Luận án nghiên cứu squalene từ vi tảo biển dị dưỡng schizochytrium mangrovei pq6 định hướng làm nguyên liệu cho thực phẩm bảo vệ sức khỏe, mỹ phẩm và dược phẩm

1 MỞ ĐẦU Tính cấp thiết luận án Việt Nam có 3.200 km bờ biển với nguồn sinh vật biển nhiệt Ďới Ďa dạng, phong phú thành phần loài giàu hợp chất tự nhiên ứng dụng cơng nghiệp thực phẩm, nơng nghiệp, y dược Trong Ďó vi tảo với ưu Ďiểm giàu dinh dưỡng, có kích thước tế bào nhỏ (< 10 µm) phù hợp với miệng ấu trùng thủy hải sản, dễ tiêu hóa, khơng Ďộc, có tốc Ďộ sinh trưởng cao sức chống chịu cao với Ďiều kiện khắc nghiệt mơi trường, Ďược coi mắt xích Ďầu tiên, nguồn sinh khối sơ cấp quan trọng chuỗi thức ăn biển Ngoài ra, sinh khối vi tảo chứa nhiều hợp chất có hoạt tính sinh học quan trọng cho người Ďộng vật nuôi như: loại sắc tố, vitamin, khống chất, protein, acid béo khơng bão hịa Ďa nối Ďôi (polyunsaturated fatty acid - PUFA) Ďặc biệt squalene Squalene tripterpene tự nhiên, tiền chất steroid Ďộng, thực vật thường Ďược sử dụng sản phẩm dinh dưỡng, chăm sóc sức khỏe, mỹ phẩm y học Squalene Ďược ứng dụng rộng rãi cơng nghiệp mỹ phẩm, có tác dụng chống khơ da làm mềm da, có vai trị bảo vệ da khỏi tác hại ánh sáng, tia UV gây Các nghiên cứu dịch tễ học Ďã cho thấy squalene ức chế hiệu tác nhân hóa học có khả gây ung thư ruột kết, phổi, da Ďộng vật thực nghiệm Squalene cần thiết cho thể chất chống oxy hố tự nhiên có vai trị bảo vệ tế bào khỏi gốc tự oxy phân tử có hoạt tính cao, có khả tăng cường hoạt Ďộng hệ miễn dịch Việc cung cấp thực phẩm chức có thành phần squalene cao (khoảng 500 mg/ngày) Ďã Ďược chứng minh cần thiết cho sức khỏe dinh dưỡng người, làm giảm Ďáng kể bệnh tim mạch ung thư vậy, chúng Ďược dùng phổ biến dược phẩm Cho Ďến nay, nguồn sản xuất squalene Ďược biết Ďến nhiều loại dầu Ďộng, thực vật Tuy nhiên, việc khai thác mức làm ảnh hưởng Ďến bảo tồn nguồn lợi cá biển tự nhiên, phụ thuộc vào thổ nhưỡng, mùa vụ loại trồng có dầu dẫn Ďến nguồn khai thác squalene Ďang dần cạn kiệt Trong Ďó, giới nói chung Việt Nam nói riêng, nhu cầu squalene làm nguyên liệu ngành công nghiệp dược phẩm mỹ phẩm Ďang ngày tăng Do vậy, việc tìm kiếm phát triển nguồn nguyên liệu thay nguồn truyền thống Ďể tách chiết squalene cần thiết Ďang Ďược nhà khoa học nước quan tâm nghiên cứu Trong Ďó, vi sinh vật nói chung vi tảo biển nói riêng nguồn tiềm cho sản xuất squalene quy mô lớn Gần Ďây số loài vi tảo biển dị dưỡng (VTBDD) thraustochytrids Ďược xem nhà máy tế bào tiềm cho sản xuất chất có giá trị cao Ďó có squalene Tuy nhiên việc nghiên cứu squalene Việt Nam Ďược bắt Ďầu từ 2012, kết nghiên cứu dừng việc cung cấp sở khoa học ban Ďầu hàm lượng squalene từ số chủng vi tảo, chưa có Ďược phương pháp tối ưu cho tách chiết, làm giàu tinh squalene; chưa có Ďược Ďiều kiện ni trồng tối ưu vi tảo tiềm có sức sản xuất sinh khối có hàm lượng squalene cao; chưa có Ďược quy trình cơng nghệ tạo chế phẩm squalene có hoạt tính sinh học bảo Ďảm an tồn cho sử dụng theo Ďịnh hướng làm nguyên liệu cho thực phẩm bảo vệ sức khỏe, mỹ phẩm dược phẩm Việt Nam Chính vậy, chúng tơi thực Ďề tài “Nghiên cứu squalene từ vi tảo biển dị dƣỡng Schizochytrium mangrovei PQ6 định hƣớng làm nguyên liệu cho thực phẩm bảo vệ sức khỏe, mỹ phẩm dƣợc phẩm” Mục tiêu nghiên cứu luận án - Sàng lọc xác Ďịnh Ďược Ďiều kiện ni trồng thích hợp chủng Schizochytrium mangrovei PQ6 Việt Nam, tiềm lựa chọn Ďược cho sản xuất squalene - Xác Ďịnh Ďiều kiện thích hợp cho tách chiết, làm squalene từ sinh khối chủng S mangrovei PQ6 lựa chọn Ďược; Ďánh giá Ďộ an toàn tác dụng sinh học, dược lý squalene tách chiết Ďược theo Ďịnh hướng làm nguyên liệu cho thực phẩm bảo vệ sức khỏe, mỹ phẩm dược phẩm Các nội dung nghiên cứu luận án - Sàng lọc Ďược chủng/loài vi tảo biển Việt Nam tiềm cho sản xuất squalene từ số chủng vi tảo biển Việt Nam - Tối ưu Ďiều kiện nuôi cấy Ďể thu Ďược sinh khối tảo có hàm lượng squalene cao chủng tiềm lựa chọn Ďược quy mô bình tam giác; bình lên men 30 Lít - Tối ưu Ďiều kiện tách chiết, làm giàu tinh squalene từ sinh khối chủng vi tảo biển lựa chọn Ďược; xây dựng quy trình tách chiết tinh squalene; xác Ďịnh Ďộ cấu trúc squalene tách chiết Ďược - Đánh giá tính an tồn squalene bao gồm Ďộc tính cấp bán trường diễn, tác dụng sinh dược mơ hình in vivo (mơ hình Ďộng vật thực nghiệm) - Bước Ďầu nghiên cứu chế tác dụng giảm cholesterol squalene mô hình in vitro (mơ hình tế bào) Những đóng góp luận án - Luận án cơng trình Ďầu tiên Việt Nam nghiên cứu cách bản, có hệ thống về: sàng lọc; ni trồng chủng tiềm Schizochytrium mangrovei PQ6 có hàm lượng squalene cao (sản lượng squalene Ďạt Ďược sau trình lên men theo mẻ có bổ sung chất 6,9 g/L); lựa chọn Ďược Ďiều kiện thích hợp cho tách chiết, làm squalene từ chủng PQ6 có Ďộ tinh Ďạt 90- 95%; squalene tách chiết Ďược an tồn, có tác dụng làm giảm cholesterol tổng số làm tăng hàm lượng lipoptrotein có tỷ trọng cao gắn với cholesterol mơ hình Ďộng vật thực nghiệm, Ďịnh hướng làm nguyên liệu cho thực phẩm bảo vệ sức khỏe, mỹ phẩm dược phẩm - Lần Ďầu tiên Việt Nam Ďã chứng minh Ďược squalene tách chiết từ S mangrovei PQ6 có tác dụng giảm cholesterol tăng Ďiều hòa biểu gen tham gia vào q trình hấp thu, vận chuyển, lưu thơng cholesterol từ mô ngoại biên Ďến tế bào gan; bước Ďầu nghiên cứu chế tác dụng giảm triglyceride squalene Ý nghĩa khoa học thực tiễn luận án - Có Ďược dẫn liệu khoa học Ďiều kiện ni trồng thích hợp chủng S mangrovei PQ6 phân lập Ďược từ huyện Ďảo Phú Quốc, tỉnh Kiên Giang vào năm 2006-2008 (lên men theo mẻ có bổ sung chất glucose 22% vào mơi trường nuôi 36 h; bổ sung 0,4% hỗn hợp vitamin (vitamin B1- 45g/L; vitamin B6 - 45 g/L; vitamin B12- 0,25g/L)) cho sinh trưởng Ďạt sinh khối khô (75,41±1,35) g/L, hàm lượng squalene Ďạt (91,53±2,45) mg/g sinh khối khô, sản lượng squalene Ďạt 6,9 g/L - Có Ďược quy trình tách chiết lượng lớn squalene từ chủng S mangrovei PQ6 có Ďộ tinh cao 90- 95%, an tồn Ďạt tiêu chuẩn Ďảm bảo chất lượng Ďịnh hướng làm nguyên liệu cho sản xuất thực phẩm chức năng, mỹ phẩm dược phẩm - Góp phần làm sáng tỏ squalene tách chiết từ chủng PQ6 có tác dụng giảm cholesterol tryglycerol nội bào, tăng hàm lượng cholesterol gắn với lipoprotein có tỷ trọng cao, HDL-C tỷ lệ HDL-C/cholesterol toàn phần máu; giảm cholesterol gắn với LDL-C VLDL-C máu mà không gây ảnh hưởng Ďến phát triển cân nặng thể gan, cholesterol tồn phần tryglyceride mơ hình tế bào Ďộng vật thực nghiệm; bước Ďầu Ďã cung cấp sở khoa học cho việc Ďịnh hướng làm nguyên liệu cho thực phẩm bảo vệ sức khỏe, mỹ phẩm dược phẩm có Bố cục luận án Luận án gồm 148 trang, Ďó phần mở Ďầu trang; Tổng quan tài liệu 39 trang; Vật liệu phương pháp nghiên cứu 22 trang; Kết thảo luận 62 trang; Kết luận kiến nghị trang; Danh mục cơng trình Ďã cơng bố trang; Tài liệu tham khảo 18 trang gồm 179 tài liệu Trong luận án có 19 bảng, 45 hình 28 trang phụ lục CHƢƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung squalene 1.1.1 Tính chất hóa lý squalene Squalene có cấu tạo (2,6,10,15,19,23-hexanmethyltetracosa-2,6,10,14,18,22hexane) - chất trao Ďổi trung gian quan trọng sinh tổng hợp sterol triterpenes Ďộng vật thực vật Squalene chất lỏng dạng dầu, suốt với trọng lượng phân tử 410,7 g/mol, tỷ trọng 0,858 g /mL, nhiệt Ďộ nóng chảy 20°C, hợp chất hịa tan dung mơi hữu khơng hịa tan nước [1, 2] Bảng 1.1 Ďưa số tính chất squalene Ďộ nhớt, tỷ trọng, Ďộ hòa tan thông số khẳng Ďịnh chất kị nước mạnh mẽ phân tử Bảng 1.1 Các thông số lý hóa squalene [3] Tính chất Trọng lượng phân tử Điểm nóng chảy Chi số khúc xạ Độ nhớt 25oC Tỷ trọng Điểm sôi 25oC Điểm chớp cháy Chỉ số Iod Các Ďỉnh hồng ngoại Sức căng bề mặt Khả hòa tan squalene nước Giá trị 410,7 g/mol -75oC 1,499 12 cP 0,858 g/mL 285oC 110oC 381 g/100g 2728, 1668, 1446, 1380, 1150, 1180, 964, 835 cm-1 ~ 32 mN/m 0,124 mg/L 1.1.2 Nguồn gốc cấu trúc squalene Squalene Ďược phát vào năm 1096 nhà nghiên cứu người Nhật, TS Mitsumaru Tsujimoto, chuyên gia dầu chất béo trạm kiểm Ďịnh Cơng nghiệp Tokyo Ơng Ďã phân tách phần khơng xà phịng hóa từ dầu gan cá mập “kuroko - zame” khám phá tồn lượng lớn hydrocacbon khơng bão hịa Tại thời Ďiểm Ďó, TS Mitsumaru Tsujimoto khơng phân tách Ďược hợp chất Tuy nhiên, ông Ďã thu Ďược thành phần bromine dạng bột màu trắng, phân hủy 155oC, Ďó chứa 26,93% C, 3,94% H 69,28% Br Ông Ďưa công thức cho hợp chất C10H18Br4 Mười năm sau, TS Tsujimoto M Ďã thành công việc chưng cất chân không phân Ďoạn dầu từ gan hai cá mập biển sâu, hydrocacbon khơng bão hịa với cơng thức C30H50, Ông gọi “squalene”, từ gốc Latin “Squalus” (cá mập) [4, 5] Năm 1934, Robinson Ďã công bố cấu trúc vòng squalene với phân tử steroit Năm 1936, cấu trúc sinh học squalene Ďược mô tả lần Ďầu tiên nhà nghiên cứu Paul Karrer - người Ďã khám phá cấu trúc hóa học vitamin A E [6] Theo công bố Kohno cộng (1995) squalene hydrocarbon hợp chất béo khơng bão hịa (C30H50), với liên kết Ďôi, chứa Ďơn vị isoprene Ďể cung cấp khung cho tổng hợp cholesterol, acid mật steroit Do cấu trúc liên kết Ďơi sáu nhóm CH3, isoprenoid có tác dụng chống oxy hóa tự nhiên cách mạnh mẽ [7] E Hình 1.1 Cấu trúc hóa học squalene tiền chất [8] A - Cấu trúc hóa học isoprene Các cấu trúc khác squalene: B - Dạng kéo dài, C - Dạng cuộn, D - Dạng giống sterol E - Cấu trúc hóa học squalene Do cấu trúc hóa học squalene, Ďặc biệt mức Ďộ khơng bão hịa cao nên squalene khơng có tính ổn Ďịnh cao mà lại dễ bị oxy hóa Hình 1.1 Ďã cho thấy liên kết Ďơi Ďã cho phép hình thành nên cấu trúc squalene dạng giống sterol, dạng kéo dài cuộn Thật thú vị cấu trúc squalene Ďược tổ chức dạng giống với sterol Hauss cs (2002) Ďã squalane - dạng hydro hóa squalene, Ďược gắn theo chiều ngang màng kép phospholipid Các tác giả nêu Ďã cấu trúc liên kết giúp bảo vệ việc chống lại proton ảnh hưởng tới protein màng [9] Lohner cs (1993) Ďã chứng minh squalene nồng Ďộ % Ďã làm thay Ďổi cấu trúc lục giác cách tăng kích thước ống lục giác ngược Trong trường hợp cấu trúc squalene Ďược cuộn lại tích lũy lớp màng lipid kép (là màng hay vùng màng chứa phân tử lipid) [10] Các thí nghiệm cho thấy squalene màng lưới nội chất thích ứng với dạng cấu trúc gần giống với ergosterol cấu trúc cuộn màng huyết tương chiếm ưu 1.1.3 Các đường sinh tổng hợp squalene động vật, thực vật vi sinh vật Squalene hợp chất trung gian tổng hợp hopanoid, phytosterol 200 triterpenes quan trọng cho màng tế bào [11] Squalene Ďược tổng hợp từ Ďơn vị isopentenyl, iso pentenyl di-phosphate (IPP) thông qua Ďường mevalonate (MVA) dimethyl-allyl-diphosphate (DMAPP) thông qua Ďường methylerytritol phosphate (MEP) [12, 8] Sự tổng hợp squalene thông qua Ďường MVA bắt Ďầu với kết hợp acetyl-CoA với acetyl-CoA khác acetoacetyl-CoA synthase Enzyme Ďược gọi transferyl acetyl-CoA hoạt Ďộng từ hình thành acetoacetyl-CoA Chuỗi phản ứng từ acetoacetyl CoA Ďến mevalonate tiếp tục tạo thành 3-hydroxy-3 methylglutaryl-CoA (HMGCoA) với có mặt adenosine triphosphate (ATP) Ďể tạo thành mevalonate 5phosphate [13] Sau Ďó, tiếp tục phosphoryl hóa phosphomevalonate kinase với diện ATP Ďể tạo thành mevalonate 5-diphosphate Tiếp theo, decacboxyl hóa decarboxylase 5-diphosphate mevalonate Ďể tạo thành IPP, từ Ďây chất Ďể xây dựng hợp chất polyprenyl DMAPP sau Ďó Ďược tạo thành cách Ďồng phân hóa IPP thơng qua isopentanyl diphosphate isomerase Phản ứng ngưng tụ IPP với DMAPP có mặt farnesyl diphosphate synthase Ďã tạo thành geranyl diphosphate (GPP) sau Ďó có q trình ngưng tụ tiếp tục với IPP khác Ďể tạo thành farnesyl diphosphate (FPP) Cuối cùng, squalene synthase Ďược xác Ďịnh enzyme xúc tác cho hình thành gián tiếp NADPH squalene với FPP chất [14, 15, 11] Sinh tổng hợp squalene thông qua Ďường MEP kết hợp hai phân tử FPP Quá trình sinh tổng hợp vi sinh vật bắt Ďầu hình thành 1- deoxy-D-xylulose-5- phosphate (DXP) Ďó DXP-synthase enzyme khác tham gia Ďể hình thành IPP DMAPP Các bước cịn lại từ IPP Ďến FPP giống hệt với Ďường MVA Con đường sinh tổng hợp squalene động vật có vú [8] Ở tế bào Ďộng vật, tổng hợp cholesterol (Hình 1.2A) xảy thơng qua Ďường MVA/isoprenoid Con Ďường bắt Ďầu với acetyl-CoA, Ďược chuyển thành HMG-CoA sau Ďó Ďược khử 3-hydroxy-3-methyl-glutaryl-CoA reductase (HMGR) thành MVA Sự Ďiều hịa Ďược trì cách kích hoạt làm giảm HMGR HMGR loại protein tách rời mạng lưới nội chất chứa vùng cảm ứng sterol xuyên màng, Ďóng vai trị quan trọng thối hóa enzyme proteasome Các nghiên cứu gần Ďây cho thấy có kích thích trực tiếp gián tiếp thối hóa cholesterol, lanosterol oxapseol A B Hình 1.2 Tổng hợp squalene thông qua Ďường MVA Ďộng vật có vú (A) [8] AACT - acetoacetyl-CoA thiolase; FPS - FPP synthase; HMGS - HMG-CoA synthase; HMGR HMG-CoA reductase; IDI - isopentenyl diphosphate isomerase; SQS - squalene synthase; SQE squalene epoxidase Tổng hợp squalene thực vật thông qua Ďường MVA phần bào tan (cytosol) MEP lạp thể (plastid) (B) AACT-acetoacetyl-CoA thiolase; DMAPP dimethylallyl diphosphate; DXP - 1-deoxy-Dxylulose-5-phosphate; DXR - DXP reductoisomerase; DXS - DXP synthase; FPP - farnesyl diphosphate; FPS - FPP synthase; G-3-P - glycerol-3phosphate; GPP - geranyl diphosphate; GGPP - geranylgeranyl diphosphate; HMBPP - (E)-4hydroxy-3-methyl-but-2-enyl pyrophosphate; HMG-CoA - 3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA; HMGS HMG-CoA synthase; HMGR-HMG-CoA reductase; IDI - isopentenyl diphosphateisomerase;IPPisopentenyldiphosphate; MEP - 2-C-methyl-D-erythritol 4-phosphate; MVA - mevalonate; SQSsqualene synthase; ER - endoplasmic reticulum Con đường sinh tổng hợp squalene thực vật [8] Ở thực vật, Ďường sinh tổng hợp sterol khác so với tế bào Ďộng vật nấm Phản ứng sinh tổng hợp từ squalene Ďến phytosterol dẫn Ďến hình thành sterol khác nhau, chẳng hạn sitosterol, stigmasterol, campesterol isofucosterol Trong thực vật, squalene bị oxy hóa thành 2,3-oxidosqualene sau Ďó Ďược chuyển Ďổi thành cycloartenol (9b, 19-cyclo-24-lanosten-3b-ol) thay lanosterol Ďược biết Ďộng vật nấm Isoprenoid thực vật Ďược tổng hợp thơng qua Ďường MVA phần bào tan (cytosol) dẫn Ďến hình thành sterol brassinosteroids ty thể - nơi chuỗi ubiquinone Ďược hình thành [16] Ngồi ra, Ďường MEP, trước Ďây Ďược gọi Ďường không mevalonate DXP, Ďược xảy lạp thể (plastid) dẫn Ďến tổng hợp carotenoids, chuỗi bên chlorophyll, plastoquinone phytohormone dạng isoprenoid (Hình 1.2B) Con đường sinh tổng hợp squalene vi sinh vật [8] Sự tổng hợp squalene vi sinh vật khác khác tùy theo loài Các vi sinh vật nhân sơ (như E coli) hay sinh vật nhân chuẩn (như Saccharomyces cerevisea, Torulaspora delbrueckii Chlamydomonas reinhardtii) sản xuất squalene thông qua Ďường MEP kết hợp hai phân tử FPP Quá trình sinh tổng hợp vi sinh vật bắt Ďầu hình thành 1- deoxy-Dxylulose-5-phosphate (DXP) Ďó DXP-synthase enzyme khác tham gia Ďể hình thành IPP DMAPP Các bước lại từ IPP Ďến FPP giống hệt với Ďường MVA Không giống Ďường MVA, Ďường MEP thường không tạo squalene, với tiến Ďạt Ďược kỹ thuật trao Ďổi chất sinh tổng hợp Ďã cho phép tạo gen mã hóa cho squalene synthase dị hợp mở rộng Ďường MEP Ďể tạo squalene Như vậy, Ďường MEP xảy chủ yếu vi khuẩn có nhân thật (eubacteria) vi khuẩn lam (cyanobacteria), MVA Ďược tìm thấy vi khuẩn cổ (archaea) số eubacteria Nhiều nghiên cứu Ďã xác Ďịnh vai trò sterol tế bào nhân chuẩn Ďã Ďược thực với nấm men hệ thống mơ hình nhân chuẩn Ảnh hưởng sterol Ďến Ďộ bền màng, tính thấm màng, sử dụng nguồn lượng hoạt Ďộng ATPase gắn màng Ďã Ďược nghiên cứu cách sử dụng nấm men Ďột biến có khiếm khuyết Ďường sinh tổng hợp ergosterol Giống tế bào nhân chuẩn khác, hình thành sterol nấm men Ďược chia thành hai phần Phần Ďầu tiên có tên mevalonate Ďường isoprenoid bắt Ďầu với acetyl-CoA dẫn Ďến hình thành FPP Ďược sử dụng làm chất cho tuyến sinh tổng hợp (Hình 1.3) A B C Hình 1.3 Sinh tổng hợp squalene thơng qua Ďường MEP vi khuẩn E.coli (A) [8] DMAPP - dimethylallyl diphosphate; DXR - DXP reductoisasease; FPP - farnesyl diphosphate; FPP G-3-P, glycerol-3-phosphate; HMBPP - (E) -4-hydroxy-3-methyl- 2-butenyl pyrophosphate; HMGCoA - 3hydroxy-3-methyl-glutaryl-CoA; IDI - isopentenyl diphosphate isomerase; IPP - isopentenyl diphosphate; MEP - 2-C-methyl-D-erythritol 4-phosphate; SQS - synthase squalene Sinh tổng hợp squalene nấm men Saccharomyces cerevisae (B) DMAPP - dimethylallyl diphosphate; Erg1p, SQE; Erg7p, lanosterol synthase; Erg9p, SQS; Erg20p, FPP synthase; FPP, farnesyl diphosphate; GPP, geranyl diphosphate; HMG-CoA, 3-hydroxy-3-methyl-glutaryl-CoA; Hmg1p, Hmg2p, HMG-CoA reductase; Idi1p, isopentenyl diphosphate isomerase; IPP, isopentenyl diphosphate; MVA, mevalonate Sinh tổng hợp squalene thông qua Ďường MEP vi tảo lục Botrycoccus braunii (C) BS, botryococcene synthase; DMAPP, dimethylallyl diphosphate; FPP, farnesyl diphosphate; DXP, 1-deoxy-D-xylulose-5-phosphate; DMAPP, dimethylallyl diphosphate; IPP, isopentenyl diphosphate; MEP, 2-Cmethyl-D-erythritol 4-phosphate; NADPH, nicotinamide adenine dinucleotide phosphate; SQS, synthase squalene; SAM, Sadenosylmethionine Tác giả Xie cộng (2017) Ďã Ďưa mối liên hệ sinh tổng hợp terpenoid docosahexaenoic acid (DHA) lồi VTBDD Schizochytrium [17] (Hình 1.4) Sự kết hợp qua lại sinh tổng hợp acid béo terpenoid với Ďiểm chung chất acetyl-CoA từ chất Ďã cho phép tạo sản phẩm cuối khác acid béo DHA terpenoid Phân tích mức Ďộ biểu gene giai Ďoạn sinh trưởng Ďã cho thấy hoạt tính xúc tác acetyl-CoA 10 carboxylase Ďã bị giảm dần cuối pha log trình tổng hợp squalene lại bắt Ďầu Sự suy giảm nêu Ďã buộc acetyl-CoA phải Ďược phân chia thành hai Ďường chu trình tổng hợp sterol tế bào Schizochytrium Chính vậy, cần phải hiểu rõ chế tổng hợp terpenoid DHA loài vi tảo nhằm Ďiều chỉnh Ďiều kiện ni cấy thích hợp Ďể thu Ďược hàm lượng squalene cao Hình 1.4 Mối quan hệ sinh tổng hợp terpenoid DHA Thraustochytrids [17] 1.1.4 Ứng dụng squalene Squalene hoạt tính chống oxy hóa mạnh mẽ Các nghiên cứu q trình oxy hóa squalene ít; cho Ďến kỷ trước, diperoxide tuần hoàn Ďược thơng báo sản phẩm oxy hóa Sau 80 năm, với kỹ thuật tiên tiến (1H-NMR 13 C-NMR), người ta thấy chế oxy hóa cấu trúc hóa học epoxy rượu Ďược hình thành sau q trình oxy hóa kéo dài Ďến 55 - 150°C [18, 19, 20] Naziri cs (2014) Ďã nghiên cứu q trình oxy hóa squalene nhiệt Ďộ Ďiều kiện khơng khí, tăng hình thành epoxy với hoạt tính proxidant dầu 40°C 62°C [18] Từ năm 50s nhiều công bố Ďã cho thấy tạo vòng squalene với lanosterol Ďể tạo thành oxydosqualene liên quan tới tổng hợp cholesterol hoạt tính chống oxy hóa Ở số Ďiều kiện Ďịnh, squalene dạng khơng vịng bị ... nguyên liệu cho thực phẩm bảo vệ sức khỏe, mỹ phẩm dược phẩm Vi? ??t Nam Chính vậy, thực Ďề tài ? ?Nghiên cứu squalene từ vi tảo biển dị dƣỡng Schizochytrium mangrovei PQ6 định hƣớng làm nguyên liệu cho. .. hướng làm nguyên liệu cho thực phẩm bảo vệ sức khỏe, mỹ phẩm dược phẩm Các nội dung nghiên cứu luận án - Sàng lọc Ďược chủng/loài vi tảo biển Vi? ??t Nam tiềm cho sản xuất squalene từ số chủng vi. .. squalene từ vi tảo biển dị dƣỡng Schizochytrium mangrovei PQ6 định hƣớng để làm nguyên liệu cho thực phẩm bảo vệ sức khỏe, mỹ phẩm dƣợc phẩm? ?? 43 CHƢƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu