(Luận án tiến sĩ) sử dụng amin bậc 4 (quaternary ammonium) để xác định hàm lượng fucoidan trong polysaccharide tách chiết từ rong nâu

i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu thân hướng dẫn TS.Nguyễn Duy Nhứt có tham khảo thêm tài liệu đáng tin cậy, có nguồn gốc rõ ràng Các số liệu, kết luận văn hoàn tồn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm nội dung luận văn Tác giả luận văn Võ Thị Như Trim luan an ii LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn tốt nghiệp này, trước tiên Tôi xin gửi lời cảm ơn tới lãnh đạo viện, nhà khoa học, anh chị em bạn bè công tác Viện nghiên cứu ứng dụng Công nghệ Nha Trang - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, tạo điều kiện tốt để làm thực nghiệm ln động viên giúp đỡ để tơi hồn thành đề tài luận văn Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới thầy TS.Nguyễn Duy Nhứt – người thầy tâm huyết hướng dẫn khoa học, gợi mở cho ý tưởng nghiên cứu, tận lực giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi hỗ trợ hầu hết kinh phí để thực luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn anh chị, bạn làm công tác nghiên cứu Viện nghiên cứu Ứng dụng cơng nghệ Nha Trang giúp đỡ tơi nhiệt tình suốt trình làm luận văn Viện Đặc biệt xin ghi nhớ tình cảm, giúp đỡ anh, chị công tác Trung tâm Ứng dụng công nghệ - Viện nghiên cứu ứng dụng Công nghệ Nha Trang tạo điều kiện chia sẽ, giúp đở tơi suốt q trình thực luận văn Cuối tơi xin bày tỏ lịng biết ơn gia đình, người thân bạn bè tơi, quan tâm sâu sắc, chia sẻ khó khăn động viên để tơi hồn thành luận văn Tác giả luận văn Võ Thị Như Trim luan an MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC DANH MỤC HÌNH DANH MỤC BẢNG DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 11 1.1 GIỚI THIỆU CHUNG VỀ RONG BIỂN 11 1.1.1 Phân loại rong biển 11 1.1.2 Ứng dụng rong biển 13 1.2 PHÂN BỐ RONG NÂU TẠI VIỆT NAM 14 1.3 THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA RONG NÂU 15 1.4 GIỚI THIỆU VỀ FUCOIDAN 19 1.4.1 Lịch sử phát cấu trúc fucoidan 19 1.4.2 Hoạt tính fucoidan 23 1.4.2.1 Một số sản phẩm fucoidan giới công dụng ghi bao bì 23 1.4.2.2 Các nghiên cứu hoạt tính sinh học fucoidan 23 1.5 MỘT VÀI PHƯƠNG PHÁP TÁCH CHIẾT FUCOIDAN 30 1.5.1 Phương pháp chiết theo Black 30 1.5.2 Phương pháp chiết Wan Aida Wan cộng 31 1.5.3 Một số phương pháp chiết sử dụng nghiên cứu cấu trúc fucoidan 32 1.5.4 Phương pháp chiết Soyoung Yang cộng (2011) 34 1.5.5 Phương pháp tinh chế fucoidan: 34 luan an 1.6 MỘT VÀI PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG FUCOIDAN 36 1.6.1 Xác định hàm lượng fucoidan rong nâu phương pháp phân tích khối lượng 36 1.6.2 Phương pháp xác địnhhàm lượng fucoidan thông qua hàm lượng fucose 38 1.6.2.1 Phương pháp Usov cộng 38 1.6.2.2 Phương pháp Bùi Minh Lý cộng 38 1.6.2.3 Phương pháp định lượng fucoidan phương pháp huỳnh quang U Warttinger 41 1.6.2.4 Phương pháp sử dụng điện cực màng polyion độ nhạy cao Ji Min Kim cộng 42 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 44 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 44 2.1.1 Rong nâu 44 2.1.2 Hexadecyltrimethylammonium bromide 46 2.1.3 Các hóa chất sử dụng 46 2.1.4 Máy móc thiết bị 47 2.1.5 Phần mềm xử lý liệu 47 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 47 2.2.1 Dịch chiết polysaccharide rong nâu 47 2.2.2 Phương pháp phân tích khối lượng .48 2.2.3 Ký hiệu mẫu sản phẩm trung gian phương pháp kiểm 49 2.2.4 Xác định hàm lượng fucoidan dựa vào xác định hàm lượng fucose .50 2.2.4.1 Xây dựng đường chuẩn methylpentose 50 2.2.4.2 Xác định hàm lượng fucose số loài rong nâu phổ biến khánh hòa phương pháp so màu 52 luan an 2.2.4.3 Xác định hàm lượng fucose số loài rong nâu phổ biến khánh hịa phương pháp sắc kí khí (GC) 54 2.2.5 Phương pháp chuẩn độ kết tủa 55 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 59 3.1 ĐỊNH LƯỢNG FUCOIDAN TRONG LOÀI RONG NÂU THU THẬP TRÊN ĐỊA BÀN TỈNH KHÁNH HỊA DỰA VÀO PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH KHỐI LƯỢNG 59 3.2 HÀM LƯỢNG FUCOIDAN TRONG LOÀI RONG NÂU Ở KHÁNH HÒA DỰA VÀO PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG FUCOSE 63 3.2.1 Xác định hàm lượng fucoidan dựa vào hàm lượng fucose rong, fucoidan tinh chế dịch chiết số loài rong nâu phổ biến khánh hòa phương pháp so màu dische z And shettles l.b.,j.biol .63 3.2.2 Xác định hàm lượng fucoidan dựa vào hàm lượng fucose rong, fucoidan tinh chế dịch chiết số loài rong nâu phổ biến khánh hịa phương pháp sắc kí khí (GC) 67 3.3 XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG FUCOIDAN TRONG DỊCH CHIẾT RONG BẰNG QUATERNARY AMMONIUM DẠNG LỎNG 70 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 75 TÀI LIỆU THAM KHẢO 76 PHỤ LỤC 83 luan an DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hình thái rong Lục 12 Hình 1.2 Hình thái rong Nâu 12 Hình 1.3 Hình thái rong Đỏ 12 Hình 1.4 Phân tử alginic axít (G: guluronic axít, M: mannuronic axít) 17 Hình 1.5 Cấu trúc laminaran 18 Hình 1.6 Cấu trúc fucoidan từ Fucus vesiculosus mô tả vào năm 1950 20 Hình 1.7 Cấu trúc fucoidan từ Ascophyllum nodosum 21 Hình 1.8 Cấu trúc fucoidan từ Fucus evanescens 21 Hình 1.9 Cấu trúc fucoidan từ Fucus distichus 22 Hình 1.10 Cấu trúc fucoidan từ Fucus serratus 22 Hình 1.11 Sơ đồ chiết fucoidan Nora M.A Ponce (2003) 32 Hình 1.12 Sơ đồ chiết tinh chế thành phần polysaccharide rong nâu 35 Hình 1.13 Phản ứng alginate kết tủa với Ca2+ 36 Hình 1.14 Fucoidan phản ứng với cetavlon 37 Hình 1.15 Phản ứng fucoidan giải hấp khỏi cetavlon 37 Hình 1.16 Sơ đồ phản ứng tạo màu L-fucose L-cystein 40 Hình 1.17 Sơ đồ phản ứng xác định thành phần gốc đường fucoidan .41 Hình 2.1 Mẫu rong Sargassum oligocystum Sargassum swatzii 44 Hình 2.2 Mẫu rong Sargassum mcclurei Sargassum duplicatum 45 Hình 2.3 Mẫu rong Turbinaria ornate Hormophys articulata 45 Hình 2.4 Sơ đồ qui trình chiết tối ưu theo Soyoung Jang cộng (2011) 48 Hình 2.5 Sơ đồ tinh chế fucoian từ dịch chiết rong (dd Mi) 49 luan an Hình 2.6 Sơ đồ xác định hàm lượng fucoidan dựa vào hàm lượng fucose phương pháp so màu Dische Z and Shettles L.B.,J.Biol 53 Hình 2.7 Sơ đồ phân tích xác định alditol acetat 55 Hình 3.1 Biểu đồ so sánh hàm lượng fucoian loài rong xác định phương pháp phân tích khối lượng 61 Hình 3.2 Đường chuẩn methylpentose 63 Hình 3.3 Sắc ký đồ GC glucose acetyl hố trực tiếp 67 Hình 3.4 Sắc ký đồ GC mẫu đường chuẩn 68 luan an DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần hoá học (trên 100g rong) số lồi rong ngành 15 Bảng 1.2 Thành phần sản phẩm chiết thô 33 Bảng 1.3 Tác dụng nồng độ etanol lên dịch chiết rong 34 Bảng 3.1 Kết hàm lượng fucoidan tính theo khối lượng fucoidan thu phương pháp chiết khối lượng rong khô 59 Bảng 3.2 Kết phân tích liệu so sánh khác biệt hàm lượng fucoidan rong loài rong bảng 3.1 (sử dụng phần mềm GrapthPad) 60 Bảng 3.3 Hàm lượng Fucoidan xác định dựa vào hàm lượng fucose (tính theo phương pháp so màu) mẫu rong tính từ rong thu thập vùng biển Khánh Hịa 64 Bảng 3.4 Hàm lượng Fucoidan xác định dựa vào hàm lượng fucose (tính theo phương pháp so màu) rong tính từ dịch chiết rong lồi rong thu thập vùng biển Khánh Hịa 65 Bảng 3.5 Kết phân tích liệu so sánh khác biệt hàm lượng fucoidan rong tính từ rong fucoidan rong tính từ dịch chiết rong loài rong thu bảng 3.3 bảng 3.4 (sử dụng phần mềm GrapthPad) 66 Bảng 3.6 Hàm lượng fucoidan dịch chiết rong từ loài rong xác định dựa vào phương pháp sắc kí khí GC 69 Bảng 3.7 Hàm lượng fucoidan tính khối lượng rong khô đem chiết xác định phương pháp chuẩn độ kết tủa 70 Bảng 3.8 Kết hàm lượng fucoidan tính theo khối lượng rong đem chiết định lượng nhiều phương pháp khác 71 luan an Bảng 3.9 Các kết phân tích liệu sử dụng phần mềm GrapthPad để so sánh kết hàm lượng fucoidan dịch chiết định lượng phương pháp phân tích khối lượng (phương pháp chiết-tinh chế) phương pháp xác định hàm lượng fucoidan dựa vào hàm lượng fucose loài rong 72 Bảng 3.10 Các kết phân tích liệu sử dụng phần mềm GrapthPad để so sánh kết hàm lượng fucoidan dịch chiết định lượng phương pháp phân tích khối lượng (phương pháp chiết-tinh chế) phương pháp chuẩn độ kết tủa với cetavlon loài rong 72 luan an DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT AIDS : Acquired immune deficiency syndrome Da : Dalton FDA : Food and Drug Administration fuc : L-fucose gal : D-galactose GC : Gas chromatography HIV : Human immunodeficiency virus HPLC : High Performance Liquid Chromatography Cetavlon : Hexadecyltrimethylammonium bromide MWCO : Moleculare weight cut off PLC : Performance Liquid Chromatography S : Sargassum TFA : Trifluoroacetic UV-VIS : Utralviolet- Visible WHO : World Health Organization DT : Diện tích HGF : Hepatocyte growth factor Ac2O : Acetic anhydrit luan an 84 S swatzii(M3,1) 0,101 0,009 0,092 100,1 0,411 0,206 0,205 S swatzii(M3,2) 0,101 0,009 0,092 100,1 0,411 0,206 0,205 S swatzii(M3,3) 0,102 0,009 0,093 100,1 0,415 0,208 0,207 S.mcclurei (M1,1) 0,216 0,008 0,208 99,9 0,907 0,454 0,454 S.mcclurei(M1,2) 0,216 0,008 0,208 99,9 0,907 0,454 0,454 S mcclurei(M1,3) 0,217 0,008 0,209 99,9 0,9116 0,456 0,456 S.mcclurei(M2,1) 0,221 0,01 0,211 100,1 0,92 0,460 0,460 S.mcclurei(M2,2) 0,221 0,01 0,211 100,1 0,924 0,462 0,462 S.mcclurei(M2,3) 0,222 0,01 0,212 100,1 0,92 0,460 0,460 S.mcclurei(M3,1) 0,219 0,01 0,209 100,2 0,911 0,456 0,455 S.mcclurei(M3,2) 0,22 0,01 0,21 100,2 0,915 0,458 0,457 S.mcclurei(M3,3) 0,22 0,01 0,21 100,2 0,915 0,458 0,457 S.duplicatum (M1,1) 0,261 0,011 0,25 100,2 1,087 0,544 0,542 S.duplicatum (M1,2) 0,262 0,011 0,251 100,2 1,091 0,546 0,544 S duplicatum(M1,3) 0,261 0,011 0,25 100,2 1,087 0,544 0,542 S.duplicatum(M2,1) 0,266 0,011 0,255 100,1 1,108 0,554 0,553 S.duplicatum(M2,2) 0,266 0,011 0,255 100,1 1,108 0,554 0,553 S.duplicatum(M2,3) 0,267 0,011 0,256 100,1 1,112 0,556 0,555 10 11 luan an 85 S.duplicatum(M3,1) 0,261 0,01 0,251 100,2 1,104 0,552 0,551 S.duplicatum(M3,2) 0,261 0,01 0,251 100,2 1,108 0,554 0,553 S.duplicatum(M3,3) 0,261 0,01 0,251 100,2 1,108 0,554 0,553 Turbinaria ornata (M1,1) 0,322 0,008 0,314 99,9 1,36 0,680 0,681 Turbinaria ornate (M1,2) 0,322 0,008 0,314 99,9 1,36 0,680 0,681 Turbinaria ornata (M1,3) 0,323 0,008 0,315 99,9 1,365 0,683 0,683 Turbinaria ornata (M2,1) 0,326 0,009 0,317 100,1 1,373 0,687 0,686 Turbinaria ornata (M2,2) 0,325 0,009 0,316 100,1 1,369 0,685 0,684 Turbinaria ornata (M2,3) 0,325 0,009 0,316 100,1 1,369 0,685 0,684 Turbinaria ornata (M3,1) 0,323 0,009 0,314 100,1 1,36 0,680 0,679 Turbinaria ornata (M3,2) 0,324 0,009 0,315 100,1 1,365 0,683 0,682 Turbinaria ornata (M3,3) 0,323 0,009 0,314 100,1 1,36 0,680 0,679 0,145 0,01 0,135 100,3 0,595 0,298 0,297 0,145 0,01 0,135 100,3 0,595 0,298 0,297 0,144 0,01 0,134 100,3 0,591 0,296 0,295 12 13 14 15 Hormophys articulata (M1,1) Hormophys articulata 16 (M1,2) Hormophys articulata (M1,3) luan an 86 Hormophys articulata (M2,1) 0,144 0,009 0,135 100 0,595 0,298 0,298 0,143 0,009 0,134 100 0,59 0,295 0,295 Hormophys articulata (M2,3) 0,144 0,009 0,135 100 0,595 0,298 0,298 Hormophys articulata 18 (M3,1) 0,142 0,009 0,133 100,2 0,586 0,293 0,292 Hormophys articulata (M3,2) 0,143 0,009 0,134 100,2 0,59 0,295 0,294 0,142 0,009 0,133 100,2 0,586 0,293 0,292 Hormophys articulata 17 (M2,2) Hormophys articulata (M3,3) luan an 87 Phụ lục 2: KẾT QUẢ HÀM LƯỢNG FUCOSE TRONG FUCOIDAN TINH CHẾ THU ĐƯỢC (FucFMi) Khối lượng khối STT tên mẫu OD396 OD427 OD396OD427 lượng fucoian nồng độ fucose(mg%) fucose (mg) HL% S.oligocystum(M1,1) 0,379 0,011 0,368 100,300 1,591 15,910 15,862 S.oligocystum(M1,2) 0,378 0,011 0,367 100,300 1,587 15,870 15,823 S.oligocystum(M1,3) 0,380 0,011 0,369 100,300 1,596 15,960 15,912 S.oligocystum(M2,1) 0,370 0,010 0,360 100,200 1,557 15,570 15,539 S.oligocystum(M2,2) 0,368 0,010 0,358 100,200 1,549 15,490 15,459 S.oligocystum(M2,3) 0,369 0,010 0,359 100,200 1,553 15,530 15,499 S.oligocystum(M3,1) 0,380 0,011 0,369 100,100 1,557 15,570 15,554 S.oligocystum(M3,2) 0,380 0,011 0,369 100,100 1,566 15,660 15,644 S.oligocystum(M3,3) 0,380 0,011 0,369 100,100 1,561 15,610 15,594 S Swatzii(m1.1) 0,356 0,011 0,345 100,100 1,493 14,930 14,915 S Swatzii(M1,2) 0,357 0,011 0,346 100,100 1,497 14,970 14,955 S Swatzii(M1,3) 0,358 0,011 0,347 100,100 1,500 15,000 14,985 S Swatzii(M2,1) 0,353 0,010 0,343 100,200 1,484 14,840 14,810 S Swatzii(M2,2) 0,355 0,010 0,345 100,200 1,493 14,930 14,900 S Swatzii(M2,3) 0,354 0,010 0,344 100,200 1,489 14,890 14,860 luan an 88 S Swatzii(M3,1) 0,380 0,011 0,369 100,000 1,500 15,000 15,000 S Swatzii(M3,2) 0,380 0,011 0,369 100,000 1,520 15,200 15,200 S Swatzii(M3,3) 0,380 0,011 0,369 100,000 1,510 15,100 15,100 S mcclurei(m1.1) 0,360 0,008 0,352 100,200 1,523 15,230 15,200 S mcclurei(M1,2) 0,361 0,008 0,353 100,200 1,527 15,270 15,240 S mcclureiM1,3) 0,360 0,008 0,352 100,200 1,523 15,230 15,200 S mcclurei(M2,1) 0,368 0,010 0,358 100,200 1,549 15,490 15,459 S mcclurei(M2,2) 0,368 0,010 0,358 100,200 1,549 15,490 15,459 S mcclurei(M2,3) 0,369 0,010 0,359 100,200 1,553 15,530 15,499 S mcclurei (M3,1) 0,364 0,009 0,355 100,100 1,536 15,360 15,345 S mcclurei (M3,2) 0,365 0,009 0,356 100,100 1,540 15,400 15,385 S mcclurei (M3,3) 0,364 0,009 0,355 100,100 1,536 15,360 15,345 S duplicatum (M1.1) 0,383 0,008 0,375 100,100 1,621 16,210 16,194 S.duplicatum(M1,2) 0,384 0,008 0,376 100,100 1,626 16,260 16,244 S duplicatum (M1,3) 0,383 0,008 0,375 100,100 1,621 16,210 16,194 S duplicatum(M2,1) 0,389 0,010 0,379 99,800 1,638 16,380 16,413 S duplicatum(M2,2) 0,388 0,010 0,378 99,800 1,634 16,340 16,373 S duplicatum(M2,3) 0,390 0,010 0,380 99,800 1,643 16,430 16,463 10 11 luan an 89 S duplicatum(M3,1) 0,387 0,009 0,378 100,000 1,634 16,340 16,340 S.duplicatum(M3,2) 0,388 0,009 0,379 100,000 1,638 16,380 16,380 S duplicatum(M3,3) 0,387 0,009 0,378 100,000 1,634 16,340 16,340 Turbinaria ornate (M1.1) 0,393 0,011 0,382 99,900 1,651 16,510 16,527 0,394 0,011 0,383 99,990 1,655 16,550 16,552 (M1,3) 0,394 0,011 0,383 99,990 1,655 16,550 16,552 Turbinaria ornate (M2,1) 0,389 0,010 0,379 99,800 1,638 16,380 16,413 Turbinaria ornate (M2,2) 0,389 0,010 0,379 99,800 1,638 16,380 16,413 0,388 0,010 0,378 99,800 1,634 16,340 16,373 (M3,1) 0,391 0,011 0,380 100,100 1,643 16,430 16,414 Turbinaria ornate (M3,2) 0,392 0,011 0,381 100,100 1,647 16,470 16,454 Turbinaria ornata (M3,3) 0,392 0,011 0,381 100,100 1,647 16,470 16,454 Hormophys articulata (M1.1) 0,400 0,010 0,390 100,100 1,685 16,850 16,833 0,401 0,010 0,391 100,100 1,690 16,900 16,883 12 Turbinaria ornate 13 (M1,2) Turbinaria ornate 14 Turbinaria ornate (M2,3) Turbinaria ornate 15 16 Hormophys articulate (M1,2) luan an 90 Hormophys articulate (M1,3) 0,400 0,010 0,390 100,100 1,685 16,850 16,833 0,401 0,009 0,392 100,200 1,694 16,940 16,906 0,401 0,009 0,392 100,200 1,694 16,940 16,906 0,400 0,009 0,391 100,200 1,690 16,900 16,866 0,398 0,009 0,389 100,100 1,681 16,810 16,793 0,397 0,009 0,388 100,100 1,677 16,770 16,753 0,397 0,009 0,388 100,100 1,677 16,770 16,753 Hormophys articulata 17 (M2,1) Hormophys articulata (M2,2) Hormophys articulata (M2,3) Hormophys articulata 18 (M3,1) Hormophys articulata (M3,2) Hormophys articulata (M3,3) luan an 91 Phụ lục 3: KẾT QUẢ HÀM LƯỢNG FUCOSE TRONG RONG TÍNH TỪ DỊCH CHIẾT RONG (FucddFMi) (TÍNH TRÊN KHỐI LƯỢNG RONG KHÔ ĐEM ĐI CHIẾT) Khối stt OD396- nồng độ lượng rong đem Khối lượng fucose(mg) tên mẫu OD396 OD427 OD427 fucose(mg%) chiết(mg) S.oligocystum(M1,1) 0,364 0,01 0,354 1,53 1000 3,825 0,383 S.oligocystum(M1,2) 0,363 0,01 0,353 1,527 1000 3,818 0,382 S.oligocystum(M1,3) 0,363 0,01 0,353 1,527 1000 3,818 0,382 S.oligocystum(M2,1) 0,36 0,011 0,349 1,51 1000 3,775 0,378 S.oligocystum(M2,2) 0,36 0,011 0,349 1,506 1000 3,765 0,377 S.oligocystum(M2,3) 0,359 0,011 0,348 1,506 1000 3,765 0,377 S.oligocystum(M3,1) 0,367 0,01 0,357 1,544 1000 3,860 0,386 S.oligocystum(M3,2) 0,366 0,01 0,356 1,54 1000 3,850 0,385 S.oligocystum(M3,3) 0,367 0,01 0,357 1,544 1000 3,860 0,386 S swatzii(M1,1) 0,169 0,01 0,159 0,697 1000 1,743 0,174 S swatzii(M1,2) 0,17 0,01 0,16 0,7 1000 1,750 0,175 S swatzii(M1,3) 0,17 0,01 0,16 0,7 1000 1,750 0,175 S swatzii(M2,1) 0,171 0,011 0,16 0,7 1000 1,750 0,175 S swatzii(M2,2) 0,172 0,011 0,161 0,706 1000 1,765 0,177 S swatzii(M2,3) 0,172 0,011 0,161 0,706 1000 1,765 0,177 luan an HL% 92 10 11 S swatzii(M3,1) 0,166 0,01 0,156 0,684 1000 1,710 0,171 S swatzii(M3,2) 0,167 0,01 0,157 0,689 1000 1,723 0,172 S swatzii(M3,3) 0,168 0,01 0,158 0,689 1000 1,723 0,172 S mcclurei(M1,1) 0,364 0,008 0,356 1,54 1000 3,850 0,385 S mcclurei(M1,2) 0,365 0,008 0,357 1,544 1000 3,860 0,386 S.mcclurei(M1,3) 0,364 0,008 0,356 1,54 1000 3,850 0,385 S mcclurei(M2,1) 0,376 0,008 0,368 1,59 1000 3,975 0,398 S mcclurei(M2,2) 0,375 0,008 0,367 1,587 1000 3,968 0,397 S mcclurei (M2,3) 0,375 0,008 0,367 1,587 1000 3,968 0,397 S mcclurei (M3,1) 0,37 0,009 0,361 1,56 1000 3,900 0,390 S mcclurei (M3,2) 0,371 0,009 0,362 1,566 1000 3,915 0,392 S mcclurei (M3,3) 0,371 0,009 0,362 1,566 1000 3,915 0,392 S duplicatum (M1,1) 0,442 0,011 0,431 1,86 1000 4,650 0,465 S duplicatum (M1,2) 0,444 0,011 0,433 1,869 1000 4,673 0,467 S duplicatum (M1,3) 0,442 0,011 0,431 1,86 1000 4,650 0,465 S duplicatum (M 2,1) 0,438 0,011 0,427 1,844 1000 4,610 0,461 S duplicatum (M 2,2) 0,439 0,011 0,428 1,848 1000 4,620 0,462 S duplicatum (M 2,3) 0,439 0,011 0,428 1,848 1000 4,620 0,462 luan an 93 12 S duplicatum (M3,1 0,442 0,009 0,433 1,835 1000 4,588 0,459 S duplicatum (M3,2 0,442 0,009 0,433 1,84 1000 4,600 0,460 S duplicatum (M3,3 0,442 0,009 0,433 1,84 1000 4,600 0,460 Turbinaria ornata (M1,1) 0,485 0,011 0,474 2,054 5,135 0,514 Turbinaria ornata (M1,2) 0,485 0,011 0,474 2,054 5,135 0,514 0,486 0,011 0,475 2,05 5,125 0,513 5,155 0,516 5,155 0,516 5,145 0,515 5,208 0,521 5,208 0,521 5,220 0,522 2,500 0,250 1000 1000 Turbinaria ornata 13 (M1,3) 1000 Turbinaria ornata 14 (M 2,1) 1000 0,488 0,01 0,478 2,062 Turbinaria ornata (M 2,2) 1000 0,488 0,01 0,478 2,062 Turbinaria ornate (M 2,3) 1000 0,487 0,01 0,477 2,058 0,492 0,009 0,483 2,083 (M3,2) 0,492 0,009 0,483 2,083 Turbinaria ornata (M3,3) 0,493 0,009 0,484 2,088 Hormophys articulata (M1,1) 0,241 0,011 0,23 1,00 Turbinaria ornata 15 (M3,1) 1000 Turbinaria ornata 16 1000 1000 1000 luan an 94 Hormophys articulata (M1,2) 1000 0,241 0,011 0,23 1,00 0,243 0,011 0,232 1,01 Hormophys articulata (M1,3) (M 2,1) 0,231 0,008 0,223 0,971 0,253 2,428 0,243 2,418 0,242 2,418 0,242 2,460 0,246 2,460 0,246 2,450 0,245 1000 (M 2,2) 0,23 0,008 0,222 0,967 Hormophys articulata (M 2,3) 0,23 0,008 0,222 0,967 0,234 0,008 0,226 0,984 (M3,2) 0,234 0,008 0,226 0,984 Hormophys articulata (M3,3) 0,233 0,008 0,225 0,98 1000 Hormophys articulata (M3,1) 2,525 1000 Hormophys articulata 18 0,250 1000 Hormophys articulata 17 2,500 1000 Hormophys articulata 1000 1000 luan an 95 Phụ lục 4: Sắc kí đồ GC xác định thành phần đường fucoidan từ loài rong S.oligocystum Sắc kí đồ GC xác định thành phần đường fucoidan từ loài rong S mcclurei luan an 96 Sắc kí đồ GC xác định thành phần đường fucoidan từ lồi rong S.swatzii Sắc kí đồ GC xác định thành phần đường fucoidan từ loài rong S.duplicatum luan an 97 Sắc kí đồ GC xác định thành phần đường fucoidan từ loài rong Turbinaria ornata Sắc kí đồ GC xác định thành phần đường fucoidan từ loài rong Hormophys atriata luan an 98 Phụ lục 5: Các thông số chuẩn Fucose số đáp ứng khối lượng fucose(mg) Diện tích fucose Khối lượng inositol(mg) Diện tích inoxitol Hăng số đáp ứng (K) 0,2 271700 0,2 452720 0,600150203 Phụ lục 6: Hàm lượng fucose dịch chiết loài rong xác định dựa vào phương pháp sắc kí khí GC Khối Khối lượng Hằng số DTDTlượng fucose/0,3ml đáp Hàm lượng Fucose Inositol Inositol dịch chiết ứng(K) fucose(%) STT Tên rong S.oligocystum 72696 102443 0,02 0,023648218 0,60015 0,394 S swatzii 46160 152735 0,02 0,010071576 0,60015 0,168 S mcclurei 155409 545400 0,05 0,023739481 0,60015 0,396 S.duplicatum 203057 610970 0,05 0,027689064 0,60015 0,461 Turbinaria ornata 112409 179516 0,03 0,031301083 0,60015 0,522 0,02 0,016056756 0,60015 0,268 Hormophys articulata 49940 103648 Phụ lục 7: Hàm lượng fucose fucoidan tinh chế từ loài rong xác định dựa vào phương pháp sắc kí khí GC Khối Khối lượng Hằng số Hàm lượng fucose/0,3ml đáp ứng lượng Inositol dung dịch K fucose(%) STT tên rong DT-Fucose DTInositol S.oligocystum 97796 101550 0,02 0,032093076 0,60015 16,047 S swatzii 119060 333635 0,05 0,029730654 0,60015 14,865 S mcclurei 168409 543499 0,06 0,030978329 0,60015 15,489 S.duplicatum 200145 412779 0,04 0,032316724 0,60015 16,158 Turbinaria ornata 111802 181112 0,03 0,030857717 0,60015 15,429 Hormophys articulata 155940 303648 0,04 0,034228454 0,60015 17,114 luan an ... polysaccharide tách chiết từ rong nâu? ?? đề xuất thực nhằm đưa phương pháp đơn giản để xác định hàm lượng fucoidan chiết tách từ rong nâu Mục tiêu đề tài đề xuât phương pháp đơn giản để xác định hàm lượng fucoidan. .. PHÁP XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG FUCOIDAN 1.6.1 Xác định hàm lượng fucoidan rong nâu phương pháp phân tích khối lượng Hàm lượng fucoidan xác định dựa vào công thức sau: (khối lượng fucoidan chiết được) %fucoidantrong... Xác định hàm lượng fucose có dịch chiết, hàm lượng fucoidan rong tính lần hàm lượng fucose rong 1.6.2.2 Phương pháp Bùi Minh Lý cộng [51] Xác định hàm lượng fucose fucoidan tinh chế từ dịch chiết