Khảo sát đặc tính sinh lý, sinh hóa

1 Khảo sát đặc tính sinh học - 1.1 Quan sát khuẩn lạc (bằng mắt thường) Quan sát hình dạng: tròn, đa giác, cưa, chia thùy Màu sắc Bề cao Kích thước (mm) 1.2 Quan sát kính hiển vi (giọt treo/giọt ép) Khả di động vi khuẩn  Khơng di động  Có di động: thụ động chủ động - 1.3 Phương pháp nhuộm Gram Phân biệt vi khuẩn G+; G-, Hình dạng vi khuẩn (cầu, trực, xoắn), Cách xếp (riêng lẻ, đôi, chuỗi, chùm) Vết bôi Crystal violet (để yên phút) Rửa vòi nước Lugol (Iodine 2-3p) Tẩy màu cồn 96o Gram + : tím Gram –: ko màu Safranin (30s-1p) Rửa vịi nước Gram + : tím Soi KHV Gram –: hồng Khảo sát đặc tính sinh hóa (thường đưa pH trung tính pH = 7) 2.1 Nguồn C (Glucose, Fructose, Maltose,…) VSV, O2 2.1.1 Cacbohydrate (Glucose)  CO2 + H2O Phenol red a LM  Acid  Vàng (+): dùng đường / Gas (+) Metyl red b MR  hh acid hữu (pH5.5)  + α-naphtol 2.1.2 Citrate Enzyme Bromothymol blue Citrate (xanh lá)  Na , NH3  + 2.2 Vòng hồng (+) Xanh dương (+) Nguồn N Tryptophanase Kowacs a Acid amin chứa vòng Indol  Indol (Tryptophan)  Vòng đỏ (+) Fe2+ b Acid amin chứa S  H2S  FeS tủa đen (+) (Cystein, Methyonin) 2.3 KIA: cho biết VSV có sử dụng Glu, Lac, H2S, sinh Gas Glu 0.1% , Lactose 1% - Glucose: thạch tròn  vàng (+) Lactose: thạch nghiêng  vàng (+) H2S: bề mặt t/xúc tròn nghiêng: đen (+) Gas: thạch tròn bị nứt/ đẩy lên (+) 2.4 Catalase: phản ứng LM hiếu khí sinh O2 Catalase VK  H2O2  H2O + O2 sủi bọt (+) Khảo sát, sàng lọc VK probiotic tiềm 3.1 Khảo sát khả kháng axit Vi khuẩn Cấy MRS lỏng pH = (điều chình = HCl 0.5M) Cấy MRS lỏng pH = (điều chình = HCl 0.5M) Ủ 0h – 1h – 2h – 3h Pha loãng mẫu Cấy 0.1ml MRS agar Ủ 37oC, 24-48h Đếm khuẩn lạc (CFU/ml) Hút 0.1ml MRS lỏng Ủ 37oC, 48h Đo OD (bước sóng 600nm) 3.2 Khả chịu muối mật Vi khuẩn Cấy MRS có muối mật 05% 1% 2% (điều chình = Bile salt Difco) Ủ 0h – 1h – 2h – 3h – 6h – 24h Pha loãng mẫu Cấy 0.1ml MRS agar Ủ 37oC, 24 - 48h Đếm khuẩn lạc (CFU/ml) 3.3 Khả kháng khuẩn Vi khuẩn Cấy vào đĩa giấy vô trùng bề mặt MRS agar Ủ 37oC, 24 - 48h Cấy vào mt LB agar / MRS agar chứa VK định (E.coli, Staphylococcus) Ủ 37oC, 24 - 48h Đo vịng vơ khuẩn ... đẩy lên (+) 2.4 Catalase: phản ứng LM hiếu khí sinh O2 Catalase VK  H2O2  H2O + O2 sủi bọt (+) Khảo sát, sàng lọc VK probiotic tiềm 3.1 Khảo sát khả kháng axit Vi khuẩn Cấy MRS lỏng pH = (điều... S  H2S  FeS tủa đen (+) (Cystein, Methyonin) 2.3 KIA: cho biết VSV có sử dụng Glu, Lac, H2S, sinh Gas Glu 0.1% , Lactose 1% - Glucose: thạch tròn  vàng (+) Lactose: thạch nghiêng  vàng (+)