NGHIÊN CỨU CHUYỂN ĐỔI BIỂU MÔ - TRUNG MÔ CARCINÔM TẾ BÀO GAI HỐC MIỆNG

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGUYỄN THỊ NGUYỆT ÁNH NGHIÊN CỨU CHUYỂN ĐỔI BIỂU MÔ - TRUNG MÔ CARCINÔM TẾ BÀO GAI HỐC MIỆNG Chuyên ngành: RĂNG - HÀM - MẶT Mã số: 62720601 LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: GS.BS NGUYỄN CHẤN HÙNG THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NĂM 2021 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tôi, kết nghiên cứu trình bày luận án trung thực, khách quan chưa công bố nơi Tác giả luận án Nguyễn Thị Nguyệt Ánh MỤC LỤC Trang Lời cam đoan DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT i ĐỐI CHIẾU THUẬT NGỮ ANH - VIỆT iv DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC BIỂU ĐỒ vii DANH MỤC HÌNH viii DANH MỤC SƠ ĐỒ ix MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Bệnh học ung thư niêm mạc miệng 1.2 Chuyển đổi biểu mô - trung mô ung thư niêm mạc miệng 10 1.3 Các dấu ấn sinh học EMT nghiên cứu 20 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33 2.1 Thiết kế nghiên cứu 33 2.2 Đối tượng nghiên cứu .33 2.3 Phương pháp nghiên cứu 40 2.4 Kiểm sốt sai lệch thơng tin 57 2.5 Đạo đức nghiên cứu 58 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU .60 3.1 Đặc điểm ung thư niêm mạc miệng loạn sản mẫu nghiên cứu .60 3.2 Tỉ lệ biểu E-cadherin keratin ung thư niêm mạc miệng, loạn sản niêm mạc miệng niêm mạc miệng bình thường .67 3.3 Biểu hóa mơ miễn dịch laminin 332 86 3.4 Biểu hóa mơ miễn dịch vimentin ung thư niêm mạc miệng 92 3.5 Liên quan dấu ấn EMT ung thư niêm mạc miệng 96 CHƯƠNG BÀN LUẬN 100 4.1 Đặc điểm lâm sàng, giải phẫu bệnh ung thư niêm mạc miệng mẫu nghiên cứu 100 4.2 Về biểu E-cadherin keratin ung thư, loạn sản niêm mạc miệng bình thường rìa diện cắt 107 4.3 Về biểu laminin 332 ung thư niêm mạc miệng liên quan với lâm sàng, giải phẫu bệnh ung thư niêm mạc miệng 122 4.4 Về biểu vimentin ung thư liên quan với lâm sàng, giải phẫu bệnh ung thư niêm mạc miệng 130 4.5 Liên quan biểu bốn dấu ấn EMT ung thư niêm mạc miệng 132 KẾT LUẬN 138 KIẾN NGHỊ 141 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC Phụ lục Phiếu thu thập liệu Phụ lục Thông tin cho bệnh nhân tham gia nghiên cứu phiếu tham gia Phụ lục Quyết định hội đồng đạo đức nghiên cứu y sinh Phụ lục Chứng nhận định hướng Giải phẫu bệnh Bệnh viện Ung Bướu Thành phố Hồ Chí Minh Chứng định hướng chuyên khoa Giải phẫu bệnh Răng Hàm Mặt Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Phụ lục Văn đồng ý cho phép sử dụng báo báo viết chung Phụ lục Danh sách bệnh nhân tham gia nghiên cứu i DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt Đa políp tuyến đại tràng APC Adenomatous Polyposis Coli APES Amino Propyl Triethoxy Silane ASR Age - Standarized Rate ATK Alpha serine/threonin-protein Kinase AUC Area Under the Curve CBF α Core-Binding Factor α CK Cytokeratin DAB 3,3’- Diaminobenzidin DDR2 Discoidin Domain Receptor Tyrosine Kinase DNA Deoxyribonucleic Acid DPX Dibutylphthalate E-cadherin Epithelial cadherin Cadherin biểu mô ECM Extra cellular matrix Khung/Chất ngoại bào EDTA Ethylene Diamine Tetraacetic Acid EGF Epidermal Growth Factor Yếu tố tăng trưởng biểu mô EGFR Epidermal Growth Factor Receptor Thụ thể yếu tố tăng trưởng biểu mô EMT Epithelial-mesenchymal Transition Chuyển đổi biểu mô - trung mô ERK/MAPK Extracellular signal-regulated kinases/Mitogen-activated protein kinases FOXC2 Forkhead box protein C2 FTS-1 Fibroblast Transcription Site-1 HE Hematoxylin and Eosin Xuất độ chuẩn hóa theo tuổi Diện tích đường cong Acid deoxyribonucleic Kinase điều hịa tín hiệu ngoại bào/ Protein kinase hoạt hóa phân bào Vị trí phiên mã nguyên bào sợi số ii Viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt HIER Heat-Induced Epitope Retrieval Bộc lộ kháng nguyên cảm ứng nhiệt HIF Hypoxia-Inducible Factor Yếu tố cảm ứng tình trạng giảm oxy HPV Human Papilloma Virus Virút bướu nhú người HRP Horseradish Peroxidase HSV Herpes Simplex Virus IARC International Agency for Research on Cancer Cơ quan Quốc tế Nghiên cứu Ung thư Ig Immunoglobulin Globulin miễn dịch INHANCE Internaltional Head and Neck Cancer Epidemiology Dịch tễ học Ung thư Đầu Cổ Quốc tế K Keratin KIT Kaln Intelligence Test Loạn sản niêm mạc miệng LSNMM MAPK Ras/Raf/mitogenactivated Protein Kinase Protein Kinase Ras/Raf/hoạt hóa phân bào MMP Matrix Metalloproteinase Metalloproteinase khung/chất N-cadherin Neural cadherin Cadherin thần kinh NMMBT Niêm mạc miệng bình thường OB-cadherin Osteoblastic cadherin Cadherin nguyên bào xương OSCC Oral Squamous Cell Carcinoma Ung thư tế bào gai hốc miệng PBS Phosphate Buffered Saline Dung dịch muối đệm phosphate P-cadherin Placental cadherin Cadherin thai pH Power of Hydrogen R-cadherin Retinal cadherin RNA Ribonucleic Acid ROC curve Receiver Operating Characteristic Curve Cadherin võng mạc Đường cong ROC iii Viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt SMA Smooth Muscle Actin Actin sợi trơn TBS Tris-buffered Saline Dung dịch muối đệm Tris TBST Tris-buffered Saline with Tween 20 Dung dịch muối đệm Tris Tween 20 TMDU Tokyo Medical and Dental Trường Đại học Y – Nha Tokyo University TNM Tumor - Node - Metastasis Bướu nguyên phát – Di hạch – Di xa UICC Union for International Cancer Control Hiệp hội Quốc tế Phòng chống Ung thư Ung thư niêm mạc miệng UTNMM WHO World Health Organization Tổ chức Y tế Thế giới iv ĐỐI CHIẾU THUẬT NGỮ ANH - VIỆT TIẾNG ANH TIẾNG VIỆT Adherent junction Liên kết dính Apoptosis Chết tế bào theo lập trình Biomarker Dấu ấn sinh học Cadherin switching Chuyển mạch cadherin Desmosome Thể liên kết /Cầu nối liên bào Epigenous Ngoại sinh Epithelial-mesenchymal transition Chuyển đổi biểu mô-trung mô Gap junction Liên kết khe/khoảng Gastrulation Giai đoạn phôi vị Growth factor receptor Thụ thể yếu tố tăng trưởng Head and neck cancer Ung thư đầu cổ Hemidesmosome Thể bán liên kết Immunohistochemistry Hóa mô miễn dịch Loss of heterozygosity Mất dị hợp tử Mesenchymal-epithelial transition Chuyển đổi trung mô-biểu mô Molecular biology Sinh học phân tử Oncogen Gen ung thư Oral cancer Ung thư niêm mạc miệng Oral dysplasia Loạn sản niêm mạc miệng Overexpression Biểu mức Proto-oncogen Gen tiền sinh ung thư Signaling pathway Đường dẫn truyền tín hiệu Squamous cell carcinoma Carcinôm tế bào gai/vảy Targeted therapy Liệu pháp nhắm trúng đích Tumor supressor gene Gen đè nén bướu v DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Tiêu chuẩn chẩn đoán EMT 17 Bảng 1.2 Tóm tắt số nghiên cứu mối liên quan biểu mức laminin 332 với lâm sàng - bệnh học UTNMM 29 Bảng 2.1 Danh sách biến số nghiên cứu 36 Bảng 2.2 Qui trình nhuộm Hematoxylin-Eosin .41 Bảng 2.3 Chẩn đốn mơ bệnh học loạn sản biểu mô miệng 43 Bảng 2.4 Xếp độ ác tính mơ học carcinôm tế bào gai hốc miệng theo cách đánh giá Anneroth c.s cải tiến .45 Bảng 2.5 Kháng thể thứ sử dụng nghiên cứu 49 Bảng 3.1 Đặc điểm dịch tễ lâm sàng ung thư niêm mạc miệng mẫu nghiên cứu 61 Bảng 3.2 Đặc điểm lâm sàng giải phẫu bệnh 130 ca ung thư niêm mạc miệng 64 Bảng 3.3 Tuổi giới tính 44 bệnh nhân loạn sản biểu mô miệng 65 Bảng 3.4 Đặc điểm lâm sàng, bệnh học theo mức độ loạn sản 66 Bảng 3.5 Biểu E-cadherin ung thư niêm mạc miệng so với niêm mạc miệng bình thường 67 Bảng 3.6 Biểu E-cadherin loạn sản so với niêm mạc miệng bình thường .69 Bảng 3.7 Biểu E-cadherin theo mức độ loạn sản .70 Bảng 3.8 So sánh biểu E-cadherin ung thư niêm mạc miệng, loạn sản niêm mạc miệng niêm mạc miệng bình thường 71 Bảng 3.9 Liên quan biểu E-cadherin với lâm sàng, giải phẫu bệnh ung thư 72 Bảng 3.10 Biểu keratin ung thư niêm mạc miệng so với niêm mạc miệng bình thường 74 Bảng 3.11 Keratin loạn sản niêm mạc miệng bình thường 77 vi Bảng 3.13 So sánh biểu keratin ung thư, loạn sản niêm mạc miệng bình thường .79 Bảng 3.14 Liên quan độ biểu K4 với lâm sàng, giải phẫu bệnh ung thư niêm mạc miệng 80 Bảng 3.15 Liên quan biểu laminin 332 màng đáy với lâm sàng, giải phẫu bệnh ung thư niêm mạc miệng 89 Bảng 3.16 Liên quan biểu laminin 332 bào tương với lâm sàng, giải phẫu bệnh ung thư niêm mạc miệng 91 Bảng 3.17 Liên quan biểu vimentin với lâm sàng, giải phẫu bệnh ung thư 95 Bảng 3.18 Liên quan biểu keratin với E-cadherin, laminin 332, vimentin ung thư niêm mạc miệng .97 Bảng 3.19 Liên quan biểu E-cadherin với laminin 332, vimentin ung thư .98 Bảng 3.20 Liên quan biểu laminin 332 vimentin ung thư 98 Giải phẫu bệnh: Mã số tiêu bản: Sinh thiết bấm  Sinh thiết dao  Bệnh phẩm mổ  Kết bướu nguyên phát: Kết hạch: Bác sĩ đọc kết quả: Ngày đọc: X quang: Siêu âm: Xét nghiệm khác: V CHẨN ĐOÁN Ung thư: T N M Giai đoạn:………… VI ĐIỀU TRỊ Phẫu thuật  Ngày: Phương thức:  Ngày: Phương thức: Radium Xạ trị  từ …./…./…… đến … /…./……Tổng liều: … Gy Phân liều:… Gy Bướu nguyên phát  Hóa trị  chu kỳ từ Hạch cổ  …./…./…… đến … /…./…… Phác đồ: ………… Điều trị nội khoa triệu chứng  VII KHẢO SÁT ĐỘ MƠ HỌC Mơ học Biệt hóa tế bào Dị dạng tế bào Phân bào Kiểu xâm lấn Độ xâm lấn Limphơ bào Tổng số điểm ác tính Mã số tiêu bản: ………… Số điểm ác tính Độ mơ học BS đọc Mã số tiêu bản: ……… VIII KHẢO SÁT HĨA MƠ MIỄN DỊCH BS đọc E-cadherin Ung thư Loạn sản NMMBT Tỉ lệ nhuộm Mức độ nhuộm Phân bố nhuộm BS đọc Keratin Ung thư Loạn sản NMMBT Tỉ lệ nhuộm Mức độ nhuộm Phân bố nhuộm BS đọc Laminin-5/UTNMM Tỉ lệ/ Khơng Màng Màng bào có đáy đáy tương màng không liên tục dấy liên tục Tỉ lệ nhuộm Mức độ nhuộm Phân bố nhuộm Vimentin/UTNMM Tỉ lệ nhuộm Mức độ nhuộm Phân bố nhuộm BS đọc PHỤ LỤC ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH KHOA RĂNG HÀM MẶT THƠNG TIN DÀNH CHO BỆNH NHÂN THAM GIA NGHIÊN CỨU Tên đề tài nghiên cứu: Nghiên cứu chuyển đổi biểu mô-trung mô carcinôm tế bào gai hốc miệng Người thực nghiên cứu: • ThS BS Nguyễn Thị Nguyệt Ánh, Khoa Răng Hàm Mặt, ĐHYD TP.HCM • Bệnh viện Ung bướu TP.HCM • Lab Giải phẫu bệnh, Khoa RHM, ĐHYD TP.HCM Nghiên cứu phê duyệt bởi: • Hội đồng khoa học Khoa RHM, ĐHYD TP.HCM • Hội đồng Y đức, ĐHYD TP.HCM Những quy định - Trước định tham gia hay không tham gia vào nghiên cứu này, ông/bà cần đảm bảo đọc kỹ, thảo luận với bác sĩ phụ trách hiểu rõ nội dung quan trọng có liên quan - Việc tham gia vào nghiên cứu hồn tồn tự nguyện, khơng tham gia rút khỏi nghiên cứu lúc nào, lý Điều không ảnh hưởng đến chăm sóc y khoa, khơng bị phạt khơng bị lợi ích mà ơng/bà có quyền hưởng từ bệnh viện theo quy định - Quyền bệnh nhân đảm bảo suốt trình tham gia nghiên cứu Về bệnh ung thư niêm mạc miệng Ung thư niêm mạc miệng mười loại ung thư thường gặp tồn giới Tỷ lệ sống cịn năm bệnh nhân ung thư niêm mạc miệng thấp đáng kể so với ung thư khác Mặc dù phát điều trị sớm ung thư niêm mạc miệng có tỷ lệ tử vong cao, chiếm khoảng 50%, chủ yếu bệnh nhân thường đến khám giai đoạn bướu lan rộng và/hoặc di Di hạch yếu tố tiên lượng quan trọng bệnh nhân ung thư niêm mạc miệng Di hạch làm cho ung thư niêm mạc miệng thường có tiên lượng xấu; thời gian sống cịn bệnh nhân có di hạch cổ ngắn so với bệnh nhân không di hạch khả di xa cao Vì vậy, việc điều trị tối ưu cho di hạch cổ quan trọng để cải thiện thời gian sống người bệnh Tuy nhiên, chẩn đoán di hạch vùng không luôn đáng tin cậy qua thăm khám thường quy Vấn đề đặt cho thấy nhu cầu cấp thiết cần phát triển chiến lược chẩn đốn nhằm xác định bướu có tiềm di cao Về mục tiêu nội dung nghiên cứu Mục tiêu nghiên cứu: Khảo sát thay đổi số yếu tố thường liên quan đến xâm lấn di ung thư niêm mạc miệng nhằm góp phần tìm hiểu bệnh sinh tìm kiếm yếu tố dự đốn diễn tiến ung thư niêm mạc miệng hướng tới liệu pháp điều trị đặc hiệu ung thư Nội dung nghiên cứu: ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử xác định mối liên quan số yếu tố thường liên quan đến xâm lấn di với đặc điểm lâm sàng giải phẫu bệnh ung thư niêm mạc miệng Lợi ích tham gia nghiên cứu Khi tham gia vào nghiên cứu này, ơng/bà góp phần to lớn vào việc nghiên cứu nhằm tìm liệu pháp điều trị đặc hiệu ung thư niêm mạc miệng mang lại hiệu điều trị tốt đồng thời giúp giảm thiểu tác dụng phụ từ điều trị không đặc hiệu, kéo dài thời gian sống cải thiện chất lượng sống người bệnh ung thư niêm mạc miệng Các bất tiện Khi tham gia vào nghiên cứu này, ông/bà thời gian (khoảng 10-15 phút) để cung cấp thơng tin có liên quan cho bác sĩ Các quyền bệnh nhân Người nghiên cứu bệnh viện cam kết thực quyền sau ông/bà tham gia nghiên cứu: - Quyền thông tin: ông/bà cung cấp thơng tin có liên quan cách đầy đủ, giải đáp rõ ràng vấn đề thắc mắc Đảm bảo thông tin mà ông/bà nhận trung thực - Quyền phục vụ: tham gia vào nghiên cứu này, bác sĩ coi ông/bà đối tượng phục vụ, chẩn đoán, điều trị, chăm sóc tốt - Quyền bảo vệ: ông/bà bảo vệ suốt q trình nghiên cứu, việc điều trị hồn tồn khơng bị ảnh hưởng - Quyền tơn trọng: thông tin cá nhân ông/bà bảo mật suốt trình tham gia nghiên cứu công bố kết quả, không nhận biết ông/bà tham gia nghiên cứu, không lợi dụng thơng tin mục đích cá nhân, phi khoa học - Quyền không tham gia: tham gia nghiên cứu tự nguyện; không tham gia rút khỏi nghiên cứu quyền ông/bà Nghĩa vụ bệnh nhân - Ơng/bà phải cung cấp thơng tin cần thiết theo quy định - Nhà nghiên cứu quyền sử dụng thông tin liệu thu thập trước ông/bà rút khỏi nghiên cứu cho mục tiêu nghiên cứu mô tả Liên lạc cần: Để hiểu rõ nghiên cứu này, ơng/bà liên lạc với bác sĩ nghiên cứu: ThS BS Nguyễn Thị Nguyệt Ánh, ĐT: 0916160848 Người bệnh/người đại diện: Họ tên:…………………………………………………………………… Tp HCM, ngày … tháng … năm … Ký tên PHỤ LỤC ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM KHOA RĂNG HÀM MẶT Độc lập – Tự – Hạnh phúc BẢN CAM KẾT TỰ NGUYỆN THAM GIA NGHIÊN CỨU Tôi đọc kỹ hiểu rõ thông tin dành cho bệnh nhân tham gia nghiên cứu: “Nghiên cứu chuyển đổi biểu mô-trung mô carcinôm tế bào gai hốc miệng” Tơi có hội đặt câu hỏi, thảo luận nhận trả lời thỏa đáng Tôi ký vào cam kết với khẳng định rằng: Tôi tự nguyện tham gia nghiên cứu khơng địi hỏi khoản thù lao Tôi phép từ chối tham gia nghiên cứu vào thời điểm mà không bị phạt bị phân biệt đối xử điều trị chăm sóc sức khỏe Bệnh viện Ung bướu TP.HCM Tôi không từ chối quyền lợi hợp pháp người tham gia nghiên cứu Người bệnh/người đại diện: Họ tên:…………………………………………………………………… Tp HCM, ngày … tháng … năm … Ký tên Người đại diện nhóm nghiên cứu Họ tên:…………………………………………………………………… Tp HCM, ngày … tháng … năm … Ký tên ... Lời cam đoan DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT i ĐỐI CHIẾU THUẬT NGỮ ANH - VIỆT iv DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC BIỂU ĐỒ vii DANH MỤC HÌNH viii DANH MỤC SƠ ĐỒ ... lục Danh sách bệnh nhân tham gia nghiên cứu i DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt Đa políp tuyến đại tràng APC Adenomatous Polyposis Coli APES Amino Propyl Triethoxy Silane ASR... ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu trình bày luận án trung thực, khách quan chưa công bố nơi Tác giả luận án Nguyễn Thị Nguyệt Ánh MỤC LỤC Trang Lời cam đoan