Tài liệu BÁO CÁO " SỰ KHÁNG KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN Edwardsiella ictaluri VÀ Aeromonas hydrophila GÂY BỆNH TRÊN CÁ TRA (Pangasianodon hypophthalmus) Ở ĐỒNG BẰNG SÔNG CỬU LONG " pdf

Keywords: antimicrobial susceptibility testing, conjugation, resistance plasmid Title: Study on antimicrobial resistance of Edwardsiella ictaluri and Aeromonas hydrophila isolates cau

SỰ KHÁNG KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN

Edwardsiella ictaluri VÀ Aeromonas hydrophila

GÂY BỆNH TRÊN CÁ TRA (Pangasianodon

hypophthalmus) Ở ĐỒNG BẰNG SÔNG CỬU LONG

Phạm Thanh Hương1, Nguyễn Thiện Nam 2 , Từ Thanh Dung 2

và Nguyễn Anh Tuấn 2

ABSTRACT

All isolates were screened against 16 antimicrobial agents by disk diffusion method and were also tested for determination of minimal inhibitory concentration (MIC) of 64 isolates (43 E ictaluri isolates and 21 A hydrophila isolates) to 5 antibiotics with broth dilution method The results showed that majority of E ictaluri isolates susceptibility to beta-lactam antimicrobial group such as ampicillin, amoxicillin and cefalexin Highly resistance was detected to streptomycin (84.1%), chloramphenicol (74.5%), enrofloxacin (74.5%) E ictaluri isolates showed fully resistance to flumequin, trimethoprim+sulfamethoxazol Whereas, A hydrophila were highly susceptive with fenicol, tetracyclines, quinolones antimicrobial groups, Highly resistance to streptomycin (55.7%) and trimethoprim + sulfamethoxazol (32.8%) Remarkably, in this study detected 96% and 23% A hydrophila isolates had multi-resistance The lowest MIC values of E ictaluri isolates was ampicillin (MIC 90 = 48.5 µg/mL) and A hydrophila was enrofloxacin (MIC 90 = 6.1 µg/mL) The confugation experiments showed that E ictaluri isolates can transfer of antimicrobial resistant genes to E coli RC85 Likely, transconjugants (Ei-R) can transfer this genes to A hydrophila isolates Both

E ictaluri isolates and transconjugants (Ei-R) also were extracted plasmid

Keywords: antimicrobial susceptibility testing, conjugation, resistance

plasmid

Title: Study on antimicrobial resistance of Edwardsiella ictaluri and

Aeromonas hydrophila isolates caused diseases on striped catfish

(Pangasianodon hypophthalmus) in the Mekong River Delta

TÓM TẮT

Nghiên cứu tiến hành làm kháng sinh đồ với 16 loại kháng sinh và xác định giá trị nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) của 64 chủng vi khuẩn (43 chủng E ictaluri

1 Chi cục Thủy sản Cần Thơ

và 21 chủng A hydrophila) trên với 5 loại kháng sinh bằng phương pháp pha loãng trong môi trường lỏng Kết quả cho thấy đa số vi khuẩn E ictaluri nhạy cao với kháng sinh: ampicillin, amoxicillin và cefalexin, trong khi đó kháng cao với kháng sinh: streptomycin (84,1%), enrofloxacin (74,5%) và chloramphenicol (74,5%) Kháng hoàn toàn với flumequin, trimethoprim +sulfamethoxazol Ngược lại, vi khuẩn A hydrophila nhạy cao với nhóm fenicol, tetracyclines, quinolones, kháng cao với kháng sinh streptomycin (55,7%) và trimethoprim+sulfamethoxazol (32,8%) Nghiên cứu phát hiện có 96% chủng vi khuẩn E ictaluri và 23% chủng vi khuẩn A hydrophila biểu hiện sự đa kháng Kết quả xác định giá trị MIC đối với vi khuẩn E ictaluri thì ampicillin cho giá trị MIC thấp nhất (MIC 90 = 48,5 µg/mL), đối với vi khuẩn A hydrophila thì enrofloxacin có giá trị MIC thấp nhất (MIC 90 = 6,1 µg/mL) Thí nghiệm tiếp hợp, vi khuẩn E ictaluri có khả năng truyền gen kháng thuốc sang vi khuẩn E.coli, cũng như vi khuẩn sau khi tiếp hợp (transconjugants) Ei-R có khả năng chuyển gen kháng thuốc này sang vi khuẩn

A hydrophila Nghiên cứu bước đầu ly trích plasmid của các chủng vi khuẩn

E ictaluri và chủng lai Ei-R kháng thuốc từ thí nghiệm tiếp hợp

Từ khóa: Kháng thuốc kháng sinh, tiếp hợp vi khuẩn, plasmid kháng kháng sinh

1 GIỚI THIỆU

Cá tra (Pangasianodon hypophthalmus) là loài cá nước ngọt được nuôi phổ

biến nhất ở Đồng bằng sông Cửu Long (ĐBSCL) Cá tra có giá trị xuất khẩu cao nên trong những năm gần đây nghề nuôi cá tra ở ĐBSCL phát triển rất mạnh đã đưa năng suất nuôi tăng lên đáng kể Tuy nhiên, để đạt được sản lượng và lợi nhuận cao nhất, người nuôi không ngừng thâm canh hóa, do đó vấn đề dịch bệnh trên cá tra xảy ra thường xuyên hơn và thiệt hại nhiều hơn Trong số các bệnh trên cá tra nuôi ở ĐBSCL phổ biến và gây thiệt hại nhiều

nhất là bệnh gan thận mủ do vi khuẩn Edwardsiella ictaluri và bệnh xuất huyết

do vi khuẩn Aeromonas hydrophila (Dung et al., 2004)

Hiện nay người nuôi cá sử dụng thuốc kháng sinh một cách phổ biến để phòng trị bệnh vi khuẩn trong nuôi thủy sản ở Việt Nam và nhiều nước trên thế giới

(Dung et al., 2008; Cabello, 2006) Do người nuôi thủy sản sử dụng thuốc

kháng sinh không đúng cách và không đúng quy định nên gây ra hiện tượng vi khuẩn kháng thuốc kháng sinh Vì thế, các nhà khoa học đã nghiên cứu tìm thấy sự kháng thuốc kháng sinh trên nhiều loài vi khuẩn gây bệnh trên tôm, cá

(Sarter et al., 2007; Akinbowale et al., 2007) Sự kháng thuốc kháng sinh gián

tiếp trong vi sinh vật có thể được hình thành thông qua các gen trên nhiễm sắc thể hoặc thông qua plasmid, cấu trúc tự sao chép mang gen trong tế bào chất

(Prescott et al., 2000) Trong đó, sự kháng thuốc kháng sinh thông qua plasmid

là rất nguy hiểm, bởi vì các loài vi khuẩn kháng thuốc có thể truyền các gen

kháng thuốc không chỉ trong cùng 1 loài mà cả các loài vi khuẩn khác, ngay cả

vi khuẩn gây bệnh cho người và các động vật trên cạn (Aoki, 1988) Chính vì

thế, việc phát hiện các vi khuẩn kháng thuốc kháng sinh là rất cấp thiết, nhằm

cung cấp thông tin cho việc sử dụng thuốc kháng sinh có hiệu quả và đảm bảo

an toàn sức khỏe của con người

2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Chủng vi khuẩn

Nghiên cứu được thực hiện trên 126 chủng vi khuẩn E ictaluri phân lập từ cá

tra bị bệnh gan thận mủ và 61 chủng vi khuẩn Aeromonas hydrophila từ cá tra

bị bệnh xuất huyết ở các tỉnh ĐBSCL từ năm 2008 – 2009 (Bảng 1)

Tất cả các chủng vi khuẩn được định danh theo phương pháp của Frerichs và

Millar (1993) dựa trên dòng chuẩn E ictaluri (CCUG 18764), thông qua các

các chỉ tiêu cơ bản (nhuộm gram, oxidase, catalase, O/F) và bộ kít API 20E

Bảng 1: Địa điểm thu mẫu và số lượng chủng vi khuẩn E ictaluri và A

hydrophila

Tỉnh thu mẫu Năm E ictaluri A hydrophila

Tổng số chủng vi khuẩn 126 61 2.2 Phương pháp lập kháng sinh đồ

Phương pháp làm kháng sinh đồ được thực hiện theo tiêu chuẩn: The Clinical

và Laboratory Standards Institute (CLSI) của Anonymous (2006), sử dụng môi

trường Mueller-Hinton Agar (MHA, Merck, Darmstadt, Germany), với 16 loại

kháng sinh: ampicillin (AM/10 µg), amoxcillin (AMX/25 μg), cefalexin

streptomycin (SM/10 µg), gentamicin (GM/30 µg), tetracycline (TE/30 µg),

doxycycline (DO/30 μg), enrofloxacin (ENR/5 μg), norfloxacin (NOR/5 μg),

ciprofloxacin (CIP/5 μg), flumequin (FM/30 µg), trimethoprim +

sulfamethoxazol (SXT/1,25/23,75 µg), rifampin (RA/30 μg), colistin (CS/50 μg) (Bio-rad, Marnes-la-Coquettle, France)

2.3 Phương pháp xác định nồng độ ức chế tối thiểu

Nồng độ ức chế tối thiểu (Minimal Inhibitory Concentration – MIC) xác định bằng phương pháp pha loãng thuốc kháng sinh trong môi trường lỏng, theo tiêu chuẩn của Clinical và Laboratory Standards Institute, 2006 (CLSI M49-A) với

5 loại kháng sinh có tính kháng và nhạy cao, đại diện cho các nhóm kháng sinh trong nghiên cứu này: ampicillin, chloramphenicol, enrofloxacin,

oxytetracycline, streptomycin Dòng vi khuẩn chuẩn E coli ATCC 25922 được

sử dụng như chủng đối chứng trong phương pháp này Thí nghiệm thực hiện

trên 43 chủng vi khuẩn E ictaluri và 21 chủng vi khuẩn Aeromonas

hydrophila đã được lập kháng sinh đồ ở trên

2.4 Phương pháp xác định khả năng tiếp hợp của vi khuẩn

Khảo sát khả năng tiếp hợp của vi khuẩn được thực hiện theo phương pháp của

Sorum et al., (2003) Các dòng vi khuẩn mang gen kháng tetracycline (vi

khuẩn nhận gen kháng thuốc) nhạy với kháng sinh tetracycline với thể tích bằng nhau trong môi trường Luria-Bertani (LB) lắc ở nhiệt độ 37oC trong thời gian thích hợp Sau đó cho hỗn hợp vi khuẩn lên đĩa MHA có pha kháng sinh

kháng thuốc được đánh giá dựa trên mật độ của vi khuẩn cho gen kháng thuốc

và mật độ của vi khuẩn E coli sau khi đã tiếp hợp (thu được trên đĩa MHA có

kháng sinh)

2.5 Phương pháp ly trích plasmid của vi khuẩn

Plasmid của các chủng vi khuẩn được ly trích bằng bộ ly trích plasmid của Promega - TB225 (Wizard Plus SV Minipreps DNA Purification System) Điện di plasmid bằng gel agarose 0,7%, ở dòng điện 140V, trong 3 giờ Gel được nhuộm trong dung dịch ethidium bromide (2 mg/ml) và chụp ảnh gel dưới ánh sáng UV 254 nm Đọc kích thước phân tử của plasmid thông qua markers chuẩn 15 kb (Biorad)

3 KẾT QUẢ

3.1 Kết quả kháng sinh đồ

Kiểm tra kháng sinh đồ được thực hiện trên 126 chủng vi khuẩn E ictaluri, cho thấy các chủng vi khuẩn E ictaluri đã giảm tính nhạy đối với 3 kháng sinh

nhóm beta-lactam: ampicillin, amoxicillin và cefalexin Kháng cao với các loại kháng sinh như: streptomycin, enrofloxacin, chloramphenicol, florfenicol, tetracycline và doxycycline Đặc biệt, các chủng vi khuẩn này đã kháng hoàn toàn với flumequin, trimethoprim+sulfamethoxazol

Bảng 2: Tỉ lệ phần trăm chủng vi khuẩn kháng, nhạy và nhạy trung bình (TB)

kháng sinh E ictaluri A.hydrophila E.ictaluri A hydrophila E.ictaluri A.hydrophila

Beta-lactam

Fenicol

4 Florfenicol 19,1 91,8 7,94 3,28 73 4,92

Aminoglycosides

Tetracyclines

Quinolones

12 Ciprofloxacin 44,4 88,5 19,1 6,56 36,5 4,92

Khác

14 Trimethoprim+

sulfamethoxazol

0 63,9 0 3,28 100 32,8

Kết quả kháng sinh đồ của 61 chủng vi khuẩn A hydrophila trong nghiên cứu cho thấy các chủng vi khuẩn A hydrophila nhạy cao với các sinh trong nhóm

fenicol, tetracyclines, quinolones, kháng cao với kháng sinh streptomycin và trimethoprim+sulfamethoxazol

Điểm nổi bật của các chủng vi khuẩn E ictaluri và A hydrophila trong nghiên

cứu này là hiện tượng đa kháng kháng sinh (vi khuẩn kháng ít nhất là 3 kháng

sinh) Với 15 loại thuốc kháng sinh (colistin kháng tự nhiên với vi khuẩn E

ictaluri nên không tính colistin vào kiểu hình đa kháng của vi khuẩn E Ictaluri) vi khuẩn E ictaluri có kiểu đa kháng với 10 loại thuốc kháng sinh

chiếm tỷ lệ cao nhất (23,8%) Đối với vi khuẩn A hydrophila có kiểu đa kháng

với 3 loại thuốc kháng sinh chiếm tỷ lệ cao nhất (13,1%)

Hình 1: Tỷ lệ phần trăm chủng vi khuẩn E ictaluri và A hydrophila đa kháng

kháng sinh

3.2 Kết quả xác định nồng độ ức chế tối thiểu

Tương tự như kết quả thực hiện kháng sinh đồ: 41 chủng vi khuẩn E ictaluri

có cùng số chủng kháng là 37 chủng (86,1%) nhưng giá trị MIC của chúng khác nhau, chloramfenicol có giá trị MIC50 = 52,8 (µg/mL) và MIC90 = 196,7

MIC90 = 48,5 (µg/mL) và thấp nhất là ampicillin với 11 chủng kháng (25,6%)

Bảng 3: Giá trị MIC của 5 loại thuốc kháng sinh đối với 43 chủng vi khuẩn E

ictaluri

Giá trị MIC (µg/mL) và số chủng vi khuẩn

Thuốc

Kháng

Chủng kháng (%)

MIC 50% MIC 90%

Theo tiêu chuẩn CLSI 2006, các chủng in đậm thể hiện tính kháng đáp ứng

Giá trị MIC của các chủng vi khuẩn A hydrophila với streptomycin là 64

chloramfenicol với MIC50 = 4,9 (µg/mL) và MIC90 = 12,7 (µg/mL) Thấp nhất

E ictaluri

A hydrophila

là enrofloxacin với giá trị MIC50 và MIC90 lần lượt là 1,28 (µg/mL) và 6,1 (µg/mL)

Bảng 4: Giá trị MIC của 4 loại thuốc kháng sinh đối với 21 chủng vi khuẩn A

hydrophila

Giá trị MIC (µg/mL) và số chủng vi khuẩn Thuốc

kháng

sinh <0,5 0,5 1 2 4 8 16 32 64 128 256 >256

Chủng kháng (%)

MIC 50% MIC 90%

Theo tiêu chuẩn CLSI 2006, các chủng in đậm thể hiện tính kháng đáp ứng

3.3 Kết quả tiếp hợp vi khuẩn

Kết quả tiếp hợp 10 chủng vi khuẩn E ictaluri và vi khuẩn E coli RC85 cho thấy vi khuẩn E ictaluri có khả năng tiếp hợp và truyền gen kháng thuốc với

tần số tiếp hợp dao động từ 1,61x10-6 - 2,45x10-3, trung bình là 6,87± 9,79x10

kháng sinh: tetracycline, streptomycin, trimethoprim+sulfamethoxazol và

chloramphenicol giống như vi khuẩn E ictaluri Riêng đối với kháng sinh flumequin thì có 8 chủng Ei-R cho kết quả nhạy trung bình với kháng sinh này,

dù 8 chủng E ictaluri tiếp hợp với chúng có tính kháng với flumequin

Kết quả tiếp hợp của 5 chủng vi khuẩn Ei-R với vi khuẩn A hydrophila thì có 4

vi khuẩn Ei-R tiếp hợp và truyền gen kháng thuốc sang vi khuẩn A hydrophila

Tần số tiếp hợp trung bình trong thí nghiệm này là 5,71±7,1x10-6 Kiểu đa

kháng thuốc của 4 chủng vi khuẩn sau khi tiếp hợp Ae-R kháng với

tetracycline, streptomycin, flumequin, trimethoprim+sulfamethoxazol và

chloramphenicol giống hoàn toàn với 4 chủng vi khuẩn Ei-R đã tiếp hợp với

chúng

3.4 Kết quả tách chiết plasmid

Plasmid của vi khuẩn được chạy điện di trên gel agarose 0,7%, nguồn điện 140V, kết quả chạy điện di được quan sát dưới tia UV cho kết quả như Hình 2

Kết quả chạy điện di 4 chủng vi khuẩn E ictaluri có xuất hiện 2 vạch plasmid giống nhau trong khoảng 2-4 kb Đối với 3 chủng vi khuẩn E ictaluri kháng

tetracycline đều có xuất hiện 2 vạch plasmid gần nhau và có kích thước trong khoảng 63-147 kb (giếng 6,7,8) Riêng chủng vi khuẩn nhạy với tetracycline (kí hiệu E72, giếng 9) không có xuất hiện 2 vạch plasmid này Các chủng vi

khuẩn E coli RC85 trước khi tiếp hợp và các chủng vi khuẩn Ei-R chỉ xuất

hiện 1 vạch plasmid giống nhau, tương đương 15 kb

Hình 2: Kết quả điện di các mẫu plasmid

Giếng 1: vi khuẩn E coli 39R861 Giếng 2: vi khuẩn E coli RC85 trước khi tiếp hợp Giếng 3-5: vi khuẩn Ei-R sau khi tiếp hợp Giếng 6-8: vi khuẩn E ictaluri kháng tetracycline Giếng 9: vi khuẩn E ictaluri nhạy tetracycline Giếng 10: thang marker chuẩn 15 kb

4 THẢO LUẬN

Cùng với sự phát triển của nghề nuôi cá da trơn công nghiệp trong những năm qua, thì bệnh do vi khuẩn gây ra trên cá da trơn ngày càng phổ biến và gây thiệt hại đáng kể, đặc biệt là các nhóm vi khuẩn gây bệnh gram âm Vì thế, người nuôi thủy sản sử dụng thuốc kháng sinh một cách tràn lan, không kiểm soát được để phòng trị bệnh thủy sản Kết quả cho thấy sự kháng thuốc của các chủng vi khuẩn trong môi trường nuôi thủy sản ngày càng phổ biến, nguy hiểm hơn là có sự truyền gen kháng thuốc từ vi khuẩn gây bệnh trên động vật thủy sản sang vi khuẩn khác trong môi trường đất, nước, và cả các chủng vi khuẩn gây bệnh ở người, gây ra tác động động xấu cho môi trường và sức khỏe của

cộng đồng

Với kết quả của nghiên cứu này, dễ nhận thấy nhóm beta-lactam nhạy cao

(>84%) với vi khuẩn E ictaluri, nhưng kháng hoàn toàn (ampicillin, amxocillin) và kháng cao (cefaxin) với vi khuẩn A hydrophila Vi khuẩn E

ictaluri trong nghiên cứu này có tính nhạy cao với nhóm thuốc beta-lactam do

chúng không có khả năng tiết ra enzyme β-lactamase làm vỡ vòng β-lactam

(Stock và Wiedemann, 2001) Tuy nhiên, trong số 126 mẫu vi khuẩn E ictaluri

của nghiên cứu này có một tỷ lệ nhỏ (< 7%) số chủng kháng với nhóm

beta-lactam Đây cũng là vấn đề cần phải lưu ý, vì hiện nay theo nghiên cứu này vi

khuẩn E ictaluri đã kháng cao với nhiều loại thuốc kháng sinh khác, ngoại trừ

nhóm beta-lactam

Ở Việt Nam, thuốc kháng sinh chloramphenicol hiện đang bị nghiêm cấm sử dụng trong nuôi trồng thủy sản, do thuốc này có độc tính rất mạnh là nguyên nhân gây ra hiện tượng thoái hóa tủy xương (Dowling, 2006) Một điểm đáng chú ý từ kết quả làm kháng sinh đồ trong nghiên cứu này là có trên 70% số

chủng vi khuẩn E ictaluri kháng với nhóm fenicol So với các nghiên cứu trước đây cho thấy nhóm thuốc fenicol nhạy cao với vi khuẩn Edwardsiella spp (Depaola et al., 1995; Shu-Peng et al., 2000) Đối với các chủng vi khuẩn

E ictaluri phân lập tại Việt Nam từ những năm trước đây, cũng cho kết quả

nhạy cao với florfenicol (Crumlish et al., 2002; Dung et al., 2004) Nguyên

nhân, vi khuẩn tăng tính kháng nhanh với các thuốc kháng sinh nhóm fenicol

do vi khuẩn đề kháng thông qua nhiều cơ chế khác nhau như: vi khuẩn có khả năng đào thải thuốc kháng sinh ra khỏi tế bào thông qua kênh protein (efflux protein) có trên thành tế bào vi khuẩn; mã hóa gen liên quan đến integron

(Arcangioli et al., 1999; Cloeckaert et al., 2000) và thông qua plasmid (Keys et

al., 2000) (Trích dẫn bởi Miranda và Zemelan, 2002) Vì thế, cần phải thận

trọng khi sử dụng thuốc này để điều trị bệnh vi khuẩn trên động vật thủy sản Tương tự, nhóm kháng sinh tetracyclines trong nghiên cứu này kháng cao đối

với vi khuẩn E ictaluri do cơ chế kháng đáp ứng đối với nhóm thuốc

tetracyclines, khi thuốc này được sử dụng qua thời gian dài trị bệnh do vi

khuẩn E ictaluri gây ra sẽ tạo ra các chủng vi khuẩn E ictaluri kháng

tetracycline Nhiều nhà khoa học cho rằng các chủng vi khuẩn kháng cao với nhóm thuốc tetracyclines liên quan đến việc sử dụng thuốc kháng sinh này quá rộng rãi và phổ biến trong nuôi trồng thủy sản, chúng có khả năng truyền gen kháng thuốc này sang vi khuẩn khác thông qua R-plasmid (Reimschuessel và

Miller 2006; Alderman và Hasting, 1998; Depaola et al., 1988)

Đối với nhóm quinolones trong nghiên cứu này, vi khuẩn E ictaluri kháng cao

với 2 loại thuốc flumequin (100%) và enrofloxacin (75,4%) Trong khi đó,

nghiên cứu của Stock và Wiedemann (2001) và Dung et al., (2008) xác định vi khuẩn E ictaluri nhạy với các thuốc kháng sinh thuộc nhóm quinolones Ngoài

ra nghiên cứu của Từ Thanh Dung (2010) chỉ xác định có 8% chủng vi khuẩn

E ictaluri kháng flumequin với MIC 90% khá thấp (4 µg/mL) và enrofloxacin

cũng rất thấp (5%) Ngoài ra, vi khuẩn E ictaluri trong nghiên cứu này giảm

tính nhạy đối với norfloxacin (34,1%) và ciprofloxacin (36,5%), Cần lưu ý rằng ở Việt Nam, thuốc norfloxacin và ciprofloxacin là hai loại kháng sinh nằm trong danh mục hạn chế sử dụng trong nuôi trồng thủy sản Do đó, việc dùng thuốc kháng sinh này trong thủy sản phải hết sức cẩn trọng và cần được kiểm soát chặt chẽ bởi các cơ quan có thẩm quyền về thuốc và thực phẩm nhằm đảm bảo an toàn cho sức khỏe của cộng đồng

Đặc biệt, nhóm thuốc aminoglycosides trong nghiên cứu này gồm streptomycin

E ictaluri và A hydrophila, nhưng gentamcin chỉ giảm tính nhạy với vi khuẩn

E ictaluri và nhạy cao với vi khuẩn A hydrophila Theo Prescott et al., (2000)

và Tolmasky (2000) vi khuẩn lờn với một kháng sinh trong nhóm aminoglycosides này, nhưng có thể nhạy cảm với một thuốc kháng sinh khác cùng nhóm aminoglycosides Vi khuẩn kháng nhanh với thuốc streptomycin do thông qua trung gian các plasmid, nhưng vi khuẩn lờn gentamicin chậm do có liên quan đến đột biến nhiễm sắc thể

Nghiên cứu đã phát hiện có đến 96% chủng vi khuẩn E ictaluri thể hiện sự đa

kháng với kiểu hình đa kháng với 10 loại kháng sinh là cao nhất (23,8%) So với nghiên cứu của Nguyễn Thiện Nam (2010) phát hiện có đến 97,5% số

chủng E ictaluri đa kháng thuốc và kiểu hình kháng với 8 loại kháng sinh

chiếm cao nhất Tuy nhiên nghiên cứu của Từ Thanh Dung (2010) xác định chỉ

có 73% chủng vi khuẩn E ictaluri là biểu hiện đa kháng Ngoài ra nghiên cứu còn ghi nhận có 23% chủng vi khuẩn A hydrophila biểu hiện đa kháng Từ

những kết quả trên, có thể khẳng định rằng, hiện tượng kháng thuốc của vi khuẩn ngày càng diễn biến phức tạp hơn, nhất là sự đa kháng ngày càng tăng

về số chủng và số lượng thuốc kháng sinh

Hiện tượng kháng thuốc càng trở nên nghiêm trọng hơn, khi trong môi trường nuôi thủy sản có sự kháng thuốc hình thành gián tiếp thông qua thể R-plasmid Các R-plasmid này có thể làm trung gian giúp vi khuẩn kháng một hay nhiều loại thuốc kháng sinh (Aoki và Takahashi, 1987; Aoki, 1988; Kruse và Sorum,

1994) Plasmid của 3 chủng vi khuẩn E ictauri kháng với tetracycline trong

nghiên cứu này đều xuất hiện 2 vạch plasmid có kích thước trong khoảng

63-147 kb

5 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT

Kết quả kháng sinh đồ cho thấy vi khuẩn E ictaluri nhạy cao (> 84%) với nhóm beta-lactam và kháng cao với các kháng sinh còn lại Vi khuẩn A

hydrophila nhạy cao (>75%) với nhóm fenicol, tetracyclines và quinolones,

kháng cao với streptomycin (55,7%) và trimethoprim + sulfamethoxazol

(32,8%) Đặc biệt nghiên cứu phát hiện có 96% chủng vi khuẩn E ictaluri và 23% chủng vi khuẩn A hydrophila biểu hiện sự đa kháng Vi khuẩn E

ictaluri có khả truyền gen kháng thuốc sang vi khuẩn E coli RC85 với tần suất

tiếp hợp là: 6,87±9,79x10-4 Đặc biệt, vi khuẩn Ei-R có khả năng truyền gen kháng thuốc này sang vi khuẩn A hydrophila với tần suất tiếp hợp trung bình

là 5,71±7,1x10-6 Bước đầu xác định được plasmid của vi khuẩn E ictaluri

kháng thuốc có kích thước trong khoảng 63-147 kb

Kết quả nghiên cứu cho thấy sự kháng thuốc của vi khuẩn ngày càng gia tăng Chính vì thế, đòi hỏi người nuôi phải thận trọng, tuân thủ đúng quy định trong