Bài viết Ứng dụng hóa mô miễn dịch phân nhóm phân tử ung thư bàng quang trình bày xác định phân nhóm kiểu hình phân tử của ung thư bàng quang bằng phương pháp hoá mô miễn dịch. Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: Nghiên cứu mô tả cắt ngang thực hiện trên 130 bệnh nhân được chẩn đoán ung thư bàng quang xâm lấn cơ (MIBC) được phẫu thuật cắt bàng quang toàn phần tại Bệnh viện Bình Dân từ tháng 1/2017 đến tháng 12/2018.
TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 521 - THÁNG 12 - SỐ ĐẶC BIỆT - 2022 ỨNG DỤNG HÓA MƠ MIỄN DỊCH PHÂN NHĨM PHÂN TỬ UNG THƯ BÀNG QUANG Nguyễn Ngọc Minh Tâm1,3, Phạm Quốc Thắng1, Đỗ Anh Toàn2, Nguyễn Phúc Nguyên4, Lý Thanh Thiện1, Bùi Thị Thanh Tâm1, Lưu Thị Thu Thảo1, Đồn Thị Phương Thảo1, Ngơ Quốc Đạt1 TÓM TẮT 22 Mục tiêu: Xác định phân nhóm kiểu hình phân tử ung thư bàng quang phương pháp hố mơ miễn dịch Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Nghiên cứu mô tả cắt ngang thực 130 bệnh nhân chẩn đoán ung thư bàng quang xâm lấn (MIBC) phẫu thuật cắt bàng quang tồn phần Bệnh viện Bình Dân từ tháng 1/2017 đến tháng 12/2018 Nghiên cứu (NC) được Hội đồng Y Đức nghiên cứu y sinh học Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh xét duyệt thông qua (Quyết định số: 820/HĐĐĐ-ĐHYD) Chúng tơi nhuộm hóa mơ miễn dịch 130 trường hợp với dấu ấn miễn dịch (CK20, GATA3, CK5/6, CD44) Chúng tơi phân nhóm phân tử sau: nhóm đáy (dương tính với CK5/6, CD44 âm tính với CK20, GATA3); nhóm lịng ống (âm tính với CK5/6, CD44 dương tính với CK20, GATA3); nhóm hỗn hợp đáy-lịng ống (dương tính với nhóm dấu ấn nhóm đáy nhóm lịng ống); Bộ mơn Mơ Phơi-Giải Phẫu Bệnh, Đại học Y Dược Thành Phố Hồ Chí Minh Bộ môn Tiết Niệu Học, Đại học Y Dược Thành Phố Hồ Chí Minh Khoa Giải Phẫu Bệnh, Bệnh Viện Bình Dân Khoa Ung Bướu, Bệnh Viện Bình Dân Chịu trách nhiệm chính: Phạm Quốc Thắng; Email: phamquocthang@ump.edu.vn Ngày nhận bài: 05.10.2022 Ngày phản biện khoa học: 05.10.2022 Ngày duyệt bài: 24.10.2022 nhóm khơng phân loại (nhuộm HMMD âm tính với dấu ấn) Kết quả: Phân nhóm đáy nhóm lịng ống có tỷ lệ 35,28% 29,23% Mặt khác, 18,47% UT BQ không biểu với dấu ấn miễn dịch (nhóm khơng phân loại) UT BQ nhóm đáy có liến quan đến giai đoạn u (Fisher, p=0,035), biệt hóa gai (Fisher, p=0,0002) tình trạng viêm quanh u ( χ2, p=0,047) Kết luận: Phân nhóm phân tử UT BQ có liên quan đến tiến triển UT BQ xâm lấn Phân nhóm phân tử UT BQ hóa mơ miễn dịch giúp ích thực hành lâm sàng chẩn đoán điều trị UT BQ Từ khóa: nhóm đáy, nhóm lịng ống, MIBC, viêm quanh u SUMMARY IMMUNOHISTOCHEMISTRY ANALYSIS OF THE MOLECULAR SUBTYPES OF MUSCLE INVASION BLADDER CANCER Objective: To discriminate the molecular subtypes of BC by immunohistochemistry Subjects and methods: A cross-sectional descriptive study was performed on 130 patients who diagnosed with MIBC who underwent radical cystectomy at Binh Dan hospital from January 2017 to December 2018 This study was approved by the Ethical Committee of the University of Medicine and Pharmacy at Ho Chi Minh City, Vietnam (approval number 820/ĐHYD-HDDD) We performed IHCs for surrogated basal makers (CK5/6 and CD44), and surrogated luminal makers (CK20 and GATA3) 159 HỘI THẢO KHOA HỌC GIẢI PHẪU BỆNH – TẾ BÀO BỆNH HỌC VIỆT NAM LẦN THỨ 10 in 130 MIBC patients IHCs classified the MICB into fourth group including basal type (positive with CK5/6 and/or CD44 and negative both of CK20 and GATA3), luminal type (negative both of CK5/6 and CD44 and positive with CK20 and/or GATA3), null type (negative for all fourth markers) and mixed type (expressed both basal and luminal markers), respectively Results: We figured out the basal subtype and luminal subtype presented 35.28% and 29.23% of MIBC respectively The null subtype was accounted for 18.47% of MIBC The basal subtype was associated with T stage (p=0.035), squamous differentiation (p=0.0002), stage (p=0.035), and tumor infiltrated lymphocytes (TILs) (p=0.047) Conclusions: Our results pointed out that the molecular subtypes of MICB were associated with the progression of MIBC Suggesting that stratification molecular subtypes of MIBC by IHCs are appealing options for clinical implementation Keywords: basal subtype, luminal subtype, MICB, TILs I ĐẶT VẤN ĐỀ Ung thư bàng quang (UT BQ) khối u phổ biến hệ thống tiết niệu, với khoảng 420.000 trường hợp 160.000 ca tử vong năm Tổ chức Nghiên cứu Điều trị Ung thư Châu Âu (EOTRC) phân loại ung thư bàng quang chưa xâm lấn (NMIBC) thành nhóm có nguy thấp, nguy trung bình có nguy cao dựa phân tích tồn diện thơng số bệnh lý NMIBC nguy tái phát tiến triển thành UT BQ xâm lấn (MIBC) Các hệ thống phân loại truyền thống vào độ biệt hóa,giai đoạn tiên lượng lâm sàng Tuy nhiên, thông số bệnh học khối u phản ánh đầy đủ "đặc điểm nội tại" ung thư bàng quang, khối u có bệnh lý tương tự thể đáp ứng sinh 160 học khác Hơn hệ thống phân loại khơng thể dự đốn nguy tái phát hay tiến triển bệnh cá thể riêng lẻ [9] Gần đây, nhiều nghiên cứu (NC) với cỡ mẫu lớn sinh học phân tử (SHPT) UT BQ ghi nhận kiểu hình phân tử UT BQ có mối tương quan với diễn tiến lâm sàng, tiên lượng bệnh đáp ứng điều trị Mặc dù y văn có nhiều bảng phân loại khác nhau, phân nhóm kiểu hình miễn dịch UT BQ đồng thuận nhiều kiểu hình nhóm đáy (biểu dấu ấn: CK5/6, CK14, CD44) nhóm lịng ống (biểu dấu ấn: uroplakin, CK20, GATA3) [4,9] Với phát triển nhanh vọt sinh học phân tử (SHPT), nhiều NC gen, yếu tố mã, ngoại di truyền, proteomics phương pháp khác mở đường giúp nhà lâm sàng chẩn đốn điều trị xác UT BQ Một bảng phân loại cần đáp ứng tiêu chuẩn sau: I Tiên đốn xác khả tái phát tiến triển UT BQ, phát triển công cụ giúp theo dõi, lên kế hoạch điều trị, phẫu thuật, liệu pháp bổ trợ theo dõi cá thể hóa II Phân loại bệnh nhân đáp ứng với hóa trị, liệu pháp nhắm trúng đích, liệu pháp miễn dịch lên kế hoạch điều trị bổ trợ cho bệnh nhân III Cung cấp thông tin quan trọng dự đoán tái phát, tiên lượng UT BQ thơng tin SHPT hữu ích cho NC chế phân tử phát triển u, tiến triển, đáp ứng hóa trị miễn dịch IV Hỗ trợ phát triển phương pháp chẩn đoán phân tử, điều trị cá thể hóa Ngồi ra, gần NC kiểu hình phân tử dựa biến đổi gen UT BQ nhận quan tâm nhiều nhà khoa học Sự phát triển kiểu hình phân tử dựa gen mã…mở đường giúp nhà khoa học hiểu sâu UT BQ [4,9] TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 521 - THÁNG 12 - SỐ ĐẶC BIỆT - 2022 Thuật ngữ phân nhóm phân tử nhắc đến trước bệnh lý khác bạch cầu cấp, UT vú, UT đại trực tràng, carcinơm đường mật gan ngồi gan carcinơm dày Điểm mấu chốt phân nhóm phân tử phát biểu gen mô u phương pháp sequencing, microarray kĩ thuật khác, sau phân tích đa gen dựa biểu gen gen liên quan tiến trình sinh ung Ví dụ, UT vú, BN nhóm đáy nhóm giàu HER-2 thường có tiên lượng kém, nhiên nhóm BN lại đáp ứng tốt với hóa trị tân hỗ trợ [9] Chúng tơi tiến hành đề tài “Nghiên cứu phân nhóm kiểu hình phân tử ung thư bàng quang phương pháp hoá mơ miễn dịch” nhằm xác định kiểu hình phân tử UT BQ II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu 130 bệnh nhân chẩn đoán UT BQ xâm lấn phẫu thuật cắt BQ tồn phần Bệnh viện Bình Dân từ tháng 1/2017 đến tháng 12/2018 BN chọn phải thỏa lúc điều kiện sau: - Các BN chẩn đoán UT BQ xâm lấn phẫu thuật cắt BQ tồn phần - Có đầy đủ hồ sơ bệnh án - Có đầy đủ khối mơ vùi nến Tiêu chuẩn loại trừ: - Các BN hóa trị trước phẫu thuật - Mô vùi nến nhỏ không đủ để thực nhuộm hố mơ miễn dịch Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu mô tả cắt ngang Cách tiến hành nghiên cứu Thu thập số liệu: đặc điểm lâm sàng giải phẫu bệnh theo phiếu thu thập số liệu Các mẫu nghiên cứu nhuộm hóa mơ miễn dịch với dấu ấn anti CK5/6 (MA191106, Invitrogen) , anti CD44 (MA5-13890, Invitrogen), anti CK20 (MA5-13263, Invitrogen), anti GATA3 (MA1-028, Invitrogen) máy nhuộm tự động BenchMark Ventana Đánh giá biểu CK5/6, CD44, CK20: Tiêu chuẩn đánh giá dương tính tế bào u bắt màu màng bào tương lan tỏa ≥ 20% tế bào khối u với cường độ bắt màu mạnh [1,9] Đánh giá biểu GATA3: Tiêu chuẩn đánh giá dương tính tế bào u bắt màu nhân lan tỏa ≥ 20% tế bào khối u với cường độ bắt màu mạnh [1,9] Xử lý số liệu Số liệu phiếu thu thập tổng hợp, phân tích xử lý phần mềm SPSS 20.0 Xét mối liên quan biến số phép kiểm χ2 Y đức nghiên cứu Đề cương NC được Hội đồng Y Đức nghiên cứu y sinh học Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh xét duyệt thơng qua, cho phép NC nhằm đảm bảo tính khoa học tính khả thi đề tài nghiên cứu (Quyết định số: 820/HĐĐĐ-ĐHYD) III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Đặc điểm mẫu nghiên cứu Bệnh nhân (BN) có tuổi nhỏ 30 tuổi, lớn 89 tuổi, độ tuổi trung vị 63 tuổi Nhóm tuổi thường gặp 57 - 69 tuổi Phần lớn bệnh nhân nam giới (chiếm 89%), có 11% bệnh nhân nữ giới Theo bảng 1, phần lớn UT BQ có độ mơ học cao (chiếm 71,54%), giai đoạn T2/3/4 chiếm 94,62% có 5,38% bệnh nhân chẩn đốn giai đoạn I Theo bảng 3.1, có 20,0% UT BQ có hình ảnh biệt hóa gai; 3,84% có hình ảnh biệt hóa tuyến 161 HỘI THẢO KHOA HỌC GIẢI PHẪU BỆNH – TẾ BÀO BỆNH HỌC VIỆT NAM LẦN THỨ 10 Bảng 1: Đặc điểm lâm sàng giải phẫu bệnh 130 bệnh nhân ung thư bàng quang n % Độ thấp 37 28,46 Độ mô học Độ cao 93 71,54 T1 5,38 Giai đoạn T T2/3/4 123 94,62 Nx/0 112 86,2 Giai đoạn N N1/2/3 18 13,8 M0 130 100 Giai đoạn M M1 Giai đoạn I 5,38 Giai đoạn u Giai đoạn II/III/IV 123 94,62 Không 104 80,0 Biệt hóa gai Có 26 20,0 Khơng 125 96,16 Biệt hóa tuyến Có 3,84 Khơng 37 28,46 Hoại tử u Có 93 71,54 Khơng 75 57,70 Viêm quanh u Có 55 42,30 Khơng 58 44,62 Xâm nhập mạch Có 72 55,38 Khơng 98 75,39 Xâm lấn thần kinh Có 32 24,61 Chúng tơi ghi nhận 55 trường hợp có giá trị phân nhóm phân tử UT BQ viêm quanh u, chiếm 42,30% Mặt khác [1,9] Chúng phân nhóm phân tử sau: chúng tơi ghi nhận 55,38% BN có tình trạng nhóm đáy (dương tính với CK5/6, CD44 xâm nhập mạch 24,61% BN có tình trạng âm tính với CK20, GATA3); nhóm lịng ống xâm lấn thần kinh (bảng 1) (âm tính với CK5/6, CD44 dương tính với Đặc điểm HMMD phân nhóm phân tử CK20, GATA3); nhóm hỗn hợp đáy-lịng ung thư bàng quang ống (dương tính với nhóm dấu ấn Chúng tơi sử dụng dấu ấn miễn dịch nhóm đáy nhóm lịng ống); nhóm (CK20, GATA3, CK5/6, CD44), dấn ấn không phân loại (nhuộm HMMD âm tính với nhiều nghiên cứu chứng minh có dấu ấn) (hình 1) Bảng 2: Các phân nhóm phân tử ung thư bàng quang n % Nhóm đáy 46 35,28 Nhóm lịng ống 38 29,23 Nhóm hỗn hợp đáy-lịng ống 24 18,47 Nhóm khơng phân loại 22 16,92 162 TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 521 - THÁNG 12 - SỐ ĐẶC BIỆT - 2022 Theo bảng 2, phân nhóm đáy nhóm lịng ống chiếm ưu với tỷ lệ 35,28% 29,23% Chúng tơi ghi nhận phân nhóm biểu hiệu đồng thời kiểu hình miễn dịch đáy lịng ống Bên cạnh chúng tơi ghi nhận 16,92% UT BQ không biểu với dấu ấn miễn dịch Liên quan phân nhóm phân tử ung thư bàng quang với đặc điểm lâm sàng giải phẫu bệnh Theo bảng phân nhóm phân tử UT BQ có liên quan đến giai đoạn u (Fisher, p=0,035), biệt hóa gai (Fisher, p=0,0002) tình trạng viêm quanh u ( χ2, p=0,047) UT BQ nhóm đáy có giai đoạn u, biệt hóa gai, thấm nhập tế bào viêm cao so với phân nhóm phân tử cịn lại Bảng 3: Liên quan phân nhóm phân tử ung thư bàng quang với đặc điểm lâm sàng giải phẫu bệnh Phân nhóm phân tử p value khơng hỗn đáy lịng ống phân loại hợp 10 13 Độ thấp 37 (18,92) (27,03) (35,14) (18,91) Độ mô học 0,610** 36 25 17 Độ cao 93 15 (16,13) (38,71) (26,88) (18,28) T1 (28,57) (14,29) (57,14) Giai đoạn T 0,035* 44 38 20 T2/3/4 123 21 (17,07) (35,78) (30,89) (16,26) 39 33 21 Nx/0 112 19 (16,96) (34,83) (29,46) (18,75) Giai đoạn N N1/2/3 18 (38,88) (27,78) (16,67) (16,67) Giai đoạn (28,57) (14,29) I (57,14) Giai đoạn 0,035* Giai đoạn 44 38 20 123 21 (17,07) II/III/IV (35,78) (30,89) (16,26) 28 32 24 Không 107 20 (19,23) (26,92) (30,77) (23,08) Biệt hóa gai 0,0002* 18 Có 23 (23,08) (7,69) (69,23) 12 10 Không 37 (18,92) (32,43) (27,03) (21,62) Hoại tử u 0,893** 16 34 28 Có 93 15 (16,13) (17,20) (36,56) (30,11) 163 HỘI THẢO KHOA HỌC GIẢI PHẪU BỆNH – TẾ BÀO BỆNH HỌC VIỆT NAM LẦN THỨ 10 Không 75 Có 55 Xâm nhập mạch Khơng 58 Có 72 Xâm lấn thần kinh Khơng 98 Có 32 Viêm quanh u 19 (25,33) 27 (49,09) 24 (41,38) 22 (30,55) 32 (32,65) 14 (43,75) 26 (34,67) 12 (21,81) 13 (22,41) 25 (34,72) 28 (28,57) 10 (31,25) 16 0,047** (21,33) 8 (14,55) (14,55) 11 10 (17,24) (18,97) 0,432** 13 12 (16,67) (18,06) 20 18 (18,37) (20,41) 0,562* 4 (12,5) (12,5) * phép kiểm Fisher; **phép kiểm χ2 14 (18,67) Hình Phân nhóm phân tử ung thư bàng quang dấu ấn miễn dịch CD44, CK5/6, CK20, GATA3 164 TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 521 - THÁNG 12 - SỐ ĐẶC BIỆT - 2022 IV BÀN LUẬN Đặc điểm mẫu nghiên cứu NC ghi nhận UT BQ thường gặp nhóm tuổi 57 - 69 tuổi UT BQ thường gặp BN 50 tuổi gặp người trẻ trẻ em Theo Kirkali Z CS, tuổi trung bình BN chẩn đoán UT BQ 65-70 tuổi [5] NC ghi nhận hầu hết bệnh nhân nam giới (chiếm 89%), có 11% bệnh nhân nữ giới Dữ liệu GLOBOCAN ghi nhận UT BQ thường gặp nam giới so với nữ giới, với tỷ lệ mắc tỷ lệ tử vong tương ứng 9,5 3,3 100.000 nam giới, gấp lần tỷ lệ phụ nữ toàn cầu [8] 71,54% trường hợp UT BQ có độ mơ học cao, hầu hết giai đoạn T2/3/4 (94,62%) Các khối u BN 40 tuổi thường độ thấp khối u độ cao thường gặp BN lớn tuổi [5] UT BQ có khả biệt hóa đa dạng thường có vùng biệt hóa gai NC chúng tơi ghi nhận 20,0% trường hợp UT BQ có hình ảnh biệt hóa gai Một số báo cáo cho ghi nhận biệt hóa gai 16–25% ung thư biểu mô BQ thay đổi tùy theo độ mô học giai đoạn u [6] Biệt hóa gai yếu tố tiên lượng khơng thuận lợi, dự đốn tái phát chỗ sau phẫu thuật cắt BQ Bênh cạnh biệt hóa gai yếu tố dự đốn đáp ứng với xạ trị hóa trị liệu [6] Chúng tơi ghi nhận 55 (42,30%) trường hợp có viêm quanh u Viêm quanh u thường tìm thấy ung thư, điều gợi ý khối u kích hoạt phản ứng miễn dịch với thể Theo Huang HS cộng (CS), BN có viêm quanh u có sống cịn tồn trung bình 15,7 so với 6,7 tháng (P =