Bài viết Dịch chiết nang trứng chín thúc đẩy quá trình chín sinh lý và phát triển phôi heo trinh sản nghiên cứu sự ảnh hưởng của dịch chiết nang trứng lên khả năng chín sinh lý và phát triển của phôi heo trinh sản. Mời các bạn cùng tham khảo!
DỊCH CHIẾT NANG TRỨNG CHÍN THÚC ĐẨY Q TRÌNH CHÍN SINH LÝ VÀ PHÁT TRIỂN PHÔI HEO TRINH SẢN Nguyễn Bá Tư1 Viện Phát triển Ứng dụng Email: tunb@tdmu.edu.vn TĨM TẮT Dịch chiết nang trứng chín có ảnh hưởng quan trọng đến phát triển trứng heo in vitro, khả kích hoạt trứng phát triển phơi heo trinh sản Các kết nghiên cứu cho thấy, sau 42 ni cấy tỷ lệ trứng heo chín có khác biệt ý nghĩa tỷ lệ trứng chín mơi trường bổ sung dịch chiết nang trứng heo chín dịch chiết nang trứng heo có kích thước 4-6 mm (lần lượt 87% 62%) Ngoài ra, dịch chiết nang trứng chín giúp nâng cao tỷ lệ trứng chín tốt từ 30% (nang kích thước 4-6 mm) lên 53% (nang trứng chín), đồng thời kết giảm đáng kể tỷ lệ trứng xấu từ 24% (nang kích thước 4-6 mm) xuống 10% (nang trứng chín) Tỷ lệ trứng kích hoạt thành cơng phát triển phôi heo trinh sản đến giai đoạn phơi nang (blastocyst) làm rõ vai trị dịch chiết nang trứng chín đến chất lượng phơi heo trinh sản Trong đó, dịch chiết nang trứng chín giúp nâng cao tỷ lệ phôi nang từ 37% (nang kích thước 4-6 mm) lên 71% (nang trứng chín) Kết góp phần hồn thiện quy trình ni chín trứng heo in vitro Từ khóa: Dịch chiết nang trứng heo; mơi trường in vitro; nang trứng chín; phơi heo trinh sản ĐẶT VẤN ĐỀ Dịch chiết nang trứng chứng minh có thành phần dinh dưỡng đặc biệt bao gồm đầy đủ yếu tố sinh trưởng, phát triển, vi khoáng, vitamin, hormone , vv, cung cấp cho trứng phát triển theo giai đoạn từ GV đến giai đoạn chín sinh lý (Park nnk., 2021) Hiện nay, quy trình ni trứng heo in vitro, việc bổ sung dịch chiết nang trứng heo trở nên thường quy hầu hết quy trình thống lấy dịch chiết nang trứng có kích thước 46mm để bổ sung với hàm lượng 10% vào môi trường TCM199 giúp cải thiện chất lượng trứng chín in vitro phát triển phơi (Pawlak nnk., 2018) Tuy nhiên, nang trứng đạt kích thước 4-6mm trứng bên gần đạt kích thước tối đa, thường phát triển chậm giai đoạn kích thước mà chủ yếu phát triển sinh lý giúp đến giai đoạn chuyển từ giảm phân sang giảm phân Việc ức chế tạm thời trình phân chia nhân đảm nhiệm hàm lượng cAMP vốn tiết từ lớp tế bào Granulosa cells Chính vậy, ni cấy in vitro, dùng dịch chiết nang trứng giai đoạn có phần hữu hàm lượng cAMP cản trở q trình chín sinh lý trứng kéo dài thời gian chín trứng 38 chí 42 nuôi cấy (Pawlak nnk., 2018) Thời gian nuôi cấy kéo dài chất lượng trứng bị ảnh hưởng, trình già hóa nhanh, chất lượng trứng chín (Pawlak nnk., 2018) Thực tế cho thấy tỷ lệ trứng chín in vitro so với chín in vivo đạt 60-70%, đặc biệt tỷ lệ phát triển phôi thường đạt 35-40% đến giai 248 đoạn phôi nang (blastocyst), điều giải thích bắt nguồn chủ yếu từ q trình ni trứng heo in vitro cịn xa so với q trình chín sinh lý bên nang trứng heo Chính vậy, việc thiết lập quy trình ni trứng heo in vitro cho có thành phần môi trường gần giống với môi trường in vivo đóng vai trị định đến chín sinh lý trứng heo, ảnh hưởng trực tiếp đến phát triển phơi heo sau kích hoạt Dựa khác biệt hàm lượng cAMP dịch chiết nang trứng có kích thước 4-6 mm nang trứng chín, chúng tơi tiến hành nghiên cứu ảnh hưởng dịch chiết nang trứng lên khả chín sinh lý phát triển phôi heo trinh sản VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu Hóa chất, mơi trường sử dụng nghiên cứu cung cấp từ hãng Sigma-Aldrich (St Louis, MO) Buồng trứng heo lấy từ lò mổ Tân Bình, Phường Tân Bình, Thị xã Dĩ An, tỉnh Bình Dương 2.2 Phương pháp Ni trứng chín Buồng trứng heo thu từ lò mổ địa phương, bảo quản dung dịch PBSPVA trình vận chuyển phịng thí nghiệm tái biệt hố tế bào, Đại học Quốc tế, Đại học Quốc gia Tp Hồ Chí Minh, Việt Nam Phức hợp tế bào hạt trứng thu nhận phương pháp cắt nang trứng có kích thước 4-6 mm Trứng lựa chọn có đủ lớp tế bào hạt (cumulus) kích thước tất lơ thí nghiệm đối chứng Sử dụng môi trường TCM 199 (Sigma Chemical Co., USA) bổ sung 10% dịch chiết nang trứng, 10 IU/ml hCG (Human chorionic gonadotropin) để nuôi trứng Chuyển 20-30 trứng (tuỳ thí nghiệm) vào ni vi giọt lớn (floating drop) 500 µl/ giọt đĩa 60 mm phủ dầu điều kiện 5% CO2 38,5oC Sau 38- 42 ni cấy, trứng chín loại bỏ tế bào hạt enzyme hyaluronidase qua mouth pipete, ủ trở lại vịng để tiến hành thí nghiệm (Lai nnk., 2002) Dịch chiết nang trứng thu từ hai loại nang: 1/ Nang có kích thước 4-6 mm; 2/ nang trứng chín Trứng nuôi môi trường TCM-199 đánh giá ảnh hưởng dịch chiết nang trứng đến chín trứng heo bao gồm: (1) thời gian, độ dãn nở lớp tế bào hạt (cumulus cell layers), (2) xuất thể cực thứ Kích hoạt trứng trinh sản Trứng sau ủ kích hoạt hệ thống điện mơi trường mannitol (0,3 mM mannitol, 0,1 mM MgSO4, 0,05 mM CaCl2 and 0,01% (w/v) PVA (Zimmermann & Vienken, 1982) Khoảng 20 trứng đặt đĩa kích hoạt với chương trình thiết lập (100 V/cm (N = 2), 100 µs nhờ hệ thống dung hợp tế bào LF201 (Cell fusion – Nuclear transplantation generator LF201), trứng sau kích hoạt chuyển vào môi trường nuôi phôi (IVD, NCSU-23), theo dõi q trình phân cắt phơi ngày 249 KẾT QUẢ 3.1 .Dịch chiết nang trứng có ảnh hưởng trực tiếp, quan trọng đến chín trứng heo in vitro Bảng 1: Ảnh hưởng dịch chiết nang trứng chín hình thái trứng heo in vitro Phương pháp Dịch nang trứng chín Số trứng nuôi cấy 250 Dịch nang trứng 4-6 273 a,b, % trứng chín (MII) 144 (87.23 ± 6.96)a 242 (62.00 ± 16.81)b Sự khác biệt với mức ý nghĩa: p