BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI TRẦN THỊ THU HUYỀN NGHIÊN CỨU TÍNH ĐA HÌNH CỦA MỘT SỐ GEN Ở PHỤ NỮ LOÃNG XƢƠNG SAU MÃN KINH Chuyên ngành Nội – Xương khớp Mã số 9720107 TÓM TẮT L[.]
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI TRẦN THỊ THU HUYỀN NGHIÊN CỨU TÍNH ĐA HÌNH CỦA MỘT SỐ GEN Ở PHỤ NỮ LOÃNG XƢƠNG SAU MÃN KINH Chuyên ngành : Nội – Xương khớp Mã số : 9720107 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HÀ NỘI – 2022 CÔNG TRÌNH NÀY ĐƢỢC TRÌNH BÀY TẠI TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI Hƣớng dẫn khoa học: TS.BS NGUYỄN THỊ THANH HƢƠNG PGS.TS NGUYỄN THỊ NGỌC LAN Phản biện 1: PGS.TS ĐẶNG HỒNG HOA Phản biện 2: PGS.TS TRẦN HUY THỊNH Phản biện 3: PGS.TS NGUYỄN NGỌC CHÂU Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm Luận án cấp trường Trường Đại Học Y Hà Nội Vào hồi ngày tháng năm 2022 Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện quốc gia - Thư viện Trường Đại Học Y Hà Nội DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Trần Thị Thu Huyền, Nguyễn Thị Thanh Hương, Nguyễn Thị Ngọc Lan (2020)” Mối liên quan đa hình kiểu gen MTHFR rs1801133 với mật độ xương phụ nữ sau mãn kinh” Tạp chí Y học Việt nam, tháng 8/2020, trang 271 – 276 Trần Thị Thu Huyền, Nguyễn Thị Thanh Hương, Nguyễn Thị Ngọc Lan (2020)” Mối liên quan đa hình kiểu gen LRP5 rs41494349 với mật độ xương phụ nữ sau mãn kinh” Tạp chí Y học thực hành, tháng 6/2020, trang 69 – 72 ĐẶT VẤN ĐỀ Loãng xương bệnh phổ biến ảnh hưởng đến khoảng 200 triệu người giới đặc trưng giảm mật độ xương, tổn thương vi cấu trúc xương, gia tăng tính dễ gãy xương Năm 2021, phân tích tổng hợp Nader Salari cộng bao gồm 70 nghiên cứu 800.457 phụ nữ tuổi từ 15 đến 105, tỷ lệ loãng xương phụ nữ giới 23,1%, tỷ lệ loãng xương phụ nữ châu Á 24,3% Tỷ lệ loãng xương cao kéo theo chi phí điều trị lỗng xương gãy xương loãng xương tăng gây ảnh hưởng đáng kể kinh tế, xã hội gánh nặng lâm sàng.Tại Việt Nam, theo Nguyễn Thị Thanh Hương (2012), tỉ lệ loãng xương cổ xương đùi cột sống thắt lưng phụ nữ miền Bắc 23,1% 49,5% Loãng xương bệnh lý chịu ảnh hưởng nhiều yếu tố yếu tố gen đóng vai trị quan trọng Nghiên cứu cặp sinh đôi phả hệ cho thấy 50-85% biến đổi mật độ xương gen qui định Đến có 20 nghiên cứu tồn hệ gen cơng bố nghiên cứu tồn hệ gen lớn năm 2019 Morris cộng xác định 518 locus ảnh hưởng đến mật độ xương Trong điều kiện Việt nam chưa thực nghiên cứu tồn hệ gen, chúng tơi chọn đa hình gen ứng viên để nghiên cứu MTHFR rs1801133, LRP5 rs41494349 FTO rs1121980 đa hình gen chứng minh có ảnh hưởng đến mật độ xương thông qua chế sinh lý học Đối với đa hình gen MTHFR rs1801133 có mặt alen T làm giảm hoạt động enzym MTHFR (Methylen Tetrahydrofolat Reductase) dẫn đến tăng nồng độ homocystein máu có nguy làm giảm mật độ xương.Gen LRP5 (LDL Receptor Related Protein 5) liên quan đến đường tín hiệu Wnt/ β-catenin ảnh hưởng đến tế bào tạo xương mật độ xương Gen FTO (Fat mass and Obesity Associated) ảnh hưởng đến trục yếu tố tăng trưởng biệt hóa 11 (growth differentiation factor 11) gamma thụ thể kích hoạt chất tăng sinh peroxisome (Peroxisome proliferatoractivated receptor gamma) liên quan đến biệt hóa dịng tế bào gốc trung mô sang tế bào mỡ ức chế hình thành xương.Trên giới có nhiều nghiên cứu cho thấy mối liên quan đa hình gen với mật độ xương kết lặp lại nhiều chủng tộc giới Ở Việt nam, chưa có nghiên cứu tìm hiểu mối liên quan đa hình gen với mật độ xương phụ nữ sau mãn kinh Vì vậy, chúng tơi tiến hành đề tài: “Nghiên cứu tính đa hình số gen phụ nữ loãng xƣơng sau mãn kinh” với hai mục tiêu: Xác định tính đa hình gen MTHFR rs1801133, LRP5 yrs41494349, FTO rs1121980 phụ nữ loãng xƣơng sau mãn kinh Tìm hiểu mối liên quan tính đa hình gen MTHFR rs1801133, LRP5 rs41494349, FTO rs1121980 với mật độ xƣơng số yếu tố nguy loãng xƣơng phụ nữ sau mãn kinh CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan loãng xƣơng loãng xƣơng phụ nữ sau mãn kinh 1.1.1 Định nghĩa loãng xương Định nghĩa Tổ chức Y tế Thế giới năm 1994: loãng xương bệnh lý xương, đặc trưng giảm khối lượng xương kèm theo hư tổn cấu trúc xương, dẫn đến tăng tính dễ gãy xương, tức có nguy gãy xương Do vậy, cần đo mật độ xương để đánh giá nguy gãy xương Định nghĩa Tổ chức Y tế Thế giới sửa đổi năm 2001, loãng xương đặc trưng thay đổi sức mạnh xương Sức mạnh đặc trưng mật độ xương chất lượng xương Chất lượng xương đánh giá thông số: cấu trúc xương, chu chuyển xương, độ khống hóa, tổn thương tích lũy, tính chất chất xương Trong thông số này, chu chuyển xương đóng vai trị quan trọng 1.1.2 Chẩn đốn lỗng xương Hiện nay, phương pháp tốt để chẩn đốn lỗng xương đo mật độ khống xương phương pháp hấp thụ tia X lượng kép Mật độ xương lượng chất khoáng xương chia cho diện tích vùng khảo sát, tính gram/cm2 Để chẩn đốn lỗng xương, mật độ xương cá nhân so với giá trị mật độ xương trung bình quần thể độ tuổi 20 - 40 (mật độ xương đỉnh) Chỉ số T (Tscore) số độ lệch chuẩn mật độ xương so với mật độ xương đỉnh Một người chẩn đốn lỗng xương số T -2,5 thấp hơn, giảm mật độ xương số T từ -2,5 đến -1,0, mật độ xương bình thường số T -1,0 trở lên Mật độ xương thấp yếu tố nguy quan trọng gãy xương Tổ chức Y tế Thế giới khuyến cáo cổ xương đùi vùng giải phẫu quan trọng để chẩn đốn lỗng xương Tuy nhiên, hướng dẫn Hiệp hội quốc tế đo mật độ xương lâm sàng (ISCD) Hội loãng xương Hoa Kỳ (NOF) khuyến cáo chẩn đốn lỗng xương nên dựa ba vị trí cổ xương đùi, đầu xương đùi, cột sống thắt lưng Phép đo vị trí khác đưa kết khác 1.1.4 Mãn kinh ảnh hưởng mãn kinh đến loãng xương Mãn kinh tình trạng vơ kinh người phụ nữ 12 tháng liên tục Trong giai đoạn mãn kinh nồng độ hormon estrogen testosteron giảm dẫn đến cân q trình tái mơ hình việc kéo dài giai đoạn hủy xương với gia tăng tuổi thọ hủy cốt bào rút ngắn giai đoạn tạo xương cách thúc đẩy trình chết theo chương trình tế bào tạo xương Những thay đổi dẫn đến tế bào tạo xương khơng cịn đủ khả để lấp đầy chỗ trống tế bào hủy xương tạo Hơn nữa, kéo dài tuổi thọ tế bào hủy xương làm tăng chiều sâu hủy xương dẫn đến việc loại bỏ cấu trúc mạng lưới bên xương xốp Đồng thời, thâm nhập sâu hủy cốt bào bề mặt nội cốt dẫn đến hao hụt làm mỏng vỏ xương Quá trình hủy xương tăng 90% sau mãn kinh trình tạo xương khoảng 45% 1.2 Gen lỗng xƣơng - Ngồi yếu tố ảnh hưởng tới lỗng xương biết đến từ lâu như: tuổi, tình trạng hormon, yếu tố lối sống (thói quen ăn uống tập luyện) yếu tố gia đình Gần phát triển công nghệ gen với khả phân tích xác định dạng đa hình kiểu gen có ảnh hưởng tới bệnh lỗng xương gãy xương mở kỉ nguyên nghiên cứu xương nói riêng y học nói chung Các nghiên cứu cặp song sinh trứng cho thấy yếu tố di truyền đóng vai trị quan trọng với bệnh lỗng xương, định 50-85% mật độ xương - Các gen ảnh hưởng đến mật độ xương nghiên cứu giới gen liên quan đến hệ thống tín hiệu RANKL/RANK/OPG, thụ thể LRP5/LRP6 (những thụ thể kiểm soát lipid), đường tín hiệu Wnt (Wnt signalling pathway), gen liên quan tới thụ thể estrogen (ER1, ER2), gen liên quan tới thụ thể vitamin D (VDR), gen liên quan tới mạng lưới collagen (COL1A1, COL1A2) Các nghiên cứu di truyền liên quan đến loãng xương bắt đầu vào khoảng năm 1990 Ban đầu nghiên cứu đơn gen khiếm khuyết gen COL1A1 COL1A2 gây bệnh xương dễ gãy, đột biến gen LRP5 gây hội chứng OPPG (osteoporosis pseudoglioma) - Trong đề tài chọn đa hình gen MTHFR rs1801133, LRP5 rs41494349 FTO rs1121980 giới có nhiều nghiên cứu cho thấy mối liên quan đa hình kiểu gen với mật độ xương kết lặp lại nhiều chủng tộc châu Âu, châu Á, châu Úc Gen MTHFR ảnh hưởng đến hoạt tính enzym MTHFR ảnh hưởng đến q trình chuyển hóa folat gây tăng nồng độ homocystein máu dẫn tới nhiều tình trạng bệnh lý có lỗng xương Chúng tơi thấy có nhiều nghiên cứu cho thấy người mang kiểu gen TT đa hình gen MTHFR rs1801133 có nguy bị giảm mật độ xương nghiên cứu tác giả Bo Abrahamsen phụ nữ sau mãn kinh Đan Mạch, Massimo De martinis phụ nữ sau mãn kinh Italia, Xiumei Hong phụ nữ sau mãn kinh Trung Quốc, Masataka Shiraki phụ nữ sau mãn kinh Nhật Bản Tuy nhiên, nghiên cứu Soewarlan W.D.H.P cộng phụ nữ sau mãn kinh Indonesia, đất nước khu vực Đông Nam Á với Việt nam lại chưa thấy mối liên quan đa hình gen mật độ xương Gen LRP5 liên quan đến đường tín hiệu Wnt/ β-catenin có ảnh hưởng đến tế bào tạo xương quy định khối lượng xương Đa hình gen Q89R (rs41494349) gặp người da trắng lại tương đối hay gặp người châu Á Các nghiên cứu tác giả Tomohiko Urano, Jung-Min Koh, Zhen- lin ZANG người Nhật Bản, Hàn Quốc Trung Quốc cho kết người mang alen R đa hình gen Q89R có mật độ xương thấp người không mang alen R Tuy nhiên, nghiên cứu phụ nữ sau mãn kinh Thái lan lại khơng tìm thấy mối liên quan đa hình gen với mật độ xương Gen FTO chứng minh qua nhiều nghiên cứu có mối liên quan mạnh với bệnh đái tháo đường béo phì nên có khả ảnh hưởng tới bệnh loãng xương Gen FTO ảnh hưởng đến trục GDF11-FTO-PPARγ liên quan đến biệt hóa dịng tế bào gốc trung mô sang tế bào mỡ ức chế hình thành xương Nghiên cứu Bích Trần cộng (2013) người Úc cho kết phụ nữ có kiểu gen đồng hợp tử lặn TT SNP rs1121980 có nguy gãy CXĐ cao 2,06 lần so với nhóm phụ nữ có kiểu gen đồng hợp tử trội CC CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Địa điểm thời gian nghiên cứu * Địa điểm nghiên cứu: Khoa Khám Bệnh Khoa Cơ Xương Khớp, Bệnh viện Bạch Mai * Thời gian nghiên cứu: Nghiên cứu thực từ tháng 05/2015 đến tháng 11/2018 2.2 Đối tƣợng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu phụ nữ sau mãn kinh từ 40 tuổi trở lên đến khám kiểm tra sức khỏe Khoa Khám Bệnh Khoa Cơ Xương Khớp, Bệnh viện Bạch Mai * Tiêu chuẩn lựa chọn: - Lâm sàng: Phụ nữ từ 40 tuổi trở lên có tiền sử khỏe mạnh mãn kinh tự nhiên Mãn kinh tự nhiên định nghĩa kinh liên tục từ 12 tháng trở lên - Các đối tượng tự nguyện đồng ý tham gia nghiên cứu sau nghe giải thích rõ mục đích nghiên cứu - Trí tuệ minh mẫn có khả trả lời câu hỏi câu hỏi vấn - Tất đối tượng nghiên cứu đo mật độ xương Trung tâm Ung bướu Y học hạt nhân – Bệnh viện Bạch Mai thời gian nghiên cứu Dựa vào trị số Tscore đo được, chúng tơi phân nhóm dựa theo tiêu chuẩn chẩn đốn lỗng xương Hiệp hội quốc tế đo mật độ xương lâm sàng (ISCD) Hội Loãng xương Hoa Kỳ (NOF): + Nhóm phụ nữ sau mãn kinh lỗng xương trị số Tscore vị trí cổ xương đùi đầu xương đùi cột sống thắt lưng ≤ -2,5 + Nhóm phụ nữ sau mãn kinh khơng lỗng xương trị số Tscore vị trí (cổ xương đùi, đầu xương đùi, cột sống thắt lưng) > -2,5 * Tiêu chuẩn loại trừ: - Bệnh nhân có tiền sử mắc bệnh mạn tính bệnh gan, thận mạn tính, ung thư, bệnh nội tiết rối loạn liên quan chuyển hóa vitamin D, chuyển hóa xương như đái tháo đường, béo phì, hội chứng hấp thu, bệnh cường giáp, suy giáp, hội chứng Cushing phát qua hỏi tiền sử bệnh, khám lâm sàng xét nghiệm cận lâm sàng - Bệnh nhân sử dụng loại thuốc liên quan đến chuyển hóa canxi vitamin D tháng vừa qua như: corticoid, hormon sinh dục thay thế, heparin, bisphosphonat - Bệnh nhân bị cắt bỏ tử cung,buồng trứng - Bệnh nhân không đồng ý tham gia nghiên cứu 2.3 Thiết kế nghiên cứu cỡ mẫu 2.3.1 Thiết kế nghiên cứu - Thiết kế nghiên cứu: nghiên cứu mô tả cắt ngang 2.3.2 Cơng thức tính cỡ mẫu * Cỡ mẫu mục tiêu 1: Sử dụng công thức ước lượng tỷ lệ quần thể: n Z12 /2 p(1 p) d2 n: cỡ mẫu nhỏ đạt Z: hệ số tin cậy, mức xác suất 95%, Z= 1,96 p: tỉ lệ alen quan tâm (minor alen) quần thể d : sai số cho phép, d= 0,05 Theo sở liệu dbSNP , chúng tơi có tỷ lệ minor alen (p) đa hình gen người châu Á Ứng với đa hình gen chúng tơi có giá trị p chúng tơi tính cỡ mẫu (n) gen + Tỷ lệ alen T đa hình gen MTHFR rs1801133 p = 0,12; n1 = 163 + Tỷ lệ alen G đa hình gen LRP5 rs41494349 p = 0,08; n2 = 114 + Tỷ lệ alen T đa hình gen FTO rs1121980 p = 0,16; n3 = 207 Vậy chọn cỡ mẫu cho mục tiêu cỡ mẫu lớn đa hình gen: n = 207 * Cỡ mẫu cho mục tiêu Mục tiêu tìm hiểu mối liên quan đa hình gen với mật độ xương số yếu tố nguy loãng xương nên cỡ mẫu tối thiểu mục tiêu là: nx2,5 = 207x2,5 = 517,5 Trên thực tế, chọn 566 phụ nữ sau mãn kinh để tiến hành nghiên cứu 2.3.3 Phương pháp chọn mẫu - Chọn mẫu cho nghiên cứu mô tả cắt ngang - Tất đối tượng vấn theo câu hỏi sàng lọc khám sàng lọc bác sỹ chuyên khoa xương khớp Các đối tượng đủ tiêu chuẩn xét nghiệm tế máu ngoại vi urê, creatinin, glucose, enzym gan, protein phản ứng C (CRP), máu lắng để loại trừ bệnh nhân đái tháo đường, thiếu máu, enzym gan tăng, suy thận, nghi ngờ bệnh lý viêm ác tính Những đối tượng thỏa mãn tất tiêu chuẩn vấn theo câu hỏi nghiên cứu, thăm khám lâm sàng theo mẫu bệnh án nghiên cứu, đo mật độ xương, lấy máu để làm phân tích gen 2.3.4 Qui trình vấn khám lâm sàng - Tuổi, tuổi có kinh, tuổi mãn kinh, thời gian mãn kinh, số con, số lần mang thai, khu vực sống, tiền sử gãy xương vấn theo mẫu bệnh án nghiên cứu - Chiều cao: chiều cao đo thước gỗ đo chiều cao (độ xác 0,1cm) Thước đặt theo chiều thẳng đứng, vng góc với mặt đất nằm ngang Đối tượng đo chiều cao bỏ giầy dép, đứng dựa lưng vào thước đo, mắt nhìn thẳng, hai tay bng thõng cho gót chân, bắp chân, mơng, vai, chẩm (9 điểm chạm) theo đường thẳng áp sát vào thước đo đứng Dùng thước vuông mảnh gỗ áp sát đỉnh đầu thẳng góc với thước đo đọc kết - Cân nặng: cân nặng đo cân điện tử Tanita với độ xác 0,1 kg, kết tính kg ghi với số lẻ Cân đặt vị trí ổn định phẳng, chỉnh thăng Trước cân cần kiểm tra cân với vật chuẩn để kiểm sốt độ xác độ nhạy cân Đối tượng bỏ giày dép, mặc quần áo gọn nhất, đứng bàn cân, khơng cử động, mắt nhìn thẳng, trọng lượng phân bố bàn chân - BMI: Được tính theo cơng thức: m BMI = h2 Trong đó: m: cân nặng (kg) h: chiều cao (m) - Hoạt động thể lực: + Bảng câu hỏi đánh giá hoạt động thể lực dựa Bảng câu hỏi hoạt động thể lực Active-Q + Các nội dung hoạt động thể lực bao gồm câu hỏi bốn lĩnh vực: hoạt động thể lực thời gian làm việc, hoạt động thể lực di chuyển tới nơi làm việc, hoạt động thể lực thời gian giải trí, hoạt động thể lực chơi thể thao Hỏi đánh giá hoạt động thể lực: tuần điển hình Đơn vị: MET đơn vị quy đổi sử dụng đánh giá hoạt động thể lực 1MET chi phí lượng ngồi lặng lẽ, tương đương với lượng calo tiêu thụ kcal / kg / Thời gian cho hoạt động tuần quy đổi phút Hoạt động thể lực nhẹ :từ đến MET Hoạt động thể lực vừa phải: từ đến MET 11 2.5 Phân tích xử lý số liệu Số liệu nhập kiểm tra phần mềm REDCap Các biến định lượng trình bày dạng trung bình độ lệch chuẩn (SD) phân bố chuẩn trung vị khoảng tứ phân vị không phân bố chuẩn Các biến định tính trình bày dạng tần số tỷ lệ phần trăm Với biến liên tục, so sánh giá trị trung bình thực kiểm định Independent samples T test Với biến phân loại, so sánh tỷ lệ thực kiểm định Chisquare test Phân tích mối liên quan kiểu gen yếu tố (tuổi, cân nặng, chiều cao, BMI, khu vực sống, tiền sử gãy xương) với mật độ xương vị trí cổ xương đùi, đầu xương đùi, cột sống thắt lưng phân tích hồi quy tuyến tính đơn biến đa biến Phần mềm ngôn ngữ R phiên 3.6.3 sử dụng để phân tích thống kê vẽ biểu đồ 2.6 Đạo đức nghiên cứu Nghiên cứu sử dụng phần số liệu đề tài “ Xác định tính đa hình nhạy cảm gen liên quan đến loãng xương gãy xương người Việt Nam” Quỹ Phát triển Khoa học Công nghệ Quốc gia (NAFOSTED) tài trợ chứng nhận chấp thuận hội đồng đạo đức nghiên cứu y sinh học Viện Nghiên cứu Y học Đinh Tiên Hoàng số 01/HĐĐĐ-VNCYHĐTH ngày 27 tháng 01 năm - 2016 hội đồng thông qua đề cương Trường Đại học Y Hà Nội 12 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Bảng 3.2: Đặc điểm chung đối tượng nghiên cứu theo phân nhóm lỗng xương nhóm khơnglỗng xương Phân nhóm Đặc điểm a Tuổi (năm) a Chiều cao (cm) a Cân nặng (kg) a BMI (kg/m2) b Phân nhóm BMI Bình thường Thiếu cân Thừa cân béo phì b Nơi sống Nông thôn Thành thị b Hoạt động thể lực (METphút/tuần) Chưa đạt (