cứu trước cordycepin adenosine có tác động lẫn nhau, phân tích đường sinh tổng hợp cho thấy adenine adenosine tiền chất q trình sinh tổng hợp cordycepin, chế sinh tổng hợp cordycepin làm sáng tỏ, nghiên cứu chứng minh sinh tổng hợp cordycepin adenosine thông qua phản ứng q trình phosphoryl hóa, dephosphoryl hóa khử phức hợp Cns1/Cns2 [25] Tuy nhiên, việc tạo nhiều hợp chất trung gian chế chuyển hóa phức tạp nên mối tương quan hai hợp chất theo thời gian nuôi cấy nghiên cứu làm rõ KẾT LUẬN Trong nuôi trồng Cordyceps militaris, thời gian thu nhận thể ảnh hưởng đến hiệu suất sinh học, tổng hợp cordycepin adenosine nấm Trong khảo sát này, nhận thấy 31 Nguyễn Thái Thanh Ngân cs hàm lượng cordycepin adenosine tổng hợp mạnh ngày cuối khảo sát (hàm lượng cordycepin đạt cao ngày thứ 65 với 5.125,28 ± 742,53 μg/g; hàm lượng adenosine đạt cao ngày thứ 60 với 1.668,85 μg/g); ngược lại hiệu suất sinh học lại thu cao giai đoạn đầu trình khảo sát (ngày thứ 45) đạt 18,29 ± 0,15 % Trong trình sinh tổng hợp, cordycepin ảnh hưởng nhiều đến sinh khối nấm so với adenosine Qua q trình nghiên cứu, chúng tơi nhận thấy nên thu hoạch nấm ngày thứ 45 mục đích thu sinh khối thu hoạch ngày thứ 65 mục đích thu hàm lượng cordycepin adenosine mốc thời gian tổng hàm lượng cordycepin adenosine đạt cao nhất, hàm lượng adenosine giảm không đáng kể Lời cảm ơn: Chúng gửi lời cảm ơn chân thành đến Viện Phát triển Ứng dụng, Trường Đại học Thủ Dầu Một hỗ trợ mặt kỹ thuật, vật liệu thiết bị cho đề tài TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Kobayasi, Y (1982) Keys to the taxa of the genera Cordyceps and Torrubiella Trans mycol Soc Japan, 23, 329-364 [2] Cleaver, J (2004) On the trail of the yak ancient Cordyceps in the modern world Publisher: alohamedicinals.ca [3] Li, C R., Nam, S H., Geng, D G., Fan, M Z & Li, Z Z (2006) Artificial culture of seventeen Cordyceps spp Mycosystema, 25, 639-645 [4] Dong, J Z., Liu, M R., Lei, C., Zheng, X J (2012) Effects of selenium and light wavelengths on liquid culture of Cordyceps militaris Link Appl Biochem Biotechnol, 166, 2030-2036 [5] Hobbs, C (2002) Medicinal mushrooms: an exploration of tradition, healing, and culture Book Publishing Company [6] Yu, X Y., Zou, Y., Zheng, Q W., Lu, F X., Li, D H., Guo, L Q & Lin, Y F (2021) Physicochemical, functional and structural properties of the major protein fractions extracted from Cordyceps militaris fruit body Food Research International, 142, 110211 [7] Zhou, X., Cai, G., He, Y & Tong, G (2016) Separation of cordycepin from Cordyceps militaris fermentation supernatant using preparative HPLC and evaluation of its antibacterial activity as an NAD+-dependent DNA ligase inhibitor Experimental and therapeutic medicine, 12(3), 1812-1816 https://doi.org/10.3892/etm.2016.3536 [8] Tian, X., Li, Y., Shen, Y., Li, Q., Wang, Q & Feng, L (2015) Apoptosis and inhibition of proliferation of cancer cells induced by cordycepin Oncology Letters, 10(2), 595-599 https://doi.org/10.3892/ol.2015.3273 [9] Tuli, H S., Sharma, A K., Sandhu, S S & Kashyap, D (2013) Cordycepin: a bioactive metabolite with therapeutic potential Life Sciences, 93(23), 863-869 https://doi.org/10.1016/j.lfs.2013.09.030 [10] Nguyen, L T T., Vo, T H., Nguyen, D K., Nguyen, M C (2021) Effects of Cordyceps militaris extract and its mixture with silica nanoparticles on burn wound healing on mouse model Journal of Drug Delivery Science and Technology, 67, 102901 32 Khảo sát hiệu suất sinh học hàm lượng cordycepin, adenosine Cordyceps militaris… [11] Verma, A K., & Aggarwal, R (2021) Repurposing potential of FDA-approved and investigational drugs for COVID-19 targeting SARS-CoV-2 spike and main protease and validation by machine learning algorithm Chemical Biology & Drug Design, 97(4), 836853 https://doi.org/10.1111/cbdd.13812 [12] Borea, P A., Gessi, S., Merighi, S & Varani, K (2016) Adenosine as a multi-signalling guardian angel in human diseases: When, where and how does it exert its protective effects? Trends in pharmacological sciences, 37(6), 419-434 https://doi.org/10.1016/j.tips.2016.02.006 [13] Wilson, R.F., Wyche, K., Christensen, B V., Zimmer, S & Laxson, D D (1990), Effects of adenosine on human coronary arterial circulation Circulation, 82, 1595-1606 [14] Hur H (2008) Chemical ingredients of Cordyceps militaris Mycobiology, 36(4), 233-235 https://doi.org/10.4489/MYCO.2008.36.4.233 [15] Calvo, A M., Wilson, R A., Bok, J W., & Keller, N P (2002) Relationship between secondary metabolism and fungal development Microbiology and molecular biology reviews: MMBR, 66(3), 447-459 https://doi.org/10.1128/MMBR.66.3.447-459.2002 [16] Jiaojiao, Z., Fen, W., Kuanbo, L., Qing, L., Ying, Y & Caihong, D (2018) Heat and light stresses affect metabolite production in the fruit body of the medicinal mushroom Cordyceps militaris Applied Microbiology and Biotechnology, 102(10), 4523-4533 https://doi.org/10.1007/s00253-018-8899-3 [17] Lê, V V., Trần, T H., Nguyễn, T B T., Ngô, X N (2015) Bước đầu nghiên cứu công nghệ nuôi trồng nhộng trùng thảo (Cordyceps militaris L ex Fr.) Việt Nam Khoa học Nông nghiệp Việt Nam, 3, 445-454 [18] Ngân, V T., Dương, Đ Q., Sương, N K., Nguyên, T B., Xuyến, V T & Hiệp, Đ M (2014) Nghiên cứu tối ưu hóa điều kiện nuôi cấy Cordyceps pseudomilitaris DL0015 Kỷ yếu Hội nghị nấm học: Nghiên cứu ứng dụng khu vực phía Nam năm 2014, tr 63 [19] Wen, T C., Li, G R., Kang, J C., Kang, C & Hyde, K D (2014) Optimization of solidstate fermentation for fruiting body growth and cordycepin production by Cordyceps militaris Chiang Mai Journal of Science, 41(4), 858-872 [20] Kopalli, S R., Cha, K M., Lee, S H., Hwang, S Y., Lee, Y J., Koppula, S & Kim, S K (2019) Cordycepin, an Active Constituent of Nutrient Powerhouse and Potential Medicinal Mushroom Cordyceps militaris Linn., Ameliorates Age-Related Testicular Dysfunction in Rats Nutrients, 11(4), 906 https://doi.org/10.3390/nu11040906 [21] Kumar, H & Spandana, M (2013), Simultaneous extraction, determination and analysis of adenosine, cordycepin and other derivatives of Cordyceps sinensis of Nepal by new validated HPLC method Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry, 2(4), 43-45 [22] Oh, J., Yoon, D H., Shrestha, B., Choi, H K & Sung, G H (2019) Metabolomic profiling reveals enrichment of cordycepin in senescence process of Cordyceps militaris fruit bodies Journal of Microbiology (Seoul, Korea), 57(1), 54-63 https://doi.org/10.1007/s12275-019-8486-z 33 Nguyễn Thái Thanh Ngân cs [23] Shrestha, B., Han, S K., Sung, J M & Sung, G H (2012) Fruiting Body Formation of Cordyceps militaris from Multi-Ascospore Isolates and Their Single Ascospore Progeny Strains Mycobiology, 40(2), 100-106 https://doi.org/10.5941/MYCO.2012.40.2.100 [24] Raethong, N., Laoteng, K & Vongsangnak, W (2018) Uncovering global metabolic response to cordycepin production in Cordyceps militaris through transcriptome and genome-scale network-driven analysis Scientific Reports, 8, 9250 [25] Xia, Y., Luo, F., Shang, Y., Chen, P., Lu, Y & Wang, C (2017) Fungal Cordycepin Biosynthesis Is Coupled with the Production of the Safeguard Molecule Pentostatin Cell Chemical Biology, 24(12), 1479-1489.e4 https://doi.org/10.1016/j.chembiol.2017.09.001 ABSTRACT INVESTIGATING BIOLOGICAL EFFICIENCY AND THE CONTENTS OF CORDYCEPIN, ADENOSINE IN Cordyceps militaris DURING THE CULTIVATION Nguyen Thai Thanh Ngan1, Do Thanh Nhan2, Le Anh Duy1, Nguyen Đang Khoa1, Nguyen Thi Lien Thuong1* Institutle of Applied Technology, Thu Dau Mot University Ho Chi Minh City University of Food Industry *Email: thuongntl@tdmu.edu.vn Cordyceps militaris is a medicinal herb containing varied natural compounds; cordycepin and adenosine are two major compounds that have been widely researched with potential application in modern medicine In current production, efforts to improve adenosine, cordycepin contents and yield of mushrooms are of increasing interest However, these factors change during cultivation, so investigating the metabolite contents and biological efficiency during the time of cultivating is necessary for harvesting mushrooms with high yield and biological activity In this study, we investigated the cordycepin and adenosine contents and biological efficiency in Cordyceps militaris fruit bodies grown after 40 days on solid medium and light induction The results showed that the highest biological efficiency was 18,29 ± 0,15 % on the 45 th day, while the contents of cordycepin and adenosine increased significantly on the last days of the survey The highest content of cordycepin was 5,125.28 ± 742.53 μg/g on the 65th day; the highest content of adenosine was 1,668.85 μg/g on the 60th day and then gradually decreased on the 65 th day This result has implications for harvesting highly biological active mushrooms, promoting health benefits of using of mushrooms and determining the right harvest time helps to improve the biological efficiency of mushrooms Keywords: Cordyceps militaris, cordycepin, adenosine, biological efficiency, cultivation process 34 ... Dịch chiết Cordyceps militaris 28 Khảo sát hiệu suất sinh học hàm lượng cordycepin, adenosine Cordyceps militaris? ?? 3.2 Hiệu suất sinh học (BE) Hiệu suất sinh học tiêu quan trọng để đánh giá phát... thời gian thích hợp để thu hoạch Cordyceps militaris giúp đạt hàm lượng adenosine tối ưu 30 Khảo sát hiệu suất sinh học hàm lượng cordycepin, adenosine Cordyceps militaris? ?? 3.5 Tương quan hàm lượng. .. khoảng thời gian nuôi trồng hợp lý để đạt hiệu cao việc tối ưu hàm lượng cordycepin 3.4 Hàm lượng adenosine Cordyceps militaris theo thời gian Kết phân tích hàm lượng adenosine Cordyceps militaris