Thông tin tài liệu
DANH MỤC VIẾT TẮT Am: thuốc kháng sinh Amipicillin DK: Đường kính DMSO: Dimethyl sulfoxide - Hợp chất hữu lưu huỳnh với công thức (CH3)2SO DNA: Acid deoxyribonucleic - Phân tử mang thơng tin di truyền mã hóa cho hoạt động sinh trưởng, phát triển, chuyên hóa chức sinh sản sinh vật nhiều loài virus MHA: Mueller Hinton Agar - Môi trường thạch Mueller Hinton MYP Mannitol Egg Yolk Polymixin NB: Nutrient Agar PDA: Potato Dextrose Agar Môi trường dinh dưỡng PDA rpm: tốc độ vòng/ phút RNA: Acid ribonucleic Te: thuốc kháng sinh Tetracycline TSB: Tryptone Soy Broth - Môi trường dinh dưỡng TSB TT: Thuốc thử i DANH MỤC BẢNG Bảng 1: Hoạt tính dược liệu chất Neem Bảng 1.2: Các thương phẩm thuốc trừ sâu từ Neem lưu hành thị trường Việt Nam .14 Bảng 2.1: Độ phân cực nhiệt độ sôi hệ dung môi khác 47 Bảng 1: Khối lượng cao Neem chiết tách với Hexan phương pháp khác .45 Bảng 3.2: Khối lượng cao Neem chiết tách với Chloroform phương pháp khác .46 Bảng 3.3: Khối lượng cao Neem chiết tách với Ethanol 96o phương pháp khác .47 Bảng 3.4: Khối lượng cao Neem chiết tách với Methanol phương pháp khác .48 Bảng 3.5: Khối lượng cao Neem chiết tách với Ethyl acetat phương pháp khác .49 Bảng 3.6: Khối lượng cao Neem chiết tách với Nước phương pháp khác .49 Bảng 3.7: Khối lượng cao Neem chiết tách với hệ dung môi khác 50 Bảng 3.8: Kết định tính nhóm chất có cao Neem chiết với Hexan 51 Bảng 3.9: Kết định tính nhóm chất có cao Neem chiết với Chloroform .52 Bảng 3.10: Kết định tính nhóm chất có cao Neem chiết với Ethanol 96o 53 Bảng 3.11: Kết định tính nhóm chất có cao Neem chiết với Methanol .54 Bảng 3.12: Kết định tính nhóm chất có cao Neem chiết với Ethyl acetate 55 Bảng 3.13: Kết định tính nhóm chất có cao Neem chiết với Nước 55 Bảng 3.14: Định tính nhóm chất cao Neem chiết với dung môi khác .56 Bảng 3.15: Mật độ quang đường chuẩn axit galic 57 ii Bảng 3.16: Kết hoạt tính chống oxi hóa cao Neem 57 Bảng 3.17: Đuờng kính vịng kháng khuẩn cao Neem với dung môi Hexan (mm) .59 Bảng 3.18: Đuờng kính vịng kháng khuẩn cao Neem với dung môi Chloroform (mm) 61 Bảng 3.19: đuờng kính vịng kháng khuẩn cao Neem với dung môi Ethanol 96o (mm) 63 Bảng 3.20: Đuờng kính vịng kháng khuẩn cao Neem với dung mơi Methanol (mm) .65 Bảng 3.21: Đuờng kính vịng kháng khuẩn cao Neem với dung môi Ethyl acetate (mm) 67 Bảng 3.22: Đường kính vịng kháng khuẩn cao Neem với dung môi Nước (mm) 69 Bảng 3.23: bảng định danh số cấu tử cao chiết n – Hexan từ Neem .71 Bảng 3.24: Bảng định danh số cấu tử cao chiết Ethanol 96o từ Neem 74 Bảng 3.25: Bảng định danh số cấu tử cao chiết Ethanol 96o từ Neem 77 ii DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Bộ phận Neem Hình 1.2: Neem tricyclic diterpene .8 Hình 1.3: Nhóm protomelicin Hình 1.4: Limonoid với vịng nguyên chuỗi bên γ – hydroxybutenolid Hình 1.5: Azadirone .10 Hình 1.6: Gedunin dẫn xuất .10 Hình 1.7: Salannin 10 Hình 1.8: Nimbin 11 Hình 1.9: Azadirachtin A 11 Hình 1.10: Vi khuẩn Staphylococus kính hiển vi 20 Hình 1.11: Vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa kính hiển vi 22 Hình 2.1: Lá Neem tươi 32 Hình 2.2: Lá Neem khơ 37 Hình 2.3: Mơ hình ngâm dầm .37 Hình 2.4: Mơ hình chiết tách phịng thí nghiệm 37 Hình 2.5: Thiết bị quay chân khơng tuần hồn 38 Hình 2.6 Mơ tả vịng kháng khuẩn 43 Hình 3.1: Biểu đồ khối lượng cao Neem chiết tách với Hexan phương pháp khác .45 Hình 3.2: Biểu đồ khối lượng cao Neem chiết tách với Chloroform phương pháp khác 46 Hình 3.3: Biểu đồ khối lượng cao Neem chiết tách với Ethanol 96o phương pháp khác 47 Hình 3.4: Biểu đồ khối lượng cao Neem chiết tách với Methanol phương pháp khác 48 Hình 3.5: Biểu đồ khối lượng cao Neem chiết tách với Ethyl acetat phương pháp khác 49 Hình 3.6: Biểu đồ khối lượng cao Neem chiết tách với Nước phương pháp khác .50 iii Hình 3.7: Định tính nhóm chất có cao Neem chiết với Hexan .52 Hình 3.8: Định tính nhóm chất có cao Neem chiết với Chloroform 53 Hình 3.9: Định tính nhóm chất có cao Neem chiết với Ethanol 96o 53 Hình 3.10: Định tính nhóm chất có cao Neem chiết với Methanol 54 Hình 3.11: Định tính nhóm chất có cao Neem chiết với Ethyl acetate 55 Hình 3.12: Định tính nhóm chất có cao Neem chiết với Nước 56 Hình 3.13: Biểu đồ phương trình đường chuẩn Acid gallic 57 Hình 3.14: Biểu đồ thể hoạt tính chống oxi hóa cao Neem 58 Hình 3.15: Khả kháng S aureus P.aeruginosa cao Neem ngâm với Hexan .60 Hình 3.16: Khả kháng S aureus P.aeruginosa cao Neem chiết với Hexan .60 Hình 3.17: Khả kháng S aureus P.aeruginosa cao Neem ngâm với Chloroform 62 Hình 3.18: Khả kháng S aureus P.aeruginosa cao Neem chiết với Chloroform 62 Hình 3.19: Khả kháng S aureus P.aeruginosa cao Neem ngâm với Ethanol 96o 64 Hình 3.20: Khả kháng S aureus P.aeruginosa cao Neem chiết với Ethanol 96o 64 Hình 3.21: Khả kháng S aureus P.aeruginosa cao Neem ngâm với Methanol 66 Hình 3.22: Khả kháng S aureus P.aeruginosa cao Neem chiết với Methanol 66 Hình 3.23: Khả kháng S aureus P.aeruginosa cao Neem ngâm với Ethyl acetate 68 Hình 3.24: Khả kháng S aureus P.aeruginosa cao Neem chiết với Ethyl acetate 68 Hình 3.25: Khả kháng S aureus P.aeruginosa cao Neem ngâm với Nước Chiết 70 Hình 3.26: Khả kháng S aureus P.aeruginosa cao Neem chiết với Nước .70 iii Hình 3.27: sắc ký đồ GC – MS cao chiết n – Hexan từ Neem 71 Hình 3.28: Sắc ký đồ GC – MS cao chiết Ethanol 96o từ Neem .74 Hình 3.29: Sắc ký đồ LC – MS cao chiết Methanol từ Neem 77 Hình 3.30 Lá cải nhúng thuốc 78 Hình 3.31 Phun trực tiếp 78 iii DANH MỤC SƠ ĐỒ Sơ đồ 2.1: Quy trình chiết cao từ Neem phương pháp ngâm dầm 35 Sơ đồ 2.2: Quy trình chiết cao từ Neem Soxhlet 36 iv Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH Báo cáo đề tài khoa học cơng nghệ cấp trường LỜI MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Nông nghiệp ngành chiếm tỷ trọng lớn kinh tế nước ta Nền sản xuất nông nghiệp nước ta đối đầu với thách thức áp lực từ bên lẫn bên ngồi Nơng nghiệp Việt Nam muốn phát triển bền vững, cần phải có thay đổi tư lẫn hành động Hiện nay, nông nghiệp phát triển theo chiều rộng chính, suất thấp, hiệu Nguyên nhân lạc hậu, thiếu chun mơn hóa q trình canh tác sản xuất dẫn đến sản phẩm chất lượng, làm giảm cạnh tranh thị trường quốc tế Trên thực tế, nông nghiệp nước ta phải đối mặt với nhiều loài sâu, bọ hại trồng nên việc sử dụng thuốc bảo vệ thực vật tránh khỏi Theo thống kê tổ chức lương thực giới (FAO) cho thấy: loại trồng đồng ruộng phải chống đỡ với 100.000 loài sâu hại khác nhau, 10.000 loài nấm, 200 loài vi khuẩn, 600 loài tuyến trùng 600 loài virus gây bệnh Lượng lương thực bị vấn nạn ngày tăng lên Để khắc phục tình trạng trên, người tích cực tìm kiếm biện pháp phòng chống tác nhân gây hại, nhiều biện pháp khác sử dụng, thuốc trừ sâu hóa học sử dụng nhiều Chúng đóng vai trị quan trọng hệ thống canh tác nông nghiệp thời gian dài mang lại hiệu cao với phạm vi sử dụng rộng lớn Có thể nói, khơng biện pháp bảo vệ mùa màng tốt thuốc trừ sâu hóa học mặt qui mô lẫn hiệu Tuy nhiên, biện pháp hóa học ngày bộc lộ khuyết điểm Do dư lượng thải mơi trường ngày lớn nên gây vấn nạn đến môi trường, đầu độc người, gây cân hệ sinh thái Điều nghiêm trọng tình trạng sử dụng q liều lượng, khơng thời gian sử dụng thuốc thời gian thu hoạch tạo nên dư lượng thuốc không cho phép hoa màu nông sản Những thông tin bị ép giá, bị trả lại hàng, không loạt qua khâu kiểm định nghiêm ngặt nhập vào nước tiên tiến quen thuộc mặt báo Đây nguyên nhân gây nhiễm độc cho khoảng 1,5 triệu người năm toàn giới, có 25 nghìn người bị tử vong (WHO-1998) Trước thực trạng này, nhà nông học nghiên cứu đưa phương pháp phòng trừ tiêu diệt loài sâu bọ hại trồng Một Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường hướng nghiên cứu triển vọng kiểm soát sinh học như: nghiên cứu sử dụng nấm, vi khuẩn, ký sinh thiên địch, hợp chất thứ cấp từ thảo mộc,….Những chế phẩm sinh học quan tâm, chúng làm ảnh hưởng đến sinh vật sống khác, dễ phân hủy, không làm độc cho nông phẩm dễ sử dụng Cây Neem (Azadirachta indica A.Juss) lồi thảo mộc có đặc tính kháng sâu bọ sử dụng nghiên cứu nước ta nhiều nước khác Nhằm tìm phương pháp tối ưu hóa việc sử dụng Neem q trình phịng trừ tiêu diệt sâu bọ nên chúng tơi thực đề tài “Nghiên cứu chiết tách cao Neem từ Neem Ấn Độ hệ dung môi khác bước đầu nghiên cứu ứng dụng Dược – Mỹ Phẩm – Thuốc bảo vệ thực vật” Mục đích nghiên cứu - Xây dựng quy trình chiết tách hợp chất hóa học Neem - Xác định tính chất cấu trúc hợp chất hóa học Neem - Thử hoạt tính sinh học có Neem bước đầu nghiên cứu ứng dụng Dược – Mỹ Phẩm – Thuốc bảo vệ thực vật - Xác định hoạt tính kháng khuẩn cao Neem theo phương pháp xác định đường kính vịng vơ khuẩn - Xác định lực chống oxy hóa tổng (Total Antioxydant Capacity) theo mơ hình phospho molybdenum Đối tượng phạm vi nghiên cứu - Nguyên liệu sử dụng để chiết tách cao nghiên cứu Neem Ấn Độ mua Công ty thảo dược An Quốc Thái, phường 11, quận Tân Bình, Thành phố Hồ Chí Minh.Lá Neem trồng tỉnh Ninh Thuận - Phịng thí nghiệm Trườg Đại học Bà Rịa – Vũng Tàu (cơ sở 3), 951 Bình Giã, phường Rạch Dừa, thành phố Vũng Tàu, tỉnh Bà Rịa – Vũng Tàu Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Ý nghĩa khoa học Kết luận án tạo liệu khoa học tương đối toàn diện hàm lượng hợp chất có hoạt tính sinh học cao (định tính, định lượng) hoạt tính sinh học (khả kháng oxi hóa, kháng khuẩn, trừ sâu) Các liệu khoa học nguồn tư liệu hữu ích cho công tác đào tạo, nghiên cứu Neem Việt Nam Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường Ý nghĩa thực tiễn Luận án góp phần nâng cao giá trị Neem nước ta, đồng thời góp phần cải thiện đời sống người nông dân Sản phẩm luận án chiết tách cao Neem tạo sản phẩm thuốc bảo vệ thực vật Cấu trúc báo cáo gồm chương: Chương 1: Tổng quan lý thuyết Chương 2: Thực nghiệm Chương 3: Kết thảo luận Chương 4: Kết luận kiến nghị Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường Hình 3.25: Khả kháng S aureus P.aeruginosa cao Neem ngâm với Nước Chiết Trên chủng S aureus khảo sát nồng độ cho thấy nồng độ 800 mg/ml 400 mg/ml có kết 3.5 mm 3.0 mm Hai nồng độ lại 400 mg/ml 200 mg/ml có kết 2.5 mm Kết cho thấy hoạt tính kháng khuẩn cao Neem chiết với Nước chủng S aureus tương đối ổn định, nhận thấy cao Neem chiết với Nước có khả kháng chủng nồng độ cao Trên chủng vi khuẩn P.aeruginosa khảo sát nồng độ nhận thấy nồng độ nồng độ 800 mg/ml 400 mg/ml kết 2.0 mm Hai nồng độ lại 400 mg/ml 200 mg/ml có kết 1.0 mm Kết cho thấy hoạt tính kháng khuẩn cao Neem chủng P.aeruginosa tương đối ổn định, nhận thấy cao Neem chiết với Nước Ethyl acetate có khả kháng chủng nồng độ cao Hình 3.26: Khả kháng S aureus P.aeruginosa cao Neem chiết với Nước 3.5 Thành phần hóa học có cao chiết Sắc ký ghép khối phổ GC/MS cao cao Neem thể hình 3.21 Kết xác định thành phần hoá học cao Neem bảng 3.23 3.5.1 Xác định thành phần hóa học có cao Neem chiết với n – hexan Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai 70 Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH Báo cáo đề tài khoa học cơng nghệ cấp trường Phân tích định tính hàm lượng tương đối hợp chất mẫu cao Neem chiết với dung môi n – hexan trung tâm phân tích Viện Hàn Lâm Khoa Học Cơng Nghệ Việt Nam, Viện Cơng Nghiệ Hóa Học, số 01 – Mạc Đĩnh Chi – Quận – TP Hồ Chí Minh Điều kiên chạy GC – MS: - Máy sắc kí khí ghép khối phổ (GC-MS) hiệu SCION SQ 456 - GC - Cột: Rxi - 5ms hiệu RESTEK (30 m x 0.25 mm (i.d.), 0.25 µm df) - Khí mang: Heli, tốc độ dịng khơng đổi: mL/phút, nhiệt độ đầu phun: 250 °C, tỷ lệ phân chia: 30 - Khối quang phổ kế: + Tác động điện tử (EI +), lượng ion hóa: 70 eV, Chế độ quét toàn bộ: 50500 amu, tốc độ quét 1s / lần quét, nhiệt độ nguồn ion hóa: 250 °C Hình 3.27: sắc ký đồ GC – MS cao chiết n – Hexan từ Neem Bảng 3.23: bảng định danh số cấu tử cao chiết n – Hexan từ Neem Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai 71 Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường Thời STT gian Định danh lưu Hàm lượng (%) Công thức cấu tạo (phút) Diacetone 4.045 15.531 17.162 Phytol 11.75 17.442 Linolenic acid 20.02 alcohol Palmitic acid 2.601 4.857 Mono – – 20.616 ethylhexyl - 1.883 adipate Carbonic acid, 24.556 25.252 27.235 2-Methyleicosane 22.14 30.769 16.04 eicosyl vinyl ester Dioctyl terephthalate Heptacosane 3.273 1.814 3-Ethyl-310 32.551 hydroxyandrost 3.534 an-17-one Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai 72 Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường 11 33.552 Norgestrel 1.161 12 33.879 Octacosane 2.385 13 34.467 -Sitosterol 2.243 Thành phần không định danh 6.299 Nhận xét: Từ kết bảng 3.23 cho thấy phương pháp GC – MS xác địch 13 cấu tử cao Neem chiết với hexan Các cấu tử điểm peak: 4.045, 15.531, 17.162; 17.442, 27.235, 30.769 có thời gian lưu cách xa có hàm lượng tương đối cao cao Neem, 2-Methyleicosane chiếm hàm lượng cao (22.24%), Linolenic acid (20.02%), Heptacosane (16.04%) Các cấu tử cịn lại có cường độ tương đối thấp nên có hàm lượng khơng đáng kể cao cao Neem Cao Neem chiết với hexan chứa số cấu tử có nhiều tác dụng đời sống như: Heptacosane có tác dụng ức chế tế bào ung thư, ngăn ngừa tích béo lòng động mạch, giảm nguy xơ vữa động mạch Linolenic acid có tác dụng ngăn ngừa phịng chống ung thư, viêm da, tiêu đường Linolenic acid sử dụng việc sản xuất xà phịng, dầu gội 3.5.2 Xác định thành phần hóa học có cao chiết Ethanol 96o Phân tích định tính hàm lượng tương đối hợp chất mẫu cao Neem chiết với dung môi Ethanol 96o Chi cục Kiểm định Hải quan 04 Số 10, đường Ngô Quyền, phường Thọ Quang, quận Sơn Trà, Tp Đà Nẵng Điều kiên chạy GC – MS: - Máy sắc kí khí ghép khối phổ (GC-MS) hiệu SCION SQ 456 - GC - Cột: Rxi - 5ms hiệu RESTEK (30 m x 0.25 mm (i.d.), 0.25 µm df) Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai 73 Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường Khí mang: Heli, tốc độ dịng khơng đổi: ml/phút, nhiệt độ đầu phun: 250 °C, - tỷ lệ phân chia: 30 - Khối quang phổ kế: + Tác động điện tử (EI +), lượng ion hóa: 70 eV, Chế độ quét toàn bộ: 50500 amu, tốc độ quét 1s / lần quét, nhiệt độ nguồn ion hóa: 250 °C Hình 3.28: Sắc ký đồ GC – MS cao chiết Ethanol 96o từ Neem Bảng 3.24: Bảng định danh số cấu tử cao chiết Ethanol 96o từ Neem Thời Hàm STT gian lưu Định danh (phút) lượng Công thức cấu tạo (%) 6.1 [1,1'Bicyclopropyl]2-octanoic acid, 2'-hexyl-, methyl ester (C21H38O) 1.46 11.62 Tetradecane, 2,6,10-trimethyl (C17H36) 0.79 Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai 74 Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH 13.483 13.710 [1,1'Bicyclopropyl]2-octanoic acid, 2'-hexyl-, methyl ester (C21H38O2) Dodecanoic acid (C12H24O2) 14.164 Octadecane, 1chloro (C18H37Cl) 16.143 Oleic Acid (C18H34O2) 10 16.622 17.162 7-Methyl-Ztetradecen-1-ol acetate (C17H32O2) 3,7,11,15Tetramethyl-2hexadecen-1-ol (C20H40O) Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường 0.74 2.6 2.09 0.52 1.2 30.91 17.848 9-Eicosyne (C20H38) 9.72 19.085 Phytol (C20H40O) 1.62 Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai 75 Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH 11 12 13 Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường 19.796 l-(+)-Ascorbic acid 2,6dihexadecanoate (C38H68O8) 7.18 20.336 nHexadecanoic acid (C16H32O2) 35.98 20.735 5,8,11Heptadecatriyno ic acid, methyl ester (C18H24O2) 5.19 Nhận xét: Mẫu cao Neem lắc qua với n – hexan để phù hợp với thiết bị trung tâm phân tích kết có khả chưa có khoảng 50% cao Neem chiết với Ethanol 96o tan n – hexan Từ kết bảng 3.24 cho thấy phương pháp GC – MS xác địch 13 cấu tử cao Neem chiết với Ethanol 96o Các cấu tử có hàm lượng tương đối cao cao Neem n-Hexadecanoic acid chiếm hàm lượng cao (35.95%), 3,7,11,15Tetramethyl-2-hexadecen-1-ol (30.91%) Các cấu tử cịn lại có cường độ tương đối thấp nên có hàm lượng khơng đáng kể cao cao Neem 3.5.3 Xác định thành phần hóa học có cao Neem chiết với Methanol Phân tích định tính hàm lượng tương đối hợp chất mẫu cao Neem chiết với dung mơi Ethanol 96o trung tâm phân tích Viện Hàn Lâm Khoa Học Công Nghệ Việt Nam, Viện Công Nghiệ Hóa Học, số 01 – Mạc Đĩnh Chi – Quận – TP Hồ Chí Minh Điều kiên chạy LC – MS: - Thiết bị: UPLC- DAD (Thermo, Hoa Kỳ), nhiệt độ: 27 oC Cột: Hypersil GOLD Dim (mm) 150 x 2.1 Kích thước hạt: 𝜇 Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai 76 Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường Hình 3.29: Sắc ký đồ LC – MS cao chiết Methanol từ Neem Bảng 3.25: Bảng định danh số cấu tử cao chiết Ethanol 96o từ Neem Thời gian STT lưu Định danh (phút) 9.850 10.527 Hàm lượng (%) Công thức cấu tạo Linolenic acid Palmitic acid Nhận xét: Đây bảng kết chạy LC – MS, chúng tối dự Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai 77 Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH Báo cáo đề tài khoa học cơng nghệ cấp trường đốn nên kết có khả khơng chắn chạy LC – MS hợp chất cao chiết Neem khơng có thư viện phổ 3.6 Kết thử nghiệm sâu Thử nghiệm hiệu diệt sâu cao Neem pha theo cách sau đây: g cao Neem chiết với Methanol + 100 ml nước + ml Tween 80 Do thời gian cịn hạn hẹp khơng đủ đáp ứng cho trình thử nghiệm nên chúng tơi chưa khảo sát tỉ lệ pha lỗng Mỗi đĩa petri chuẩn bị sâu sau tiến hành thử nghiệm thuốc Sau phun trực tiếp lên sâu, sau chúng tơi nhận thấy số sâu chết con, sau số sâu chết Khi nhúng cải vào sau cho sâu vào đĩa sâu có tượng bị khỏi nhúng thuốc không ăn Chúng nhận thấy nguyên nhân tác dụng thuốc làm sâu ngán ăn chết sau thời gian phun thuốc khơng chết Hình 3.30 Lá cải nhúng thuốc Hình 3.31 Phun trực tiếp Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai 78 Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Bằng phương pháp ngâm dầm phương pháp chiết soxhlet sử dụng dung mơi có độ phân cực khác (Hexan, chloroform, ethanol 96o, methanol, ethyl acetat) Ngâm dầm: Tỉ lệ nguyên liệu/dung môi 1:20 (15g Neem 300 ml dung môi) thời gian ngày, ngày, ngày, ngày Chiết soxhlet: Tỉ lệ nguyên liệu/dung môi 1:20 (15g Neem 300 ml dung môi) thời gian giờ, giờ, giờ, 12 Sau so sánh khối lượng cao Neem chiết với hệ dung môi khác phương pháp ngâm dầm phương pháp chiết Soxhlet chúng tơi nhận thấy chiết với Methanol Ethanol 96o lượng cao Neem thu nhiều Định tính số chất hữu cao Neem chiết với dung môi khác nhau: Hầu hết tất cao Neem chiết với dung mơi khác phản ứng dương tính với cacbonhydrat, Steroid – triterpenoid Trong đó, chiết với Ethanol 96o Methanol cho kết có hợp chất như: alkaloid, cacbonhydrat, Steroid – triterpenoid Khi chiết với dung mơi Nước có xuất nhiều nhóm chất nhất: Flavonoid, Saponin, Cacbonhydrat, Triterpenoid Steroid Và chiết với dung môi Hexan co mặt nhóm chất nhất: Cacbonhydrat, Triterpenoid Steroid Khả kháng khuẩn cao Neem chiết với hệ dung môi khác nhau: Kết khảo sát hoạt tính cao Neem chủng vi khuẩn thử nghiệm cho thấy nồng độ cao 800 mg/ml 400 mg/ml đạt đường kính vịng kháng khuẩn cao Và hai nồng độ 200 mg/ml với 100 mg/ml kháng có khơng kháng Trong hệ dung mơi dung mơi Hexan Methanol có khả kháng khuẩn cao Thử nghiệm hiệu diệt sâu cao Neem g cao Neem chiết với Methanol + 100 ml nước + ml Tween 80 Khi nhúng cải vào sau cho sâu vào đĩa sâu có tượng bị khỏi nhúng thuốc khơng ăn Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai 79 Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH 4.2 Báo cáo đề tài khoa học cơng nghệ cấp trường Kiến nghị Q trình nghiên cứu thực quy mơ phịng thí nghiệm với thời gian hạn chế Do đó, xin đưa số kiến nghị sau: - Nên nghiên cứu sử dụng thêm phương pháp khác chiết cao Neem: sử dụng loại enzyme, dùng sóng siêu âm hay vi sóng, để trình chiết đạt hiệu cao - Khảo sát thêm tiềm kháng khuẩn cao Neem - Định danh số hợp chất khác Neem để đánh giá khả dược liệu - Tiếp tục pha thuốc trừ sâu từ cao Neem với nồng độ khác Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai 80 Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng việt [1] “Cây tử đinh hương Ấn đa dụng” Đăng ngày 14/04/2004 lúc 29 phút Truy cập ngày 15 tháng năm 2019 [2] Bộ Nông Nghiệp Phát Triển Nông Thôn, 2005 Danh mục thuốc bảo vệ thực vật phép sử dụng Việt Nam, trang [3] D A Tuấn and et al, 2001 Azdirachtin- Hoạt chất gây ngán ăn mạnh sâu khoang phân lập từ hạt Neem (Azadirachta indica A.Juss) di thực vào Việt Nam Tuyển tập Hội nghị Khoa học Công nghệ hóa hữa tồn quốc lần thứ hai., pp Trang 333- 337 Nhà Xuất Bản Nông Nghiệp, Hà Nội [4] Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Trung, Bùi Xuân Chương Viện Dược liệu, 1000 thuốc động vật làm thuốc Việt Nam Tập 2, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật Hồ Văn Chiến, 2001 Thuốc bảo vệ thực vật kỹ thuật phun thuốc khảo nghiệm đồng Tài liệu Cục bảo vệ thực vật – Trung tâm kiểm định thuốc bảo vệ thực vật phía Nam, trang – 16 [5] Karumitze S A., 1963 Cơ sở hóa học bảo vệ thực vật (Phan Cát dịch) Nhà xuất Khoa học Hà Nội, trang – 66, 197 – 203 [6] L T T Phượng, 2004 Chiết xuất hoạt chất sinh học từ hạt Neem khỏa sát tác động chúng ngài gạo (Corcyra cephalonica St) Luận văn Thạc sĩ Khoa học Nông nghiệp Đại học Nông Lâm, Hồ Chí Minh [7] Lâm Cơng Định, 1985 Xoan chịu hạn (Azadirachta indica A Juss ) – Một loài thích ứng với vùng nóng hạn Thuận Hải Tạp chí Lâm nghiệp, tháng 8/1985 [8] Lâm Cơng Định, 1991 Giới thiệu cấy xoan chịu hạn (Azadirachta indica A.Juss) nhập nội vào vùng cát nóng hạn Phan Thiết- Tuy Phong Sở Nông nghiệp Thuận Hải [9] Lê Thị Thanh Phượng, 2004 Chiết xuất hoạt chất sinh học từ nhân hạt Neem (Azadirachta indica A Juss) khảo sát tác động chúng ngài gạo (Corcyra cephalonica St.) Luận văn thạc sĩ khoa học Nông nghiệp, Đại học Nông lâm Thành phố Hồ Chí Minh, trang – 26, 96 – 98 [10] N T Ý Nhi, 2012 Nghiên cứu thành phần limonoid Neem trồng Ninh Thuận, ĐH Khoa học Tự Nhiên Hồ Chí Minh Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai 81 Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường [11] Nguyễn Trần Oánh, 2002 Công nghệ sản xuất thuốc bảo vệ thực vật Giáo trình cao học – Viện khoa học Nông nghiệp, trang 20 – 54 [12] Nguyễn Xuân Thành, 1997 Nông dược bảo quản sử dụng, Nhà xuất Nông nghiệp Hà Nội, trang 3-17, 13-24, 146-147 [13] Trần Kim Quy cộng sự, 2005 Báo cáo nghiệm thu giai đoạn đề tài: Hồn thiện quy trình trích ly limonoid quy mô pilot từ Neem điều chế phụ gia thích hợp để làm nguyên liệu pha chế thuốc trừ sâu bảo vệ thực vật, 75 trang [14] Trần Quang Hùng, 1999 Thuốc bảo vệ thực vật Nhà xuất nông nghiệp Hà Nội, trang 7-13, 56-62, 114-117 [15] V Đ K Vũ Văn Độ, Nguyễn Tiến Thắng, "Đánh giá độ độc chế phẩm phối trộn dầu Neem với Bt (Baccillus thuringiensis) sâu xanh (Heliothis armigara), sâu tơ (Plutella xylostella)," Viện Sinh học Nhiệt Đới- Trung tâm Khoa Học Tự Nhiên Công Nghệ Quốc Gia 2005 [16] V Đ Khánh, 2004 Khảo sát hoạt tính kháng số lồi nấm gây bệnh nấm Aspergiluss flavus sinh độc tố aflatoxins sản phẩm chiết xuất từ Neem trồng Việt Nam Luận văn Thạc sĩ Đại học Khoa Học Tự Nhiên Hồ Chí Minh [17] V N Phượng, P Đ Trí, T X Du, and N V Uyển, 1999- 2000 Nhân giống in vitro xoan Ấn Độ (Azadirachta indica A.Juss), Tuyển tập cơng trình nghiên cứu khoa học cơng nghệ, Viện Sinh học Nhiệt đới, 2001 Nhà xuất Nông nghiệp [18] V V Đ Nguyễn Tiến Thắng, Đỗ Thị Tuyến, Lê Thị Thanh Phượng, Vũ Đăng Khánh, 2003 Xây dựng qui trình chiết xuất hoạt chất sinh học từ hạt Neem trồng Việt Nam khảo sát ảnh hưởng dịch chiết lên phát triển nấm gây bệnh thực vật (Fusarium oxysporum, Alternaria sp.) Ngài Gạo (Corcyra cephalonica st.) Báo cáo đề tài cấp sở- Viện Sinh học Nhiệt đới Tài liệu Tiếng anh [19] A V B Sankaram et al., "Pesticidal dry powder formulation enriched in azadirachtin up to 88% an emulsifiable concentrate enriched up to 30% of azadirachtin and a process for preparing such formulation and concentrate from Neem seed/kernel," ed: Google Patents, 1999 [20] B Hicks, "Developments in the world of Neem," Pesticide Outlook, vol 14, no 3, pp 102-103, 2003 Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai 82 Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường [21] Baptista, J., Lima, E., Paiva, L., Castro, A.R (2014), Value of off-season fresh camellia sinensis leaves Antiradical activity, total phenolics content and catechin profiles, Food science and technology, 59, pp 1152-1158 [22] D Mongkholkhajornsilp, S Douglas, P L Douglas, A Elkamel, W Teppaitoon, and S Pongamphai, "Supercritical CO extraction of nimbin from Neem seeds – a modelling study," Journal of Food Engineering, vol 71, no 4, pp 331-340, 2005 [23] E Melwita and Y.-H Ju, "Separation of azadirachtin and other limonoids from crude Neem oil via solvent precipitation," Separation and Purification Technology, vol 74, no 2, pp 219-224, 2010 [24] G Jadeja, R Maheshwari, and S Naik, "Extraction of natural insecticide azadirachtin from Neem (Azadirachta indica A Juss) seed kernels using pressurized hot solvent," The Journal of Supercritical Fluids, vol 56, no 3, pp 253-258, 2011 [25] Gupta B N and Sharma K K., 1998 Neem – A Wonder Tree Indian council of forestry research and education, Dehra Dun, India http://www.nysipm.cornell.edu/publication/eiq/files/EIQ_values04.pdf [26] I Ara, B S Siddiqui, S Faizi, and S Siddiqui, "Tricyclic diterpenoids from the stem bark of Azadirachta indica," Journal of Natural Products, vol 51, no 6, pp 10541061, 1988 [27] J D Stark and J F Walter, "Neem oil and Neem oil components affect the efficacy of commercial Neem insecticides," Journal of Agricultural and Food Chemistry, vol 43, no 2, pp 507-512, 1995 [28] Kelkar C M., 1996 Chap.28, Commercialization, Neem Society of Pesticide Science, India (ED by N S Randhawa and B S Parmar) New age international limited publish, pages 319 – 323 [29] Kenneth and J Lissant, 1974 Emulsions and emulsions technology Marcel Dekker Inc, New York, USA, pages 71 – 111 [30] Kovach J., Petzoldt C., Pegni J., Tette J., 2005 Method for measure the environment impact of pesticides [31] Lindner Paul L., 1974 Chap 4, Agricultural Emulsions In Emulsions and Emulsions technology ED by Kenneth and J Lissant, Marcel Dekker Inc, New York, USA, pages 191 – 209 Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai 83 Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật – Kinh Tế Biển, Ngành CNKTHH Báo cáo đề tài khoa học công nghệ cấp trường [32] N R Council, Neem: a tree for solving global problems The Minerva Group, Inc., 2002 [33] P M Murali, "Process of preparing purified azadirachtin in powder form from Neem seeds and storage stable aqueous composition containing azadirachtin," ed: Google Patents, 2001 [34] P Murali, "Process for preparing purified Azadirachtin in powder form from Neem seeds and storage stable aqueous composition containing Azadirachtin," ed: Google Patents, 1998 [35] Puri H S., 1999 Neem A Divine Tree Azadirachta indica Harwood Academic Publishers, England [36] R O Larson, "Stable anti-pest Neem seed extract," ed: Google Patents, 1985 [37] S Pankaj, T Lokeshwar, B Mukesh, and B Vishnu, "Review on Neem (Azadirachta indica): thousand problems one solution," Int Res J Pharm, vol 2, no 12, pp 97-102, 2011 [38] S R Damarla, S Sridhar, and M C Gopinathan, "Compositions containing Neem seed extracts and saccharide," ed: Google Patents, 2002 [39] Saxena R C., 1995 Homoteria: leaf and planthoppers, aphids, psyllids, whiteflies and scale insect In The Neem tree Azadirachta indica A Juss and Other Meliaceous Plants, (ED by H Schmutterer) VCH Publishers Inc, New York, USA, pages 269 – 281 [40] V Vijayan, S Aafreen, S Sakthivel, and K R Reddy, "Formulation and characterization of solid lipid nanoparticles loaded Neem oil for topical treatment of acne," Journal of Acute Disease, vol 2, no 4, pp 282-286, 2013 [41] Vankenburg W V., 1973 Pesticide Formulations, Marcel Dekker Inc, New York, USA, pages 65 – 110 [42] Völlinger M., 1986 The possible development of resistance against Neem seed kernel extract and deltamethrin in Plutella xylostella In Natural pesticides from the Neem tree Azadirachta indica A Juss and other tropical plants Proc.3rd inter Neem conf., Nairobi, Kenya, pages 543 – 554 [43] Z Lidert, C G Overberger, and J S Clovis, "Preparation of high purity Neem seed extracts," ed: Google Patents, 1995 Chủ nhiệm: Phạm Thị Kim Hai 84 Hướng dẫn khoa học: ThS Tống Thị Minh Thu ... sử dụng Neem q trình phịng trừ tiêu diệt sâu bọ nên thực đề tài ? ?Nghiên cứu chiết tách cao Neem từ Neem Ấn Độ hệ dung môi khác bước đầu nghiên cứu ứng dụng Dược – Mỹ Phẩm – Thuốc bảo vệ thực vật? ??... chiết nhân hạt Neem lên Trialeurodes vaporamorum thấy số lượng trứng giảm phần tư.[13; 39] 1.4 Cơ sở hóa học thuốc bảo vệ thực vật công nghệ sản xuất thuốc bảo vệ thực vật Thuốc bảo vệ thực vật. .. đặt đề tài, đề tài nghiên cứu dựa báo nghiên cứu khoa học khác, nội dung nghiên cứu sau: - Tiến hành quan sát, thu nhập thông tin, liệu liên quan đến cách mơ tả hình thái Dựa tài liệu đó, bước đầu
Ngày đăng: 09/02/2023, 16:03
Xem thêm:
