VAI TRÒ CỦA HỆ THỐNG HLA TRONG GHÉP TẠNG VÀ ỨNG DỤNG KỸ THUẬT GIẢI TRÌNH TỰ THẾ HỆ MỚI TRONG NGHIÊN CỨU HỆ THỐNG HLA

VAI TRÒ CỦA HỆ THỐNG HLA TRONG GHÉP TẠNG VÀ ỨNG DỤNG KỸ THUẬT GIẢI TRÌNH TỰ THẾ HỆ MỚI TRONG NGHIÊN CỨU HỆ THỐNG HLA MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH SÁCH HÌNH iii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT iv CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN VỀ.

VAI TRÒ CỦA HỆ THỐNG HLA TRONG GHÉP TẠNG VÀ ỨNG DỤNG KỸ THUẬT GIẢI TRÌNH TỰ THẾ HỆ MỚI TRONG NGHIÊN CỨU HỆ THỐNG HLA MỤC LỤC MỤC LỤC .i DANH SÁCH HÌNH .iii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT iv CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN VỀ HỆ THỐNG HLA 1.1 Giới thiệu 1.2 Phân loại 1.3 Cấu trúc, đa hình chức phân tử HLA 1.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến biểu bề mặt 1.4.1 CIITA NLRC5 1.4.2 Tính đa hình promoter 1.4.3 Long-range promoter 1.4.4 Các biến dị ghép nối 1.4.5 Thay codon bắt đầu .10 1.4.6 Thay vị trí polyadenyl hóa 10 1.4.7 Sự methyl hóa DNA 11 1.4.8 Quá trình biến đổi sau phiên mã .13 1.4.9 Độ ổn định vật lý biểu protein 13 1.4.10 Hoạt động hấp thu HLA 14 1.5 Sự đa dạng di truyền HLA 16 1.5.1 Gen HLA 16 1.5.2 Microsatellite 17 1.5.3 SNP 17 1.5.4 Biến dị di truyền .17 1.6 Điều hòa gen HLA chế biểu sinh .18 1.7 Xét nghiệm HLA lâm sàng 19 1.7.1 Đánh giá huyết kháng nguyên HLA 20 1.7.2 Đánh giá phân tử allele HLA .20 1.7.3 Sàng lọc kháng thể HLA bắt chéo tế bào lympho 21 1.8 Các gợi ý cho việc cấy ghép 22 1.9 Các gợi ý nghiên cứu phịng thí nghiệm 23 1.10 Các vấn đề cần quan tâm .25 CHƯƠNG 2: VAI TRÒ CỦA HLA TRONG GHÉP TẠNG VÀ NGS-BASED HLA 27 2.1 Hệ thống HLA cấy ghép .27 2.1.1 Cơ chế đào thải cấy ghép kháng thể .27 2.1.2 Ghép tạng thể rắn 29 2.1.3 Ghép tế bào gốc tạo máu dị sinh .30 2.2 Kiểm tra kháng thể trước cấy ghép 32 2.2.1 Xác định không phù hợp kháng nguyên HLA không chấp nhận đánh giá rủi ro cấy ghép thận 32 2.2.2 Cấy ghép bệnh nhân mẫn cảm cao 34 2.2.3 Các chiến lược cấy ghép cho bệnh nhân có độ nhạy cảm cao 34 2.2.4 Tác động nhạy cảm HLA kết ca cấy ghép thận 35 2.3 Kiểm tra kháng thể sau cấy ghép 37 2.3.1 Thử nghiệm kháng thể HLA huyết rối loạn chức bề mặt allograft .37 2.3.2 Sàng lọc sinh thiết theo quy trình để kiểm tra sau cấy ghép loại thải qua trung gian kháng thể 38 2.3.3 Sàng lọc kháng thể HLA huyết nối tiếp sau cấy ghép .39 2.4 Phân loại HLA dựa vào kỹ thuật giải trình tự hệ (NGS) 40 2.5 HLA bệnh liên kết 42 2.6 Phân loại HLA dựa NGS nghiên cứu dân số ứng dụng để điều tra bệnh liên kết HLA 43 CHƯƠNG 3: KẾT LUẬN 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO .46 DANH SÁCH HÌNH Hình 1.1: MHC người vai ngắn nhiễm sắc thể số Hình 1.2: Phức hợp HLA nhiễm sắc thể số người Hình 1.3: Giản đồ phân tử HLA lớp I (a) lớp II (b) 5 DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT ADCC Gây độc tế bào qua trung gian kháng thể phụ thuộc vào tế bào NK AMR Sự thải loại qua trung gian kháng thể APC Tế bào trình diện chuyên biệt kháng nguyên BLS Hội chứng tế bào lympho trần CDC Gây độc tế bào lympho phụ thuộc bổ thể CIITA Transactivator lớp II CMR Sự thải loại qua trung gian tế bào T CpG Cytosine-guanine dinucleotide DSA Kháng thể HLA đặc hiệu người hiến tặng ELISA Xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với enzyme GVHD Bệnh ghép vật chủ cấp tính HLA Kháng nguyên bạch cầu người HSCT Ghép tế bào gốc tạo máu IFNγ Interferon γ MFI Trung bình cường độ huỳnh quang MHC Kháng nguyên phù hợp tổ chức người NGS Giải trình tự hệ NK Tế bào giết chết tự nhiên NLR Protein thụ thể giống NOD NMDP Chương trình Người hiến tủy Quốc gia PAS Vị trí polyadenyl hóa thay PRA Tế bào tham gia tái kích hoạt kháng thể SAB Xét nghiệm chuỗi kháng nguyên đơn SNP Đa hình nucleotide đơn SPI Phân tích miễn dịch pha rắn TCR Thụ thể tế bào T TG Bệnh cầu thận cấy ghép UA Sự không chấp nhận kháng nguyên HLA không phù hợp UNOS Mạng lưới Chia sẻ Nội tạng Hoa Kỳ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN VỀ HỆ THỐNG HLA 1.1 Giới thiệu Kháng nguyên bạch cầu người (HLA, gọi phức hợp kháng nguyên phù hợp tổ chức người 'MHC'), đoạn 3,6 Mb gen người 6p21.3, mã hóa 220 gen có chức đa dạng, bao gồm 20 gen mã hóa protein miễn dịch Sự biểu chủ yếu gen HLA điều chỉnh phản ứng miễn dịch thu gen HLA lớp I HLA lớp II tương tác với thụ thể tế bào T (TCR) tế bào CD8 + Tc CD4 + Th, thông qua chế đáp ứng miễn dịch qua trung gian tế bào dịch thể, tương ứng Biểu gen HLA tiếp tục kích hoạt cytokine (ví dụ, IFNγ, IL-4) tạo phản ứng miễn dịch bẩm sinh thích ứng (Kishore and Petrek, 2018) Vùng HLA có liên quan đến nhiều bệnh, chủ yếu có tính chất tự miễn dịch truyền nhiễm Vùng HLA vùng đa hình gen người chứa sáu gen HLA điển hình: lớp I HLA-A, -B, -C lớp II HLADRB1, -DQB1 -DPB1 Các đa hình vùng HLA mở rộng biểu cân liên kết (LD), bao gồm với allele HLA điển hình cụ thể Ở cấp độ protein, biến thể trình tự vùng khe hở liên kết peptide phân tử HLA lớp I (xoắn α1 α2) HLA lớp II (domain β1) (domain tương tác HLA) tương tác với TCR có đặc tính liên kết kháng ngun khác biệt ảnh hưởng đến trình bày kháng nguyên Các phân tử lớp I tăng cường nhạy cảm gen thụ thể tế bào giết chết tự nhiên (NK) (chẳng hạn thụ thể giống Ig tế bào sát thủ 'KIR') tế bào thuộc dòng bạch cầu (thụ thể giống Ig bạch cầu 'LIR') Do đó, gen HLA gen HLA, biến thể liên gen dạng đơn bội chúng vùng HLA biểu locus đa gen ảnh hưởng đến biểu hiện, liên kết peptide ổn định phân tử HLA (Kishore and Petrek, 2018) MHC người ánh xạ tới nhánh ngắn nhiễm sắc thể số (6p21) kéo dài khoảng 3,600 kilobase DNA MHC người chia thành ba vùng (Choo, 2007) Hình 1.1: MHC người vai ngắn nhiễm sắc thể số Vùng lớp I chứa gen HLA-A, HLA-B HLA-C điển hình mã hóa chuỗi nặng phân tử lớp I (Choo, 2007) Vùng lớp II bao gồm loạt vùng con, vùng chứa gen A B mã hóa chuỗi α β tương ứng Họ gen DR bao gồm gen DRA tối đa chín gen DRB (DRB1 đến DRB9) Các DRA gen mã hóa chuỗi α khơng thay đổi liên kết với chuỗi β khác mã hóa DRB gen Tính đặc hiệu kháng nguyên HLA-DR (tức là, từ DR1 đến DR18) xác định chuỗi DRβ1 đa hình mã hóa allele DRB1 Các kiểu đơn bội HLA số allele DRB1 định chứa liên kết đặc biệt vị trí DRB3, DRB4 DRB5 Các họ DP DQ có gen biểu cho chuỗi α β gen giả chưa biểu bổ sung Các DQA1 DQB1 sản phẩm gen liên kết để tạo thành DQ phân tử DPA1 DPB1 sản phẩm hình thành phân tử DP (Choo, 2007) Vùng lớp III không mã hóa phân tử HLA, chứa gen cho thành phần bổ thể (C2, C4, yếu tố B), 21-hydroxylase, yếu tố hoại tử khối u (TNFs) số gen khác (Choo, 2007) Các halotype HLA  Các gen HLA liên kết chặt chẽ toàn MHC thừa hưởng haplotype HLA theo kiểu Mendel từ bố mẹ Sự phân biệt haplotype HLA gia đình định nghiên cứu HLA gia đình Hai anh chị em ruột có 25% hội giống kiểu gen HLA, 50% khả đơn bội HLA (chia sẻ loại halotype) 25% khả họ khơng có chung halotype HLA (Choo, 2007)  Sự kết hợp ngẫu nhiên có kháng nguyên từ locus HLA khác haplotype HLA lớn, số kiểu haplotype HLA định tìm thấy thường xuyên số quần thể so với dự kiến Hiện tượng gọi cân liên kết Ví dụ, HLA-A1, B8, DR17 haplotype HLA phổ biến người da trắng, với tần suất 5% (Choo, 2007) 1.2 Phân loại Các kháng nguyên phức hợp HLA phân loại thành ba lớp: lớp 1, lớp lớp (Mahdi, 2019) MHC lớp I: có ba gen MHC lớp I ba gen phụ MHC lớp I HLA (Mahdi, 2019) Lớp MHC I:  HLA-A  HLA-B  HLA-C MHC nhỏ lớp I:  HLA-E  HLA-F  HLA-G β2-microglobulin liên kết với tiểu đơn vị gen phụ để tạo gen di truyền MHC lớp II: có ba protein hai protein MHC lớp II phụ mã hóa HLA MHC lớp II: chúng mã hóa locus HLA-DRB1, DRB3, DRB4 DRB5 Các gen lớp II kết hợp với để tạo thành thụ thể protein dị số (αβ) thường biểu bề mặt tế bào trình diện kháng nguyên (Mahdi, 2019)  HLA-DP: chuỗi α mã hóa locus HLA-DPA1 chuỗi β mã hóa locus HLA-DPB1  HLA-DQ: chuỗi α mã hóa locus HLA-DQA1 chuỗi β mã hóa locus HLA-DQB1  HLA-DR: chuỗi α mã hóa locus HLA-DRA chuỗi β (mỗi người có ba chuỗi) MHC nhỏ cấp II: chúng sử dụng trình xử lý nội kháng nguyên, tải peptide kháng nguyên tạo từ mầm bệnh vào phân tử HLA tế bào trình diện kháng nguyên  DM  DO Phức hợp HLA người thừa hưởng di truyền từ cha mẹ họ (50% từ cha mẹ), vậy, bạn có nhiều khả kết hợp mạnh mẽ với anh chị em với thành viên ngẫu nhiên dân số; nhiên, cặp anh chị em có 25% hội hồn tồn trùng khớp Khả kết hợp hồn hảo với người khơng liên quan đến bạn khoảng 100,000 Do đó, gần hai người anh em sinh đơi, hệ thống miễn dịch người nhận có khả cơng tế bào người hiến tặng (Mahdi, 2019) Lớp I kháng nguyên bạch cầu người tìm thấy bề mặt tất tế bào có nhân, diện peptide nội bào hệ thống miễn dịch Ngoài lớp I, HLA lớp II diện tế bào trình diện kháng nguyên chuyên biệt (APC) Tuy nhiên, mức độ biểu HLA tế bào tĩnh Các cytokine tiền viêm điều hòa biểu HLA lớp I tất tế bào diện lớp II tế bào khơng có APC tế bào T tế bào nội mơ Ví dụ, thí nghiệm ni cấy tế bào nội mơ bị, biểu MHC lớp I tổng thể tăng từ 7-13 lần kích thích interferon γ (IFNγ) (Carey et al., 2019) Sử dụng tế bào máu ngoại vi, phát khác biệt gấp ba lần tổng số biểu HLA loại I loại II cá thể, điều có ý nghĩa việc xác định kháng nguyên tổng thể môi trường cấy ghép Hơn nữa, nghiên cứu khác biệt tổng số lớp I gấp ba lần, thay đổi mật độ bề mặt kháng nguyên cụ thể HLAA2 30 lần bảy cá thể (Carey et al., 2019) Phân loại HLA có lợi tiếp tục hưởng lợi từ ứng dụng NGS Việc xác định đặc điểm toàn diện rõ ràng đa hình rộng rãi vùng HLA NGS góp phần vào tiến lĩnh vực HLA mối liên quan bệnh tật cách xác định xác mối liên quan cấp độ allele cách sử dụng liệu xác từ nghiên cứu di truyền quần thể dựa NGS (Kishore and Petrek, 2018) 2.2 Kiểm tra kháng thể trước cấy ghép 2.2.1 Xác định không phù hợp kháng nguyên HLA không chấp nhận đánh giá rủi ro cấy ghép thận Một nhiệm vụ phịng thí nghiệm HLA xác định không chấp nhận kháng nguyên HLA không phù hợp (unacceptable HLA antigen mismatches - UA) Sử dụng thơng tin này, kết hợp chéo âm tính ''kết hợp chéo ảo'' thực phân loại xong HLA người hiến tiềm Việc xác định UA bước định quan trọng khả cung cấp nội tạng giảm dần số lượng UA ngày tăng tất bệnh nhân thường xuyên chết danh sách chờ đợi trước họ cấy ghép Ngược lại, UA không công nhận, xét nghiệm không nhạy khơng xác, dẫn đến tỷ lệ sống sót mảnh ghép lô hàng nội tạng vơ ích xét nghiệm kết hợp chéo trung tâm người nhận dương tính Sự đời xét nghiệm chuỗi kháng nguyên đơn - SAB (single-antigen bead) cho phép xác định xác UA trước thực được, đặc biệt bệnh nhân nhạy cảm cao Việc định UA nói chung khơng nên dựa phản ứng SAB mà dựa vào khả phản ứng kháng thể có phù hợp với biểu mơ cơng nhận tiền sử biến cố nhạy cảm bệnh nhân hay không Nhiều trung tâm coi trường hợp không phù hợp HLA lặp lại từ lần cấy ghép trước UA họ cho kết âm tính sàng lọc kháng thể Với đời xét nghiệm kháng thể nhạy hơn, chưa rõ xét nghiệm kháng thể mức độ nhạy thích hợp để xác định UA Các kháng thể IgG HLA đặc hiệu người hiến tặng phát gây độc tế bào lympho phụ thuộc bổ thể (CDC) coi chống định cấy ghép, DSA phát xét nghiệm khác thể mức độ rủi ro khác Nhiều phịng thí nghiệm khơng cịn sử dụng xét nghiệm CDC để sàng lọc kháng thể HLA phụ thuộc vào SPI để xác định xem kháng nguyên có chấp nhận hay khơng Mặc dù có liệu tốt việc cấy ghép thận quan khác cho thấy DSA có từ trước phân tích miễn dịch pha rắn (SPI) có liên quan đến tăng nguy đào thải, thường AMR kết hơn, tranh cãi liệu kháng thể không phát CDC ELISA phát xét nghiệm hạt SPI ảnh hưởng đến kết Hiện tại, cá nhân có nhiều kháng thể đặc hiệu xét nghiệm SAB âm tính xét nghiệm CDC chiếm phần lớn danh sách chờ ghép Nhiều người nhận dương tính với DSA cơng nghệ dựa dòng chảy Luminex thực tốt sau cấy ghép có chức ghép lâu dài tốt Do đó, khó để đặt ngưỡng rủi ro chấp 34 nhận Cũng nên xem xét trung bình cường độ huỳnh quang (MFI) thấp huyết sàng lọc vào thời điểm xa với kiện chủng ngừa ban đầu trường hợp khơng có huyết lịch sử, đặc điểm huyết có phản ứng cao trước Kết hợp chéo tương lai với tế bào hiến tặng huyết tiền sử thường sẵn thời điểm cung cấp nội tạng khơng có xét nghiệm tốt để xác định kháng ngun có khả kích hoạt phản ứng trí nhớ Hơn nữa, MFI thường không tương quan với độ mạnh kết hợp chéo, cho thấy nguy miễn dịch xác định dựa thông số (Tait et al., 2013) DSA tồn sau cấy ghép sau điều trị giải mẫn cảm coi yếu tố nguy phát triển bệnh cầu thận cấy ghép (TG) mảnh ghép sau Để thực hiểu tác động DSA trước cấy ghép phát xét nghiệm chuỗi, cần phải ghi lại kết ngắn hạn dài hạn Ngoài ra, kết bị ảnh hưởng giao thức giải mẫn cảm cảm ứng với chất làm tan máu lúc cung cấp cho tất người nhận, việc sử dụng liệu hồi cứu để trả lời tất câu hỏi thường gặp nhiều khó khăn Hiện có liệu cho thấy nguy AMR tăng lên cấy ghép thực với diện DSA Nhiều chương trình cấy ghép khơng muốn cấy ghép qua DSA dương tính với hạt nhiều chương trình phân bổ dựa kết hợp chéo ảo, người nhận bị loại trừ dựa kết chuỗi mà khơng có hội ghép chéo với tế bào người hiến tặng Hầu hết liệu từ nghiên cứu hồi cứu với phác đồ ức chế miễn dịch thay đổi, khó để có ước tính thực nguy khơng tồn nhóm đối chứng (Tait et al., 2013) 2.2.2 Cấy ghép bệnh nhân mẫn cảm cao Quan điểm cũ cho diện cấy ghép trước DSA chống định cấy ghép lý khiến bệnh nhân nhạy cảm cao xếp vào danh sách chờ kết hợp chéo huyết với hầu hết tất người hiến tặng dương tính Sự đời SPI nhạy cảm dẫn đến gia tăng số lượng bệnh nhân nhạy cảm cao cho thấy diện DSA lúc chống định mà yếu tố nguy Nguy đào thải mảnh ghép giảm theo hai cách: (a) lựa chọn người hiến tặng mà bệnh nhân khơng có DSA (b) loại bỏ DSA thông qua phác đồ giải mẫn cảm (Tait et al., 2013) 35 2.2.3 Các chiến lược cấy ghép cho bệnh nhân có độ nhạy cảm cao Các chương trình đặc biệt cần thiết để tăng hội cấy ghép cho bệnh nhân nhạy cảm cao với người hiến tặng kết hợp chéo âm tính mà khơng cần giải mẫn cảm Đối với bệnh nhân chờ đợi quan hiến tặng qua đời, chương trình khơng phù hợp chấp nhận Eurotransplant chứng minh hiệu Cơ sở chương trình khơng phù hợp chấp nhận xác định xác kháng nguyên HLA mà bệnh nhân nhạy cảm cao khơng hình thành kháng thể Các chương trình tương tự tồn phạm vi quốc tế, nơi bệnh nhân nhạy cảm cao ưu tiên nhận quan âm tính kết hợp chéo ảo Bệnh nhân có người hiến tặng cịn sống khơng tương thích tham gia vào chương trình trao đổi người hiến tặng theo cặp Trong trường hợp bệnh nhân nhạy cảm có sẵn người hiến tặng cịn sống mà bệnh nhân hình thành DSA, chương trình trao đổi người hiến tặng ghép đơi tạo điều kiện cho việc cấy ghép với người hiến tặng kết hợp chéo âm tính thay Nếu khơng xác định người hiến tặng tương thích, giải mẫn cảm thực kết hợp với biện pháp khác Các giao thức giải mẫn cảm nhằm mục đích hạ DSA thời điểm cấy ghép xuống ngưỡng coi an tồn trì DSA mức này, với trợ giúp ức chế miễn dịch, ngày đến vài tuần sau cấy ghép Bằng cách này, kháng thể bị loại bỏ khỏi tuần hoàn bệnh nhân phương pháp hấp thu miễn dịch hấp thụ miễn dịch trình sản xuất chúng bị ức chế ức chế miễn dịch tế bào T, IVIg, rituximab chất ức chế proteasome bortezomib dựa lý suy giảm tế bào lympho B tế bào huyết tương làm giảm sản xuất DSA Một cách tiếp cận bổ sung ngăn chặn hoạt hóa bổ thể cách sử dụng eculizumab ức chế bổ thể C5 Thật khơng may, thử nghiệm ngẫu nhiên có đối chứng so sánh hiệu lâm sàng chiến lược giải mẫn cảm khác bị thiếu Bệnh nhân giải mẫn cảm thường bị ức chế miễn dịch mạnh bệnh nhân mẫn cảm với DSA kết hợp chéo âm tính Vấn đề cịn tranh luận liệu giải mẫn cảm có ngăn cản việc sản xuất kháng thể de novo HLA mang lại kết lâu dài tốt hay khơng Ngày có nhiều chứng cho thấy rằng, bệnh nhân lựa chọn cẩn thận dựa hiệu giá kháng thể, giải mẫn cảm thực cách an tồn với mảnh ghép tốt sống sót bệnh nhân ghép tạng từ người hiến tặng sống qua đời kết hợp giải mẫn cảm, khơng phù hợp chấp nhận chương trình, kết hợp tốt HLA biện pháp khác theo cách tích hợp báo cáo làm giảm đáng 36 kể thời gian chờ đợi kết tốt sống sót bệnh nhân (Tait et al., 2013) 2.2.4 Tác động nhạy cảm HLA kết ca cấy ghép thận Như ghép thận, ghép chéo thủ tục thường quy ghép tụy Mặc dù việc xác định UA kết hợp chéo ảo trở thành quy trình thường quy ngày nhiều trung tâm cấy ghép tim phổi năm gần đây, ghép tạng tế bào đảo khác, cần có thêm liệu để xác định vai trị xác DSA trước cấy ghép mảnh ghép kết (Tait et al., 2013) Mặc dù khơng có thử nghiệm lâm sàng ngẫu nhiên đưa chứng rõ ràng tác động kháng thể có từ trước kết ghép tim, số báo cáo gợi ý rõ ràng mẫn cảm bệnh nhân chờ ghép tim vấn đề đáng kể chủ yếu tỷ lệ mẫn cảm ngày tăng truyền máu Các sản phẩm sau đưa thiết bị hỗ trợ vào và, bệnh nhân nhi, sau sử dụng mô allograft phẫu thuật tim bẩm sinh Sự nhạy cảm, đặc biệt diện DSA, chứng minh có liên quan đến tỷ lệ thải loại cao kết ghép có chứng cho thấy việc cố định bổ thể DSA gây bất lợi cho kết ghép Các báo cáo gần việc cạn kiệt thành cơng kháng thể đồng loại dẫn đến việc cấy ghép người nhận tim có độ nhạy cảm cao mà khơng có siêu thải loại (Tait et al., 2013) Có báo cáo siêu thải loại sau ghép phổi qua kết hợp chéo dương tính Do đó, kháng thể tồn từ trước HLA thường xem bất lợi việc ghép phổi Mặc dù khơng có chứng tác động PRA kết lâm sàng, nghiên cứu lớn báo cáo PRA 25% có dự đốn tiêu cực đáng kể hoạt động thành cơng tồn phổi hai nghiên cứu khác, liệu pháp giải mẫn cảm trước cấy ghép liên quan đến cải thiện thơng số lâm sàng, bao gồm đào thải cấp tính viêm tiểu phế quản tắc nghẽn (Tait et al., 2013) Trong ghép gan, tác động dị ứng kết tranh cãi xét nghiệm HLA trước cấy ghép kết hợp chéo thủ tục thường quy Tuy nhiên, nhiều nghiên cứu gần kết hợp chéo trước cấy ghép có liên quan trình ghép gan đặc biệt kết hợp chéo tế bào T dương tính diện DSA trước cấy ghép có liên quan đến tỷ lệ sống sót mảnh ghép Các kháng thể 37 HLA tạo sẵn có liên quan đến khả sống sót ca cấy ghép lại (Tait et al., 2013) Trong ghép gan-thận kết hợp, người ta đề xuất gan cung cấp khả bảo vệ miễn dịch chống lại thải ghép thận Tuy nhiên, nghiên cứu gần bao gồm phân tích lớn 2.484 người ghép ganthận kết hợp giải mẫn cảm trước có tác động tiêu cực đến tỷ lệ sống sót tổng thể bệnh nhân tỷ lệ sống sót sau ghép thận Mặc dù người nhạy cảm với ghép thận kết hợp gan, gan cho có khả bảo vệ ngăn ngừa AMR có kháng thể HLA tạo sẵn, nghiên cứu gần hơn, DSA tạo sẵn báo cáo để thúc đẩy AMR thận rằng, bệnh nhân nhạy cảm với DSA loại II hình thành trước, gan khơng bảo vệ hồn tồn (Tait et al., 2013) Có số liệu hạn chế tác động kháng thể trước cấy ghép chức ghép tuyến tụy Hầu hết ca cấy ghép tuyến tụy thực ghép tụy-thận đồng thời liệu nhóm chủ yếu tập trung vào thận tiêu chuẩn bệnh lý cho AMR thận xác định rõ ràng Mất mảnh ghép sớm huyết khối ghép tụy, thải loại siêu cấp tăng thải lại cấp không coi yếu tố gây mảnh ghép sớm đó, tác động kháng thể tồn trước chống lại HLA người hiến bị đánh giá thấp Tiêu chuẩn chẩn đoán AMR tuyến tụy thiết lập gần Điều cho phép chẩn đoán AMR tốt dẫn đến việc làm rõ vai trò kháng thể nguy mắc AMR tác động đến kết ghép (Tait et al., 2013) Dữ liệu cấy ghép ruột hạn chế Trong allografts ruột cô lập, kháng thể HLA tạo sẵn chứng minh có tác động bất lợi đáng kể đến sống sót allograft Hơn nữa, trường hợp AMR ghi nhận ca cấy ghép ruột với DSA kết hợp chéo dương tính cấy ghép trước sau cấy ghép de novo DSA có liên quan đáng kể với tần suất mức độ nghiêm trọng đào thải tế bào cấp tính Trong hai nghiên cứu báo cáo DSA tiền cấy ghép phát hạt dòng chảy CDC có liên quan đến khả sống sót sau cấy ghép cấy ghép tế bào đảo, nghiên cứu khác, mối liên quan tương tự khơng thể hình dung bệnh nhân thường cấy ghép với thận nhận tủy xương người hiến tặng với truyền đảo nhỏ Trong báo cáo đăng ký đa trung tâm, PRA trước cấy ghép (không xác định DSA) khơng dự đốn thất bại cấy ghép tế bào đảo, PRA sau cấy ghép có liên quan đến kết Mặc dù có 38 sẵn liệu, nghiên cứu đo DSA người nhận đơn lẻ tế bào đảo cho thấy tác động tiêu cực kháng thể HLA có từ trước (Tait et al., 2013) 2.3 Kiểm tra kháng thể sau cấy ghép 2.3.1 Thử nghiệm kháng thể HLA huyết rối loạn chức bề mặt allograft AMR xảy 10% đến 20% người nhận allograft tim tương quan với việc gia tăng tỷ lệ tổn thương huyết động, thải loại, tỷ lệ mắc bệnh mạch máu toàn thân cao tử vong Tuy nhiên, tất người nhận allograft nội tạng rắn có nguy phát triển AMR nhau, giai đoạn đầu sau cấy ghép Ví dụ, bệnh nhân allograft thận cấy ghép đối mặt với nhớ miễn dịch (ví dụ, với diện tiền cấy ghép DSA), có tỷ lệ tăng AMR (lâm sàng cận lâm sàng) sau cấy ghép sớm khoảng từ 21% đến 55% Để so sánh, trường hợp không cấy ghép trước DSA, tỷ lệ mắc AMR sớm thấp nhiều, tỷ lệ báo cáo 1% đến 6% năm Hơn nữa, bệnh nhân có cPRA từ 80% trở lên, chứng cho thấy họ có nguy tăng AMR mảnh ghép thiếu khơng có DSA Do đó, xem xét công dụng xét nghiệm kháng thể HLA huyết sớm sau cấy ghép, người ta phải tính đến hồ sơ nguy bệnh nhân đề cập Nguyên nhân allograft muộn ghép thận phần lớn xác định chủ yếu qua trung gian miễn dịch liên quan đến (a) bệnh tự miễn tái phát de novo, (b) AMR với tổn thương mãn tính (TG màng đáy mao mạch phúc mạc đa lớp), (c) xơ hóa mơ kẽ teo ống thận (IFTA) có khơng có đào thải qua trung gian tế bào bệnh thận polyomavirus Do đó, tiện ích xét nghiệm kháng thể HLA huyết có nhiều khả phát DSA khởi phát rối loạn chức ghép muộn (tức tăng creatinin huyết protein niệu khởi phát sau tháng sau cấy ghép) Điều đặc biệt bệnh nhân ghi nhận không bị ức chế miễn dịch (Tait et al., 2013) 2.3.2 Sàng lọc sinh thiết theo quy trình để kiểm tra sau cấy ghép loại thải qua trung gian kháng thể Sinh thiết theo phác đồ định nghĩa sinh thiết thực mảnh ghép ổn định mà khơng có chứng rối loạn chức sinh lý (ví dụ, protein niệu) theo dõi can thiệp sau điều trị Việc sử dụng sinh thiết theo phác đồ người nhận allograft tim chấp nhận tốt, vai trò chúng người ghép thận gan tranh cãi Bệnh nhân thận tim (và bệnh nhân gan phổi) 39 cấy ghép DSA, dù điều hòa miễn dịch hay khơng cấy ghép trước, có tỷ lệ mắc AMR sau cấy ghép sớm so với bệnh nhân khơng có DSA Hơn nữa, nghiên cứu thực sinh thiết theo phác đồ bệnh nhân thận tim phát tỷ lệ AMR cận lâm sàng tăng lên Hơn nữa, người nhận thận, TG cận lâm sàng xác định, có liên quan đến tổn thương mãn tính rối loạn chức ghép muộn Ngoài việc thực sinh thiết theo phác đồ để phát AMR cận lâm sàng, sinh thiết theo phác đồ tiến hành sau kiện AMR để xác định hiệu liệu pháp (tức C4d + dai dẳng, cầu thận, mao mạch phúc mạc mạch) để xác định số tiên lượng kết (tức là, TG màng đáy mao mạch phúc mạc đa lớp) Ngược lại, trường hợp khơng có DSA trước cấy ghép, khả phát sớm AMR cận lâm sàng sau cấy ghép phương pháp sinh thiết người ghép thận thấp rõ ràng tim Ý nghĩa kháng thể de novo HLA trường hợp khơng có kháng thể de novo DSA HLA cịn tranh cãi Các nhóm báo cáo kết tuyệt vời bệnh nhân cấy ghép trước kháng thể de novo HLA, nhóm khác cho tăng nguy mảnh ghép, cho DSA có khả bị cô lập allograft ngăn cản phát lưu hành Điều thường tranh luận tầm quan trọng kháng thể de novo HLA không hướng dẫn người hiến tặng Thiếu nghiên cứu theo sinh thiết theo phác đồ bắt đầu dựa kháng thể de novo HLA mà khơng có DSA để ghi lại liệu có chứng tổn thương qua trung gian kháng thể hay không Kinh nghiệm việc sử dụng sinh thiết theo phác đồ để nghiên cứu bệnh nhân điều trị cắt ức chế miễn dịch hạn chế Tuy nhiên, nghiên cứu gần chứng minh bệnh nhân chuyển từ cyclosporine sang everolimus 4,5 tháng sau cấy ghép có tỷ lệ de novo DSA AMR sau ngừng cyclosporine cao so với bệnh nhân trì cyclosporine Tương tự, khơng tn thủ, hình thức ngừng thuốc ức chế miễn dịch, có liên quan đến tỷ lệ de novo DSA cao mảnh ghép nhanh liên quan đến AMR Tổng hợp lại, cho thấy việc giảm ức chế miễn dịch làm tăng nguy mắc AMR (Tait et al., 2013) 2.3.3 Sàng lọc kháng thể HLA huyết nối tiếp sau cấy ghép Bệnh nhân thận cấy ghép sau cấy ghép trước DSA có tỷ lệ tăng AMR sớm sau cấy ghép AMR TG cận lâm sàng Một số nhóm chứng minh bệnh nhân tồn tăng DSA huyết tương quan với kết ghép chức ghép sớm có ổn định hay khơng Tương tự, thất bại DSA việc 40 giảm AMR sau điều trị có liên quan đến kết ghép Sự phát triển de novo DSA sau ghép thận có liên quan đến việc tăng nguy mảnh ghép nhiều loạt lớn Đáng ý, nhiều báo cáo này, xảy DSA de novo loại I, hầu hết bệnh nhân phát triển DSA de novo loại II hướng vào DR, DQ người hiến tặng kháng nguyên DP Một nghiên cứu gần theo dõi phát triển de novo DSA chứng minh thời gian xuất trung bình 4,6 năm sau cấy ghép với xu hướng xuất sớm đối mặt với không tuân thủ; tỷ lệ lưu hành de novo DSA thời điểm 10 năm 20% bệnh nhân tuân thủ 60% bệnh nhân không tuân thủ Tỷ lệ không tuân thủ cao tương tự bệnh nhân AMR mãn tính báo cáo gần Ngoài việc giảm thiểu không tuân thủ thuốc, yếu tố nguy khác phát triển de novo DSA không phù hợp HLA-DR, đào thải qua trung gian tế bào sớm (cả lâm sàng cận lâm sàng) tuổi người nhận trẻ Liên quan đến ghép tim, ảnh hưởng có hại kháng thể tỷ lệ sống sót mảnh ghép, đặc biệt bệnh nhân phát triển kháng thể de novo sau cấy ghép, báo cáo gần Trong nhóm 950 bệnh nhân nghiên cứu thời gian 15 năm, tỷ lệ sống sót mảnh ghép cao bệnh nhân không phát triển kháng thể (70%) người hiển thị chúng trước cấy ghép (71%) Tỷ lệ sống sót mảnh ghép thấp người nhận có kháng thể trước cấy ghép sau cấy ghép (56%) sau cấy ghép (47%) Kháng thể de novo xuất năm sau cấy ghép có tỷ lệ sống Sự phát triển AMR có tác động tiêu cực đáng kể đến tỷ lệ sống sót mảnh ghép (16% bệnh nhân AMR so với 63% bệnh nhân không AMR) Trong số người ghép phổi, diện kháng thể HLA có liên quan đến tình trạng thải ghép cấp tính tái phát dai dẳng Điều quan trọng, thải loại yếu tố nguy quan trọng phát triển bệnh viêm tiểu phế quản tắc nghẽn, có tỷ lệ mắc bệnh cao tới 50% sau cấy ghép có liên quan đến phát triển DSA Liệu điều trị để loại bỏ/giảm DSA có làm giảm nguy thải ghép phổi hay không chưa rõ ràng Ở người nhận allograft gan, kháng thể HLA gần lên yếu tố góp phần gây đợt thải ghép cấp tính mãn tính, liệu suy giảm kháng thể có mang lại tác dụng có lợi hay khơng chưa báo cáo Điều người nhận cấy ghép nội tạng khác (Tait et al., 2013) 2.4 Phân loại HLA dựa vào kỹ thuật giải trình tự hệ (NGS) Với đời phương pháp giải trình tự hệ (NGS) với chi phí cao, hiệu quả, thời đại mà việc phân loại HLA thơng 41 thường thực cấp độ allele Các tảng tự động mạnh mẽ có sẵn để giải trình tự toàn gen HLA, bao gồm UTRs 5′ 3′ trình tự nội Trong điều tạo gia tăng đáng kể số lượng allele mơ tả, cho phép hội liên kết trình tự chức DNA môi trường liên kết bệnh cấy ghép (Carey et al., 2019) Các phương pháp giải trình tự vài ngày để hoàn thành việc lựa chọn người hiến tặng có khả “biểu thấp” giới hạn người hiến sống kết hợp với chia sẻ thận, chẳng hạn Chương trình Chia sẻ Thận Người hiến tặng sống Vương quốc Anh Tuy nhiên, với đời phương pháp giải trình tự mới, chẳng hạn Oxford Nanopore Minion, việc giải trình tự gen HLA hồn chỉnh khả tương lai (Carey et al., 2019) Sự đa hình HLA lần xác định đặc trưng cách sử dụng kháng thể (kháng huyết thanh) chống lại bạch cầu thử nghiệm độc tính tế bào vi mô phát triển để đánh giá huyết kháng nguyên HLA (loại mô) người Tuy nhiên, kể từ kỹ thuật PCR đời, kỹ thuật phân loại HLA dựa DNA tiến vượt bậc tiến nhanh chóng thúc đẩy thực tế việc phân loại DNA cho phép độ phân giải HLA cao cung cấp tiện ích chẩn đốn tốt so với định kiểu huyết Ngày nay, phân loại HLA có độ phân giải cao tiêu chuẩn vàng cho ứng dụng lâm sàng dựa HLA, đặc biệt để ghép tế bào gốc tạo máu (HSCT) hữu ích cho nghiên cứu khoa học vai trò HLA sinh lý bệnh (Kishore and Petrek, 2018) Các tảng NGS thường sử dụng để giải trình tự thơng lượng cao phân tích song song hàng loạt, bao gồm cho HLA Ion torrent (Thermo Fisher), Illumina, SOLiD (ABI), PacBio, Oxford Nanopore Ngoài chi phí vốn, chúng khác nhiều tính năng, bao gồm độ dài trình tự thời gian trình tự Những hạn chế NGS chi phí cao, thời gian giải trình tự lâu địi hỏi chun mơn kỹ thuật cao Giải trình tự thơng lượng cao vùng HLA đề xuất công cụ tích hợp để phát xác SNP, InDel, CNV, biến thể vị trí mối nối phân loại gen HLA để có độ phân giải tốt Các khía cạnh kỹ thuật phân loại HLA dựa NGS gần xem xét chi tiết Tóm lại, bước liên quan đến NGS bao gồm (Kishore and Petrek, 2018): (i) Khuếch đại PCR vùng đích (vùng HLA hồn chỉnh, gen có chiều dài đầy đủ, số exon định gen HLA), định lượng tinh chế enzyme amplicon 42 (ii) Chuẩn bị thư viện cách kết nối amplicon vào điều hợp lập mục, tinh lọc amplicon dựa hạt lựa chọn kích thước (iii) Giải trình tự sử dụng tảng NGS (iv) Phân tích liệu phần mềm phù hợp Đối với NGS, hai kỹ thuật nhắm mục tiêu cụ thể vào vùng HLA bao gồm: phân lập dựa PCR tầm xa/trung bình phương pháp bắt giữ dựa lai ghép Tuy nhiên, đạt cân allele tốt bao phủ đồng dọc theo tất gen mục tiêu thách thức lớn Cách tiếp cận kết hợp phương pháp nâng cao dựa NGS để tăng độ dài trình tự cơng cụ tin sinh học tiên tiến có khả trở thành tiêu chuẩn vàng để phân loại xác biến thể HLA (lên đến độ phân giải allele trường thứ tư) tạo dạng đơn bội HLA có chiều dài đầy đủ mà khơng có mơ hồ pha Việc xác định trình tự vùng HLA hồn chỉnh cách sử dụng thư viện trình tự HLA hầu hết cần thiết để tạo sở liệu dựa dân số, dịng họ hữu ích cho nghiên cứu bệnh liên quan đến HLA, việc phân loại HLA có độ dài đầy đủ exon chọn lọc gen HLA thích hợp cho mục đích lâm sàng Hơn nữa, thông tin từ phân loại HLA dựa NGS kỳ vọng cung cấp nhìn sâu sắc biểu điều hòa gen HLA bao gồm chế ngoại di truyền nâng cao hiểu biết “HLA-omics” bệnh miễn dịch phức tạp (Kishore and Petrek, 2018) Với tiến cách phân loại HLA thông lượng cao dựa NGS, có mở rộng đáng kể số lượng trình tự HLA allele gửi đến sở liệu HLA (13.324 loại I, 4.857 loại II 182 allele khơng phải HLA khác q trình phát triển sở liệu đa hình miễn dịch ImMunoGeneTics/HLA 'IPD-IMGT/HLA1 Danh mục “CWD” phổ biến ghi chép đầy đủ cho HLA lớp I allele II trì để cập nhật allele HLA tìm thấy tần số biết (phổ biến C) chép cách sử dụng phân loại dựa trình tự liệu haplotype HLA (tài liệu đầy đủ 'WD') (CWD v2.0.0) Các loại CWD mở rộng đến ký hiệu “G” “P” cho allele khác có trình tự nucleotide protein giống hệt nhau, tương ứng Tuy nhiên, với cách đánh NGS HLA, thách thức cịn phân kỳ đa hình dẫn đến kết khơng rõ ràng Thách thức kết hợp bỏ qua PCR cân allele, thư viện có kích thước đoạn nhỏ để đạt 43 phân kỳ khơng có khả chọn trình tự vùng HLA, chẳng hạn exon gen DPB1 DRB1 (Kishore and Petrek, 2018) 2.5 HLA bệnh liên kết Vùng HLA có liên quan đến 100 bệnh đa nhân tố, phức tạp, chủ yếu bệnh sinh viêm tự miễn dịch Các bệnh bao gồm bệnh celiac, bệnh vẩy nến, bệnh viêm khớp dạng thấp, bệnh tiểu đường type 1, bệnh lupus ban đỏ, bệnh phổi (ví dụ: bệnh hen suyễn bệnh sarcoidosis), bệnh truyền nhiễm (ví dụ: HIV, viêm gan, bệnh phong, bệnh lao) bệnh khác khối u ác tính bệnh thần kinh Trong hầu hết trường hợp, khó để xác định mối liên hệ di truyền chính, chủ yếu lý sau: mật độ gen HLA cao, LD mạnh ảnh hưởng nhiều locus HLA Tuy nhiên, việc sử dụng NGS để lập đồ gen HLA cho allele không báo cáo dạng haplotype hữu ích việc giải phức tạp bệnh liên quan đến HLA dạng phụ lâm sàng chúng Ví dụ, bệnh vẩy nến, liên kết gen HLA-DPB1 BTNL2 năm locus số gen HLA-C, -B, -DPB1 BTNL2 báo cáo cách sử dụng NGS Các mối liên quan HLA riêng biệt báo cáo nguy tổng thể bệnh vảy nến nguy kiểu phụ cụ thể nó, chẳng hạn viêm khớp vảy nến vảy nến da (Kishore and Petrek, 2018) Trong tương lai, phân giải allele gen HLA NGS thu hữu ích việc nghiên cứu ảnh hưởng tương tác biến thể nguy bệnh tật, việc lựa chọn người tham gia vào thử nghiệm phòng ngừa can thiệp giải mã chế trình bày kháng nguyên phản ứng tế bào T rối loạn tự miễn dịch mãn tính, chẳng hạn viêm khớp dạng thấp Có ứng dụng quan trọng việc phân loại HLA dựa NGS y sinh học, cụ thể (i) đối sánh HLA cặp người cho-người nhận HSCT, bao gồm việc phân loại HLA cho sổ đăng ký người hiến tủy xương không liên quan (ii) mô tả đặc điểm phản ứng cá nhân với liệu pháp thuốc bao gồm di truyền dược lý Hơn (iii) NGS tạo điều kiện cho chiến lược dựa phù hợp epitope ghép tạng thể rắn (Kishore and Petrek, 2018) 2.6 Phân loại HLA dựa NGS nghiên cứu dân số ứng dụng để điều tra bệnh liên kết HLA Phân loại HLA dựa NGS có lợi cho nghiên cứu dân số, điều quan trọng không di truyền quần thể mà cịn việc giải thích nghiên cứu liên quan đến bệnh tật sử dụng sổ đăng ký người 44 hiến tạng Trong tất ứng dụng này, NGS lấp đầy khoảng trống liệu có thiết lập sở liệu HLA dành riêng cho dân số với độ xác cải thiện Ví dụ, nghiên cứu dân số đưa mức độ phổ biến allele HLA (danh mục CWD) cung cấp tài liệu tham khảo để hỗ trợ giải điểm không rõ ràng việc cấy ghép mô để xác định diện phổ biến allele HLA quần thể người khác Thơng tin cập nhật cải thiện cách phân loại NGS HLA Một ứng dụng NGS nghiên cứu dân số báo cáo sở liệu khu vực HLA hoàn chỉnh dân số người Trung Quốc Trong nhóm người Saudi gồm cá thể khỏe mạnh, tần số allele tần số đơn bội gen HLA (HLA-A, -B, -C, -DRB1 -DQB1) báo cáo với độ phân giải cải thiện cách sử dụng cách phân loại NGS HLA Ở cấp độ gen HLA nhắm mục tiêu, đa dạng gen HLA-E dựa NGS đánh giá người Tây Phi Mức độ đa hình khu vực HLA đặc trưng cho dân số châu Âu châu Mỹ hầu hết cấp độ trường thứ hai Điều dự kiến mô tả chi tiết cách sử dụng NGS, báo cáo gần người dân Anh Argentina (Kishore and Petrek, 2018) Trong bối cảnh nghiên cứu mối liên hệ bệnh tật, người ta cho nguy HLA quy định khác quần thể khác Một danh sách mô tả quần thể allele HLA (ở độ phân giải thấp) biến thể nguy tăng giảm kiểu hình bệnh tiến triển bệnh bệnh sarcoidosis phác thảo Bệnh Celiac đại diện cho ví dụ khác bệnh liên quan đến HLA dân số châu Âu khác Căn bệnh liên quan đến gen HLA-DQA -DQB khoảng 96% bệnh nhân celiac châu Âu mang gen di truyền HLA-DQ2.5 (DQA1∗05DQB1∗0201) số báo cáo có khác biệt người khơng phải châu Âu, ví dụ, người Brazil Iran, -DQ2.2 không liên quan đến bệnh celiac Ngoài ra, sở HLA khác biệt locus GIMAP, nơi mã hóa protein liên quan đến phát triển tế bào lympho T B v bnh Behỗet ó c mụ t cỏc quần thể châu Á châu Âu (Kishore and Petrek, 2018) Do đó, việc nâng cao kiến thức di truyền quần thể HLA có ý nghĩa quan trọng việc điều tra mối liên hệ bệnh haplotype allele HLA cụ thể nhóm dân tộc khác Vì mục đích này, sở liệu HLA allelefrequency.net danh mục allele haplotype cụ thể cung cấp liệu allele haplotype phổ biến kiến trúc di truyền HLA quần thể Bản cập nhật họ với việc phân loại HLA phân 45 giải allele NGS cung cấp thơng tin có giá trị bao gồm vùng chưa lập đồ trước (intron, exon mở rộng trình tự điều hịa gen khác) hữu ích để hiểu thêm vai trị biến thể HLA liên quan tính nhạy cảm với bệnh điều chỉnh lâm sàng kết Trong bối cảnh này, hướng dẫn chung “Tăng cường báo cáo nghiên cứu Hiệp hội Di truyền (STREGA)” “Tăng cường báo cáo nghiên cứu Hệ miễn dịch (STREIS)” áp dụng cho phân tích hiệp hội HLA Những nỗ lực lĩnh vực tiến hành, kích thích nhiều hoạt động Hội thảo HLA quốc tế Di truyền học miễn dịch lần thứ 17 'IHIW', phát triển xung quanh việc phân loại NGS HLA ứng dụng nó, với cách tiếp cận tập trung để phân tích quản lý liệu, bao gồm thu thập, chia sẻ liệu lưu trữ Có thể truy cập chi tiết dự án thực cập nhật liên quan đến di truyền quần thể HLA, chẳng hạn EFIPG, EUROSTAM, HLA-NET AHPD https://hla-net.eu/projects/ (Kishore and Petrek, 2018) 46 CHƯƠNG 3: KẾT LUẬN Hệ thống kháng nguyên bạch cầu người (HLA) đặc biệt đa hình chứa nhiều gen mã hóa thành phần quan trọng hệ thống miễn dịch thích ứng người Sự phù hợp allelic gen bệnh nhân người hiến tặng điều cần thiết cho kết cấy ghép ghép tế bào gốc tạo máu toàn thể mức độ thấp ghép tạng rắn Do đó, việc xác định kiểu gen gen loại I HLA-A, -B -C gen loại II HLA-DRB1, -DQB1 -DPB1 thực thường xuyên phòng khám quan đăng ký hiến tế bào gốc (Klasberg et al., 2019) Hiện tại, 21.000 allele đặt tên báo cáo kho lưu trữ trình tự tham chiếu công khai trung tâm biến đổi allele HLA cho riêng gen (IPD-IMGT / HLA phát hành 3.36.0) Do đó, việc xác định kiểu gen HLA mẫu nhiệm vụ không nhỏ Về mặt lịch sử, phân loại dựa huyết học thay số phương pháp đánh máy dựa DNA có độ phân giải độ xác khác nhau, chẳng hạn đầu dị oligonucleotide cụ thể theo trình tự PCR mồi cụ thể theo trình tự cuối phân loại dựa trình tự dựa giải trình tự Sanger Trong phương pháp sử dụng mức độ khác nhau, chúng ngày thay phương pháp giải trình tự hệ (Klasberg et al., 2019) Sự đời giải trình tự hệ (NGS) thay đổi diện mạo hệ thống phân loại gen hệ thống kháng nguyên bạch cầu người (HLA) lâm sàng, sở đăng ký người hiến tế bào gốc bối cảnh nghiên cứu NGS làm tăng đáng kể thơng lượng giải trình tự với độ xác cao, đồng thời tiết kiệm thời gian chi phí so với công nghệ tiền thân Điều dẫn đến việc tìm hiểu rộng sâu gen quan trọng cấu tạo gen miễn dịch người Sự phát triển nhanh chóng cơng nghệ giải trình tự chứng minh phát triển tảng giải trình tự đọc ngắn khác với độ dài đọc khả giải trình tự khác đến tảng giải trình tự đọc dài có khả định dạng gen đầy đủ mà không bị phân mảnh Đồng thời, có phát triển phân tích tính tốn đa dạng cơng cụ phần mềm phát triển để giải điểm mạnh hạn chế khác liệu trình tự tạo tảng trình tự khác (Klasberg et al., 2019) 47 TÀI LIỆU THAM KHẢO Allen, E.S., B Yang, J Garrett, E.D Ball, M Maiers and G.P Morris, 2018 Improved accuracy of clinical HLA genotyping by next-generation DNA sequencing affects unrelated donor search results for hematopoietic stem cell transplantation Human Immunology, 79(12): 848-854 Carey, B.S., K.V Poulton and A Poles, 2019 Factors affecting HLA expression: A review International Journal of Immunogenetics, 46(5): 307320 Choo, S.Y., 2007 The HLA system: genetics, immunology, clinical testing, and clinical implications Yonsei medical journal, 48(1): 11–23 Juhos, S., K Rigó and G Horváth, 2016 On Genotyping Polymorphic HLA Genes — Ambiguities and Quality Measures Using NGS In: Kulski, J.K (Editor) Next Generation Sequencing - Advances, Applications and Challenges IntechOpen 369-386 Kishore, A and M Petrek, 2018 Next-Generation Sequencing Based HLA Typing: Deciphering Immunogenetic Aspects of Sarcoidosis Frontiers in genetics, 9: 503 Klasberg, S., V Surendranath, V Lange and G Schöfl, 2019 Opportunities for Next Generation Sequencing-Based HLA Genotyping Transfus Med Hemother, 46: 312–324 Mahdi, B.M., 2019 Introductory Chapter: Concept of Human Leukocyte Antigen (HLA) In: Mahdi, B.M (Editor) Human Leukocyte Antigen (HLA) IntechOpen 1-8 Mehra, N.K and A.K Baranwal, 2016 Clinical and immunological relevance of antibodies in solid organ transplantation International Journal of Immunogenetics, 43(6): 351-368 Shiina, T., Hosomichi, K., Inoko, H., J.K Kulski, 2009 The HLA genomic loci map: expression, interaction, diversity and disease Journal of Human Genetics, 54: 15–39 Tait, B.D., C Süsal, H.M Gebel, P.W Nickerson, A.A Zachary, F.H Claas, E.F Reed, R.A Bray, P Campbell, J.R Chapman, P.T Coates, R.B Colvin, E Cozzi E, I.I Doxiadis, S.V Fuggle, J Gill, D Glotz, N Lachmann, T Mohanakumar, N Suciu-Foca, S Sumitran-Holgersson, K Tanabe, C.J Taylor, D.B Tyan, A Webster, A Zeevi and G Opelz, 2013 Consensus guidelines on the testing and clinical management issues associated with HLA and non-HLA antibodies in transplantation Transplantation, 95(1): 19-47 Vogiatzi, P., 2016 Some considerations on the current debate about typing resolution in solid organ transplantation Transplantation Research, 5: 48 ... phù hợp HLA Sau cấy ghép AbMR CMR bị loại bỏ ức chế miễn dịch (Carey et al., 2019) 27 CHƯƠNG 2: VAI TRÒ CỦA HLA TRONG GHÉP TẠNG VÀ NGSBASED HLA 2.1 Hệ thống HLA cấy ghép HLA- A, HLA- B HLA- DR từ... cấy ghép 22 1.9 Các gợi ý nghiên cứu phịng thí nghiệm 23 1.10 Các vấn đề cần quan tâm .25 CHƯƠNG 2: VAI TRÒ CỦA HLA TRONG GHÉP TẠNG VÀ NGS-BASED HLA 27 2.1 Hệ thống. .. chưa báo cáo Điều người nhận cấy ghép nội tạng khác (Tait et al., 2013) 2.4 Phân loại HLA dựa vào kỹ thuật giải trình tự hệ (NGS) Với đời phương pháp giải trình tự hệ (NGS) với chi phí cao, hiệu