Nghiên cứu đặc trưng và tính chất của màng sơn polyurethan chứa nano ceo2 tio2

Tạp chí Hóa học, 2018, 56(1), 60-64 Bài Nghiên cứu DOI: 10.15625/vjc.2018-0005 Hoạt tính sinh học thành phần hóa học bời lời nhớt (Litsea glutinosa) thu hái tỉnh Thái Nguyên Thừa Thiên-Huế Phạm Thị Ninh1,2, Trần Thị Phương Thảo1* Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Học viện Khoa học Công nghệ, Viện Hàn lâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam Đến Tịa soạn 22-12-2017; Chấp nhận đăng 30-12-2017 Abstract Litsea glutinosa samples collected from Thai Nguyen and Thua Thien-Hue province were investigated chemically and biologically As results: There were remarkable differences in chemical constituents and biological activities between two Litsea glutinosa samples Flavonoid glycosides, megastigmanes and aporphine alkaloids were isolated and identified from the sample collected in Thua Thien Hue province, while no flavonoid glycosides, only three aporphine alkaloids and some fatty acids and fatty acid esters were isolated from the sample collected in Thai Nguyen province The ethanol extract of sample from Thua Thien-Hue province showed a stronger α- glucosidase inhibition than that of the sample from Thai Nguyen province The in vivo antidiabetic activity of Thua Thien-Hue sample was evaluated The result was promising Keywords Litsea glutinosa, chemical constituents, α- glucosidase inhibition, antidiabetic activity MỞ ĐẦU Thiên Huế thử nghiệm hoạt tính hạ đường huyết chuột thí nghiệm Bời lời nhớt thuốc dân gian có tên khoa học Litsea glusinosa (Lour.) C B Rob thuộc họ Long não (Lauraceae) Cây cịn có tên mò nhớt, sàn thụ, bời lời dầu, nhớt mèo Cây cao từ 5-10 m, thân cành thường xanh quanh năm nên gọi “cây thường xanh” Ở nước ta, mọc bờ rào, rừng còi, khắp nơi từ Lạng Sơn đến An Giang Các phận có chứa chất nhớt Trên giới, bời lời nhớt phân bố miền Nam Trung Quốc, Ấn Độ, Malaixia, Indonesia, Campuchia [1,][2] Theo Đông y, bời lời nhớt có vị đắng, nhiệt, tiêu sưng, trị viêm Các phận có tác dụng làm thuốc Vỏ tươi giã nát dùng để chữa bong gân, chấn thương, tụ máu, đau khớp, kiết lị, ỉa chảy Lá bời lời nhớt dùng chữa ung nhọt, áp se, viêm vú, trị nhức đầu thiên đầu thống Rễ dùng để trị viêm ruột, viêm tuyến mang tai, mụn nhọt đái tháo đường Bột dùng làm sáp chế xà phòng, dùng làm chất kết dính kỹ thuật làm giấy, hương nén, dùng để thắp đèn [1,] [2] Trong báo công bố khác thành phần hóa học hoat tính ức chế enzym α- glucosidase Bời lời nhớt thu hái tỉnh Thái Nguyên Thừa Thiên Huế Dịch chiết cồn nước vỏ bời lời nhớt thu hái Thừa 60 Wiley Online Library THỰC NGHIỆM 2.1 Hóa chất thiết bị Phổ hồng ngoại (FT-IR) đo dạng viên nén KBr thiết bị IMPACT 410 hãng Nicolet Hoa Kỳ Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1D- 2DNMR ghi máy Bruker Avance 500MHz với TMS làm chất nội chuẩn cho 1H tín hiệu dung môi làm chuẩn cho 13C-NMR Phổ khối ESI-MS đo máy Agilent LC-MSD-Trap SL, Varian Sắc ký lớp mỏng (TLC) thực mỏng silica gel Merck 60 F254 Sắc ký cột sử dụng silica gel (Merck) cỡ hạt 0,043-0,063 0,0630,200 mm Sắc ký cột: SiO2 cỡ hạt 197-400 mesh (0,040-0,063 mm), pha đảo RP-18, Sephadex LH20, nhựa trao đổi ion Dianion HP- 20 Dung môi chưng cất qua cột trước sử dụng Hiện màu mỏng đèn tử ngoại bước sóng 254 365 nm thuốc thử vanilin/H2SO4 hơ nóng 100 oC màu 2.2 Mẫu nghiên cứu Mẫu Bời lời nhớt Thái Nguyên thu hái vào © 2018 Vietnam Academy of Science and Technology, Hanoi & Wiley-VCH Verlag GmbH & Co KGaA, Weinheim Tạp chí Hóa học Trần Thị Phương Thảo cộng tháng 10 năm 2014 xác định tên nhà thực vật học Ngô Văn Trại, nguyên cán Viện Dược liệu (Mẫu tiêu LGTN 10/2014) Mẫu Thừa Thiên - Huế thu hái Huế tháng 10 năm 2015 tiến sĩ Lê Công Sơn, Bảo tàng Cố đô Huế xác định tên khoa học (mẫu tiêu LGH 10/2015) Cả hai mẫu tiêu lưu giữ Phòng Tổng hợp Hữu cơ- Viện Hóa học, Viện Hàm lâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam 2.3 Phương pháp thử hoạt tính ức chế enzym αglucosidase Dựa phản ứng phân cắt chất p-nitrophenyl- tác động enzyme pnitrophenol có màu vàng Enzyme -glucosidase chất đối chứng acarbose sử dụng hãng Sigma p-glucosidase Phương pháp [3-6] nước cất vô trùng đến nồng độ cuối phản ứng 1024, 256, 64, 16, 4, g/ml Acarbose sử dụng làm chất đối chứng dương Ở mẫu đối chứng âm, mẫu thử thay đệm phản ứng Thí nghiệm ủ nhiệt độ 37oC Sau 30 phút, phản ứng dừng 100 µl Na2CO3 Độ hấp thụ phản ứng xác định máy Tecan Genios với bước sóng 405 nm (A) Khả ức chế enzyme -glucosidase mẫu thử xác định công thức: Độ ức chế (%) = [A(đối chứng âm) – A(mẫu thử)]/A(đối chứng âm) x 100% IC50 (half maximal inhibitory concentration) nồng độ chất thử ức chế 50% hoạt động enzyme -glucosidase, tính phần mềm Table curve 2.4 Phương pháp đánh giá hoạt tính hạ đường huyết chuột tiêm alloxan (in vivo) Phép thử đánh giá hoạt tính hạ đường huyết chuột thực Phòng thử nghiệm sinh học-Viện Công nghệ Sinh học-Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam dựa phép thử đại công bố tài liệu [7] Mẫu nghiên cứu: Dịch chiết cồn nước vỏ loài bời lời nhớt (EtOH) Hóa chất: Alloxan monohydrat (Sigma Aldrich) Động vật: Chuột nhắt trắng chủng dịng BALB/c khoẻ mạnh, khơng mắc bệnh, có khối lượng từ 22-26g ni khu nuôi động vật Viện Công nghệ sinh học-Viện Hàn lâm KH & CN Việt Nam Chuột cho ăn thức ăn tiêu chuẩn nước uống tự Dụng cụ thí nghiệm: Kim cong đầu tù dùng để uống, kim tiêm thiết bị phụ trợ khác Thiết bị xác định nồng độ glucose: Nồng độ glucose huyết chuột định lượng phương pháp so màu, thực máy định lượng sinh hoá bán tự động AU680 hãng Beckman Coulter Tiến hành: Gây tăng đường huyết cho 35 chuột cách tiêm alloxan monohydrat nồng độ 180 mg/kgP/01 lần (chuột nhịn đói hồn tồn trước 12 giờ) Lấy máu định lượng glucose huyết sau 48 (2 ngày) tiêm alloxan monohydrat, chuột nhịn đói hồn tồn trước 12 Sau định lượng glucose chọn chuột có hàm lượng glucose huyết lớn 150 mg/dL coi mắc bệnh tiểu đường có hàm lượng glucose huyết lớn mmol/L coi mắc bệnh tiểu đường 24 chuột thí nghiệm (được lựa chọn tổng số 35 chuột tiêm alloxan) chia thành lơ thí nghiệm (lơ 2-5) (6 con/lơ) cho lơ có trị số glucose huyết trung bình ban đầu tương đương bắt đầu cho uống hoạt chất nghiên cứu với đối chứng sinh lý (chuột không gây tăng đường huyết-lô 1) Các lô chia sau: Lô (Chuột không gây tăng đường huyết): uống nước (0,2-0,3 ml/con/ngày) Lô (Chứng bệnh lý): uống nước (0,2-0,3 ml/con/ngày) Lô (Chứng tham khảo): uống acarbose liều mg/kgP/ngày (0,2-0,3 ml/con/ngày) Lô (uống dịch chiết EtOH liều 250 mg/kgP/ngày (0,2 - 0,3 ml/con/ngày) Lô (uống dịch chiết EtOH liều 500 mg/kgP/ngày (0,2 - 0,3 ml/con/ngày) Cho chuột uống mẫu thử (lô 4, 5), acarbose (lô 3) nước (lô 1, 2) ngày, ngày cho chuột uống lần vào buổi sáng Cân trọng lượng lấy máu chuột ngày Ngày thứ 9, sau uống mẫu thử lần cuối cùng, cân trọng lượng © 2018 Vietnam Academy of Science and Technology, Hanoi & Wiley-VCH Verlag GmbH & Co KGaA, Weinheim www.vjc.wiley-vch.de 61 Bài Nghiên cứu chuột lấy máu chuột lô để định lượng glucose máu chuột (chuột nhịn đói 12 trước thí nghiệm) Đánh giá tác dụng hoạt chất dựa vào độ ổn định trọng lượng chuột giảm nồng độ glucose huyết trước sau cho uống hoạt chất 2.5 Phương pháp thử độc tính cấp Phương pháp thử độc tính cấp tiến hành theo tài liệu [8] Động vật thí nghiệm - Loài: Chuột nhắt trắng chủng giống BALB/c - Cân nặng: 20±2g - Số lượng: 70 chuột - Nguồn gốc: Phịng Thử nghiệm sinh học, Viện Cơng nghệ sinh học - Điều kiện chăm sóc: ĐVTN ni điều kiện chuồng thoáng mát, đảm bảo vệ sinh, chế độ ăn uống theo nhu cầu chuột - Cân nặng: Tất ĐVTN trước tiến hành thí nghiệm theo dõi cân nặng + Thử sơ - Cách xử lí chuẩn bị mẫu thử: Mẫu pha nước cất - Thăm dò mức liều khơng làm chết chuột thí nghiệm: Dùng 10 chuột, cho uống 0,4 ml mẫu thử x lần tương đương mức liều 10 g mẫu thử/kg chuột Sau 24 theo dõi, khơng có chuột thí nghiệm bị chết + Thử nghiệm thức - Các mức liều thử nghiệm: Lô 1: Uống cao chiết ethanol-nước vỏ cành bời lời nhớt liều 10 g/kg trọng lượng thể Lô 2: Uống cao chiết ethanol-nước vỏ cành bời lời nhớt liều 12 g/kg trọng lượng thể Lô 3: Uống cao chiết ethanol-nước vỏ cành bời lời nhớt liều 14 g/kg trọng lượng thể Lô 4: Uống cao chiết ethanol-nước vỏ cành bời lời nhớt liều 16 g/kg trọng lượng thể Lô 5: Uống cao chiết ethanol-nước vỏ cành bời lời nhớt liều 18 g/kg trọng lượng thể Lô 6: Uống cao chiết ethanol-nước vỏ cành bời lời nhớt liều 20 g/kg trọng lượng thể Lô 7: Uống nước dùng để pha cao chiết Sau uống cao chiết ethanol-nước vỏ cành loài bời lời nhớt khoảng giờ, chuột ni dưỡng bình thường trở lại (cho ăn, uống tự do) theo dõi liên tục 72 để xác định số chuột chết lơ tính giá trị LD50 Tiến hành - Chuột nhịn ăn 15-18 trước thí nghiệm, nước uống theo nhu cầu Kiểm tra cân nặng trước thử nghiệm Chuột đạt yêu cầu cân Hoạt tính sinh học thành phần… nặng đưa vào thử nghiệm - Cách dùng: Đưa mẫu thử pha nước theo đường uống Lấy thể tích mẫu thử theo quy định đưa thẳng vào dày chuột kim cong đầu tù - Lịch theo dõi: Theo dõi biểu chuột sau uống vòng 12 h đầu theo dõi hoạt động ĐVTN thời gian ngày sau uống Xác định số chuột chết thời điểm sau uống 12h, ngày, ngày, ngày ngày Công thức tính giá trị LD50 Xác định LD50 tiến hành theo phương pháp Karber sau: LD50 = LD - Σb/N Trong đó: LD50: Liều chết 50 % động vật thí nghiệm; LD100: Liều thấp gây chết 100% động vật thí nghiệm; N: Số động vật nhóm; a: Sự khác biệt liều hai liều liên tiếp; b: Tỷ lệ tử vong trung bình hai nhóm liên tiếp 2.6 Chiết tách chất Mẫu vỏ cành bời lời nhớt thu hái Thừa Thiên Huế sấy khô 40oC, xay nhỏ thu 1,7 kg; ngâm chiết với MeOH/nước (80/20) nhiệt độ phịng Ngâm chiết (4 x lít), thời gian 4h/ lần chiết, dịch chiết cất loại dung môi thu cao chiết tổng Cao chiết tổng chiết phân lớp với dung môi n-hexan, EtOAc, n-butanol Các dịch chiết cất loại dung môi thu cao chiết tương ứng với khối lượng n-hexan (5 g), EtOAc (10 g) n-BuOH (60 g) Phân lập cao chiết phương pháp sắc ký cột thường, sắc ký cột nhanh với chất hấp phụ silica gel, sephadex LH-20, RP-18 hệ dung mơi thích hợp thu 07 chất thuộc khung aporphine alkaloid Mẫu bời lời nhớt thu hái Thừa Thiên Huế sau sấy khô, nghiền nhỏ thu 2,2 kg bột mịn Ngâm chiết với EtOH/nước (80/20) nhiệt độ phịng (4x3 lítx4h), cất loại dung mơi áp suất giảm thu cao chiết tổng Chiết phân lớp cao chiết tổng với n-hexan, EtOAc phần dịch nước giữ lại Các dịch chiết cất loại dung môi thu cao chiết tương ứng n-hexan (30 g), EtOAc (40 g), phần dịch nước giữ lại (100 g) Phân lập cao chiết phương pháp sắc ký cột thường, sắc ký cột nhanh với chất hấp phụ như: silica gel, sephadex LH-20, RP-18 với hệ dung mơi thích hợp thu 07 chất thuộc khung flavonoid glycoside megastimane Mẫu vỏ cành bời lời nhớt thu hái Thái Nguyên sấy khô 40 oC, xay nhỏ thu 5,0 kg Chiết với dung mơi có độ phân cực © 2018 Vietnam Academy of Science and Technology, Hanoi & Wiley-VCH Verlag GmbH & Co KGaA, Weinheim www.vjc.wiley-vch.de 62 Tạp chí Hóa học tăng dần (n-hexane, ethyl acetate, metanol metanol/nước = 1:1) thu cặn dịch chiết tương ứng với khối lượng 21 g, 13g, 650 g 450 g Phân lập chất từ cao chiết phương pháp sắc ký cột thu 10 chất, có aporphine alkaloid, lại alcol acid béo KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Trần Thị Phương Thảo cộng acarbose (5 mg/kg) dịch chiết cồn-nước liều 250 500 mg/kg khơng có giảm thể trọng ( P > 0.05) Bảng 1: Ảnh hưởng dịch chiết cồn-nước lên trọng lượng thể chuột bị tiểu đường STT Nhóm thí nghiệm Trọng lượng chuột (g) Ngày Ngày 3.1 Thành phần hóa học I Chuột khỏe mạnh 23,45±1,38 23,05±0,89 Từ kết nghiên cứu thành phần hóa học hai mẫu bời lời nhớt thu hái Thừa Thiên- Huế Thái Nguyên rút nhận xét sau: Chỉ thu hợp chất alkaloid khung aporphine từ vỏ cành hai mẫu này, mẫu hai mẫu khơng có alkaloid Từ mẫu Thừa Thiên - Huế tách chiết xác định cấu trúc hóa học alkaloid, có alkaloid tách dạng muối [9] Từ vỏ cành mẫu Thái Nguyên thu alkaloid trùng với alkaloid thu mẫu thừa Thiên- Huế Có khác biệt rõ thành phần hóa học từ hai mẫu Từ mẫu Thừa Thiên Huế tách xác định flavonoid glycoside megastimane, từ mẫu mẫu Thái Nguyên flavonoid glycoside megastimane mà thấy số chất phân cực alcol este béo [10] II Chuột bị tiểu đường 3.2 Hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase III 22,78±1,29 23,38±1,26 (5 mg/kg) IV Chuột bị tiểu đường uống cao EtOH (250 mg/kg) 22,60±1,43 22,50±0,35 V Chuột bị tiểu đường uống cao EtOH (500 mg/kg) 23,38±1,33 24,10±1,08 Bảng 2: Kết xác định nồng độ glucose huyết chuột bị tiểu đường ngày thứ sau ngày thứ uống dịch chiết cồn-nước Hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase dịch chiết ethanol/nước 80:20 từ mẫu Thừa Thiên-Huế (IC50 = 194,9 µg/ml) mạnh hoạt tính mẫu Thái Nguyên ( IC50 > 256 µg/ml) Acarbose dùng làm chất đối chứng dương (IC50 165 µg/ml) STT 3.3 Hoạt tính hạ đường huyết động vật thực nghiệm Dịch chiết cồn-nước 80:20 mẫu vỏ cành bời lời nhớt Thừa Thiên-Huế chọn để đánh giá hoạt tính chống bệnh tiểu đường động vật thực nghiệm Quá trình thực nghiệm mô tả phần thực nghiệm với hai liều 250 500 mg/kg thể trọng chuột Ảnh hưởng dịch chiết cồn-nước vỏ cành mẫu bời lời nhớt Thừa Thiên-Huế thể trọng chuột đưa bảng Bảng cho thấy chuột bị gây đái tháo đường alloxan có giảm thể trọng từ 22,85 g/con ngày xuống 20,00 g/con ngày Sự giảm có ý nghĩa thống kê (P < 0,05) Trong chuột bị tiểu đường cho ăn Chuột bị tiểu đường uống acarbose 22,85±1,89 20,00±0,87 Nồng độ glucose (mmol/L) Nhóm thí nghiệm Ngày Ngày I Chuột khỏe mạnh 5,15±0,18 5,02±0,18 II Chuột bị tiểu đường 19,30±6,31 18,07±7,25 III Chuột bị tiểu đường uống acarbose 19,42±6,83 10,10±3,92 (5 mg/kg) IV 18,70±7,75 10,94±3,75 Chuột bị tiểu đường uống cao EtOH (250 mg/kg) V 19,04±9,14 9,90±1,62 Chuột bị tiểu đường uống cao EtOH (500 mg/kg) Bảng nồng độ glucose huyết chuột thử nghiệm ngày ngày Bảng cho thấy chuột bị tiểu đường uống acarbose dịch chiết © 2018 Vietnam Academy of Science and Technology, Hanoi & Wiley-VCH Verlag GmbH & Co KGaA, Weinheim www.vjc.wiley-vch.de 63 Bài Nghiên cứu Hoạt tính sinh học thành phần… cồn-nước có nồng độ glucose giảm có ý nghĩa thơng kê (P < 0,05) so với nhóm chứng bệnh lý 3.4 Kết thử độc tính cấp Kết nghiên cứu độc tính cấp dịch chiết cồn nước vỏ bời lời nhớt L glutinosa thu hái Thừa Thiên- Huế cho thấy lô lô (chuột uống 10 12 g dịch chiết cồn-nước/kg thể trọng) sau 72 chuột di chuyển ăn bình thường (bảng 3) Ở lô (chuột uống 14 16 g dịch chiết cồnnước/kg thể trọng) sau 72 chuột di chuyển ăn bình thường Ở lơ lô (chuột uống 18 20 g dịch chiết cồn-nước/kg thể trọng) sau 72 chuột di chuyển, giảm ăn uống, số có tượng ngồi Riêng lơ (uống 20 g dịch chiết cồn-nước/kg thể trọng) có bị chết Liều LD50 xác định > 20 g/kg thể trọng chuột Như coi dịch chiết an toàn Bảng 3: Số lượng chuột chết, biểu bên chuột uống dịch chiết cồn-nước vỏ cành bời lời nhớt Lô Số chuột chết vòng g/kgP 72 (con) Mẫu Biểu bên ngồi vịng 0-72 10 Chuột di chuyển, ăn bình thường 12 Chuột di chuyển, ăn bình thường 14 Chuột di chuyển, ăn bình thường 16 Chuột di chuyển, ăn bình thường Chuột di chuyển, giảm ăn uống, số có tượng bị ngồi Chuột di chuyển, giảm ăn uống, số có tượng bị ngồi 18 20 KẾT LUẬN Các kết nghiên cứu cho thấy hai mẫu bời lời nhớt thu tỉnh Thái Nguyên Thừa ThiênHuế bời lời nhớt Thừa Thiên -Huế có tiềm để phát triển thành chế phẩm có tác dụng hạ đường huyết, dùng việc hỗ trợ điều trị bệnh tiểu đường Lời cảm ơn Nhóm tác giả xin trân trọng cảm ơn Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam tài trợ kinh phí cho đề tài (Mã số đề tài: VAST04.03/15-16) TÀI LIỆU THAM KHẢO Pham Hoang Ho An illustrated flora of Vietnam, page 356, Young Publishing House, Ho Chi Minh City, 1999 Vo Van Chi Dictionary of Vietnamsese Medicinal plant, Medical publishing house, page 130, 1999 Y M Kim, M H Wang, H I Rhee A novel αglucosidase inhibitor from pine bark, Carbohydr Res., 2004, 339, 715-717 T Li, X D Zhang, Y W Song, J W Liu A microplate-based screening method for -glucosidase inhibitors, Nat Prod Res Dev., 2005, 10, 1128-1134 H Chen, X Yan, W Lin, L Zheng, W Zhang A new method for screening α-glucosidase inhibitors and application to marine microorganisms, Pharmaceutical Biology, 2004, 42(6), 416-421 W Hakamata, M Kurihara, H Okuda, T Nishio T Oku Design and screening strategies for alphaglucosidase inhibitors based on enzymological information, Curr Top Med Chem., 2009, 9(1), 3-12 Yananrday R, Colac H Effect chard (Beta vulgaris L varcicla) on blood glucose level in normal and alloxan-induced diabetic rabbit, J Ethnophamacol., 1998, 4, 309-311 J S Akhila, S Deepa, M C Alwar Acute toxicity studies and determination of median lethal dose, Curr Sci., 2017, 93, 917-920 Tran Thi Phuong Thao, Pham Thi Ninh, Tran Van Loc, Nguyen Tuan Thanh, Tran Van Sung Chemical constituents, cytotoxic and α-glucosidase inhibitory activity of the isolated compounds from Litsea glutinosa collected in Thua Thien-Hue province, Vietnam, Chemistry of Natural Compounds, Accepted 6/2017 10 Pham Thi Ninh, Nguyen Thi Luu, Nguyen The Anh, Tran Van Loc, Nguyen Thi Ha Mi, Tran Thi Phuong Thao, Tran Van Sung Chemical constituents of the barks of Litsea glutinosa collected in Thai Nguyen province, Vietnam, Vietnam Journal of Chemistry, 2015, 53(5), 652-656 Liên hệ: Trần Thị Phương Thảo Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam Số 18, Hồng Quốc Việt, quận Cầu Giấy, Hà Nội, Việt Nam E-mail: ntuelam2010@gmail.com © 2018 Vietnam Academy of Science and Technology, Hanoi & Wiley-VCH Verlag GmbH & Co KGaA, Weinheim www.vjc.wiley-vch.de 64 ... 63 Bài Nghiên cứu Hoạt tính sinh học thành phần… cồn-nước có nồng độ glucose giảm có ý nghĩa thơng kê (P < 0,05) so với nhóm chứng bệnh lý 3.4 Kết thử độc tính cấp Kết nghiên cứu độc tính cấp... nồng độ chất thử ức chế 50% hoạt động enzyme -glucosidase, tính phần mềm Table curve 2.4 Phương pháp đánh giá hoạt tính hạ đường huyết chuột tiêm alloxan (in vivo) Phép thử đánh giá hoạt tính hạ... www.vjc.wiley-vch.de 61 Bài Nghiên cứu chuột lấy máu chuột lô để định lượng glucose máu chuột (chuột nhịn đói 12 trước thí nghiệm) Đánh giá tác dụng hoạt chất dựa vào độ ổn định trọng lượng chuột