LÊ ANH HUY-VIRUS HPV VÀ UNG THƯ CỔ TỬ CUNG docx

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP. HCM NGÀNH CÔNG NGHỆ HÓA HỌC      MÔN VI SINH ĐẠI CƯƠNG Bài báo cáo: HUMAN PAPILOMAVIRUS VÀ UNG THƯ CỔ TỬ CUNG GVHD: Vương Thị Việt Hoa SVTH: Lê Anh Huy 08139101 TP. HCM. Tháng 4 năm 2010 Mục lục: A. Tổng quan về UTCTC. 1.tình hình UTCTC. 2.khái niệm UTCTC. B. Các đặc điểm virus HPV. 1. Cấu tạo 2.Cấu trúc bộ gene của HPV 3.protein cua virus HPV và chức năng của nó. C. Cac giai đoạn phát triển của UTCTC. D. văcxin cho virus HPV. 1.vacxin Gardas. 2.vacxin cerverix. 3.Các phản ứng có thể xảy ra sau khi chủng ngừa E.các phương pháp chuẩn đoán phân tử 1. Nghiệm pháp PAP: 2.Xét nghiệm DNA HPV 2.1Phương pháp lai bắt giữ (Hybrid Capture Technology): 2.2Phương pháp PCR (Polymerase Chain Reaction ) 2.3Phương pháp lai ngược bằng LipA (Reverse Hybridization line Probe Assay) 2.4Phương pháp khuyếch đại tín hiệu DNA nhánh (bDNA) 2.5 Phương pháp Southern blot 2.6 Phương pháp định lượng bằng Real-time PCR: A.TỔNG QUAN VỀ UNG THƯ CỔ TỬ CUNG (UTCTC) 1.Tình hình ung thư cổ tử cung: Ung thưổ tử cung (UTCTC) là một trong những bệnh ung thưầu và là nguyên nhân thứ hai gây tử vong cho phụ nữ toàn thế giới .Theo Tổ chức Y Tế Thế Giới (WHO), năm 2007, số ca mới xấp xỉ 550.000 người và gây tử vong cho khoảng 260.000 bệnh nhân, chủ yếu là các bệnh nhân ở các nước đang phát triển (chiếm 90%). Hiện nay, theo thống kê, có khoảng 269 triệu phụ nữ trên thế giới nhiễm Human Papillomavirus (HPV). Tình trạng viêm nhiễm này dẫn đến 440.000 người bị ung thư ổ tử cung hàng năm. Các vùng khác nhau có có tỉ lệ mắc bệnh khác nhau. Tỉ lệ cao nhất là vùng Trung và Nam Mỹ, miền Nam và Đông Châu Phi và vùng Caribe, với tỉ lệ mắc phải ít nhất là 30 ca mới trên 100.000 phụ nữ mỗi năm . Đông Nam Á chiếm tỉ lệ trung bình với gần 20 ca mới trên 100.000 phụ nữ mỗi năm. Ở Việt Nam, UTCTC chiếm tỉ lệ 53,5% các loại ung thưở nữ giới. Theo các con số thống kê ở Hà Nội và TP. HCM 1996 – 1999 tỉ lệ mắc chuẩn theo tuổi tính trên 100000 dân lần lượt là 5,5 và 26,0. Nhưậy tỉ lệ ung thưổ tử cung ở thành phố Hồ Chí Minh tươối cao nếu đem so sánh với thống kê ở Mỹ (SEER) là 7.5. Theo thống kê năm 2002, hằng năm, số ca mới ung thưổ tử cung tại Việt Nam là hơố ca tử vong gần 3000. Tỉ lệ mắc bệnh ung thưổ tử cung và nhiễm trùng HPV ở thành phố Hồ Chí Minh cao gấp 4 lần so với Hà Nội. 2.Khái niệm về ung thư cổ tử cung a.Ung thư Ung thưật ngữ dùng để chỉ sự phát triển không kiểm soát và ác tính của các tế bào. Sự phát triển này dẫn đến sự hình thành khối u. Các khối u này xâm chiếm các phần xung quanh nó và các phần xa hơơể, phá hoại các mô bình thường và cạnh tranh về dinh dưỡng và oxy với các mô này. Sự di căn xảy ra khi một nhóm các tế bào tách ra từ khối u và di chuyển đến các vùng xa hơạch máu, mạch bạch huyết và bắt đầu hình thành khối u mới tại vị trí ấy. b.Ung thư cổ tử cung Hình:tỉ lệ gây bệnh đối với người của virus HPV Ung thưổ tử cung được gọi tên theo bộ phận cơể mà ung thưất hiện. Ung thư ổ tử cung còn được phân loại dựa theo loại tế bào mà nó bắt đầu phát triển. Hầu hết ung thưổ tử cung là ung thưểu mô tế bào vảy. Chúng là những tế bào dẹt, mỏng, lót bề mặt cổ tử cung. Khi ung thưới một bộ phận khác của cơể, khối u mới sẽ có cùng một loại tế bào bất thường và có cùng tên gọi với ung thưưầu). Ví dụ, nếu ung thưổ tử cung lan đến xươế bào ung thưở xươế bào ung thưổ tử cung. Bệnh này được gọi là ung thưổ tử cung di căn. c.Những yếu tố nguy cơ nhiễm bệnh UTCTC: Nguyên nhân chính gây ra bệnh ung thưổ tử cung là do nhiễm phải một hoặc nhiều type Human papillomavirus (HPV) có nguy cơ ư!"#$%& #"ễm thường gây ung thưổ tử cung nhất là type 16 và type 18, chiếm lần lượt là 70% và 20% các trường hợp bệnh nhân mắc UTCTC. Theo thống kê, số phụ nữ bị nhiễm HPV phát bệnh thành ung thưổ tử cung chỉ chiếm khoảng 5-10% người nhiễm HPV. Nhưậy nhiễm HPV là điều kiện cần như chưủ để hình thành bệnh. Theo các nghiên cứu, bên cạnh HPV cần có thêm sự tươủa các điều kiện hay yếu tố khác như'hoạt động tình dục, hút thuốc lá, sinh đẻ nhiều lần, sử dụng các thuốc tránh thai trong một thời gian dài (từ 12 năm trở lên.), hệ miễn dịch yếu hay bị nhiễm HIV… Theo hệ thống phân lọai Bethesda 2001, UTCTC được phân chia thành 6 cấp độ: NILM, ASCUS, ASC-H, LSIL, HSIL, CA. - NILM (negative for intraepithelial lesion or malignancy): được xếp vào nhóm này gồm các trường hợp: âm tính đối với các tổn thươểu mô và không ác tính hoặc các mẫu cho thấy không có các bất thường ở biểu mô. - ASCUS (Atypical Squamous Cells of Undetermined Significance): ở giai đoạn này người ta bắt đầu quan sát được các bất thường của tế bào biểu mô. Đó là những trường hợp xuất hiện các tế bào vảy không điển hình nhưhưủ cơở để kết luận có thể dẫn đến loạn sản hay không. Đối với trường hợp này cần phải làm thêm các chẩn đoán khác để kết luận. - ASC-H (Atypical squamous cells, cannot exclude an HSIL): tươự ASCUS, như ế bào vảy trong trường hợp này có khả năng phát triển thành số lượng lớn các tế bào tổn thươặng ở giai đoạn HSIL. - SIL mức độ thấp (LSIL): là những thay đổi còn sớm về kích thước, hình dạng, số lượng tế bào trên bề mặt cổ tử cung. Một số tổn thươức độ thấp có thể tự biến mất. Tuy nhiên, theo thời gian, một số tổn thường khác có thể phát triển rộng hơ ặc trở nên bất thường hơạo nên tổn thươức độ cao. Tổn thươ(ền ung thưức độ thấp có thể gọi là hiện tượng loạn sản nhẹ hoặc hiện tượng tân tạo trong biểu mô cổ tử cung (CIN 1). Những thay đổi ban đầu nhưậy thường xảy ra ở phụ nữ từ 25-35 tuổi như)ể xuất hiện ở những nhóm tuổi khác. - SIL mức độ cao (HSIL): là có một số lượng lớn tế bào có dấu hiệu tiền ung thư% *ống như+,-ức độ thấp, những thay đổi tiền ung thưỉ liên quan đến những tế bào trên bề mặt cổ tử cung. Những tế bào này sẽ không trở thành ung thư"  ấn vào những lớp tế bào sâu hơủa cổ tử cung trong nhiều tháng, có thể trong nhiều năm. Tổn thươức độ cao còn được gọi là hiện tượng loạn sản mức độ vừa hoặc nặng (CIN 2và CIN 3) hay ung thưểu mô nông tại chỗ. Chúng thường xuất hiện nhiều nhất ở những phụ nữ trong độ tuổi từ 30-40 như)ể xảy ra ở những độ tuổi khác. - Ung thư cổ tử cung xâm lấn (CA-invasive carcinoma): Khi những tế bào bất thường lan sâu hơổ tử cung hoặc tới các mô khác hay những cơ" ệnh được gọi là ung thưổ tử cung hay ung thưổ tử cung thể xâm lấn. B. CÁC ĐẶC ĐIỂM CỦA HPV: 1.Cấu tạo: Human Papillomavirus (HPV) có vật liệu di truyền là DNA, thuộc họ Papovaviridae, gây bệnh ở người. HPV có đường kính khoảng 55nm chứa DNA dạng vòng, mạch đôi, liên kết với protein giống histone. Vỏ capsid được tạo thành từ 72 đơị capsomere, mỗi đơị là một pentamer của protein cấu trúc L1 và L2. Hình 1: Hình dạng Human papillomavirus 2.Cấu trúc bộ gene của HPV: Bộ gene virus có 7200-8000 cặp base, chứa 8 khung đọc mở (Open reading frame- ORF). Tất cả các type HPV đều có cấu trúc bộ gene tươự nhau và thường chỉ có một mạch được dùng để phiên mã, do đó sự phiên mã xảy ra theo một chiều duy nhất. Bộ gene papillomavirus có thể chia ra làm ba vùng: - Vùng điều hòa dài (Long control region-LCR): chiếm khoảng 10% bộ gene, có độ dài từ 800-1000 cặp base tùy theo từng type HPV. Sự điều hòa biểu hiện của các gene cần cho sự tồn tại của virus nhưự phiên mã và hoạt động của chu trình tan xảy ra chủ yếu ở vùng này. Vùng LCR có chứa vùng trình tự tín hiệu kết thúc và polyadenyl hóa của các gene phiên mã muộn L1, L2; trình tự enhancer là vị trí gắn của nhiều nhân tố phiên mã khác nhau như./!0120304520660##7 và promoter cần cho sự phiên mã RNA của virus, gọi là P97 ở HPV 16 và P105 ở HPV 18. - Vùng gene sớm (Early – E) bao gồm các khung đọc mở của các gene E1, E2, E4, E5, E6 và E7 cần cho sự sao chép và khả năng gây bệnh của virus. Gene E6 và E7 được xem là nguyên nhân chính dẫn đến tính bất tử và mức độ ác tính của các tế bào ung thư ổ tử cung. - Vùng gene muộn (Late- L) gồm hai gene L1 và L2 mã hóa cho các protein cấu trúc tạo nên vỏ capsid của virus. Hiệu quả lâm sàng của vắc-xin có ý nghĩa gì? Hình 2: Sơồ cấu trúc bộ gene của HPV 3.Protein của virus HPV và chức năng của nó - Protein E1 và E2 :cần thiết cho quá trình sao chép của HPV. Chúng được bảo tồn cao trong tất cả các type của HPV. - Protein E4 : có thể thúc đẩy quá trình sao chép DNA của HPV và điều hòa hoạt động của virus ở giai đoạn trễ trong chu trình xâm nhiễm của HPV. - Protein E5 quan trọng trong giai đoạn đầu của sự xâm nhiễm, có vai trò trong việc ngăn chặn sự chết theo chươủa các tế bào có DNA hưỏng. - Protein E6: có khả năng gắn với protein ức chế khối u p53. p53 là một protein gắn DNA được biểu hiện để đáp ứng lại với sự sai hỏng của DNA. Kết quả của đáp ứng này dẫn tới việc ngừng chu trình phân bào hoặc dẫn tới apotosis. Ngòai ra, protein E6 còn hoạt hóa telomerase – một enzyme có vai trò trong việc kéo dài telomere ở đầu mút các nhiễm sắc thể. Protein E6 có khả năng tác động đến quá trình kiểm soát sự sao chép của tế bào, sự phân cực của tế bào cũng như8nh bám dính của tế bào. - Protein E7: cũng là một oncoprotein của HPV, tác động làm tăng bất thường sự sao chép DNA của HPV. Protein E7 đóng vai trò quan trọng đối với tiến trình dẫn tới ung thưổ tử cung và quá trình sinh bệnh của virus. - Protein L1và L2: protein L1 có khả năng tự hình thành vỏ capsid còn protein L2 liên quan đến sự gắn DNA và ảnh hưởng đến hiệu quả của quá trình đóng gói thành các virion. C. Các giai đoạn phát triển của ung thư cổ tử cung Giai đoạn 1 là bị nhiễm HPV. Như nói trên phần lớn ung thư cổ tử cung là do nhiễm HPV, nhưng không phải bất cứ ai bị nhiễm HPV đều có ung thư! Trong thực tế, ở độ tuổi đôi mươi (hay khi mới có quan hệ tình dục), có khoảng 60% đến 80% phụ nữ bị nhiễm HPV; nhưng sau 12 tháng, 70% trong số này không còn bị nhiễm nữa, và sau 24 tháng chỉ còn 9% tiếp tục bị nhiễm HPV. Sau khi bị nhiễm HPV, một trong ba tình huống lâm sàng sẽ xảy ra: hoặc là virút chỉ thụ động (tức là chỉ có mặt trong tế bào nhưng không gây tác hại); hoặc là virút sẽ gây nên một vài bệnh liên quan đến cổ tử cung; hoặc virút sẽ tiến triển và làm hại tế bào gây tên tình trạng “tiền ung thư”. Giai đoạn 2 là tiền ung thư. Phụ nữ nằm trong tình trạng này vẫn bình thường, và vẫn chưa thể gọi là mắc bệnh “ung thư”. Đây chính là giai đoạn mà y khoa muốn nhận bệnh và ngăn ngừa bệnh trước khi tế bào phát triển thành ung thư. Chỉ có khoảng 10% phụ nữ bị nhiễm HPV (giai đoạn 1) trở thành tiền ung thư. Phần lớn những phụ nữ bị tiền ung thư thường ở độ tuổi 25 đến 29. Nói cách khác, thời gian từ khi bị nhiễm HPV đến tiền ung thư kéo dài từ 5 đến 10 năm. Khoảng 1 phần 3 trường hợp trong giai đoạn này sẽ không phát triển thành ung thư, nhưng khoảng 12% sẽ phát triển thành ung thư chưa di căn (giai đoạn 3) Giai đoạn 3 là ung thư chưa/không di căn (thuật ngữ y khoa gọi là carcinoma in-situ). Ở giai đoạn này, tế bào có dấu hiệu ung thư nhưng chỉ giới hạn trong cổ tử cung, và do đó điều trị có thể đem lại kết quả khả quan. Một số trường hợp ung thư cổ tử cung ở giai đoạn này cũng không phát triển thêm, và một số trường hợp thì bệnh tự nhiên biến mất! Giai đoạn sau cùng là ung thư di căn, tức là tế bào ung thư xâm lấn sang các cơ phận khác, và đây chính là giai đoạn nguy hiểm nhất của bệnh. Nhưng chỉ khoảng 1% trường hợp từ giai đoạn 2 phát triển thành loại ung thư nguy hiểm ở giai đoạn cuối này. Phần lớn phụ nữ mắc bệnh trong giai đoạn này là 50 tuổi trở lên, tức sau thời kì mãn kinh. Không phải bệnh nhân nào cũng tiến triển từ giai đoạn 1 đến giai đoạn 4. Trong thực tế, có nhiều trường hợp ung thư ở giai đoạn 2 và 3 tự nhiên dừng lại và không còn biểu hiện ung thư nữa. Ngay cả quá trình hình thành và phát triển ung thư thường biến chuyển với [...]... ngừa vi rút HPV gây ung thư cổ tử cung tuýp 16 và 18 Đây là hai tuýp gây ra hơn 70% các ca ung thư cổ tử cung Vì thế, ở lứa tuổi đã có quan hệ tình dục, đặc biệt lứa tuổi trung niên (đối tượng có nguy cơ mắc ung thư cổ tử cung cao nhất) cần được tiêm phòng để bảo phong benh Việt nam đã chính thức cấp phép lưu hành vắc xin Cervarix Đâ là loại vắc xin có thể tiêm phòng ngừa ung thư cổ tử cung cho phụ... 2 tuýp virus HPV gây ung thư là HPV1 6, HPV1 8 và 2 tuýp gây mụn cóc .Ung thư cổ tử cung hiện đã được triển khai trên hơn 100 nước Một số nước phát triển như Anh, Pháp, Australia đã đưa nó vào chương trình tiêm chủng quốc gia, tiêm miễn phí cho các em gái độ tuổi 9 den 26, tiêm văcxin ung thư cổ tử cung sẽ giúp phụ nữ phòng ngừa được những lần nhiễm HPV sau này, bao gồm cả các type gây ung thư 2.vacxin... đoạn loạn sản) Vắc xin ngừa ung thư cổ tử cung có thể sử dụng cho các bé gái từ 9 tuổi trở lên, với ba liều vắc xin tiêm trong 6 tháng Đây là loại vắc xin rất có hiệu quả trong việc dự phòng ung thư cổ tử cung do vi rút Human Papiloma Vi rút (vi rút HPV) gây ra, đặc biệt tiêm cho trẻ em gái trước tuổi có quan hệ tình dục và với 3 mũi vắc xin khả năng phòng ngừa ung thư cổ tử cung đạt tới 98% Các nghiên... đều có hiệu quả ngăn ngừa nhiễm HPV (hay tiền ung thư) từ 98% đến 100% Tuy nhiên, một điều quan trọng cần phải nhấn mạnh là hiệu quả 98-100% không có nghĩa là vắcxin ngăn ngừa 98% đến 100% ca ung thư cổ tử cung Để hiểu được phát biểu đó, cần phải điểm qua 4 giai đoạn phát triển của một tế bào bình thư ng đến tế bào ung thư như sau: 1.Vắc-xin Gardasil Bệnh ung thư cổ tử cung (UTCTC) có thể chữa khỏi hoàn... một phương pháp tế bào học Trong nghiệm pháp PAP, bác sĩ thư ng dùng một que quấn bông chuyên dụng phết ở cổ tử cung và các vùng quanh để thu lấy một lớp tế bào, sau đó tế bào trên que phết sẽ được quét lên một tấm kính mỏng và soi dưới kính hiển vi Nghiệm pháp PAP có thể cho thấy những bất thư ng trong tế bào ở cổ tử cung, các dấu hiệu tổn thư ng ban đầu ở mức độ thấp hoặc cao với ưu điểm lớn là có... vắcxin này có thể ngăn ngừa một số bệnh gây nên bởi HPV: mụn cóc sinh dục, ung thư âm hộ, âm đạo… Vắc xin này có hiệu lực ít nhất trong năm năm và có thể kéo dài lâu hơn Thuốc chủng ngừa HPV Gardasil bảo vệ chống lại 2 loại Siêu Vi Khuẩn Human Papillomaviruses gây ra phần lớn các bệnh ung thư cổ tử cung Thuốc chủng này cũng bảo vệ chống lại 2 loại HPV gây ra phần lớn mụn cóc ở bộ phận sinh dục Thuốc...tốc độ khác nhau, tùy thuộc vào hệ thống miễn dịch có đủ mạnh hay không Do đó, danh từ ung thư trong thực tế bao gồm một số thực thể được “tiến hóa” bằng nhiều cách khác nhau D vacxin cho virus HPV Hinh:vacxin HPV và tiem phòng bệnh Hiện nay, đã có hai loại vắcxin (Gardasil và Cervarix) được phát triển và có hiệu quả giảm nguy cơ nhiễm virút HPV týp 16, 18, 11 và 6 Kểt quả các nghiên cứu lâm... ngừa Các phản ứng thông thư ng có thể là đau, tấy đỏ và sưng ở cánh tay chỗ chích ngừa, nhức đầu và sốt Đối với bất cứ loại thuốc chủng nào, có thể xảy ra phản ứng vì dị ứng tuy rất hiếm khi xảy ra Phản ứng này có thể gồm phát ban, khó thở, hoặc sưng cổ họng, lưỡi, môi hoặc mắt E CÁC PHƯƠNG PHÁP CHẨN ĐÓAN PHÂN TỬ: 1 Nghiệm pháp PAP: Hay còn gọi là phết tế bào âm đạo - cổ tử cung Đây là xét nghiệm đơn... PGMY09/11, GP5+/GP6+, và SPF10 Các cặp mồi dùng cho mục đích phân type lại thư ng được thiết kế để nhân bản các trình tự ở vùng gene E6/E7- vùng gene tương đối biến động giữa các type HPV Ưu điểm: độ nhạy rất cao Nhược điểm: chỉ phát hiện DNA HPV trong những mẫu có lượng DNA HPV chỉ từ 10-100 bản sao Độ nhạy và độ đặc hiệu của phương pháp không ổn định, nó phụ thuộc nhiều vào các primer, kích thư c của sản... lại trong giếng và được phát hiện bằng cách lần lượt bổ sung phức hợp anti-DIG Alkaline phosphatase và cơ chất phản ứng Màu của phản ứng sẽ được đo bằng OD ở bước sóng 450nm Ưu điểm: độ nhạy rất cao 2.4 Phương pháp khuyếch đại tín hiệu DNA nhánh (bDNA): Nguyên tắc: Cố định tế bào lên đĩa Cho các mẫu dò mục tiêu vào Tiếp đến, probe đánh dấu enzyme và cơ chất phát quang hóa học được cho vào Việc gia tăng . A.TỔNG QUAN VỀ UNG THƯ CỔ TỬ CUNG (UTCTC) 1.Tình hình ung thư cổ tử cung: Ung thư ổ tử cung (UTCTC) là một trong những bệnh ung thư ầu và là nguyên. của ung thư cổ tử cung Giai đoạn 1 là bị nhiễm HPV. Như nói trên phần lớn ung thư cổ tử cung là do nhiễm HPV, nhưng không phải bất cứ ai bị nhiễm HPV