LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP: " ĐẶC ĐIỂM BỆNH HỌC BỆNH TRẮNG GAN, TRẮNG MANG TRÊN CÁ TRA (Pangasianodon hypophthalmus) GIỐNG Ở ĐỒNG THÁP" potx

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN HUỲNH THỊ NGỌC THANH ĐẶC ĐIỂM BỆNH HỌC BỆNH TRẮNG GAN, TRẮNG MANG TRÊN CÁ TRA (Pangasianodon hypophthalmus) GIỐNG Ở ĐỒNG THÁP LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH BỆNH HỌC THỦY SẢN 2009 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN HUỲNH THỊ NGỌC THANH ĐẶC ĐIỂM BỆNH HỌC BỆNH TRẮNG GAN, TRẮNG MANG TRÊN CÁ TRA (Pangasianodon hypophthalmus) GIỐNG Ở ĐỒNG THÁP CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: TỪ THANH DUNG BÙI THỊ BÍCH HẰNG 2009 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com i LỜI CẢM TẠ Lời đầu tiên con xin chân thành biết ơn cha mẹ đã sinh ra và nuôi dạy con khôn lớn! Xin chân thành gửi lời cảm ơn và lòng biết ơn sâu sắc đến cô Từ Thanh Dung đã tận tình giúp đỡ, truyền đạt kinh nghiệm và tạo mọi điều kiện thuận lợi trong suốt quá trình thực hiện đề tài. Chân thành cảm ơn quý thầy cô Khoa Thủy Sản bộ môn Bệnh Học Thủy Sản. Xin gửi đến cô cố vấn Bùi Thị Bích Hằng lời biết ơn sâu sắc đã dìu dắt lớp trong suốt quá trình học tập Xin cảm ơn các anh chị trong bộ môn Bệnh Học Thủy Sản đã đóng góp những ý kiến quý báu giúp em hoàn thành luận văn. Chân thành cảm ơn Cty TNHH Minh Thành _Tp Cao Lãnh, Chi Cục thủy sản Hồng Ngự đã nhiệt tình giúp đỡ em trong suốt quá trình thu mẫu. Cuối cùng là các bạn lớp Bệnh Học Thủy Sản K31 đã động viên và giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện luận văn tốt nghiệp. Xin chân thành cảm ơn! PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com ii TÓM TẮT Cá tra là một trong những đối tượng nuôi thủy sản đang được nuôi công nghiệp tại các tỉnh ĐBSCL. Đồng Tháp chính là cái nôi của nghành sản xuất giống cá tra cung ứng 70% cá tra giống cho toàn vùng ĐBSCL. Trong những năm gần đây đã xuất hiện bệnh TGTM gây thiệt hại lớn đến nghề sản xuất cá giống. Chính vì vậy đề tài “Đặc điểm bệnh học bệnh trắng gan trắng mang trên cá tra (Pangasianodon hypophthamus) giống ở Đồng Tháp” được thực hiện nhằm tìm hiểu sự thay đổi về đặc điểm bệnh học trong quá trình bệnh diễn ra ở các ao ương nhằm đưa ra cơ sở khoa học cần thiết để góp phàn làm giảm thiệt hại phát sinh bệnh giúp cho việc điều trị hiệu quả hơn. Mẫu được thu định kỳ trên 4 ao ương xuất hiện bệnh trắng gan trắng mang (TGTM) tại huyện Hồng Ngự tỉnh Đồng Tháp, thu 4 - 6 lần mỗi lần thu 10 con. Mẫu cá thu được phân tích ngoại ký sinh, cấy mẫu vi sinh và cố định mẫu mô trong dung dịch formol trung tính 10%. Kết quả kiểm tra ký sinh trùng và vi sinh đã xác định được mẫu cá trong 4 ao nuôi đều phát hiện được ký sinh trùng thuộc nhóm đơn bào và 1 ao có nhiễm vi khuẩn Edwardsiella ictaluri và Aeromonas hydrophyla. Kết quả mô học ở cá TGTM, giữa các đợt thu mẫu cấu trúc không biến đổi nhiều, cá bệnh TGTM cấu trúc biến đổi nhẹ hơn cá bị TGTM kết hợp với mủ gan. Các đặc điểm thường gặp như: tế bào mất cấu trúc, hoại tử, xung huyết và xuất huyết trên gan thận tỳ tạng. Mặc dù chưa xác định được tác nhân gây bệnh TGTM nhưng các thông tin trên sẽ là cơ sở cho các nghiên cứu tiếp theo. PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com iii MỤC LỤC PHẦN I GIỚI THIỆU 1 PHẦN II TỒNG QUAN TÀI LIỆU 3 2.1 Một số bệnh thường gặp 3 2.1.1 Bệnh do ký sinh trùng 3 2.1.2 Bệnh vi khuẩn 4 2.2 Các nghiên cứu mô học 5 2.3 Tình hình xuất hiện bệnh 7 PHẦN III VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 9 3.1 Thời gian và địa điểm 9 3.2 Vật liệu nghiên cứu 9 3.3 Phương pháp nghiên cứu 9 3.3.1 Phương pháp thu mẫu 9 3.3.2 Phương pháp kiểm tra ký sinh trùng 9 3.3.3 Phương pháp định danh vi khuẩn 10 3.3.4 Phương pháp mô học 10 PHẦN IV KẾT QUẢ THẢO LUẬN 13 4.1 Đặc điểm cá khỏe 13 4.2 Đặc điểm cá bệnh 13 4.3 Kết quả ký sinh trùng 14 4.4 Xác định thành phần vi sinh 16 4.5 Kết quả mô học 18 4.5.1 Mang 18 4.5.2 Gan 21 4.5.3 Thận 24 4.5.4 Tỳ tạng 27 PHẦN V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 30 5.1 Kết luận 30 5.2 Đề xuất 30 TÀI LIỆU THAM KHẢO 31 PHỤ LỤC 35 Phụ Lục A 35 Phụ Lục B 37 Phụ Lục C 38 Phụ Lục D 39 Phụ Lục E 42 Phụ Lục F 44 Phụ Lục G 50 Phụ Lục H 51 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com iv DANH SÁCH HÌNH Hình 3.1: Sơ đồ xử lý mẫu mô 11 Hình 3.2: Sơ đồ qui trình nhuộm mẫu mô 12 Hình 4.1: Nội tạng cá khỏe và cá TGTM 13 Hình 4.2: Gan, Mang cá TGTM và cá khỏe 13 Hình 4.3: Đĩa tách ròng vi khuẩn 16 Hình 4.4: Nhuộm Gram vi khuẩn E 100X 16 Hình 4.5: Test API 20E 17 Hình 4.6: Đĩa cấy vi khuẩn trên TSA 17 Hình 4.7: Nhuộm Gram vi khuẩn E 100X 17 Hình 4.8: Test API 20E 18 Hình 4.9: Mang cá khỏe 19 Hình 4.10: Mang cá TGTM 19 Hình 4.11: Mô học mang cá khỏe (H&E) 19 Hình 4.12: Mô học mang cá bệnh TGTM (H&E) 20 Hình 4.13: Mô học mang cá TGTM & MG (H&E) 21 Hình 4.14: Mô học gan cá khỏe (H&E) 21 Hình 4.15: Mô học gan cá bệnh TGTM (H&E) 23 Hình 4.16: Mô học gan cá bệnh TGTM & MG (H&E) 24 Hình 4.17: Mô học thận cá khỏe (H&E) 25 Hình 4.18: Mô học thận cá bệnh TGTM (H&E) 26 Hình 4.19: Mô học thận cá TGTM & MG (H&E) 27 Hình 4.20: Mô học tỳ tạng cá khỏe (H&E) 27 Hình 4.21: Mô học tỳ tạng cá bệnh TGTM & MG (H&E) 29 DANH SÁCH BẢNG Bảng 4.1: Tỉ lệ cảm nhiễm ký sinh trùng 14 Bảng 4.2: Cường độ cảm nhiễm ký sinh trùng 15 Bảng 4.3: Kết quả mô học trên mang 19 Bảng 4.4: Kết quả mô học trên gan 22 Bảng 4.5: Kết quả mô học trên thận 25 Bảng 4.6: Kết Quả mô học trên tỳ tạng 28 Bảng 4.7: Các chỉ tiêu sinh hóa của kit API 20E 38 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com v TỪ VIẾT TẮT ĐBSCL: Đồng Bằng Sông Cửu Long TGTM: Trắng gan, trắng mang TGTM & MG: trắng gan trắng mang kết hợp mủ gan H&E: Haematocyline & Eosin MMC: trung tâm đại thực bào sắc tố PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com 1 PHẦN I GIỚI THIỆU Cá tra là một trong những đối tượng xuất khẩu chủ lực của Việt Nam. Theo Hiệp hội Chế biến và Xuất khẩu thủy sản Việt Nam (VASEP), tính đến đầu tháng 12 năm 2008 kim ngạch xuất khẩu thủy sản của cả nước đạt 4 tỷ USD. Trong đó 10 tháng đầu năm, sản lượng xuất khẩu đã đạt 1.054.600 tấn, trị giá 3,828 tỷ USD, tăng 39,4% về lượng và 24,4% về giá trị so với cùng kỳ năm 2007. Đặc biệt, các nước trong khối EU vẫn đứng đầu thị trường nhập khẩu thủy sản Việt Nam, chiếm 25,3% tổng kim ngạch xuất khẩu của cả nước với gần 970 triệu USD, tăng 29,3% so với 10 tháng năm 2007.(Afasco, 2009) Hiện nay nghề nuôi cá tra ở ĐBSCL ngày càng phát triển với mức độ thâm canh hóa ngày càng tăng, để đáp ứng nhu cầu thì con giống đang là vấn đề cấp thiết. Đồng Tháp là một trong những tỉnh có nghề sản xuất cá giống phát triển mạnh, khoảng 300 cơ sở, tổng diện tích sản xuất khoảng 4.000 ha, cung ứng 65-70% cá tra giống cho toàn vùng ĐBSCL (Thanh sơn, 2008). Với tình trạng nuôi cá tra như hiện nay dẫn đến bệnh thường xuyên xảy ra như bệnh xuất huyết, bệnh mủ gan, bệnh ký sinh trùng …gây thiệt hạị nặng. Bên cạnh đó, trong những năm gần đây đã xuất hiện bệnh “trắng gan, trắng mang” gây ảnh hưởng đến sản lượng cá tra nuôi. Đặc biệt gây chết vào giai đoạn giống trầm trọng và vẫn chưa được xác định chính xác tác nhân gây bệnh. Bệnh trắng gan trắng mang thường xuất hiện ở giai đoạn cá tra giống (khoảng 1 tháng tuổi), và gây tỉ lệ chết cao từ vài trăm đến vài nghìn con/ngày, kéo dài từ 7 đến 10 ngày (thông tin từ người nuôi). Theo Huy và Tiến vào năm 2008, đã có nghiên cứu về mô học và huyết học trên cá tra bệnh trắng gan trắng mang. Và các thông tin khoa học cụ thể về bệnh trắng gan trắng mang trên đối tượng nuôi này hầu như chưa có. Chính vì vậy mà đề tài “Đặc điểm bệnh học bệnh trắng gan, trắng mang trên cá tra (pangasianodon hypophthalmus) giống ở tỉnh Đồng Tháp” được thực hiện. Mục tiêu đề tài Tìm hiểu sự thay đổi về đặc điểm bệnh học trong quá trình bệnh diễn ra ở các ao ương nhằm đưa ra cơ sở khoa học cần thiết để góp phần giảm thiệt hại phát sinh bệnh này giúp cho việc điều trị hiệu quả hơn. PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com 2 Nội dung Định kỳ thu mẫu và xác định thành phần loài ký sinh trùng và vi khuẩn trong 4 ao ương cá tra ở tỉnh Đồng tháp. Xác định sự thay đổi cấu trúc mô học trên cá tra bệnh trắng gan trắng mang trong 4 ao ương. PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com 3 PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Một số bệnh thường gặp trên cá tra Theo Nguyễn Trọng Bình từ năm 1996-2006, hiện nay diện tích nuôi cá tra, basa ở 3 miền: Nam, Trung và Bắc tăng gấp 7 lần, sản lượng tăng 36,2 lần. Và cá tra đã được xuất khẩu sang 80 quốc gia và vùng lãnh thổ. Để có sản lượng cao cung cấp cho xuất khẩu, bên cạnh của tăng diện tích nuôi trồng thì còn có nuôi cá tra ở mật độ cao và nuôi thâm canh đã làm xuất hiện nhiều loại bệnh như bệnh vi khuẩn, một số bệnh do nấm, ký sinh trùng gây ra.v.v. (http://www.hcmbiotech.com.vn) Bệnh được xem là một thách thức quan trọng mà người nuôi thủy sản đang phải đối mặt. Theo Từ Thanh Dung và ctv (2005), tác nhân gây bệnh trên động vật thủy sản chủ yếu là vi khuẩn, virus, nấm và nguyên sinh động vật. Bên cạnh đó, một khảo sát của Nguyễn Chính (2005), tại các vùng nuôi cá tra thâm canh ở An Giang và Cần Thơ thì cá mắc nhiều loại bệnh với các tần số xuất hiện khác nhau, bệnh thường gặp và gây thiệt hại nhiều nhất là bệnh gan thận có mủ, xuất hiện trên 82% ao và 100% bè nuôi cá đồng thời tỷ lệ cá chết có thể lên đến 80 – 90% nếu không chữa trị kịp thời. 2.1.1 Bệnh do ký sinh trùng Theo Bùi Quang Tề (2001), cho rằng ký sinh trùng phụ thuộc vào giai đoạn phát triển của cá. Trong giai đoạn cá hương (từ 1 – 1,5 tháng tuổi) và giai đoạn gống (từ 2 – 3 tháng tuổi) gặp chủ yếu là trùng đơn bào ngoại ký sinh như nhóm trùng bánh xe (Trichodina, Trichodinella spp và Tripartiella spp) và một số loài sán lá song chủ. Ở giai đoạn giống thì cá tra thường dễ bị nhiễm các loài ký sinh trùng như: Trichodina, Dactylogyrus, Gyrodactylus, Myxobolus, Ichthyophthyrius, Henneguya,…ký sinh gây bệnh. Bệnh trùng bánh xe Tác nhân gây bệnh là một số loài kí sinh trùng thuộc họ Trichodinidea bao gồm các loài thuộc giống Trichodina ký sinh ở da và mang cá, các đối tượng cá tra giống, cá trê giống, bống tượng, mè vinh,…đều bị nhiễm trùng bánh xe gây thành dịch làm cá chết từ 50 – 90% trong ao nuôi (Bùi Quang Tề và ctv, 2004). Theo Từ Thanh Dung (2005), thì nhiệt độ thích hợp cho trùng bánh xe là từ 20 – 30 0 C, bệnh thường xảy ra ở thời điểm cuối mùa Xuân đến đầu mùa Thu, chúng ký sinh ở hầu hết các loài cá nhưng chủ yếu gây bệnh và làm chết cá hương và cá giống trong các ao ương có mật độ dày và điều kiện sống không tốt. PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com [...]... trên vùng mô 2.3 Tình hình xuất hiện bệnh trắng gan, trắng mang trên cá tra Trong thời gian gần đây, hầu như tất cả các vùng nuôi cá tra thường xuất hiện loại bệnh phổ biến là trắng mang, trắng gan gây thiệt hại cho người nuôi Hiện nay bệnh này tác nhân gây bệnh chưa được xác định rõ Theo Phạm Ngọc Khỏe (2008), khi kiểm tra ký sinh trùng trên cá tra bị bệnh trắng mang, trắng gan có khả năng nhiễm các... Phương Tiến (2008), kết luận trên cá tra bệnh trắng gan trắng mang nhẹ, hồng cầu giảm đi 18,7% so với cá khỏe, 26,6% so với cá bị không bệnh này trong cùng ao nuôi Trong khi đó ở cá tra bệnh trắng gan trắng mang nặng là 4,57% và 6,48% Theo kết quả phân tích vi sinh của Phạm Ngọc Khỏe (2008), và Phạm Thị Phương Tiến (2008), thì tác nhân gây bệnh trắng gan trắng mang trên cá tra không phải là vi khuẩn... tạng của cá bị trắng gan kết quả cho thấy tùy giai đoạn nặng nhẹ khác nhau của bệnh mà cấu trúc mô tỳ tạng có những đặc điểm như hoại tử dạng hạt, hoại tử hóa lỏng hay cấu trúc của tủy đỏ và tủy trắng khác nhau Gần đây một nghiên cứu mô bệnh học của Phan Khắc Huy (2008), về đặc điểm mô bệnh học ở cá tra có dấu hiệu trắng gan, trắng mang cho biết đối với cá trắng gan, trắng mang đơn thuần trên cấu trúc... mô bệnh học trên cá tra trắng gan thể hiện nhiều thay đổi về cấu trúc, đặc biệt ở gan, thận và tỳ tạng có hiện tượng xung huyết, xuất huyết và nhiều vùng bị hoại tử trầm trọng xuất hiện ở hầu hết các vùng chức năng của các cơ quan kể trên Vi khuẩn cũng đã được tìm thấy trên mẫu mô của các cơ quan này, những vi khuẩn này tạo thành bó ở rìa các vết hoại tử Đồng thời ở mang cá bệnh có sự dính lại của các... xuất huyết ở một số loài cá như: cá basa, cá bống tượng, cá rô phi, cá trê giống, … Đây là bệnh nhiễm khuẩn nên có thể xảy ra ở các giai đoạn khác nhau từ cá giống , cá thịt và cá bố mẹ đều có thể bị tác hại bởi bệnh này Tỷ lệ tử vong ở động vật thủy sản từ 30 – 70% nhưng ở giai đoạn giống của ba ba và cá trê có thể lên đến 100% (Đỗ Thị Hòa và ctv, 2004) 2.2 Các nghiên cứu mô học Từ khi học thuyết tế.. .Bệnh trùng quả dưa Tác nhân gây bệnh là trùng quả dưa Ichthyophthyrius multifiliis, nhiệt độ thích hợp cho trùng phát triển từ 22 – 280 C, bệnh gây thiệt hại chủ yếu ở giai đoạn cá hương và cá giống Ở Việt Nam, bệnh phát sinh rộng trên nhiều loài cá khác nhau như cá chép, trắm cỏ, cá trê, cá tra, bống tượng…Trùng quả dưa đã gây thành dịch bệnh của cá giống ở các loài kể trên với tỷ lệ... mô học, chủ yếu trên các đối tượng nuôi phổ biến hiện nay như theo luận văn tốt nghiệp của Nguyễn Quốc Thịnh (2002), bước đầu nghiên cứu mô bệnh học bệnh đốm trắng trong nội tạng cá tra cho thấy khi cá bị trắng gan các cơ quan bị hủy hoại nặng nhất là gan, thận và tỳ tạng kế đến là mang và cuối cùng bị ảnh hưởng nhẹ nhất là tim và cơ Các tổn thương vi thể chủ yếu là hoại tử dạng hạt Không ngừng ở đó... nang/lamelle) Mang (5 bào nang/lamelle) Mang( 7 bào nang/ thi trường Mang (2-4 cá thể/lamelle) Da (4 cá thể/lamelle) Mang (5-7 cá thể/lamelle) Da (26 cá thể/ lamelle) Da (10- 13 cá thể/lamelle) Mang (15 cá thể/lamelle) Mang (13 2cá thể/thị trường) Mang (6 bào nang/lamelle) Mang (3 cá thể/lamelle) Mang (4 cá thể/thị trường) Da (2 bào nang/lamelle) Mang( 17bào nang/lamelle) Mang (9 cá thể/ lamelle) Trichodina Ao... gây bệnh là Myxobolus, Henneguya và Thelohanellus Theo nghiên cứu của Bùi Quang Tề (2001), thì Henneguya được tìm thấy rất nhiều trên da cá tại các ao ương cá tra giống ở Long Khánh, Hồng Ngự - Đồng Tháp Myxobolus ký sinh ở hơn 30 loài cá nước ngọt Việt Nam, bệnh gặp ở mọi vùng miền Mức độ cảm nhiễm Myxobolus ở một số loài cá khá cao và đã gây thành bệnh làm cá chết hàng loạt Bệnh phát triển mạnh ở nhiệt... mang cá gồm các lá mang, lược mang, xương cung mang, động mạch ra vào mang và các dây thần kinh, mang có nhiệm vụ hô hấp lấy oxy từ môi trường vào cơ thể và thải CO2 ra bên ngoài quá trình này được tiến hành qua vách của các tia mang và sợi mang nhỏ Khi cá có dấu hiệu TGTM, Mang cá khi bị TGTM màu sắc nhợt nhạt, chuyển từ màu đỏ tươi sang hồng nhạt, nếu bệnh nặng mang chuyển sang trắng hoàn toàn Mang cá . xuất cá giống. Chính vì vậy đề tài Đặc điểm bệnh học bệnh trắng gan trắng mang trên cá tra (Pangasianodon hypophthamus) giống ở Đồng Tháp” được thực hiện nhằm tìm hiểu sự thay đổi về đặc điểm. Đặc điểm bệnh học bệnh trắng gan, trắng mang trên cá tra (pangasianodon hypophthalmus) giống ở tỉnh Đồng Tháp” được thực hiện. Mục tiêu đề tài Tìm hiểu sự thay đổi về đặc điểm bệnh học trong. tủy trắng khác nhau. Gần đây một nghiên cứu mô bệnh học của Phan Khắc Huy (2008), về đặc điểm mô bệnh học ở cá tra có dấu hiệu trắng gan, trắng mang cho biết đối với cá trắng gan, trắng mang