ĐẶT VẤN ĐỀ Sốt xuất huyết Dengue (SXHD) là bệnh truyền nhiễm cấp tính do virus Dengue gây ra, bệnh lây truyền qua muỗi Aedes. Trong khoảng 50 năm trở lại đây, tỉ lệ mắc SXHD tăng cao, đặc biệt ở các vùng địa lý mới. Theo thống kê của Tổ chức Y tế Thế giới, xấp xỉ 3,9 tỷ người đang sống trong vùng dịch sốt xuất huyết và có khoảng 390 triệu ca nhiễm virus Dengue với khoảng 96 triệu ca có biểu hiện lâm sàng hàng năm [1]. Trong 10 năm trở lại đây, các nước khu vực Đông Nam Á và Tây Thái Bình Dương tiếp tục ghi nhận số bệnh nhân mắc SXHD tăng. Tại Việt Nam, tình hình dịch SXHD đã và đang diễn ra hết sức phức tạp trên cả nước đặc biệt ở các đô thị lớn như Hà Nội và Thành phố Hồ Chí Minh. Năm 2018, cả nước có 126.682 số ca mắc với 17 ca tử vong. Năm 2019, số ca mắc tăng 2,5 lần và số ca tử vong tăng 3 lần với 320.702 trường hợp mắc SXHD và 54 trường hợp tử vong [2]. Trên thực tế, số ca mắc và tử vong có thể còn cao hơn nhiều. Trong thực hành lâm sàng, việc tiên lượng đúng các ca bệnh nặng sẽ giúp các bác sĩ lựa chọn được phác đồ hiệu quả để điều trị bệnh nhân. Tuy nhiên, việc tiên lượng này còn gặp rất nhiều khó khăn và hạn chế do thiếu các chỉ tiêu tiên lượng. Do đó, nghiên cứu sâu về cơ chế bệnh sinh của SXHD từ đó có thể đưa ra các yếu tố dùng làm chỉ tiêu tiên lượng các ca bệnh nặng là rất cần thiết và hữu ích cho công tác điều trị bệnh. Trong quá trình virus Dengue xâm nhập vào cơ thể, hệ thống miễn dịch bẩm sinh phản ứng sớm nhất chống lại sự xâm nhập và nhân lên của virus. Hệ thống bổ thể gồm một nhóm các protein trong huyết thanh là một thành phần quan trọng của hệ thống miễn dịch bẩm sinh. Thông qua các cơ chế: làm tan tế bào, opsonin hóa, tăng cường đáp ứng viêm, hệ thống bổ thể bảo vệ cơ thể chống lại rất nhiều tác nhân gây bệnh [3]. Để thực hiện được chức năng, các protein bổ thể cần được hoạt hóa. Một trong những con đường hoạt hóa bổ thể quan trọng, tham gia vào cơ chế bệnh sinh của nhiều bệnh lý là con đường lectin với vai trò then chốt của 2 protein Mannose Binding Lectin (MBL) và Ficolin-2 [3]. Thông qua vùng nhận diện tác nhân trong cấu trúc phân tử, MBL và Ficolin-2 có khả năng gắn đặc hiệu với các phân tử trên bề mặt các tác nhân gây bệnh, từ đó hoạt hóa hệ thống bổ thể theo con đường lectin bảo vệ cơ thể chống lại các tác nhân đó [3]. Nồng độ MBL và tính đa hình gen MBL2 đã được chỉ ra có liên quan đến nhiễm nhiều loại virus khác nhau như HIV, HBV, HCV và đặc biệt là một số virus trong họ Flaviviridae như WNV [4], [5], [6], [7]. Trong nghiên cứu này, MBL được chỉ ra là có khả năng gắn vào đầu có chứa N-Linked glycan trên vỏ virus từ đó trung hòa và thanh thải hiệu quả virus [7]. Giống như MBL, Ficolin-2 cũng đã được chỉ ra đóng một vai trò quan trọng trong nhiễm một số loại virus ở người như HBV, HCV [8], [9]. Là một loại trong họ Flaviviridae, vỏ của virus Dengue có chứa N-Linked glycan là phối tử cho MBL và Ficolin-2 gắn vào, từ đó trung hòa và thanh thải virus [7]. Do đó, nồng độ và chất lượng MBL và Ficolin-2 có thể đóng vai trò quan trọng trong cơ chế bệnh sinh của SXHD. Tuy nhiên, các nghiên cứu về vai trò của hai protein MBL, Ficolin-2 và các gen MBL2 và FCN2 mã hóa cho hai protein này ở bệnh nhân mắc SXHD còn khá hạn chế và hoàn toàn mới trên quần thể người Việt. Từ những cơ sở lý luận và thực tiễn đó, chúng tôi tiến hành đề tài: “Nghiên cứu tính đa hình gen MBL2, FCN2 và nồng độ protein MBL, Ficolin-2 ở bệnh nhân sốt xuất huyết Dengue” với hai mục tiêu: 1. Xác định tính đa hình các gen MBL2, FCN2 và định lượng nồng độ protein MBL, Ficolin-2 ở bệnh nhân sốt xuất huyết Dengue. 2. Phân tích mối liên quan giữa tính đa hình các gen MBL2, FCN2, nồng độ protein MBL, Ficolin-2 với mức độ bệnh và một số biểu hiện lâm sàng, cận lâm sàng ở bệnh nhân sốt xuất huyết Dengue.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QN Y NGƠ TRƯỜNG GIANG NGHIÊN CỨU TÍNH ĐA HÌNH GEN MBL2, FCN2 VÀ NỒNG ĐỘ PROTEIN MBL, FICOLIN-2 Ở BỆNH NHÂN SỐT XUẤT HUYẾT DENGUE LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HÀ NỘI, 2022 MỤC LỤC Trang phụ bìa Lời cam đoan Lời cảm ơn Mục lục Danh mục chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục hình ĐẶT VẤN ĐỀ Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Dịch tễ học bệnh sốt xuất huyết Dengue 1.1.1 Tình hình sốt xuất huyết Dengue giới 1.1.2 Tình hình SXHD Việt Nam 1.2 Cơ chế bệnh sinh sốt xuất huyết Dengue 1.3 Hệ thống bổ thể 1.3.1 Hệ thống bổ thể 1.3.2 Con đường lectin hoạt hóa bổ thể 13 1.4 Protein MBL gen MBL2 14 1.4.1 Protein MBL 14 1.4.2 Gen MBL2 tính đa hình gen MBL2 20 1.5 Protein Ficolin-2 gen FCN2 24 1.5.1 Protein Ficolin-2 24 1.5.2 Gen FCN2 tính đa hình gen FCN2 27 1.6 Vai trị MBL, Ficolin-2 tính đa hình gen MBL2, FCN2 sốt xuất huyết Dengue 29 1.6.1 Vai trò MBL đa hình gen MBL2 sốt xuất 29 huyết Dengue 1.6.2 Vai trị Ficolin-2 đa hình gen FCN2 sốt xuất 30 huyết Dengue 1.7 Tình hình nghiên cứu vai trò protein MBL Ficolin- 31 tính đa hình gen MBL2 FCN2 bệnh sốt xuất huyết Dengue Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu 33 33 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 33 2.1.2 Tiêu chuẩn lựa chọn bệnh nhân 33 2.1.3 Tiêu chuẩn loại trừ 35 2.2 Phương pháp nghiên cứu 36 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu 36 2.2.2 Cách chọn mẫu 37 2.2.3 Các phương tiện nghiên cứu 37 2.2.4 Các bước tiến hành 37 2.3 Nội dung nghiên cứu 39 2.3.1 Chỉ tiêu dịch tễ 39 2.3.2 Chỉ tiêu lâm sàng, cận lâm sàng 39 2.3.3 Xác định nồng độ Ficolins-2 MBL huyết 41 2.4 Phân tích kết 48 2.5 Địa điểm thời gian nghiên cứu 49 2.6 Đạo đức nghiên cứu 49 Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Một số đặc điểm nhóm bệnh nhân sốt xuất huyết Dengue 3.1.1 Đặc điểm tuổi giới 50 50 50 3.1.2 Một số tiêu lâm sàng, cận lâm sàng 50 3.2 Tính đa hình gen MBL2, FCN2 nồng độ protein MBL, 53 Ficolin-2 nhóm đối tượng nghiên cứu 3.2.1 Tính đa hình gen MBL2 nhóm đối tượng nghiên cứu 53 3.2.2 Tính đa hình gen FCN2 ởcác nhóm đối tượng nghiên cứu 56 3.2.3 Đặc điểm nồng độ protein MBL, Ficolin-2 nhóm đối 60 tượng nghiên cứu 3.3 Mối liên quan tính đa hình gen MBL2, FCN2 nồng 61 độ MBL, Ficolin-2 với mức độ bệnh số biểu lâm sàng, cận lâm sàng bệnh sốt xuất huyết Dengue 3.3.1 Mối liên quan tính đa hình gen MBL2 mức độ 61 bệnh, số biểu lâm sàng, cận lâm sàng bệnh sốt xuất huyết Dengue 3.3.2 Mối liên quan tính đa hình gen FCN2 với mức độ 72 bệnh số biểu lâm sàng, cận lâm sàng bệnh sốt xuất huyết Dengue 3.3.3 Mối liên quan nồng độ protein MBL với mức độ 80 bệnh số biểu lâm sàng, cận lâm sàng bệnh sốt xuất huyết Dengue 3.3.4 Mối liên quan nồng độ Ficolin-2 với mức độ bệnh 84 số biểu lâm sàng, cận lâm sàng bệnh sốt xuất huyết Dengue 3.3.5 Mối liên quan tính đa hình gen MBL2 nồng độ 87 MBL huyết bệnh sốt xuất huyết Dengue 3.3.6 Mối liên quan tính đa hình gen FCN2 nồng độ 90 protein Ficolin-2 bệnh sốt xuất huyết Dengue Chương 4: BÀN LUẬN 4.1 Đặc điểm chung nhóm bệnh nhân sốt xuất huyết Dengue 95 95 4.1.1 Đặc điểm tuổi giới 96 4.1.2 Một số tiêu lâm sàng cận lâm sàng 96 4.2 Về tính đa hình gen MBL2, FCN2 nồng độ protein MBL, 100 Ficolin-2 nhóm đối tượng nghiên cứu 4.2.1 Về tính đa hình gen MBL2 nhóm đối tượng nghiên 100 cứu 4.2.2 Về tính đa hình gen FCN2 nhóm đối tượng nghiên 102 cứu 4.2.3 Đặc điểm nồng độ protein MBL, Ficolin-2 nhóm đối 104 tượng nghiên cứu 4.3 Về mối liên quan tính đa hình gen MBL2, FCN2 105 nồng độ MBL, Ficolin-2 với mức độ bệnh số biểu lâm sàng, cận lâm sàng bệnh sốt xuất huyết Dengue 4.3.1 Mối liên quan tính đa hình gen MBL2 mức độ 105 bệnh, số biểu lâm sàng, cận lâm sàng bệnh sốt xuất huyết Dengue 4.3.2 Mối liên quan tính đa hình gen FCN2 với mức độ 110 bệnh số biểu lâm sàng, cận lâm sàng bệnh sốt xuất huyết Dengue 4.3.3 Mối liên quan nồng độ protein MBL với mức độ 114 bệnh số biểu lâm sàng, cận lâm sàng bệnh sốt xuất huyết Dengue 4.3.4 Về mối liên quan nồng độ Ficolin-2 với mức độ bệnh 115 số biểu lâm sàng, cận lâm sàng bệnh sốt xuất huyết Dengue 4.3.5 Về mối liên quan tính đa hình gen MBL2 nồng độ 119 MBL huyết bệnh sốt xuất huyết Dengue 4.3.6 Về mối liên quan tính đa hình gen FCN2 nồng độ 122 protein Ficolin-2 bệnh sốt xuất huyết Dengue KẾT LUẬN KIẾN NGHỊ DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI LUẬN ÁN TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT TT Phần Phần viết đầy đủ (tiếng Anh) viết tắt Phần viết đầy đủ (tiếng Việt) GPT Glutamate Pyruvate transaminase Enzym chuyển amin Glutamat Pyruvat APTT Activated -partial thromboplastin time Thời gian hoạt hoá thromboplastin phần GOT Glutamate Oxaloacetate Transaminase Enzym chuyển amin Glutamat Oxaloacetat CR Complement receptor Thụ thể nhận diện bổ thể CRD Carbohydrate Recognition Domain Vùng nhận diện Carbohydrat CRP C-reactive protein Protein phản ứng C DENV-1 Dengue virus type Virus Dengue týp DHF Dengue hemorrhagic fever Sốt xuất huyết Dengue DNA Deoxyribonucleic Acid Acid Deoxyribonucleic 10 DSS Dengue shock syndrome Hội chứng sốc Dengue 11 DWS Dengue with warning signs Sốt Dengue có dấu hiệu cảnh báo 12 ELISA Enzym linked immuno sorbent assay Xét nghiệm miễn dịch gắn enzym 13 HCT Hematocrite Dung tích hồng cầu 14 HI Haemagglutination - inhibition Phản ứng ức chế ngưng kết hồng cầu 15 IgA Immunoglobuline A Kháng thể lớp A 16 IgM Immunoglobuline M Kháng thể lớp M 17 IgG Immunoglobuline G Kháng thể lớp G 18 IL TT Phần Phần viết đầy đủ (tiếng Anh) viết tắt Phần viết đầy đủ (tiếng Việt) 19 KN-KT Kháng nguyên - kháng thể 20 LTA Lipoteichoic Acid Acid lipoteichoic 21 MACELISA IgM antibody capture Enzym Linked Immunosorbent Assays Xét nghiệm miễn dịch enzym tìm kháng thể IgM 22 MASP MBL Assosiated Serine Protease Serin Protease liên kết MBL 23 MBL Mannose Binding Lectin Lectin liên kết mannose 24 NS Non structural protein Protein không cấu trúc 25 OR Odd ratio Tỷ xuất chênh 26 PCR Polymerase chain reaction Phản ứng tổng hợp chuỗi 27 PLT Platelet Tiểu cầu 28 PT Prothrombin time Thời gian prothrombin 29 PRR Pattern Recognition Receptor Thụ thể nhận diện mầm bệnh 30 TLR Toll-Like Receptor Thụ thể Toll-Like 31 TNF Tumor necrosis factor Yếu tố hoại tử u 32 SD Severe Dengue Sốt Dengue nặng Interleukin 33 SLE Systemic lupus erythematous Lupus ban đỏ hệ thống 34 SNP Single-Nucleotide Polymorphism Đa hình đơn Nucleotid 35 SXHD 36 RBC Red Blood Cell Hồng cầu 37 WBC White Blood Cell Bạch cầu 38 WHO World Health Organization Tổ chức Y tế Thế giới Sốt xuất huyết Dengue DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Tên bảng Trang 2.1 3.1 Trình tự cặp mồi đặc hiệu Đặc điểm tuổi, giới bệnh nhân nghiên cứu 46 50 3.2 Một số tiêu lâm sàng, cận lâm sàng bệnh nhân nghiên 50 cứu Đặc điểm kháng nguyên, kháng thể đặc hiệu virus Dengue 51 bệnh nhân nghiên cứu Tần suất kiểu gen, alen điểm đa hình vùng Promoter 53 gen MBL2 nhóm nghiên cứu Tần suất kiểu gen, alen điểm đa hình vùng exon gen 54 MBL2 nhóm nghiên cứu Tần suất kiểu gen đơn bội, lưỡng bội đa hình (- 55 221)+exon gen MBL2 nhóm nghiên cứu Tần suất kiểu gen đơn bội gen MBL2 nhóm nghiên 56 cứu Tần suất kiểu gen alen điểm đa hình vùng promoter 57 gen FCN2 nhóm nghiên cứu Tần suất kiểu gen alen điểm đa hình vùng exon 7; 58 intron 7; exon gen FCN2 nhóm nghiên cứu Tần suất kiểu gen đơn bội tạo 59 3.3 3.4 3.5 3.6 3.7 3.8 3.9 3.10 SNP Bảng Tên bảng Trang (+6031/+6220/+6424) gen FCN2 nhóm nghiên cứu 3.11 Tần suất kiểu gen đơn bội tạo SNP gen FCN2 60 3.12 nhóm nghiên cứu Đặc điểm nồng độ MBL nhóm nghiên cứu 60 3.13 Đặc điểm nồng độ Ficolin-2 nhóm nghiên cứu 61 So sánh tần suất kiểu gen kiểu alen điểm đa hình 62 vùng Promoter gen MBL2 nhóm nghiên cứu So sánh kiểu gen kiểu alen điểm đa hình vùng exon 63 gen MBL2giữa nhóm nghiên cứu So sánh tần suất kiểu gen đơn bội, lưỡng bội đa hình (- 67 221)+exon gen MBL2giữa nhóm nghiên cứu So sánh tần suất kiểu gen đơn bội gen MBL2giữa 70 nhóm nghiên cứu So sánh tần suất kiểu gen alen điểm đa hình vùng 72 3.14 3.15 3.16 3.17 3.18 exon ; intron 7; exon gen FCN2 nhóm nghiên cứu 73 So sánh tần suất kiểu gen đơn bội tạo SNP 3.19 3.20 3.21 3.22 3.23 3.24 77 (+6031/+6220/+6424) gen FCN2 nhóm bệnh nhóm chứng So sánh tần suất kiểu gen đơn bội tạo SNP gen FCN2 78 nhóm bệnh nhóm chứng Tương quan nồng độ MBL triệu chứng cận lâm 82 sàng Giá trị phân biệt nhóm bệnh DHF DWS protein 83 MBL 84 Tương quan nồng độ Ficolin-2 triệu chứng cận 86 lâm sàng Giá trị phân biệt nhóm bệnh DHF DWS protein Ficolin-2 87 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Tên hình Trang 1.1 1.2 Phân bố tình hình SXHD giới giai đoạn 2010- 2016 Số ca sốt xuất huyết Dengue nhập viện tử vong theo tuần 1.3 1.4 1.5 1.6 1.7 năm 2018 2019 Cơ chế bệnh sinh sốt xuất huyết Dengue Các đường hoạt hóa bổ thể Bước đầu khởi động đường lectin Cấu trúc phân tử protein MBL Mơ hình kết phân tách hỗn hợp MBL kỹ thuật 12 14 15 16 1.8 1.9 1.10 1.11 2.1 SDS-PAGE Đa hình gen MBL2 Cây tiến hóa MBL2 Cấu trúc đa bậc protein Ficolin MBL Máy Diagnostic Automation đo mật độ quang bước sóng 21 24 25 28 41 2.2 450 nm Bộ kít định lượng Ficolin-2 huyết phương 42 2.3 2.4 pháp ELISA tiến hành nghiên cứu Máy phần mềm định lượng miễn dịch Luminex Bộ kít định lượng MBL huyết máy 43 44 2.5 3.1 Luminex dùng nghiên cứu Máy nhân gen Eppendorf Hoạt độ enzym GOT GPT hai nhóm bệnh nhân dương 47 52 Đa hình đơn Nucleotit gen FCN2 tính âm tính với kháng thể IgG IgM đặc hiệu virus 3.2 Dengue Mối liên quan đa hình -550C/G gen MBL2 số 64 3.3 biểu cận lâm sàng bệnh nhân SXHD Mối liên quan đa hình -221C/G gen MBL2 số 65 3.4 biểu cận lâm sàng bệnh nhân SXHD Mối liên quan đa hình +4G/A gen MBL2 số 65 103 Shresta S (2012) Role of complement in dengue virus infection: protection or pathogenesis? mBio 3(1) 104 Figueiredo G.G., Cezar R.D., Freire N.M., et al (2016) Mannosebinding lectin gene (MBL2) polymorphisms related to the mannosebinding lectin low levels are associated to dengue disease severity Human Immunology 77(7):571-575 105 Bộ Y tế (2011) Hướng dẫn chẩn đoán, điều trị sốt xuất huyết Dengue 458/QĐ-BYT 106 Đỗ Trung Phấn (2006) Các số huyết học người Việt Nam giai đoạn 1995 - 2000, Huyết học truyền máu, Nhà xuất Y học, Hà Nội 107 Nguyễn Thế Khanh Phạm Tử Dương (2005) Xét Nghiệm Sử Dụng Trong Lâm Sàng, Nhà xuất Y học, Hà Nội 108 Tong H V., Antony J.S., Ojurongbe O., et al (2013) Mannose-binding lectin and susceptibility to schistosomiasis The Journal of infectious diseases 207(11):1675-1683 109 Parkash O., Almas A., Jafri S.W., et al (2010) Severity of acute hepatitis and its outcome in patients with dengue fever in a tertiary care hospital Karachi, Pakistan (South Asia) BMC Gastroenterology 10(1):1-8 110 Trịnh Công Điển (2017) Nghiên cứu mối liên quan týp vi rút với số đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng bệnh nhân sốt xuất huyết Dengue Học viện Quân y, Luận văn thạc sĩ Y học, Học viện Quân Y 111 Kassim F.M., Izati M.N., TgRogayah T., et al (2011) Use of dengue NS1 antigen for early diagnosis of dengue virus infection Southeast Asian J Trop Med Public Health 42(3):562-569 112 Diệp Thanh Hải, Đỗ Kiến Quốc, Nguyễn Thanh Vũ cộng (2013) Đặc điểm dịch tễ học bệnh sốt xuất huyết Dengue dựa vào hệ thống giám sát trọng điểm huyện Mang Thít, tỉnh Vĩnh Long năm 2012-2013 Tạp chí Y học Dự phịng 146(10):106-111 113 Pant S., Goel A., Gangwar P.K., et al (2019) Genetic association of MBL-2 gene polymorphisms with filarial chyluria Bioinformation 15(11):806 114 Singh H., Jadhav S., Chauware V (2021) Impact of MBL-2 coding region polymorphism on modulation of HAND and HIV-1 acquisition Microbial Pathogenesis 160:105163 115 Mwesigwa S., Moulds J.M., Chen A., et al (2018) Whole‐exome sequencing of sickle cell disease patients with hyperhemolysis syndrome suggests a role for rare variation in disease predisposition Transfusion 58(3):726-735 116 Pehlivan S., Köse M., Mese S., et al (2021) Investigation of MBL2 and NOS3 functional gene variants in suspected COVID-19 PCR (–) patients Pathogens and Global Health.1-7 117 Sena M.A., da Silva Castanha P.M., Guimarães A.B.G., et al (2022) Mannose-binding lectin levels and MBL2 gene polymorphisms are associated to dengue infection in Brazilian children at the early ages International Journal of Infectious Diseases 118 Kalia N., Singh J., Sharma S., et al (2019) SNPs in 3′-UTR region of MBL2 increases susceptibility to recurrent vulvovaginal infections by altering sMBL levels Immunobiology 224(1):42-49 119 Alves Pedroso M., Boldt A., Pereira‐Ferrari L., et al (2008) Mannan‐ binding lectin MBL2 gene polymorphism in chronic hepatitis C: association with the severity of liver fibrosis and response to interferon therapy Clinical & Experimental Immunology 152(2):258-264 120 Goeldner I., Skare T.L., Utiyama S.R., et al (2014) Mannose binding lectin and susceptibility to rheumatoid arthritis in Brazilian patients and their relatives PLoS One 9(4):e95519 121 Liu C., He T., Rong Y., et al (2016) Association of mannose-binding lectin polymorphisms with tuberculosis susceptibility among Chinese Scientific Reports 6(1):1-6 122 Mishra A., Antony J.S., Sundaravadivel P., et al (2015) Association of ficolin-2 serum levels and FCN2 genetic variants with Indian visceral leishmaniasis PloS one 10(5):e0125940 123 Faik I., Oyedeji S.I., Idris Z., et al (2011) Ficolin-2 levels and genetic polymorphisms of FCN2 in malaria Human Immunology 72(1):74-79 124 Osthoff M., Jaeger V.K., Heijnen I.A., et al (2019) Role of lectin pathway complement proteins and genetic variants in organ damage and disease severity of systemic sclerosis: a cross-sectional study Arthritis Research & Therapy 21(1):1-8 125 Tereshchenko S.Y., Smolnikova M.V., Zobova S (2020) Complement activation lectin pathway (mannose-binding lectin and ficolin) genes polymorphism as the risk factor of CagA positive chronic Helicobacter pylori infection in adolescents Russian Journal of Infection and Immunity 10(1):180-186 126 Ashmawy I., El-Lebedy D., Awadallah E., et al (2020) Association of FCN2 gene rs3124954 and STAT4 gene rs7582694 polymorphisms with juvenile onset systemic lupus erythematosus and lupus nephritis in a sample of Egyptian children Gene Reports 21:100968 127 Ambrosio A.R., Bavia L., Hiraiwa P.M., et al (2021) The lectin pathway of complement and the initial recognition of Leishmania infantum promastigotes Life Sciences 282:119793 128 Elkoumi M., Emam A., Allah M., et al (2019) Association of ficolin-2 gene polymorphisms and susceptibility to systemic lupus erythematosus in Egyptian children and adolescents: a multicenter study Lupus 28(8):995-1002 129 Kempen G., Meijvis S., Endeman H., et al (2017) Mannose‐binding lectin and l‐ficolin polymorphisms in patients with community‐acquired pneumonia caused by intracellular pathogens Immunology 151(1):8188 130 Bąk-Romaniszyn L., Świerzko A.S., Sokołowska A., et al (2020) Mannose-binding lectin (MBL) in adult patients with inflammatory bowel disease Immunobiology 225(1):151859 131 Gomaa M.H., Ali S.S., Fattouh A.M., et al (2018) MBL2 gene polymorphism rs1800450 and rheumatic fever with and without rheumatic heart disease: an Egyptian pilot study Pediatric Rheumatology 16(1):24 132 Graudal N.A., Madsen H.O., Tarp U., et al (2000) The association of variant mannose‐binding lectin genotypes with radiographic outcome in rheumatoid arthritis Arthritis & Rheumatism: Official Journal of the American College of Rheumatology 43(3):515-521 133 Mullighan C.G., Heatley S., Doherty K., et al (2002) Mannose-binding lectin gene polymorphisms are associated with major infection following allogeneic hemopoietic stem cell transplantation Blood, The Journal of the American Society of Hematology 99(10):3524-3529 134 Ornelas A.M., Xavier-de-Carvalho C., Alvarado-Arnez L.E., et al (2019) Association between MBL2 haplotypes and dengue severity in children from Rio de Janeiro, Brazil Memórias Instituto Oswaldo Cruz 114 135 Prommalikit O (2015) Association between mannose-binding lectin gene polymorphisms and susceptibility to dengue virus infection: a preliminary report Infectious Disease Association of Thailand 46:29 136 Ouf E.A., Ojurongbe O., Akindele A.A., et al (2012) Ficolin-2 levels and FCN2 genetic polymorphisms as a susceptibility factor in schistosomiasis The Journal of Infectious Diseases 206(4):562-570 137 Świerzko A.S., Jarych D., Gajek G., et al (2021) Polymorphisms of the FCN2 Gene 3’UTR Region and Their Clinical Associations in Preterm Newborns Frontiers in Immunology 12 138 Khor C.C., Chau T.N.B., Pang J., et al (2011) Genome-wide association study identifies susceptibility loci for dengue shock syndrome at MICB and PLCE1 Nature Genetics 43(11):1139 139 Elshamaa M.F., Hamza H., Abd El Rahman N., et al (2018) Association of ficolin-2 (FCN2) functional polymorphisms and protein levels with rheumatic fever and rheumatic heart disease: relationship with cardiac function Archives of Medical Sciences Atherosclerotic Diseases 3:e142 140 Erkan A.N., Oz I., Terzi Y.K., et al (2016) FCN2 c 772G> T polymorphism is associated with chronic adenoiditis and/or tonsillitis, but not− A> G and− 602 G> A International Journal of Pediatric Otorhinolaryngology 87:1-4 141 Marzetti V., Di Battista C., Ferrante R., et al., editors (2017) MBL2 and FCN2 gene polymorphisms in a cohort of Italian children with rheumatic fever: A case–control study Seminars in arthritis and rheumatism: Elsevier 142 Dabrowska-Zamojcin E., Czerewaty M., Malinowski D., et al (2018) Ficolin-2 gene rs7851696 polymorphism is associated with delayed graft function and acute rejection in kidney allograft recipients Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis 66(1):65-72 143 Holdaway J., Deacock S., Williams P., et al (2016) Mannose-binding lectin deficiency and predisposition to recurrent infection in adults Journal of Clinical Pathology 69(8):731-736 144 Darmawan A.B., Soesatyo M.H., Restuti R.D., et al (2018) The role of mannose-binding lectin serum level in tubotympanic chronic suppurative otitis media International Journal of Otolaryngology 2018 145 Heng Y., Cong Y., Liang Y., et al (2018) Association study between mannose-binding lectin (MBL) polymorphisms and serum MBL protein levels after Mycoplasma ovipneumoniae infection in sheep 24(1) 146 Tereshchenko S., Smolnikova M., Gorbacheva N., et al (2019) Mannose-Binding Lectin Plasma Concentration and MBL Gene Rs1800450 Polymorphism in Asthmatics Children American Thoracic Society p A1289-A1289 147 Badarukhiya J.A., Tupperwar N., Nizamuddin S., et al (2021) Novel FCN2 Variants and Haplotypes are Associated with Rheumatic Heart Disease DNA and Cell Biology 40(10):1338-1348 148 Chen T., Hu Y., Ding Q., et al (2015) Serum ficolin-2 concentrations are significantly changed in patients with hepatitis B virus infection and liver diseases Virologica Sinica 30(4):249-260 149 Luo F., Chen T., Liu J., et al (2016) Ficolin-2 binds to HIV-1 gp120 and blocks viral infection Virologica Sinica 31(5):406-414 150 Carbone F., Valente A., Perego C., et al (2021) Ficolin-2 serum levels predict the occurrence of acute coronary syndrome in patients with severe carotid artery stenosis Pharmacological Research 166:105462 151 Colliard S., Jourde‐Chiche N., Clavarino G., et al (2018) Autoantibodies targeting ficolin‐2 in systemic lupus erythematosus patients with active nephritis Arthritis Care & Research 70(8):12631268 152 Jalal P.J., King B.J., Saeed A., et al (2019) Elevated serum activity of MBL and ficolin-2 as biomarkers for progression to hepatocellular carcinoma in chronic HCV infection Virology 530:99-106 153 Giraudi P.J., Salvoza N., Bonazza D., et al (2022) Ficolin-2 Plasma Levels Assesses Liver Fibrosis in Non-Alcoholic Fatty Liver Disease 154 Carr J.M., Cabezas‐Falcon S., Dubowsky J.G., et al (2020) Dengue virus and the complement alternative pathway FEBS Letters 594(16):2543-2555 155 Cabezas-Falcon S., Norbury A.J., Hulme-Jones J., et al (2021) Changes in complement alternative pathway components, factor B and factor H during dengue virus infection in the AG129 mouse Journal of General Virology.001547 156 Liu J., Ali M.A., Shi Y., et al (2009) Specifically binding of L-ficolin to N-glycans of HCV envelope glycoproteins E1 and E2 leads to complement activation Cellular &Molecular Immunology 6(4):235-244 157 Hamed M.R., Brown R.J., Zothner C., et al (2014) Recombinant human L-ficolin directly neutralizes hepatitis C virus entry Journal of Innate Immunity 6(5):676-684 158 Rantala A., Lajunen T., Juvonen R., et al (2008) Mannose-binding lectin concentrations, MBL2 polymorphisms, and susceptibility to respiratory tract infections in young men Journal of Infectious Diseases 198(8):1247-1253 159 Eisen D.P., Minchinton R.M (2003) Impact of mannose-binding lectin on susceptibility to infectious diseases Clinical Infectious Diseases 37(11):1496-1505 160 Minchinton R., Dean M., Clark T., et al (2002) Analysis of the relationship between mannose‐binding lectin (MBL) genotype, MBL levels and function in an Australian blood donor population Scandinavian Journal of Immunology 56(6):630-641 161 Lee S.-G., Yum J.-S., Moon H.M., et al (2005) Analysis of mannosebinding lectin (MBL2) genotype and the serum protein levels in the Korean population Molecular Immunology 42(8):969-977 162 Adamek M., Heyder J., Heinold A., et al (2013) Characterization of mannose‐binding lectin (MBL) variants by allele‐specific sequencing of MBL2 and determination of serum MBL protein levels Tissue Antigens 82(6):410-415 PHỤ LỤC Hình ảnh phân tích kết giải trình tự xác định tính đa hình gen MBL2 FCN2 I Hình ảnh phân tích kết giải trình tự xác định tính đa hình gen MBL2 -550C/G -221G/C 5’UTR +4G/A Codon52 Codon54 Codon57 I Hình ảnh phân tích kết giải trình tự xác định tính đa hình gen FCN2 -986G/A -902C/A -602G/A -64A/C -4G/A +6031A/G +6220T/G +6359C/T +6424A/T BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y NGƠ TRƯỜNG GIANG NGHIÊN CỨU TÍNH ĐA HÌNH GEN MBL2, FCN2 VÀ NỒNG ĐỘ PROTEIN MBL, FICOLIN-2 Ở BỆNH NHÂN SỐT XUẤT HUYẾT DENGUE Chuyên ngành: Khoa học Y Sinh Mã số: 72 01 01 LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: PGS TS HỒ ANH SƠN TS HOÀNG VĂN TỔNG HÀ NỘI, 2022 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu với hướng dẫn khoa học tập thể cán hướng dẫn Các kết nêu luận án trung thực công bố phần báo khoa học Luận án chưa cơng bố Nếu sai tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm Tác giả Ngơ Trường Giang LỜI CẢM ƠN Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới lãnh đạo Đảng ủy Ban Giám đốc Học viện Quân y tạo điều kiện giúp đỡ q trình thực nghiên cứu Tơi xin chân thành cảm ơn Bộ môn Sinh học-Di truyền Y học, Bộ môn Sinh lý bệnh - Học viện Quân y tạo điều kiện thuận lợi, hỗ trợ, giúp đỡ tơi q trình học tập thực luận án Tôi xin chân thành cảm ơn Bộ môn Huyết học truyền máu, Bộ môn Khoa Truyền nhiễm thuộc Bệnh viện Quân y 103 tạo điều kiện, hỗ trợ, giúp đỡ tơi q trình thu thập số liệu Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến GS.TS Nguyễn Lĩnh Toàn, PGS.TS Hồ Anh Sơn, TS Hoàng Văn Tổng cán hướng dẫn khoa học tận tình giúp đỡ, trực tiếp hướng dẫn thực nghiên cứu khoa học trình học tập thực luận án Tơi xin trân trọng cảm ơn nhà Khoa học Bộ mơn Hội đồng cấp đóng góp cho tơi nhiều ý kiến q báu để hồn thiện luận án Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới bệnh nhân giúp tơi có số liệu luận án Cuối cùng, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới Bố, Mẹ, Vợ, Con, Gia đình Bạn bè ln bên cạnh yêu thương, động viên, giúp đỡ sống, học tập công tác Nghiên cứu sinh Ngô Trường Giang ... đa hình gen MBL2, FCN2 định lượng nồng độ protein MBL, Ficolin-2 bệnh nhân sốt xuất huyết Dengue Phân tích mối liên quan tính đa hình gen MBL2, FCN2, nồng độ protein MBL, Ficolin-2 với mức độ bệnh. .. 3.3.5 Mối liên quan tính đa hình gen MBL2 nồng độ 87 MBL huyết bệnh sốt xuất huyết Dengue 3.3.6 Mối liên quan tính đa hình gen FCN2 nồng độ 90 protein Ficolin-2 bệnh sốt xuất huyết Dengue Chương 4:... sàng bệnh sốt xuất huyết Dengue 4.3.5 Về mối liên quan tính đa hình gen MBL2 nồng độ 119 MBL huyết bệnh sốt xuất huyết Dengue 4.3.6 Về mối liên quan tính đa hình gen FCN2 nồng độ 122 protein Ficolin-2