3. Nội dung và ph−ơng pháp nghiên cứu
3.3. Ph−ơng pháp nghiên cứu
3.3.1. Xác định ảnh h−ởng của hệ số chuyển đổi nitơ thành protein thô đến hàm l−ợng protein thô trong một số loại thức ăn cho gia cầm
+ Tập hợp tài liệu về hệ số chuyển đổi nitơ thành protein thô của các tác giả n−ớc ngoài.
+ Xác định hàm l−ợng nitơ tổng số và nitơ phi protein trong một số nguyên liệu thức ăn nh− ngô, đỗ t−ơng, bột cá.
+ Tập hợp các số liệu về hàm l−ợng nitơ tổng số và nitơ phi protein của một số phòng phân tích.
+ Tính toán hàm l−ợng protein thô trong một số loại nguyên liệu thức ăn cho gà bằng hệ số chuyển đổi riêng của từng loại protein thức ăn.
+ Tính toán hàm l−ợng protein thô trong một số khẩu phần ăn cho gà với hệ số chuyển đổi nitơ thành protein thô chung là 6,25 và hệ số riêng của từng loại protein thức ăn.
+ Xác định khoảng biến động về hàm l−ợng protein trong các loại nguyên liệu khi sử dụng các hệ số khác nhau.
3.3.2. Thí nghiệm xác định ảnh h−ởng của hệ số chuyển đổi nitơ thành protein thô đến sức sinh tr−ởng của gà broiler
Thí nghiệm đ−ợc bố trí theo ph−ơng pháp phân lô so sánh (ph−ơng pháp khối ngẫu nhiên đầy đủ), theo mô hình bố trí thí nghiệm một nhân tố. Thí nghiệm đ−ợc lặp lại hai lần.
3.3.2.1. Chuẩn bị thí nghiệm
+ Lấy mẫu nguyên liệu, phân tích thành phần hoá học và giá trị dinh d−ỡng của nguyên liệu để phối hợp khẩu phần ăn thí nghiệm.
+ Chuẩn bị chuồng trại: tiến hành vệ sinh chuồng nuôi, máng ăn, máng uống theo đúng qui trình vệ sinh thú y.
+ Chọn gà thí nghiệm: lựa chọn 180 gà con 1 ngày tuổi (giống gà CP 707), có khối l−ợng trung bình của giống, khoẻ mạnh. Chia đều số gà trên làm 4 lô, mỗi lô 45 con, mỗi lô chia làm 3 nhóm, mỗi nhóm 15 con.
+ Sơ đồ bố trí thí nghiệm
Yếu tố thí nghiệm Lô 1** Lô 2* Lô 3** Lô 4*
Số con đầu kỳ (n) 45 45 45 45
Giai đoạn 0 - 2 tuần tuổi
CP khẩu phần (%) 23 23 21 21
Giai đoạn 3 - 5 tuần tuổi
CP khẩu phần (%) 21 21 19 19
Giai đoạn 6 tuần tuổi
CP khẩu phần (%) 19 19 17 17
Ghi chú: CP là hàm l−ợng protein thô
** Hàm l−ợng protein thô của khẩu phần đ−ợc xác định bằng hệ số chuyển đổi nitơ thành protein thô riêng của từng nguyên liệu thức ăn. Sử dụng hệ số của Mossé (1990).
* Hàm l−ợng protein thô của khẩu phần đ−ợc xác định bằng hệ số chung là 6,25.
3.3.3.2. Nuôi d−ỡng và chăm sóc đàn gà
Gà ở tất cả các lô thí nghiệm đều đ−ợc chăm sóc nuôi d−ỡng nh− nhau (theo qui trình của Công ty CP), chỉ khác nhau về các mức protein.
3.3.3. Xác định thành phần hoá học và giá trị dinh d−ỡng của thức ăn thí nghiệm
Ph−ơng pháp phân tích thành phần hoá học theo AOAC (1975)[33], TCVN - 86 (Tiêu chuẩn Việt Nam - Thức ăn chăn nuôi - Tổng cục đo l−ờng chất l−ợng - 1986)[29] và ph−ơng pháp phân tích thức ăn của bộ môn Thức ăn gia súc Tr−ờng Đại học Nông nghiệp I (Vũ Duy Giảng và CS, 1989)[3].
+ Ph−ơng pháp lấy mẫu trung bình: đ−ợc tiến hành theo tiêu chuẩn nhà n−ớc-TCVN 4325-86[24].
+ Định l−ợng hàm l−ợng n−ớc và vật chất khô (VCK) theo tiêu chuẩn Việt nam, TCVN 4326-86[25].
Hàm l−ợng n−ớc trong thức ăn là khối l−ợng n−ớc mất đi khi sấy mẫu ở 103 ± 2oC đến khối l−ợng không đổi và đ−ợc biểu thị bằng phần trăm khối l−ợng mẫu đ−a vào thử.
Tỷ lệ VCK (%) = 100 - % n−ớc
+ Định l−ợng hàm l−ợng tro thô: theo tiêu chuẩn Việt nam, TCVN 4327-86[26]. Tro hoá mẫu thức ăn ở nhiệt độ 500-550oC.
+ Định l−ợng hàm l−ợng protein thô (CP): theo tiêu chuẩn Việt nam, TCVN 4328-86[27] và AOAC (1975)[33], bằng ph−ơng pháp Microkjeldahl.
Tất cả các dạng nitơ có trong cơ thể hoặc trong các mô đ−ợc gọi là nitơ tổng số. Nitơ có trong thành phần axit amin của protein là nitơ protein, nitơ không có trong thành phần protein nh− muối vô cơ, axit nitric, các axit amin tự do, peptit, urê và các dẫn xuất của urê, các ancaloit, các bazơ purin và pyrimidin... là nitơ phi protein.
Tr−ớc tiên, mẫu đ−ợc vô cơ hóa bằng axit sunphuric đặc ở nhiệt độ cao và có chất xúc tác. Các phản ứng của quá trình vô cơ hoá đ−ợc xảy ra theo ph−ơng trình 2.3.1, 2.3.2, 2.3.3, 2.3.4 và 2.3.5.
2 H2SO4 2 H2O + 2 SO2 + O2 (Ph−ơng trình 2.3.1)
oxi tạo thành trong phản ứng lại oxi hoá các nguyên tố khác. Các phân
tử chứa nitơ d−ới tác dụng của H2SO4 tạo thành NH3. Ví dụ, protein bị thuỷ phân thành axit amin; C và H của axit amin tạo thành CO2 và H2O, còn N đ−ợc giải phóng d−ới dạng NH3 kết hợp với H2SO4 d− tạo thành (NH4) 2SO4 tan trong dung dịch.
2 NH3 + H2SO4 (NH4) 2SO4 (Ph−ơng trình 2.3.2)
Các nguyên tố P, K, Ca, Mg... chuyển thành dạng oxit P2O5, K2O, CaO. MgO...
Đuổi amoniac ra khỏi dung dịch bằng NaOH
(NH4) 2SO4 + 2 NaOH Na2SO4 + H2O + 2NH3 (Ph−ơng trình 2.3.3) NH3 bay ra cùng với n−ớc sang bình hứng, bình hứng chứa axit boric (H3BO3)
2NH4OH + 4H3BO3 = (NH4) 2B4O7 + 7H2O (Ph−ơng trình 2.3.4) hoặc H2SO4, phản ứng xảy ra theo ph−ơng trình 2.3.5
2NH4OH + H2SO4 (NH4) 2SO4 + 2H2O (Ph−ơng trình 2.3.5) * Hoá chất và dụng cụ
+ Hoá chất
- H2SO4 đậm đặc, 98% - Chất xúc tác HClO4 70%
- Dung dịch NaOH 33%
- axit boric H3BO3 2,5%
- Dung dịch chỉ thị - Tashiro (hỗn hợp một phần dung dịch metyl đỏ 0,2% trong dung dịch alcohol với 5 phần dung dịch bromocresol lá cây 0,2% trong alcohol)
- Dung dịch HCl 0,1N + Dụng cụ
- Máy công phá, nhiệt độ lớn hơn 3000C
- Máy cất (bán tự động), đặt đ−ợc thời gian cất, bơm hoá chất.
- Bình tam giác 250ml
- Burrette; Pipette; ống đong
- ống kjeldahl * Thủ tục tiến hành
+ Chuẩn bị mẫu: mẫu đã đ−ợc làm sạch, sấy khô, nghiền nhỏ và cho qua rây 0,1mm.
+ Công phá mẫu
- Cân 0,1 - 0,2g mẫu cho vào ống kjeldahl, cho tiếp10ml H2SO4 đặc vào ốngvà lắc nhẹ cho mẫu thấm đều, để yên ít nhất 30 phút hoặc qua đêm.
- Công phá: đ−a ống kjeldahl vào lò, đốt ở nhiệt độ 2600C cho đến khi thấy khói màu trắng bay ra (SO2). Nhấc ống ra để nguội, cho vào ống 5-7 giọt HClO4 70% rồi đun tiếp ở nhiệt độ 2600C, sau khoảng 10 phút ch−a thấy dung dịch trắng thì nhấc ống ra để nguội cho tiếp 1-2 giọt HClO4 70% vào, đun tiếp đến khi dung dịch trong suốt (dung dịch này đ−ợc dùng để cất nitơ).
- Chuẩn bị bình cất: bình tam giác 250ml, cho vào bình 25ml H3BO3 2,5% + 3 giọt chỉ thị Tashiro. Đặt bình tam giác vào ổ cất mẫu (nhúng ngập đầu ng−ng).
- Cho mẫu vào ống cất, cho 3 giọt chỉ thị Tashiro (màu đỏ), bơm NaOH 33% cho đến khi xuất hiện màu xanh thì dừng lại. Thực hiện quá trình cất trong 5 phút. Trong quá trình cất khi NH4+ đ−ợc ng−ng sang bình hứng thì nhấc bình hứng xuống, không để ngập đầu ng−ng trong bình hứng nữa.
+ Chuẩn độ nitơ (N) trong bình hứng bằng HCl 0,1N cho đến khi dung dịch chuyển từ xanh sang đỏ thì dừng lại. Ghi lại l−ợng HCl đã dùng. * Tính toán kết quả
ml axit x N của axit x 1,40 %N = ---
Khối l−ợng mẫu(g) Protein thô (%) = %N x k
(k là hệ số chuyển đổi nitơ thành protein thô)
+ Định l−ợng hàm l−ợng nitơ phi protein (NPP): Theo ph−ơng pháp của Hayward, J. W (1975)[52]. Ph−ơng pháp này cho phép tính tỷ lệ % nitơ phi protein trong nitơ tổng số của mẫu. Nitơ phi protein có thể từ urê, axit nucleic, glucozamin,...
Ph−ơng pháp phân tích
Cân 1-2g mẫu đã nghiền nhỏ, cho vào bình thuỷ tinh có dung tích 120 ml. Cho thêm vào 10 - 20 viên bi thuỷ tinh và 25ml n−ớc. Lắc và khuấy trong 10 phút và để lắng 30 phút.
Cho thêm vào 25ml dung dịch axit tricloaxêtic 20%, khuấy đều 10 phút, để yên trong tủ lạnh 3 giờ và lọc. Dung dịch lọc phải trong, có thể lọc lại phần dịch đầu nếu cần. Xác định nitơ phi protein của một phần dịch lọc.−
Tính tỷ lệ % nitơ phi protein trong nitơ tổng số của mẫu.
Định l−ợng theo tiêu chuẩn Việt nam,TCVN 4321-86[23].
+ Định l−ợng hàm l−ợng xơ thô theo TCVN 4329-86[28].
Thuỷ phân mẫu bằng dung dịch axit và kiềm trong thời gian nhất định để tách các chất protein, chất béo, bột đ−ờng... ra khỏi mẫu. Phần còn lại là xơ thô, gồm: hemixelluloz, xelluloz, lignin, silic...
+ Dẫn xuất không nitơ (DXKN)
DXKN(%) = 100 - (%n−ớc + %protein thô + %chất béo thô + %xơ thô + %khoáng tổng số)
+ Ước tính giá trị năng l−ợng trao đổi (ME) của một số nguyên liệu thức ăn dùng trong chăn nuôi gà
Tính năng l−ợng trao đổi ch−a hiệu chỉnh (ME1) của thức ăn theo công thức của Nerhing, 1973 (Viện Chăn Nuôi, 1995)[30], sau đó −ớc tính giá trị ME hiệu chỉnh (MEc) theo công thức của Hill và Anderson (1958)[53]. (Hiệu chỉnh theo l−ợng nitơ (N) tích luỹ trong cơ thể, 1 g N tích luỹ có giá trị 8,22 kcal năng l−ợng).
ME1 = 4,26 x1 + 9,5 x2 + 4,23 x3 + 4,23 x4 (kcal ME/kg)
Trong đó: x1, x2, x3, x4 lần l−ợt là protein tiêu hoá, chất béo tiêu hoá, xơ tiêu hoá và dẫn xuất không nitơ tiêu hoá (g/kg thức ăn).
MEc = ME1 - N (g) tích luỹ trong cơ thể x 8,22 Kcal/g
Để tìm l−ợng nitơ của thức ăn tích luỹ trong cơ thể gia cầm các tác giả đã dùng số liệu của Blum, 1988 (Viện Chăn Nuôi, 1995)[30]: gà tr−ởng thành, nitơ tích luỹ bằng 0; Gà mái đẻ và gà sinh tr−ởng cuối kỳ nitơ tích luỹ bằng 30% nitơ thức ăn; Gà sinh tr−ởng đầu kỳ nitơ tích luỹ bằng 40% nitơ thức ăn. Để thuận tiện, các tác giả đã chọn con số 35% để tính toán cho tất cả các loại thức ăn cho gia cầm.
3.3.4.1. Tỷ lệ nuôi sống (%): Hàng ngày ghi chính xác số gà chết của từng lô thí nghiệm. Kết thúc thí nghiệm tính tỷ lệ nuôi sống của đàn gà theo công thức:
Số con còn sống đến cuối kỳ
Tỷ lệ nuôi sống (%) = --- x 100 Số con đầu kỳ
3.3.4.2. Khối l−ợng gà qua các tuần tuổi (g/con): cân gà tại các thời điểm 1, 7, 14, 28, 35 và 42 ngày tuổi. Cân vào giờ qui định tr−ớc khi cho ăn, cân vào buổi sáng. Cân từng con một. Cân bằng cân điện tử có độ chính xác
±0,1g.
3.3.4.3. Độ sinh tr−ởng tuyệt đối (G): Công thức tính:
W1-W0
G = --- (g/con/ngày) T1-T0
Trong đó:
G: Độ sinh tr−ởng tuyệt đối
W0: Khối l−ợng cơ thể gà tại thời điểm T0 (g) W1: Khối l−ợng cơ thể gà tại thời điểm T1 (g) T0: Thời điểm khảo sát tr−ớc
T1: Thời điểm khảo sát sau
3.3.4.4. L−ợng thức ăn thu nhận (LTĂTN):
Hàng ngày cân chính xác l−ợng thức ăn đổ vào máng cho gà ăn vào giờ nhất định trong ngày, hôm sau vét sạch l−ợng thức ăn còn thừa trong máng và đem cân lại. L−ợng thức ăn thu nhận hàng ngày đ−ợc tính theo công thức:
∑ l−ợng thức ăn cho ăn - ∑ l−ợng thức ăn thừa LTĂTN = --- (g/con/ngày) Số gà trong lô ( nhóm)
3.3.4.5. Hiệu quả sử dụng thức ăn (HQSDTĂ):Chính là tiêu tốn thức ăn cho 1 kg tăng trọng. Tính bằng công thức:
HQSDTĂ = L−ợng thức ăn thu nhận của lô thí nghiệm(kg)/tăng trọng của lô thí nghiệm (kg)
3.3.4.6. Hiệu quả sử dụng protein (gam protein/ 1kg TT)
HQSD protein = HQSDTĂ (gTĂ/kgTT) x % CP khẩu phần
3.3.4.7. Tỷ lệ hữu hiệu của protein (PER):
Số gam tăng trọng Tính bằng công thức: PER = ---
1 gam protein ăn vào
3.3.4.8. Giá thành thức ăn (đồng/kg): giá thành thức ăn tổng hợp đ−ợc tính dựa vào giá các nguyên liệu trong từng khẩu phần thí nghiệm.
3.3.4.9. Chi phí thức ăn (CPTA) cho 1 kg tăng trọng (đồng/kg tăng trọng)
∑ TăTN (kg) x giá 1 kg TA CPTA/kg TT = ---
Khối l−ợng tăng (kg) (CPTA/kgTT = HQSDTĂ x giá 1kg TA)
3.3.4.10. Chỉ số sản xuất - PN (Production Number)
Khối l−ợng cơ thể (g) x Tỷ lệ nuôi sống (%) PN = ---
10 x [ Thời gian nuôi (ngày) x TTTA/kgTT ]
3.3.4.11. Các chỉ tiêu đánh giá năng suất và chất l−ợng thịt:
Sau thí nghiệm chọn mỗi lô 6 con (3 trống và 3 mái) có khối l−ợng cơ thể t−ơng đ−ơng khối l−ợng trung bình của lô để mổ khảo sát. Xác định theo ph−ơng pháp của Uỷ ban gia cầm, Viện Hàn lâm khoa học Nông nghiệp Đức - dẫn theo Nguyễn Chí Bảo (1978)[2]. Các chỉ tiêu cần xác định:
+ Khối l−ợng sống (g): là khối l−ợng cân sau khi cho gà nhịn đói 12 - 18 giờ, chỉ cho uống n−ớc.
+ Khối l−ợng móc hàm (g): là khối l−ợng sau khi cắt tiết, vặt lông và bỏ nội tạng.
Khối l−ợng móc hàm
+ Tỷ lệ móc hàm (%) = --- x 100 Khối l−ợng sống
+ Khối l−ợng thân thịt (g): là khối l−ợng móc hàm trừ đi khối l−ợng chân (cắt ở khuỷu) và khối l−ợng đầu (cắt ở đoạn giữa x−ơng chẩm và x−ơng atlat)
Khối l−ợng thân thịt
+ Tỷ lệ thân thịt (%) = --- x 100 Khối l−ợng sống
+ Khối l−ợng thịt đùi (g): là khối l−ợng thịt đùi trái (bỏ da, x−ơng) nhân đôi. Tỷ lệ thịt đùi đ−ợc tính theo hai công thức:
Khối l−ợng thịt đùi + Tỷ lệ thịt đùi (% ) = --- x 100 Khối l−ợng sống Khối l−ợng thịt đùi Tỷ lệ thịt đùi (%) = --- x 100 Khối l−ợng thân thịt
+ Khối l−ợng thịt ngực (g): là khối l−ợng cơ ngực trái (bỏ da và x−ơng) nhân đôi. Tỷ lệ thịt ngực đ−ợc tính theo hai công thức:
Khối l−ợng thịt ngực + Tỷ lệ thịt ngực (%) = --- x 100 Khối l−ợng sống Khối l−ợng thịt ngực Tỷ lệ thịt ngực (%) = --- x 100 Khối l−ợng thân thịt
+ Khối l−ợng mỡ bụng (g): là khối l−ợng hai lá mỡ Khối l−ợng mỡ
+Tỷ lệ mỡ bụng (%) = --- x 100 Khối l−ợng sống
+ Thành phần hoá học của thịt đùi và thịt ngực (hàm l−ợng n−ớc, protein và lipit) phân tích theo tiêu chuẩn Việt Nam (TCVN - 4327, 86; 4328, 86; 4331, 86)[29].