(Khóa luận tốt nghiệp) Đánh giá tác dụng ức chế enzym Acetylcholinesterase in vitro của các phân đoạn dịch chiết Hoàng liên (Coptis chinensis Franch)

(Khóa luận tốt nghiệp) Đánh giá tác dụng ức chế enzym Acetylcholinesterase in vitro của các phân đoạn dịch chiết Hoàng liên (Coptis chinensis Franch)(Khóa luận tốt nghiệp) Đánh giá tác dụng ức chế enzym Acetylcholinesterase in vitro của các phân đoạn dịch chiết Hoàng liên (Coptis chinensis Franch)(Khóa luận tốt nghiệp) Đánh giá tác dụng ức chế enzym Acetylcholinesterase in vitro của các phân đoạn dịch chiết Hoàng liên (Coptis chinensis Franch)(Khóa luận tốt nghiệp) Đánh giá tác dụng ức chế enzym Acetylcholinesterase in vitro của các phân đoạn dịch chiết Hoàng liên (Coptis chinensis Franch)(Khóa luận tốt nghiệp) Đánh giá tác dụng ức chế enzym Acetylcholinesterase in vitro của các phân đoạn dịch chiết Hoàng liên (Coptis chinensis Franch)(Khóa luận tốt nghiệp) Đánh giá tác dụng ức chế enzym Acetylcholinesterase in vitro của các phân đoạn dịch chiết Hoàng liên (Coptis chinensis Franch)(Khóa luận tốt nghiệp) Đánh giá tác dụng ức chế enzym Acetylcholinesterase in vitro của các phân đoạn dịch chiết Hoàng liên (Coptis chinensis Franch)(Khóa luận tốt nghiệp) Đánh giá tác dụng ức chế enzym Acetylcholinesterase in vitro của các phân đoạn dịch chiết Hoàng liên (Coptis chinensis Franch)(Khóa luận tốt nghiệp) Đánh giá tác dụng ức chế enzym Acetylcholinesterase in vitro của các phân đoạn dịch chiết Hoàng liên (Coptis chinensis Franch)(Khóa luận tốt nghiệp) Đánh giá tác dụng ức chế enzym Acetylcholinesterase in vitro của các phân đoạn dịch chiết Hoàng liên (Coptis chinensis Franch)(Khóa luận tốt nghiệp) Đánh giá tác dụng ức chế enzym Acetylcholinesterase in vitro của các phân đoạn dịch chiết Hoàng liên (Coptis chinensis Franch)(Khóa luận tốt nghiệp) Đánh giá tác dụng ức chế enzym Acetylcholinesterase in vitro của các phân đoạn dịch chiết Hoàng liên (Coptis chinensis Franch)(Khóa luận tốt nghiệp) Đánh giá tác dụng ức chế enzym Acetylcholinesterase in vitro của các phân đoạn dịch chiết Hoàng liên (Coptis chinensis Franch)(Khóa luận tốt nghiệp) Đánh giá tác dụng ức chế enzym Acetylcholinesterase in vitro của các phân đoạn dịch chiết Hoàng liên (Coptis chinensis Franch)(Khóa luận tốt nghiệp) Đánh giá tác dụng ức chế enzym Acetylcholinesterase in vitro của các phân đoạn dịch chiết Hoàng liên (Coptis chinensis Franch)(Khóa luận tốt nghiệp) Đánh giá tác dụng ức chế enzym Acetylcholinesterase in vitro của các phân đoạn dịch chiết Hoàng liên (Coptis chinensis Franch)(Khóa luận tốt nghiệp) Đánh giá tác dụng ức chế enzym Acetylcholinesterase in vitro của các phân đoạn dịch chiết Hoàng liên (Coptis chinensis Franch)(Khóa luận tốt nghiệp) Đánh giá tác dụng ức chế enzym Acetylcholinesterase in vitro của các phân đoạn dịch chiết Hoàng liên (Coptis chinensis Franch)(Khóa luận tốt nghiệp) Đánh giá tác dụng ức chế enzym Acetylcholinesterase in vitro của các phân đoạn dịch chiết Hoàng liên (Coptis chinensis Franch)(Khóa luận tốt nghiệp) Đánh giá tác dụng ức chế enzym Acetylcholinesterase in vitro của các phân đoạn dịch chiết Hoàng liên (Coptis chinensis Franch)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC NGUYỄN BÍCH HẠNH ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG ỨC CHẾ ENZYM ACETYLCHOLINESTERASE IN VITRO CỦA CÁC PHÂN ĐOẠN DỊCH CHIẾT HOÀNG LIÊN (COPTIS CHINENSIS FRANCH) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC HÀ NỘI - 2017 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC NGUYỄN BÍCH HẠNH ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG ỨC CHẾ ENZYM ACETYLCHOLINESTERASE IN VITRO CỦA CÁC PHÂN ĐOẠN DỊCH CHIẾT HỒNG LIÊN (COPTIS CHINENSIS FRANCH) KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC (NGÀNH DƯỢC HỌC) Khóa: QH.2012.Y Người hướng dẫn: TS BÙI THANH TÙNG HÀ NỘI - 2017 LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa luận này, tơi nhận giúp đỡ nhiệt tình thầy bạn Với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, xin trân trọng cảm ơn TS Bùi Thanh Tùng – giảng viên môn Dược lý – Dược lâm sàng Khoa Y Dược - Trường Đại học Quốc gia Hà Nội tận tình bảo, hướng dẫn giúp đỡ suốt q trình thực hồn thành nghiên cứu Trong q trình thực khóa luận, tơi nhận nhiều giúp đỡ từ thầy cô phụ trách phịng thí nghiệm Khoa Tơi xin chân thành cảm ơn Khoa Y dược tạo điều kiện tốt sở vật chất, dụng cụ phịng thí nghiệm cho tơi thực tốt đề tài nghiên cứu Tôi xin trân trọng gửi lời cảm ơn tới tồn thầy mơn Dược lý – Dược lâm sàng tồn thể thầy cô Khoa Y Dược giúp đỡ, trang bị cho tơi nhiều điều bổ ích thực hành trang q báu giúp tơi thêm vững bước đường tới Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn đặc biệt ý nghĩa tới ông bà, bố mẹ, người thân bạn bè bảo, động viên, chia sẻ, sát cánh bên để vượt qua khó khăn q trình học tập nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng năm 2017 Sinh viên Nguyễn Bích Hạnh A ACh AChE ACTI BuOH CV DTNB EtOAc EtOH HCl HPLC IC50 IU MeOH NXB pH RSD SD STT TCL UV DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Độ hấp thụ (Absorbance) Acetylcholin Enzym actylcholinesterase Acetylthiocholine iodid Butanol Hệ số biến thiên (Coefficient of Variation) Acid 5-5’-dithiobis-2-nitrobenzoic Ethyl acetat Ethanol Acid hydro clorid Sắc ký lỏng hiệu cao (High Performance Liquid Chromatography) Nồng độ ức chế 50% (Inhibitory Concentration 50%) Đơn vị quốc tế (International Unit) Methanol Nhà xuất Chỉ số đo hoạt động ion hidro (Hydrogen power) Độ lệch chuẩn tương đối (Relative Standard Deviation) Độ lệch chuẩn (Standard Deviation) Số thứ tự Sắc ký lớp mỏng (Thin Layer Chromatography) Giá trị trung bình Tia tử ngoại (Ultraviolet) DANH MỤC CÁC BẢNG STT Tên bảng Bảng 3.1 Thành phần hỗn hợp phản ứng Bảng 3.2 Giá trị IC50 phân đoạn dịch chiết từ Hoàng liên chân gà Berberin clorid Trang 27 28 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Hồng liên chân gà (Coptis chinensis Franch) Hình 1.2 Cơng thức cấu tạo số chất thân rễ Hồng liên .7 Hình 1.3 Các vị trí hoạt động enzym AChE 14 Hình 2.1 Sơ đồ chiết xuất phân đoạn dược liệu Hoàng liên 20 Hình 2.2 Quá trình phản ứng diễn phương pháp đo quang sử dụng thuốc thử Ellman 21 Hình 2.3 Sơ đồ quy trình thử nghiệm tác dụng ức chế AChE in vitro 23 Hình 2.4 Sơ đồ quy trình đánh giá đặc điểm động học ức chế AChE in vitro 25 Hình 3.1 Đồ thị biểu diễn khả ức chế hoạt độ enzym AChE phân đoạn dịch chiết Hoàng liên chân gà 29 Hình 3.2 Đồ thị biểu diễn khả ức chế hoạt độ enzym AChE Berberin clorid 29 Hình 3.3 Đồ thị Lineweaver-Burk cho phân đoạn dịch chiết n-BuOH 31 Hình 3.4 Đồ thị Dixon cho phân đoạn dịch chiết n-BuOH để xác định số ức chế Ki 31 MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ MỞ ĐẦU CHƯƠNG - TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Hoàng liên chân gà (Coptis chinensis Franch) – Họ Hoàng liên (Ranunculaceae) 1.1.1 Đặc điểm thực vật 1.1.2 Phân bố, trồng trọt thu hái 1.1.3 Thành phần hóa học 1.1.4 Bộ phận dùng 1.1.5 Tác dụng dược lý 1.2 Tổng quan nghiên cứu sàng lọc tác dụng ức chế enzym Acetylcholinesterase in vitro 13 1.2.1 Acetylcholin, enzym Acetylcholinesterase giả thuyết vai trò hệ cholinergic bệnh Alzheimer 13 1.2.2 Một số phương pháp thường dùng nghiên cứu sàng lọc tác dụng ức chế enzym Acetylcholinesterase in vitro 15 CHƯƠNG - ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Nguyên vật liệu 19 2.1.1 Mẫu nghiên cứu 19 2.1.2 Hóa chất, dung mơi 19 2.1.3 Máy móc, thiết bị dụng cụ 19 2.2 Phương pháp nghiên cứu 19 2.2.1 Phương pháp đánh giá tác dụng ức chế enzym AChE 19 2.2.2 Phương pháp đánh giá đặc điểm động học ức chế enzym AChE 24 2.3 Phương pháp xử lý số liệu 25 CHƯƠNG - KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 27 3.1 Kết đánh giá tác dụng ức chế AChE 27 3.2 Kết đánh giá đặc điểm động học ức chế AChE 30 3.3 Bàn luận 32 3.3.1 Về kết đánh giá tác dụng ức chế enzym Acetylcholinesterase in vitro phân đoạn dịch chiết Hoàng liên (Coptis chinensis Franch) 32 3.3.2 Về kết đánh giá đặc điểm động học ức chế enzym Acetylcholinesterase phân đoạn dịch chiết Hoàng liên 33 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO MỞ ĐẦU Cuộc sống đại ngày phát triển với gia tăng bệnh suy giảm trí nhớ - đặc biệt Alzheimer không người cao tuổi mà chí người trẻ tuổi mắc phải Năm 2012, Tổ chức y tế giới cảnh báo mối lo ngại bệnh gây đưa bệnh Alzheimer vào vấn đề sức khỏe cộng đồng cần ưu tiên [11] Nghiên cứu cho thấy có khoảng 35 triệu người mắc bệnh Alzheimer, thống kê châu Á có khoảng gần 13 triệu người mắc bệnh Alzheimer, dự đốn đến năm 2050 số tăng lên đến 62,8 triệu người Việt Nam có khoảng triệu người bị sa sút trí tuệ mà dạng điển hình Alzheimer Đây coi bệnh nặng nhóm bệnh sa sút trí tuệ, mối quan tâm hàng đầu nhà lão khoa toàn giới nước ta tuổi thọ trung bình ngày cao, số người mắc bệnh ngày nhiều [6] Bệnh nhân bị Alzheimer bị giảm khả xét đốn, định hướng khơng gian thời gian, ngơn ngữ, tư nhận thức hành động ảnh hưởng nặng nề đến chức chất lượng sống, gây nhiều khó khăn cho người bệnh, cho gia đình xã hội Các thuốc điều trị Alzheimer chủ yếu gồm thuốc ức chế cholinesterase, thuốc kháng thụ thể N-methyl – D – Aspartat, thuốc tăng cường hoạt tính serotonin Ba nhóm thuốc đa số thuốc tân dược, giá thành cịn tương đối cao có nhiều tác dụng phụ khơng mong muốn Do nhu cầu nghiên cứu phát triển thuốc có nguồn gốc từ dược liệu để hỗ trợ điều trị Alzheimer cần thiết Acetylcholinesterase (AChE) enzym có mặt khe synap hệ thần kinh trung ương có vai trị trì ổn định nồng độ chất dẫn truyền thần kinh Acetylcholin [8] Với việc Whitehouse lần đưa giả thuyết vai trò hệ cholinergic bệnh Alzheimer vào năm 1982, AChE xác định đích phân tử bệnh Trên sở đó, vài phương pháp thử in vitro xây dựng Trong đó, phương pháp đo quang sử dụng thuốc thử Ellman sử dụng phổ biến nghiên cứu sàng lọc tác dụng ức chế AChE in vitro Đây hướng quan trọng nhận nhiều quan tâm nhà khoa học giới nước, đặc biệt thuốc có nguồn gốc dược liệu [27,34] Theo Y học cổ truyền Trung Quốc, Hoàng liên thân rễ phơi khơ nhiều loại Hồng liên chân gà như: Coptis chinensis Franch, Coptis teeta Wall, Coptis teetoides C.Y Cheng, Coptis deltoidea C.Y Cheng et Hsisao, Coptis quinquesecta… thuộc họ Hoàng liên – Ranunculaceae biết đến với nhiều công dụng kháng khuẩn, chống virus, chống viêm Ở Việt Nam, Hoàng liên chân gà (Coptis chinensis Franch) dùng phổ biến thuốc với nhiều tác dụng tốt Gần đây, số nghiên cứu cho thấy hợp chất berberin số alkaloid chiết xuất từ dược liệu có tiềm ức chế enzym AChE cao mở hướng điều trị bệnh Alzheimer Nhận thấy, dịch chiết Hoàng liên có chứa lượng lớn alkaloid đặc biệt berberin có tiềm lớn nghiên cứu phát triển thuốc từ dược liệu để phòng điều trị bệnh thần kinh, suy giảm trí nhớ Alzheimer Vì vậy, tiến hành nghiên cứu đề tài “Đánh giá tác dụng ức chế enzym Acetylcholinesterase in vitro phân đoạn dịch chiết Hoàng liên (Coptis chinensis Franch)” với mục tiêu: Mục tiêu 1: Đánh giá tác dụng ức chế enzym AChE phân đoạn dịch chiết Hoàng liên (Coptis chinensis Franch) Mục tiêu 2: Đánh giá đặc điểm động học ức chế enzym AChE phân đoạn dịch chiết ... Mục tiêu 1: Đánh giá tác dụng ức chế enzym AChE phân đoạn dịch chiết Hoàng liên (Coptis chinensis Franch) Mục tiêu 2: Đánh giá đặc điểm động học ức chế enzym AChE phân đoạn dịch chiết CHƯƠNG... Acetylcholinesterase in vitro phân đoạn dịch chiết Hoàng liên (Coptis chinensis Franch) 32 3.3.2 Về kết đánh giá đặc điểm động học ức chế enzym Acetylcholinesterase phân đoạn dịch chiết Hoàng liên 33 KẾT... GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC NGUYỄN BÍCH HẠNH ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG ỨC CHẾ ENZYM ACETYLCHOLINESTERASE IN VITRO CỦA CÁC PHÂN ĐOẠN DỊCH CHIẾT HOÀNG LIÊN (COPTIS CHINENSIS FRANCH) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI