Nghiên cứu vòng đời của vi tảo biển dị dưỡng schizochytrium mangrovei PQ6

Khóa luận tốt nghiệp Khoa cơng nghệ sinh học LỜI CẢM ƠN Lời xin gửi lời câm ơn sâu sắc đến PGS.TS Đặng Diễm Hồng, Trưởng phòng công nghệ Táo, Viện Công nghệ Sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam tạo điều kiện cho tơi thực tập phịng thí nghiệm Tôi xin chân thành cám ơn ThS NCS Lưu Thị Tâm, KS Phạm Văn Nhất, KS Hoàng Thị Hương Quỳnh - người trực tiếp giúp đỡ suốt thời gian thực đề tài tốt nghiệp Tôi xin gừi lời cám ơn chân thành tới tập thê phịng Cơng nghệ Táo giúp đỡ tơi nhiệt tình chia khó khăn với tơi suốt q trình tơi thực tập phịng Tôi xin gứi lời cảm ơn đến tất cà thầy, cô Khoa Công nghệ Sinh học, Viện Đại học Mớ Hà Nội giúp dỡ dạy bào thời gian học tập nghiên cứu Tôi xin bày tó lịng biết ơn sâu sắc tới bố mẹ, gia đình bạn bè tạo điều kiện tốt va viển tơi ừịng súồt q tr'1'nlt tổi học tập nghiên cứu Hà Nội, ngày tháng năm 2015 Sinh viên Đỗ Thị Ánh Sao Đỗ Thị Ánh Sao Lớp: KS CNSH 11-04 Khóa luận tốt nghiệp Khoa công nghệ sinh học MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i Mục Lục ii Danh Mục Hình V Danh Mục Bang vi Danh Mục Các Từ Viết Tắt vi MỞ ĐÀU CHƯƠNG TÓNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung tảo vi tảo 1.1.1 Khái niệm tào, vi tảo biển 1.1.2 Phân loại 1.1.3 Sinh sán, sinh dưỡng cùa tào 1.1.4, Sinh tnrởngTdilíảờdệĩl Viện Đại học .Mơ Hà Nội 1.1.5 Vai trò cùa vi tảo 1.2 Chu kỳ sống tế bào 16 Gian kỳ 16 1.2.1 1.2.1.1 GI 16 1.2.1.2 s 17 1.2.1.3 G2 18 1.2.1.4 Phân bào 18 Nguyên phân 21 1.2.2 1.2.2.1 Đặc điểm cúa nguyên phân 21 1.2.2.2 Các kỳ nguyên phân 22 1.3 Giới thiệu chung chi vi tảo biến Schizochytrium 25 Đỗ Thị Ánh Sao Lớp: KS CNSH 11-04 Khoa cơng nghệ sinh học Khóa luận tốt nghiệp 1.3.1 VỊ trí, phân loại Schizochytrium 25 1.3.2 Chu trình sống Schizochytrium 26 1.3.3 Tình hình nghiên cứu Schizochytrium 26 1.3.3.1 Trên giới 26 1.3.3.2 Ở Việt Nam .27 CHƯƠNG PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cưu 31 2.1 Vật liệu hóa chất .31 2.1.1 Vật liệu 31 2.1.2 Hóa chất 31 2.2 Thiết bị, dụng cụ 31 2.3 Phương pháp nghiên cứu 31 2.3.1 Chuẩn bị tế bào tào s mangrovei PQ6 đế quan sát vòng dời 31 2.3.2 Các bước tiếEhwviện Viện.Đại.học.Mả.Hà.Nậi 32 2.4 Xử lý số liệu 33 CHƯƠNG KÉT QUẢ 34 3.1 Ảnh hướng tuổi khuẩn lạc lên phát sinh hình thái tế bào tảo Schizochytrium mangrovei PQ6 34 3.2 Kháo sát chế độ ni lên phát sinh hình thái táo Schizochytrium mangrovei PQ6 35 3.3 Các dạng te bào chu trình sống Schizochytrium mangrovei PQ6 36 3.4 Các kiếu phân chia tế bào chu trình sổng Schizochytrium mangrovei PQ6 .37 3.4.1 Các kiểu phân chia tế bào 37 3.4.2 Nhận dạng số kiểu phân chia tế bào dựa vào kích thước tế bào 39 Đỗ Thị Ánh Sao 111 Lớp: KS CNSH 11-04 Khóa luận tốt nghiệp 3.4.3 Khoa cơng nghệ sinh học Nhận dạng số kiểu phân chia tế bào dựa vào phân bố không gian tế bào 3.5 40 Vòng đời tảo Schizochytrium mangrovei PQ6 40 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 43 I Kết luận 43 Kiến nghị 43 Thư viện Viện Đại học Mở Hà Nội Đỗ Thị Ánh Sao IV Lớp: KS CNSH 11-04 Khóa luận tốt nghiệp Khoa cơng nghệ sinh học DANH MỤC HÌNH STT Số trang Tên hình Hình Năm pha sinh trưởng vi tảo Hình Chu kỳ tế bào 16 Hình Các kỳ cùa ngun phân 22 Hình Vịng đời Aurantiochytrium limacinuni 26 Hình Thao tác sử dụng micropipette đế phân lập tế bào tào 32 Hình Sự phát sinh hình thái tế bào táo s mangrovei PQ6 34 Hình Các dạng tế bào tảo s mangrovei PQ6 36 Hình Phân chia từ thành tế bào 37 Hình Phân cifỉỊfÀ’ Wrt1 VÍệPPĐại Hình 10 Phân chia từ thành tế bào 37 Hình 11 Phân chia từ thành 16 tế bào 38 Hình 12 Phân chia từ thành 32 tế bào 38 Hình 13 Ảnh minh họa giai đoạn phóng động bào tử tào s mangrovei PQ6 38 học Mở Hà Nội 37 Hình 14 Anh minh họa giai đoạn phóng amip táo s mangrovei PQ6 38 Hình 15 Vịng đời táo s.mangrovei PQ6 40 Hình 16 Sự biên đơi nội chất bên tê bào sau bô sung môi trường M1 41 Đỗ Thị Ánh Sao Lớp: KS CNSH 11-04 Khóa luận tốt nghiệp Khoa công nghệ sinh học DANH MỤC BẢNG STT Bàng Số trang Tên báng Ảnh hương cùa che độ ni nên phát sinh hình thái tào 35 s mangrovei PQ6 DANH MỤC CÁC TÙ VIẾT TẤT STT Ý nghĩa Ký hiệu AA ADN Deoxyribonucleic acid ARN Ribonucleic acid DHA Axit docosahexaenoic (C22:6 n-3) DPA Axit docopentaenoic (C22:5 n-6) EPA Axit eicosapentaenoic (C20:5 n-3) Axít arachidonic (C20:4 n-6) LCPUFAp Long-chain polyunsaturated fatty acids NST PUFA 10 I-ARN 11 s 12 SK Nhiễm sac the Polyunsaturated fatty acid Ribonucleic acid ribosome Schizochytrium Sinh khoi Sinh khối khô 13 SKK 14 TB Tế bào 15 VTM Vitamin 16 NLSH Nhiên liệu sinh học Đỗ Thị Ánh Sao VI Lớp: KS CNSH 11-04 LỜI MỞ ĐÀU Vi tảo thực vật bậc thấp, có khả quang hợp Chúng có cấu trúc đa dạng: đơn bào, đa bào hay tập đoàn, sống chủ yếu nước phân biệt với bời chất màu (chat diệp lục, sắc tố) chất dự trữ Trong tự nhiên đời sống người vi tào có vai trị quan trọng Vi tảo có kích thước phù họp, dễ tiêu hóa gây nhiễm mơi trường, nhiều lồi khơng có độc tố, chúng mắt xích chuỗi thức ăn cùa hệ sinh thái nước có ni sinh khối lớn Vi táo giữ vai trò quan trọng việc tạo môi trường (đất nước), nguồn phân bón Vi tâo cịn ngun liệu đê tách chiết hợp chất có hoạt tính sinh học cao để làm thực phẩm chức cho người động vật Tuy nhiên, ứng dụng phố biến cùa vi táo làm thức ăn cho nuôi trồng thuy sán khai thác hợp chất có hoạt tính sinh học đế làm thực phẩm chức thuốc chữa bệnh Hiện Schizochytrium - chi vi táo biển dị dưỡng thuộc họ Thraustochytrid, giới Stramenophile, biết đến nguồn tiềm cho sản xuất thương mại eĨÌHỈ ^ũlậìítỉrắề feNfthg ni trồng thúy hai sản làm giàu luân trùng Artemia cung cấp thức ăn cho ấu trùng tơm cá Ngồi sinh khối chúng sứ dụng làm thức ăn cho gà mái đẻ trứng giàu DHA có mặt siêu thị Mehico, Đức Tây Ban Nha [23, 24] Ở Việt Nam, chủng vi tảo cùa chi phân lập nuôi cấy thành công hệ thống nuôi khác Trong số chung vi tào biển thuộc chi Schizochytrium phân lập vùng biến Việt Nam lồi Schizochytrium mangrovei PQ6 dã chứng minh dối tượng tiềm cho sàn xuất axít béo omega-3 omega-6 (như axít eicosapentaenoic (C20:5 n-3, EPA), axil docosahexaenoic (C22:6 n-3, DHA) axít docopentaenoic (C22:5 n-6, DPA) bới hàm lượng lipít chúng chiếm 70% sinh khối khơ Các axít béo có vai trị quan trọng cho sức khỏe cùa người động vật nuôi Sinh khối táo s niangrovei PQ6 tiến hành nghiên cứu ứng dụng rộng rãi nhiều lĩnh vực cùa đời sống như: làm thức ăn tươi sống cho ni trồng lồi ấu trùng động vật hai mành vó, làm nguyên liệu đố làm thuốc Đỗ Thị Ánh Sao Lóp: KS CNSH 11-04 chữa bệnh làm thực phẩm chức cho người dộng vật ni Ngồi ra, chúng sử dụng làm nguyên liệu đế sàn xuat biodiesel [261 Mặc dù loài vi tào biền dị dường s mangrovei PQ6 nuôi trồng thành công hệ thống nuôi cay khác sinh khối chúng ứng dụng nhiều vào thực tiễn sống Tuy nhiên, nghiên cứu di truyền học phân từ chu trình sống chúng cịn nhiều hạn chế Đe hiếu biết rõ đặc điếm di truyền lồi tảo tiềm này, chúng tơi tiến hành luận văn “Nghiên cún vòng đòi vi tảo biển dị dưõmg Schizochytrium mangrovei PQ6” Mục đích đề tài nghiên cứu cúa sau: +/ Nhằm xác định dạng tế bào, kiều phân chia thời gian phân chia tế bào vòng đời vi táo biến Schizochytrium mangrovei PQ6 làm sở cho phân loại loài +/ Xác định pha sinh trướng cúa tào làm sờ cho việc xác định độ bội kích thước hệ gen lồi tào tiềm Cơng việc nghiên cứu thực phịng Cơng nglìệ Táo, Viện Cơng nghệ Sinh học thuộc Vjfn Nàn lâtự ^hoaji^c^i Công nghệ Việt Nam Đỗ Thị Ánh Sao Lóp: KS CNSH 11-04 CHƯƠNG I TÒNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 GIỚI THIỆU CHUNG VỀ TẢO / 7.7 Khái niệm vê táo, vi táo biên Tảo (algae) thực vật bậc thấp (thực vật có bào tứ khơng phân chia thành thân, rễ, lá) Trong tế bào (TB) tào có chứa diệp lục chúng sống chủ yếu nước Vi tảo (microalgae) tat cà loại tảo có kích thước hiền vi tức muốn quan sát chúng phái sừ dụng kính hiền vi Trong số khống 50.000 lồi tào giới vi táo chiếm 2/3 Vai trò quan trọng cúa vi táo qua trình quang hợp hấp thụ COị, cung cấp Ơ2 cho sinh vật khác trái đất, khép kín vịng tuần hồn vật chất làm tăng tốc độ quay vịng cùa chu trình [11], Cơ tào gọi tàn (thallus) thiếu thân, rề, chúng lại có chlorophyll a sac tố quang hợp dien hình thực vật Hau hết táo sống môi trường nước nước mặn, lợ, Tào có cấu trúc từ đơn bào đến đa bào Nhìn chung, tế bào táo cE^Ặt^Ồ^Ịc^i^cíỉĩQ/úy tìíờiỉ^tìr itlỉú* thife vật bậc cao có vách ngăn bang xellulose, có lục lạp có chlorophyll, cấu trúc dạng tán thường gặp cùa táo gồm cấu trúc mônát, cấu trúc palmella, cấu trúc hạt, cấu trúc sợi, cấu trúc dạng bản, cấu trúc ống Táo có mặt khắp nơi trái đất, từ đinh núi cao đáy biền sâu chí độ sâu khoảng 200 m biến nước biến dó Những loài tăo sống thủy vực gọi tảo phù du {Phytoplankton), tào sống bám đáy thúy vực bám vật sống hay thành tàu thuyền dược gọi táo đáy {Phytobentos) Dạng tảo cộng sinh với nấm thành Địa y dạng phân bố rộng rãi nhiều loài khai thác làm dược phẩm, nước hoa, phẩm nhuộm mục đích kinh tế khác (hiện biết 20.000 lồi Dịa y thuộc 400 chi khác nhau) 1.1.2 Phân loại Căn vào màu sắc, có mặt cúa chất dự trữ thành phần võ, cấu tạo nhân TB người ta chia tào thành ngành khác Đỗ Thị Ánh Sao Lóp: KS CNSH 11-04 Căn vào màu sắc (thành phần sắc tố), táo dược chia thành 10 ngành khác bao gồm: Tảo lam: Cyanophyta 2.Tào vàng: Chrysophyta 3.Tào nâu: Phaeophyta 4.Tão sillic: Bacillariophya 5.Tão đó: Rhơphyta ó.Tão giáp: Pyrophyta 7.Tao mắt: Euglenophyta Tao lục: Chlorophyta 9.Tào vòng: Charophyta 10-Tảo vàng: Xanhthopy Mặt khác, vào có mặt chất dự trừ, thành phần vỏ, cấu tạo nhân tế bào mà người ta chia tảo thành ngành sau: 1/ Ngành Tào Dyctyosphaerium, lục (Chlorophyta): Scenedesmus, Các Pediastrum, chi Closterium, Coelastrum, Staurastrum, Dunaliella, Chlamydomonas, Haematococcus, Tetrasehnis, Chlorella, 2/ Ngành Tào lông roi lệch (Heterokontophyta): Các chi Melosira, Asterionella, Cymatopleurra, Somphonema, Fragilaria, Stephanodiscus, Navicula, Malomonas, Dinobryon, Peridinium, Isochrysis, Chaetoceros, Phaeodactylum, Skeletonema, Nitzschia Thư viện Viện Đại học Mở Hà Nội 3/ Ngành Tào măt (Euglenophyta): Các chi Phacus, Trachelơmonas, Ceratium 4/ Ngành Tào (RhodophytaỴ Các chi Porphyridium, Rhodella 1.1.3 Sinh sàn, sinh dưỡng cùa táo Nhìn chung tảo có phương thức sinh sán sinh sán sinh dường, sinh sản vơ tính sinh sán hữu tính Sinh sán sinh dường: Thực bang phần riêng rẽ (đa bào hay đơn bào) thể thường khơng chun hóa chức phận sinh sản Táo đơn bào sinh sản cách phân chia tế bào Tảo tập đoàn phân tách thành tập đồn nhỏ hay hình thành tập đồn bên tế bào mẹ cùa cá thể (Volvocales, Protococcales) Sinh sàn sinh dưỡng cùa tảo dạng sợi tiến hành cách tách sợi thành đoạn đoạn đứt ngẫu nhiên cúa sợi Sinh săn vô tính: Hình thức sinh sãn biến cũa tào thực hình thành bào tử chuyên hóa Đa số táo có bào tử chuyền động, có cấu trúc mơnát, khơng có màng tế bào gọi động bào tứ (zoospore) Động bào tứ bơi lội thời gian ngan, tạo vó bọc mầm thành thể Những Đỗ Thị Ánh Sao Lóp: KS CNSH 11-04 Hình 12 Phân chia tù' thành 32 tế bào Hình 11 Phân chia tù' thành 16 tế bào Hình 13 Ánh minh họa giai đoạn phóng động bào tử tão s mangrovei PQ6 Hình 14 Ánh minh họa giai đoạn phóng amip ị' tão s mangrovei PỌ6 ĐỖ Thị Ánh Sao 38 Lóp: KS CNSH 11-04 Kết nghiên cứu thu được trình bày hình 8, 9, 10, 11, 12, 13 14 cho thấy số kiêu phân chia tế bào chu trình sống táo s mangrovei PQ6 sau: Thứ nhất: Các tế bào sinh dường hình cầu có phân chia thành 2, 4, 8, 16 32 tế bào sinh dưỡng hình cầu phương thức nhân đơi liên tục (Hình 8, 9, 10 11) Đây kiểu phân chia chu yếu chu trình sống táo Thời gian đế kết thúc chu kì phân chia tế bào theo kiều kéo dài khoảng 6h30 den 10h50 tùy vào kích thước trạng thái tế bào chọn đế quan sát ban dầu Thứ hai: Các tế bào dạng cụm có thề phóng tế bào động bào tứ có roi, có khả di động (Hình 13) Thời gian phóng động bào từ kéo dài khoảng 20 phút đến 60 phút, số lượng động bào tứ phóng khơng xác định tùy thuộc vào nội tế bào dạng cụm phóng ban đầu thông thường số lượng tế bào phóng thường > 16 tế bào Thứ 3: Các tế bào dạng cụm có thề phóng tế bào dạng amip có hình dạng khơng xác định, có khả chuyến động biến đối hình thái tế bào (Hình 14) Thời gian phóng ^mip giống phóng động tójo tứ kéo dài khoảng 20 phút đến 60 phút Tuy nhiên, số lượng amip phóng khơng nhiều, thường đen tế bào Thứ 4: Các tế bào phát triền phân chia theo dạng khác từ cụm tế bào trớ thành sorus (nang bọc), bên sàn xuất động bào tử có roi dạng amip Khi gặp điều kiện thuận lợi, chúng phân chia theo kiểu thứ thứ 3.4.2 Nhận dạng số kiêu phân chia tê bào dựa vào kích thước tế bào Tào s mangrovei PQ6 có kích thước tế bào thay đối từ - 25pm tùy thuộc vào giai đoạn sinh trướng cùa chúng Sự phân chia tế bào tào s mangrovei PQ6 phụ thuộc nhiều vào kích thước tế bào chọn đe quan sát Khi kích thước tế bào nhỏ (9- 10 pm) phân chia nhân đơi dạng cao Neu tế bào có kích thước khống 12 - 15pm khã phân chia thành dạng 16 cao Khi tế bào có kích thước lớn 15p m thành tế bào dày phân chia thành dạng 16 32 chiếm đa số Đỗ Thị Ánh Sao 39 Lóp: KS CNSH 11-04 3.4.3 Nhận dạng số kiểu phân chia tế bào dựa vào phân bố không gian cùa tế bào Bên cạch việc xác định kiểu phân chia tế bào dựa vào kích thước tế bào phân chia tế bào cịn có the xác định dựa vào phân bố không gian lớp tế bào Khi tế bào phân chia từ I thành tế bào, phân bố không gian lớp thường lớp lớp (2/0) 1/1 Ó dạng phân chia từ tế bào phân bố khơng gian thường 4/0; 3/1; 2/2 Trong đó, dạng phân chia từ thành 16 tế bào có phân bố 8/0; 4/4; 5/3; 5/2/1; 4/3/1 16/0; 10/5/1; 8/4/4, Tuy nhiên, dạng phân chia thành 32 tế bào chưa xác định phân bố không gian cùa lớp tế bào 3.5 Vòng đòi cua tảo s mangrovei PQ6 Sau quan sát phát sinh hình thái tế bào kiều phân chia chu trình sống cùa tế bào táo s mangrovei PQ6, chúng tơi đưa vịng đời chung tào trình bày hình 15 Hình 15 Vịng đời táo s.mangrovei PỌ6 Ket q trình bày the hình 15 cho thấy: Táo sinh sàn vơ tính theo nhiều phương thức Trong điều kiện thuận lợi cho sinh trưởng, táo sinh trường cách phân đơi liên tục Kích thước tế bào sinh dưỡng hình cầu tăng dàn bên tế bào bat đầu xuất vách ngăn Tùy theo kiều phân chia vách ngăn mà từ tế bào có thề tách thành 2, 8, 16, 32 tế bào (giống mơ tá hình 8, 9, 10, 11 12) Chu trình sống kiều diễn liên tục cho đen mật độ tế bào đạt cực đại điều kiện sống gặp khó khăn cạn Đỗ Thị Ánh Sao 40 Lóp: KS CNSH 11-04 kiệt dinh dường Khi đó, tảo dừng sinh trưởng tích lũy lượng lớn lipít tế bào chúng Trong điều kiện bất lợi cho sinh trường tảo môi trường nuôi cấy nghèo dinh dưỡng thay đối chế độ ni đột ngột, tế bào sinh dường hình cầu phát triền thành cụm tế bào, từ chúng phóng bào tử amip đề thích nghi với mơi trường sống (Hình 13, 14) Thời gian phóng bào tư amip diễn thời gian ngắn, khoáng 30 - 60 phút tùy tế bào Dưới điều kiện phịng thí nghiệm, chúng tơi nhận thấy dạng tế bào amip động bào tứ tồn mơi trường ni thời gian ngắn, sau động bào tứ bị roi, tế bào amip tròn dần lại chuyến sang dạng tế bào sinh dưỡng hình cầu Tuy nhiên, chưa quan sát diễn biến sinh trưởng phát triển động bào từ hay amip chu kì sống Chúng có thề sinh trưởng kiểu phân chia thứ (tức tạo tế bào sinh dường hình cầu, tế bào lớn lên phân chia thành tế bào hình cầu mói) chúng tăng dần kích thước, bên chứa nhiều tế bào con, bên bao bọc bới màng (tức tạo thành cụm tế bào), sau đó, cụm tế bào sè phóng bào từ phóng amip tùy điều kiện ni Tuy nhiên, có bốc nước q trình quan sát vịng đời cũa tào, vậy, chúng tơi tiến hành bố sung thêm môi trường Ml khứ trùng vào mầu đe tránh tường khơ mẫu Khi bổ sung mơi trường xuất màng phú bao bọc lấy te bào lập tức, sau I màng bao phú biến mat te bào lại phân chia bình thường (Hình 16) Hình 16 Sự hiến đổi nội chất bên tế bào sau bổ sung mơi trường Ml mói ĐỖ Thị Ánh Sao 41 Lóp: KS CNSH 11-04 Như vậy, việc xác định thời gian vòng đời cùa tào cần cộng thêm thời gian trễ mang tính tương đối kéo dài Trong điều kiện ni có khuấy sục vịng đời cúa tảo giám xuống Theo công bố Honda cộng (1998) |25J táo Schizochytrium limacinum cho thấy, tào có dạng tế bào dạng sinh dưỡng hình cầu dạng động bào tử dạng amip vịng đời cùa táo Te bào hình cầu có đường kính - 15pm, động bào tứ hình trứng, dài - 8,5pm rộng - 7pm, chiều ngang roi không Khi bọc động bào phóng tạo 16-24 động bào từ com mơi trường dinh dưỡng có bố sung phấn thơng, tế bào sinh dưỡng hình thành tế bào dạng amip có kích thước chiều dài 12 - 20pm rộng - 8pm; tế bào dạng amip trịn hình thành động bào tử, dài 4,5 - 6pm rộng 3,5 - 5pm Như vậy, kết nghiên cứu thu chúng tơi có nhiều nét tương đồng với công bố Honda cộng (1998) dạng tế bào xuất vòng đời tảo, có tượng phóng bào tử amip Từ kết q vịng đời có thề kết luận lồi tảo chúng tơi sứ dụng thuộc chi Schizochytrium Thư viện Viện Đại học Mở Hà Nội Đỗ Thị Ánh Sao 42 Lóp: KS CNSH 11-04 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Từ kết trình bày nêu cho phép chúng tơi rút so kết luận sau: 1/ Sự phát sinh hình thái tế bào tảo mangrovei PQ6 phụ thuộc nhiều vào tuổi khuẩn lạc chế độ ni cấy Dạng bào tứ phóng amip xuất nhiều giai đoạn đầu mẫu tâo cấy chuyền từ khuẩn lạc có thời gian cấy chuyển từ 15 ngày tuồi nuôi lắc 24 Khi tuổi khuẩn lạc > 15 < ngày chế độ nuôi tĩnh nuôi lắc < khơng quan sát thấy dạng bào tử dạng amip 2/ Có kiểu hình thái tế bào vịng đời cùa tảo: Dạng tế bào sinh dường hình cầu, dạng động bào tứ có roi, có chuyến động dạng tế bào amip có hình dạng kích thước thay đối Dạng tế bào amip chuyến trạng thái thành dạng tế bào sinh dưỡng hình cầu ngược lại Trong vịng đời cùa tào s.mangrovei PQ6 có cách phân chia tế bào chính: phóng bào từ phóng amip phân chia tế bào kiểu sinh dưỡng Tuy nhiên, dạng phân chia tế bào theo kiểu sinh sản sinh dưỡng (từ 2, 4, 8, tào 3/ Vòng đời tào s.mangrovei PQ6 kéo dài khoảng 30 phút đến 10 50 phút tùy vào kích thước trạng thái tế bào ban đầu quan sát Thời gian phóng bào từ phóng amip kéo dài khống 10 - 20 phút Kiến nghị Trong trình thực đề tài ‘’Nghiên cứu vòng đời cùa vi tão biền dị dưỡng Schizochytrium mangrovei PQ6” thu so kết quà khả quan Tuy nhiên, đe có the hiểu rõ vịng đời cùa lồi vi tảo tiềm số vấn đề cần tiếp tục nghiên cứu đề cung cấp dẫn liệu khoa học cho việc định tên khoa học phân tích hệ gen như: l/cần tiếp tục nghiên cứu kích thước bọc động bào tử động bào tứ đề có số liệu khoa học đế so sánh với loài táo thuộc chi Schizochytrium Đồng thời, chuyển hình thái tế bào từ dạng tế bào hình cầu sang dạng động bào từ hay amip ngược lại hệ can làm sáng tó Đỗ Thị Ánh Sao 43 Lóp: KS CNSH 11-04 2/ Tiên hành kiêm tra độ bội dạng tê bào phát sinh chu trình sơng chúng Từ đó, xác định giai đoạn đơn bội, giai đoạn lường bội cùa tâo làm sở cho phương pháp dòng chày tế bào (Flow Cytometry) để xác định kích thước hệ gen Thư viện Viện Đại học Mở Hà Nội Đỗ Thị Ánh Sao 44 Lóp: KS CNSH 11-04 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu nước I Hoàng Thị Lan Anh, Đinh Thị Thu Hằng, Đặng Diềm Hồng 2009 Đánh giá hiệu sừ dụng sinh khối vi tào biến dị dưỡng Schizochytrium mangrovei PQ6 việc làm giàu Luân trùng (Brachionus plicatilis) Artemia nauplii Tuyến tập Hội nghị khoa học toàn quốc sinh học bicn phát triến bền vững Nhà xuất băn KHTN CN Hà Nội 27-28/11 /2009 trang 413-421 Hoàng Thị Lan Anh 2014 Nghiên cứu số đặc điếm sinh học khả nâng ứng dụng cúa chủng vi táo biến dị dưỡng Schizochytrium mangrovei PQ6 Luận án tiến sĩ sinh học Hoàng Thị Lan Anh, Nguyễn Thị Minh Thanh, Đặng Diễm Hồng, 2009 Tách chiết tinh axít béo khơng bão hịa từ sinh khối vi tảo biển dị dưỡng Schizochytriurn inangrovei PQ6 Tạp chí Cơng nghệ sinh học, (3): 381-387 Hồng Thị Lan Anh, Lưu Thị Tâm, Nguyền Thị Minh Thanh, Đinh Thị Ngọc Mai, Đặng Diềm Hồng, 2008 Nuôi cấy chúng Schizochytrium sp PQ6 ,Uâ.káLilhư vien ViemDaiMe MợJJaJNoi' ' , hệ thơng lên men khác nhẳ Tạp chi Cơng nghệ Sinh học, 6(4A):705-711 Phạm Thành Công, 2007 Đánh giá thừ nghiệm khă ứng dụng tảo dị dưỡng Schizochytrium sp nuôi luân trùng (Barachionusplicatilis) sử dụng cho ương ni cá biên Luận vân cao học Hồng Thị Minh Hiền, Lưu Thị Tâm, Lê Thị Thơm, Nguyễn cấm Hà, Lương Hồng Hạnh Hồng Thị Lan Anh Ngơ Thị Hoài Thu, Đặng Diễm Hồng, 2013 Nghiên cứu trình tách chiết lipít tống số axít béo tự cho sán xuất dầu omega-3 omega-6 từ sinh khối vi tào biển dị dưỡng Schizochytrium mangrovei PQ6 Tạp chí sinh học, 35(4): 484-493 Đặng Diễm Hồng, Hồng Thị Lan Anh Ngơ Hồi Thu, 2008 Phân lập vi tào biền dị dường Schizochytrium giàu DHA vùng biến huyện đảo Phú Quốc Tạp chí Sinh học, 30(2): 50-55 Đặng Diềm Hồng, Hoàng Thị Minh Hiền, Phạm Hồng Sơn, 2006 Sừ dụng nguồn rong biếnViệt Nam nguồn thực phẩm chức năng, thuốc phân bón Đỗ Thị Ánh Sao 45 Lóp: KS CNSH 11-04 Kỹ yếu 2006 - Viện Công nghệ sinh học - Viện khoa học Công nghệ Việt Nam NXB Khoa học tự nhiên \’à công nghệ, 241-243 Đinh Thị Ngọc Mai, Nguyễn cấm Hà, Lê Thị Thơm, Đặng Diễm Hồng, 2013 Bước đầu nghiên cứu squalen số chung vi táo biến phân lập Việt Nam Tạp chí sinh học, 35(3): 333-341 10 Dặng Đình Kim, Đặng Hồng Phước Hiền (1999) Công nghệ sinh học vi tào, NXB Nông nghiệp Hà Nội 11 Ngô Ke Sương Nguyền Thị Quý, Nguyền Văn Hòa, 1994 Kết bước đầu nghiên cứu tào lam co định nitơ Tạp chí sinh học, 16(3): tr 50 - 54 12 Ngơ Thị Hồi Thu, Hoàng Thị Lan Anh Đặng Diềm Hồng 2009 Tối ưu hóa điều kiện ni cấy mơi trường lỏng chúng schizochytrium sp PQ6 phân lập huyện đảo Phú Quốc, tinh Kiên Giang Tạp chí sinh học, 31(4): 82-88 Tài liệu nước 13 AlgoRythmc, 2000 The information bulletin on algae “The biomedical potential of microalgae” N(l 49 1st Quarter 14 Bailey RB, D^fe^i CM Veeder GT III, Kaneko T and Barclay WR, 2003 Enhanced production of lipids containing polyenoic fatty acid by very high density cultures of eukaryotic microbes in fermentors US Patent 6607900 15 Booth T, 1971 Occurrence and distribution of chytrids, chytridiaceous fungi, and some Actinomycetales from soil of Oregon, California and Nevada Can J Bot 49: 939-949 16 Brown MR 2002 Nutritional value of microalgae for aquculturc In: CruzSuarez LE Ricque-Marie D, Tapia-Salazar M Gaxiola-Cortés MG Simoes N (Eds.) Avances en Nutrición Accola VI Memorias del VI Simposium Internacional de Nutrición Acuicola al de Septiembre del 2002 Cancun, Quintana Roo, Mexico 17 Brown MR, Jeffrey SW, Volkman JK Dunstan GA 1997 Nutritional properties of microalgae for mariculture Aquaculture, 151: 315-331 Đỗ Thị Ánh Sao 46 Lóp: KS CNSH 11-04 18 Chisti Y, 2007 Biodiesel from microalgae Biotechnology Advances, 25: 294306 19 Demirbas A, 2009 Production of biodiesel from algae oils Energy Sources, 31:163-168 20 Fabregas J Herrero c, 1986 Marine microalgae as a potential source of miner­ als in fish diisets Aquaculture, 52: 237-243 21 Gouveia L Marques AE da Silva TL & Reis A, 2009 Neochloris oleabundans UTEX # 1185: a suitable renewable lipid source for biodiesel production Journal of Industrial Microbiology and Biotechnolology, 36: 821-826 22 Gouveia L Oliveira AC, 2009 "Microalgae as a raw material for biofuels production." Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology, 36(2): 269274 23 Hammond BG, Mayhew DA, Holson JF Nemec MD, Mast RW Sander WJ 2001 Safety assessment of DHA-rich microalgae from Schizochytrium sp - II Developmental toxicity evaluation in rats and rabbits, REGUL TOX p 33(2), pp: 205-217 y|ìir vjện Viện 0ạj họC Mở Hà Nội 24 Hammond BG, Mayhew DA, Naylor MW Ruecker FA, Mast RW, Sander WJ, 2001 Safety assessment of DHA-rich microalgae from Schizochytrium sp - I Subchronic rat feeding study", REGUL TOX p, 33(2) pp: 192-204 25 Honda D Yokochi T Nakahara T, Erata M Higashihara T, 1998 Schizochytrium limacinum sp nov., a new Thraustochytrid from a mangrove area in the west Pacific Ocean Mycol Res, 102(4): 439-448 26 Hong DD, Mai DTN Thom LT, Ha NC, Lam BD Tam LT, Anh HTL Thu NTH, 2013 Biodiesel production from Viet Nam heterotrophic marine microalga Schizochytrium mangrovei PQ6 J of Bioscience and Bioengineering, 116(2): 180-185 27 Knuckey RM, Brown MR., Barrett SM, Hallegraeff GM 2002 Isolation of new nanoplanktonic diatom strains and their evaluation as diets for the juvenile Pacific oyster (Crassostrea gigas) Aquaculture, 211(1 - 4): 253 - 274 28 Kreeger DA, Langdon CJ, 1993 Effect of dietary protein content on growth of juvenile mussels, Mytilus trossulus (Gould 1859) Biol Bull 185: 123 - 139 Đỗ Thị Ánh Sao 47 Lóp: KS CNSH 11-04 29 Kulkarni MG Dalai AK, 2006 Waste cooking oil - an economical source for biodiesel: a review Ind Eng Chern Res, 45: 2910-2913 30 Ladygina N, Dedyukhina EG and Vainshtein MB, 2006 A review on microbial synthesis of hydrocarbons Process Biochemistry, 41: 1001-1014 31 Leonardos N Lucas IAN, 2000 The nutritional value of algae grown under different culture conditions for Mytilus edulis L larvae Aquaculture, 182:301315 32 Li Y, Horsman M, Wu N, Lan CQ Calero ND, 2008 Biofuels from Microalgae Biotechnol Prog, 24: 815-820 33 Lora-Vilchis MC, Doctor N, 2001 Evaluation of seven algal diets for spat of the Pacific Scallop Argopecten ventricosus J Worl Aquae Soc, 32(2): 228-235 34 McEvoy LA and Bell JG Sargent JR, 1997 Requirements, presentation and sources of polyunsaturated fatty acids in marine fish larval feeds 35 Metting FB, 1996 Biodiversity and application of microalgae Journal of |1ỢC Mớ Hà Nội Industrial 36 Millar RH and Scott JM, 1967 The larve of the oyster Ostrea edulis during starvation J mar boil Ass U.K, 47: 457-484 37 Moss ST 1986 Biology and phylogeny of the Labyrinthuales and Thraustochytoriales, In: Moss ST (ed) The biology of marine fungi Cambridge University Press, Cambrindge, 105-129 38 Nasciomento IA 1980 Growth of the larvae of Crassostrea gugas Thunbcrg, feb wuth diffirernt ạl-gal species at high cell concentrations Journal du conseil Permanent International pour Explora-tion de la Mer, 39: 134- 139 39 Õrdõg V, szigei J, Pulz o, 1996 Proceedings of the conference on progress in plant sciences from plant breeding to growth regulation Pannon Univesity, Monsonmagyarovar 40 Patil V Tran KQ and Giselrpd HR 2008 Towards sustainable production of biofuels from microalgae Int J Mol Sci, 9: 1188-1195 Đỗ Thị Ánh Sao 48 Lóp: KS CNSH 11-04 41 Porter D, 1990 Phylum Labyrinthulomycota In Margulis L, Corliss JO, Melconia M and Chapman D.I (eds) Handbook of Protoctista pp, 388-393 Jones and Bartlett Publisher, Boston, USA 42 Raghukumar s, 1988 Schizochytrium mangrovei sp nov., a thraustochytrid from mangroves in India Transactions of the British Mycological Society’, 90: 627-631 43 Raghukumar s, 2002 Ecology of marine protists, the Labyrinthulomycetes (Thraustochytrids and labyrinthulids) Eur J Protistol, 38: 127-145 44 Raghukumar s, 2008 Thraustochytrid marine protists: production of PUFAs and other emerging technologies Mar Biotechnol, 10: 631-640 45 Riesing TF, 2006 Cultivating Algae for Liquid Fuel Production Permaculture Activist 48(59) 46 Roberts RD and Nicholson CM, 1998 Variable response from abalone larvae (Haliotisiris, H virginea) to a range of settlement cues Molluscan Res 18, 131142 47 Ronnestad I, Helland ,K.&>lip; J99? Fp^djing A.rjefinịa\Ịọ pf Atlantic halibut (Hippoglusus hippoglusus L) results in lower larval vitamin A content compared with feeding copepod Aquaculture, 165: 159- 164 48 Sharif ABMH and Aishah s, 2008 Biodiesel fuel production from algae as renewable energy American J Biochem & Biotechnol, 4: 250-254 49 Sijtsma L, de Swaaf ME, 2004 Biotechnological production and applications of the (0-3 polyulsaturated fatty acid docosahexaenoic acid Appl Microbiol Biotechnol, 64: 146-153 50 Spolaore p, Joannis-Cassan c, Duran E and Isambert A, 2006 Commercial application of microalgae Journal of Bioscience and Bioengineering, 101: 87- 96 51 Thinh L, Renaud SM Parry DL, 1999 Evaluation of recently isolated Australian tropical microalga for the enrichment of the dietary value of brine­ shrimp, Artemia nauplii Aquaculture, 170: 161-173 52 Valencial, Ansorena D and Astiasaran 1, 2007 Development of dry ermented sausages rich in docosahexaenoic acid with oil from the microalgae Đỗ Thị Ánh Sao 49 Lóp: KS CNSH 11-04 Schizochyttrium sp: Influence on nutritional properties, sensorial quality and oxidation stabililiy Food chemitry, 104: 1087-1096 53 Webb KL, Chu FE, 1983 Phytoplankton as a food source for bivalve larvae In: Pruder GD, Langdon CJ and Conklin DE (Editors), Proceedings of the Second International Conference on Aquaculture Nutrition: Biochemical and Physiological Approaches to Shellfish Nutrition, Louisiana State University, Baton Rouge, LA, pp 272-291 54 Whyte JNC, Bourne N, Hodgson CA, 1989 Influence of algal diets on biochemical composition and energy reserves in Patinopecten yessoensis (Jay) larvae Aquaculture, 78: 333-347 55 Wu TS, Yu ST and Lin IP 2005 Effect of culture condition on docosahexaenoic acid production by Schizochytrium sp S3I1 Process Biochemistry, 40(9): 3103-3108 56 Yokochi T Honda D, Higashihara T & Nakahara, 1998 Optimization of docosahexaenoic acid production by Schizochytrium limacinuin SR21 Applied Microbiology and Biotechnology, 49: 72-76 .| 57 Zhiyou Wen, Johnson Michael, 2009 “Preparation of biodiesel fuel from the microalga Schizochytrium limacinum by direct transesterification of algal biomass” Energy and Fuels In Progress Các trang web 58 http://d.violet.vn/uploads/rcsources/562/2216965/prcview.swf 59 http://sites.google.com/site/sinhkhoj 12/sinhhoc 10/baitapchukitebaovaquatrinhn guyenphan 60 http://syst.bio.konanu.ac.jP/labybase/Aurantiochytrium_limacinum_life_cycle.h tml 61 http://thuvienluanvan.info/luan-van/chu-ky-te-bao-va-su-phan-bao-38214/ 62 http://timtailieu.vn/tai-lieu/bai-giang-chu-ky-song-cua-te-bao-va-su-phan-bao25684/ 63 http://vi.wikipedia.org/wiki/Nguy%C3%AAn_ph%C3%A2n Đỗ Thị Ánh Sao 50 Lóp: KS CNSH 11-04 64 https://thucphamchucnang.wordpress.com/t%E1%BA%A3oxo%El%BA%AFn/ Thư viện Viện Đại học Mở Hà Nội Đỗ Thị Ánh Sao 51 Lóp: KS CNSH 11-04 1-15,17.18,19.20.21.23-31.33,35,39.40.42-50 Thư viện Viện Đại học Mở Hà Nội Đỗ Thị Ánh Sao 52 Lóp: KS CNSH 11-04 ... dung ? ?Nghiên cứu vòng đời vi tảo biến dị dường Schizochytrium mangrovei PQ6" với mục tiêu xác định dạng tế bào, kiểu phân chia thời gian phân chia tế bào vòng đời cúa vi tào biến mangrovei PQ6. .. ‘? ?Nghiên cứu vòng đời cùa vi tão biền dị dưỡng Schizochytrium mangrovei PQ6? ?? thu so kết quà khả quan Tuy nhiên, đe có the hiểu rõ vịng đời cùa lồi vi tảo tiềm số vấn đề cần tiếp tục nghiên cứu. .. biết rõ đặc điếm di truyền loài tảo tiềm này, tiến hành luận văn ? ?Nghiên cún vòng đòi vi tảo biển dị dưõmg Schizochytrium mangrovei PQ6? ?? Mục đích đề tài nghiên cứu cúa sau: +/ Nhằm xác định dạng