Nghiên cứu xây dựng quy trình điều chế cao lỏng lược vàng (Callisia fragrans (Lindl.) Woodson)

Bài viết Nghiên cứu xây dựng quy trình điều chế cao lỏng lược vàng (Callisia fragrans (Lindl.) Woodson) tiến hành nghiên cứu với mong muốn tạo nên ý nghĩa điều trị cho cây lược vàng. Bước đầu tiên để hiện thực hóa mục tiêu là phát triển các dạng bào chế hiện đại từ cây Lược vàng, đặc biệt là các dạng bào chế dùng ngoài.

NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐIỀU CHẾ CAO LỎNG LƯỢC VÀNG (CALLISIA FRAGRANS (LINDL.) WOODSON) Hoàng Đức Mạnh, Nguyễn Gia Thuận, Võ Thị An Thuyên Trần Thị Mỹ Hoa, Nguyễn Thị Bích Ngọc Khoa Dược, Đại học Cơng nghệ thành phố Hồ Chí Minh GVHD: ThS.DS Nguyễn Hữu Phước TĨM TẮT Theo Đơng Y, Lược vàng (Callisia fragrans (Lindl.) Woodson) cho loại dược liệu có tác dụng cầm máu, tiêu viêm tốt Vì vậy, tiến hành nghiên cứu với mong muốn tạo nên ý nghĩa điều trị cho Lược vàng Bước để thực hóa mục tiêu phát triển dạng bào chế đại từ Lược vàng, đặc biệt dạng bào chế dùng Trong nghiên cứu này, Lược vàng chiết xuất phương pháp ngấm kiệt phương pháp ngâm lạnh có hỗ trợ siêu âm, với dung môi ethanol nồng độ khác Bằng phương pháp đo quang phổ UV-Vis, cao lỏng Lược vàng xác định hàm lượng flavonoid tồn phần tính theo quercetin cho kết 0,72 mg quercetin/ml cao lỏng Từ khóa: Callisia fragrans, flavonoid, lược vàng, quercetin, UV-Vis Đặt vấn đề Cây Lược vàng (Callisia fragrans (Lindl.) Woodson) hay gọi địa lan vòi, vốn trồng rộng rãi Việt Nam Lược vàng truyền miệng chúng trị nhiều bệnh: bỏng, viêm khớp, bệnh da, tim mạch,… với tác dụng chủ yếu kháng viêm [1] Vì vậy, nhiều nghiên cứu khoa học đời, tìm nhiều thành phần có Lược vàng, đặc trưng nhóm flavonoid [1–3] Tuy nhiên, để có sở phát triển nguồn dược liệu Lược vàng thành dạng bào chế đại, việc nghiên cứu xây dựng quy trình chiết xuất chuẩn hóa cao Lược vàng cần thiết Nghiên cứu thực nhằm mục đích bước đầu tìm quy trình chiết xuất xử lý dịch chiết để điều chế cao lỏng Lược vàng Nguyên vật liệu phương pháp nghiên cứu Nguyên vật liệu 739 Bột nửa thô dược liệu Lược vàng với độ ẩm 1,3%, cung cấp công ty Thảo dược Tấn Phát (22/21 đường số 21, phường 8, quận Gò Vấp) đạt tiêu chuẩn sở Chất đối chiếu thứ cấp quercetin Viện Kiểm nghiệm Thuốc Trung ương cung cấp với hàm lượng 86%, tái kiểm ngày 31/12/2022 Ethanol 96%, natri acetat, acid acetic, nhơm clorua có nguồn gốc từ Trung Quốc cung cấp phịng thí nghiệm khoa Dược – HUTECH Trang thiết bị bao gồm máy đo quang phổ SPECTROSCOPY UV-VIS U-3900 (Nhật), Cân phân tích Ohaus PA214 (Mỹ), thiết bị cịn lại thiết bị thường qui có sẵn phịng thí nghiệm trường Đại học Cơng nghệ TP.HCM – HUTECH Phương pháp nghiên cứu Khảo sát lựa chọn dung môi Các dung môi, tỷ lệ dung môi cần khảo sát: nước, ethanol 25%, ethanol 50%, ethanol 80% Phương pháp chiết xuất ngâm lạnh có hỗ trợ siêu âm Cho 25 g bột dược liệu vào erlen 500ml Lần lượt cho vào 250 ml dung môi cần khảo sát với tỷ lệ dược liệu, dung môi 1:10, siêu âm với tần số 37 kHz 45 phút Sau lọc qua bơng, ép bã Lọc cô dịch chiết bếp cách thủy đến thu cắn khô (khối lượng không đổi cô) Hòa tan cắn 50ml ethanol 96% tiến hành định lượng flavonoid tồn phần tính theo quercetin Khảo sát phương pháp chiết xuất Phương pháp chiết xuất khảo sát: ngấm kiệt ngâm lạnh có hỗ trợ siêu âm Dung môi dùng để chiết xuất ethanol 80% Phương pháp ngâm lạnh có hỗ trợ siêu âm thực tương tự quy trình nêu mục 2.2.1 Phương pháp ngấm kiệt: làm ẩm 50 g bột dược liệu với dung môi ethanol 80% giờ; cho dược liệu làm ẩm vào bình ngấm kiệt tiêu chuẩn thể tích 500 ml; thêm dung mơi cách mặt dược liệu cm ngâm lạnh 48 giờ; rút dịch chiết với tốc độ 30 giọt/phút đến thu 350 ml ngưng thêm dung mơi; rút hết dịch chiết ép bã, gộp dịch chiết; lọc cô dịch chiết bếp cách thủy đến thu cắn khô (khối lượng không đổi cơ); cắn hịa tan 50 ml ethanol 96% tiến hành định lượng flavonoid tồn phần tính theo quercetin Điều chế cao lỏng Lược vàng định lượng flavonoid tồn phần tính theo quercetin cao lỏng Lược vàng Q trình chiết xuất quy mơ kg dược liệu Lược vàng phương pháp ngấm kiệt thực nhiệt độ thường Dịch chiết sau chiết xuất cách thủy đến cịn lít (cao lỏng) Cao lỏng 740 Lược vàng pha loãng 2,5 lần dung môi pha mẫu, tạo thành dung dịch thử định lượng hàm lượng quercetin với phương pháp quang phổ UV-Vis sau tạo phức với AlCl3 [2,4] Dung môi pha mẫu: Hỗn hợp methanol - acid acetic 95:5 (tt/tt), dùng 24 Dung dịch thử: hút xác 10,00 ml chế phẩm cắn hịa tan ethanol 96% cho vào bình định mức 25ml pha lỗng với dung mơi pha mẫu, lắc để yên 45 phút Dung dịch chuẩn đối chiếu: Cân xác 12,5 mg quercetin cho vào bình định mức 50 ml, siêu âm 15 phút điền đến vạch dung môi pha mẫu Phản ứng tạo phức thực bình định mức với thành phần chất phản ứng trình bày Bảng Bảng Thành phần tham gia phản ứng tạo phức đo quang phép định lượng flavonoid tồn phần tính theo quercetin Mẫu Thành phần Chuẩ Trắng n Chuẩn 1 Dung dịch thử (ml) AlCl3 10% (ml) Chuẩn đối chiếu (ml) CH3COONa 1% (ml) Dung môi pha mẫu Trắng Thử thêm Thử chuẩn 0 5 1 1 1 1 Thử Vừa đủ 25 ml Các mẫu để ổn định 45 phút nhiệt độ phòng tạo điều kiện cho q trình tạo phức xảy hồn tồn Sau đo độ hấp thu bước sóng 412 nm Khảo sát tính tương quan nồng độ độ hấp thu quercetin 741 Tính tương quan nồng độ độ hấp thu quercetin Pha dãy dung dịch quercetin nồng độ khác 0,05; 0,10 ; 0,15 ; 0,20 ; 0,25 mg/ml, phối hợp với thuốc thử đo độ hấp thu bước sóng 412 nm Thiết lập phương trình hồi quy tuyến tính nồng độ độ hấp thu của chuẩn quercetin có dạng y = ax + b [4] Kết bàn luận Dung môi chiết xuất Kết khảo sát dung mơi chiết xuất trình bày Bảng Bảng Tỷ lệ cắn khô (%) thu từ Lược vàng chiết dung môi khảo sát Mẫu Nước Ethanol 25% Ethanol 50% Ethanol 80% 3,52 3,90 4,30 5,06 3,30 3,32 3,96 4,62 3,60 3,56 4,40 4,34 Trung bình 3,47 3,59 4,22 4,67 SD 0,0099 0,0271 0,0400 0,0257 Kết từ Bảng cho thấy, lượng cắn khô thu chiết ethanol 80% cao nhất, tiếp đến ethanol 50% cao Tuy nhiên, kiểm định phép kiểm t-test khác khơng có ý nghĩa thống kê (p=0,08 với mức ý nghĩa 0,05) Xét tính chất cắn, cắn thu chiết nước, ethanol 25% ethanol 50% chất dẻo, khó hịa tan trở lại nước so với cắn chiết ethanol 80% Sau cắn hòa tan ethanol 96%, mẫu đo độ hấp thu 412 nm kết ghi nhận Bảng Bảng Độ hấp thu 412 nm dịch hòa tan cắn thu từ Lược vàng chiết dung môi khảo sát 742 Ethanol Mẫu Chuẩn Nước 0,8103 0,4109 0,4087 0,4325 0,6217 - 0,3911 0,4591 0,5125 0,5981 - 0,4008 0,4162 0,4678 0,5702 Trung bình - 0,4009 0,4280 0,4709 0,5967 0,0099 0,0271 0,0400 0,0257 SD 25% Ethanol 50% Ethanol 80% So sánh khác độ hấp thu cắn chiết ethanol 50% ethanol 80% hoà tan vào ethanol 96% phép kiểm t-test cho thấy có khác có ý nghĩa độ hấp thu mẫu (p=0,009 với mức ý nghĩa 0,05) Như vậy, lượng cắn chiết ethanol 80% không nhiều cắn chiết ethanol 50% hàm flavonoid chiết ethanol 80% nhiều chiết ethanol 50% Từ kết trên, dung môi ethanol 80% sử dụng để khảo sát phương pháp chiết xuất điều chế cao lỏng Lược vàng Phương pháp chiết xuất Kết so sánh hai phương pháp ngâm lạnh có hỗ trợ sóng siêu âm phương pháp ngấm kiệt chiết Lược vàng trình bày Bảng Bảng Tỷ lệ cắn khô thu (%) độ hấp thu 412 nm dịch hòa tan cắn ứng với hai phương pháp chiết xuất Lược vàng Tỷ lệ cắn khô (%) Mẫu PP ngấm kiệt 7,06 PP hỗ trợ Độ hấp thu 412 nm Chuẩn PP ngấm (0,25M) kiệt 0,8103 0,8217 sóng siêu âm 5,06 743 PP hỗ trợ sóng siêu âm 0,6217 6,62 4,62 - 0,7702 0,5981 6,34 4,34 - 0,8163 0,5702 6,67 4,67 - 0,8027 0,5967 0,3629 0,3629 0,0283 0,0257 Trung bình SD Phép kiểm ANOVA tỷ lệ cắn khô độ hấp thu 412 nm chứng minh có khác có ý nghĩa so sánh phương pháp chiết (mức ý nghĩa  = 0,05) Qua cho thấy, phương pháp ngấm kiệt có khả chiết nhiều hoạt chất Phương pháp ngấm kiệt khó nâng quy mô sản xuất , nhiên phương pháp khơng sử dụng máy móc, thiết bị chun dụng (máy siêu âm) Vì vậy, phương pháp ngấm kiệt sử dụng để điều chế cao Lược vàng Định lượng flavonoid tồn phần tính theo quercetin cao Lược vàng Dịch chiết dung môi ethanol 80% từ kg bột Lược vàng theo phương pháp ngấm kiệt đặc đến thể tích lít (tương ứng với thể cao lỏng) Để định lượng flavonoid tồn phần tính theo quercetin phương pháp đo độ hấp thu UV-Vis, thí nghiệm khảo sát tính tương quan nồng độ độ hấp thu quercetin thực Kết trình bày Hình Hình Kết khảo sát tính tuyến tính chuẩn quercetin Phương trình hồi quy tuyến tính biểu diễn mối quan hệ nồng độ độ hấp thu quercetin tìm y = 2,861x + 0,1118, với y độ hấp thu bước sóng 412 nm x nồng độ quercetin mẫu đo Phương trình hồi quy cho thấy có tính tuyến tính cao với hệ số xác định R2 = 0,9995 744 Từ phương trình trên, nồng độ quercetin cao lỏng Lược vàng xác định mẫu đo kết thể Bảng Bảng Độ hấp thu 412 nm dịch hòa tan cắn thu từ dược liệu Lược vàng hàm lượng flavonoid tính theo quercetin (mg/ml) Mẫu thử Độ hấp thu 412 nm (y) Hàm lượng flavonoid tính theo quercetin (mg/ml) (x) 0,9210 0,7220 0,9214 0,7223 0,9208 0,7218 0,9205 0,7216 0,9217 0,7225 0,9215 0,7223 Trung bình TB = 0,7221 SD SD = 0,0003 RSD RSD = 0,04% Kết luận kiến nghị Sau khảo sát dung môi phương pháp chiết xuất, có kết luận sau đây: (i) Trong dung môi cần khảo sát, dung môi ethanol 80% cho tỷ lệ cắn chiết so với dược liệu cao 4,67 (%) có độ hấp thu cao 0,5967; (ii) phương pháp ngấm kiệt có tỷ lệ cắn khô chiết cao hẳn (6,67%) so với phương pháp ngâm lạnh hỗ trợ sóng siêu âm (4,67%); (iii) Cao lỏng Lược vàng điều chế phương pháp ngấm kiệt chứa hàm lượng quercetin 0,72 mg/ml Do điều kiện thời gian, khảo sát đủ tất phương pháp chiết xuất Phương pháp ngâm, chiết xuất hồi lưu nên xem xét để đưa vào khảo sát 745 Lời cảm ơn Nghiên cứu hướng dẫn ThS Ds Nguyễn Hữu Phước, với hỗ trợ điều kiện phịng thí nghiệm Đại học Cơng nghệ TPHCM – HUTECH TÀI LIỆU THAM KHẢO Chernenko TV, Ul’chenko NT, Glushenkova AI, et al Chemical investigation of Callisia fragrans Chem Nat Compd 2007;43:253–5 doi:10.1007/s10600-007-0098-x Le T, Cao DK, Pham TV, et al Changes in total phenol, flavonoid contents and anti-Lactobacillus activity of Callisia fragrans due to extraction solvent Ho Chi Minh City, Vietnam: 2018 040011 doi:10.1063/1.5033411 Olennikov DN, Ibragimov TA, Zilfikarov IN, et al Chemical composition of Callisia fragrans juice Phenolic compounds Chem Nat Compd 2008;44:776–7 doi:10.1007/s10600-009-9174-8 Chang C-C, Yang M-H, Wen H-M, et al Estimation of total flavonoid content in propolis by two complementary colometric methods Journal of Food and Drug Analysis 2020;10 doi:10.38212/22246614.2748 Lien N, Minh C, Thu N Định lượng flavonoid tồn phần cao khơ Rau đắng đất (Glinus oppositifolius (L.) Aug DC.) phương pháp quang phổ UV-Vis Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ số 746 ... phần tính theo quercetin Điều chế cao lỏng Lược vàng định lượng flavonoid toàn phần tính theo quercetin cao lỏng Lược vàng Quá trình chiết xuất quy mơ kg dược liệu Lược vàng phương pháp ngấm kiệt... phương pháp chiết xuất điều chế cao lỏng Lược vàng Phương pháp chiết xuất Kết so sánh hai phương pháp ngâm lạnh có hỗ trợ sóng siêu âm phương pháp ngấm kiệt chiết Lược vàng trình bày Bảng Bảng Tỷ... nồng độ quercetin mẫu đo Phương trình hồi quy cho thấy có tính tuyến tính cao với hệ số xác định R2 = 0,9995 744 Từ phương trình trên, nồng độ quercetin cao lỏng Lược vàng xác định mẫu đo kết thể