Thông tin tài liệu
TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ
KHOA THỦY SẢN
DƯƠNG VĂN NHÍ
SỰ BIẾN ĐỔI CÁC CHỈ HUYẾT HỌC CỦA CÁ TRA
(Pangasianodon hypophthalmus) GIỐNG GÂY
CẢM NHIỄM VỚI CÁC CHỦNG VI KHUẨN
Edwardsiella ictaluri CÓ ĐỘC LỰC KHÁC NHAU
LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC
CHUYÊN NGÀNH BỆNH HỌC THỦY SẢN
2009
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com
TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ
KHOA THỦY SẢN
DƯƠNG VĂN NHÍ
SỰ BIẾN ĐỔI CÁC CHỈ HUYẾT HỌC CỦA CÁ TRA
(Pangasianodon hypophthalmus) GIỐNG GÂY
CẢM NHIỄM VỚI CÁC CHỦNG VI KHUẨN
Edwardsiella ictaluri CÓ ĐỘC LỰC KHÁC NHAU
LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC
CHUYÊN NGÀNH BỆNH HỌC THỦY SẢN
CÁN BỘ HƯỚNG DẪN
TS. PHẠM THANH LIÊM
2009
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com
i
LỜI CẢM TẠ
Xin gởi lời cảm tạ sâu sắc đến thầy Phạm Thanh Liêm đã tạo điều kiện
cho tôi được thực nghiệm và tận tình hướng dẫn tôi trong suốt quá trình thực
hiện đề tài.
Xin gởi lời cảm ơn quý báo đến cô Đặng Thị Mai Thy, cô Nguyễn Thị
Thu Hằng cùng với tất cả các quý thầy cô, các anh chị cán bộ trong khoa Thủy
Sản nói riêng và trường Đại học Cần Thơ nói chung đã truyền đạt những kinh
nghiệm và kiến thức nền tảng quý báo trong suốt thời gian học tập ở trường và
làm luận văn tốt nghiệp.
Cảm ơn cha mẹ và các anh chị tôi đã động viên và tạo điều kiện cho tôi
được hoàn thành tốt việc học tập trong suốt 4 năm theo học ở trường.
Tôi xin cảm ơn bạn Nguyễn Thị Chúng, bạn Lê Thượng Khởi đã cùng
thực hiện đề tài với tôi và cuối cùng là tất cả các bạn cùng lớp Bệnh học Thủy
sản khóa 31 đã nhiệt tình động viên và hỗ trợ tôi trong thời gian học tập ở
trường.
Xin chân thành cảm ơn!
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com
ii
TÓM TẮT
Đề tài “Sự biến đổi các chỉ tiêu huyết học của cá tra (Pangasianodon
hypophthalmus) giống gây cảm nhiễm với các chủng vi khuẩn Edwardsiella
ictaluri có độc lực
khác nhau” nhằm xách sự biến động các chỉ tiêu huyết học
của cá tra giống khi cảm nhiễm với các chủng vi khuẩn Edwardsiella ictaluri
có LD
50
khác nhau. Đề tài được thực hiện trên ba chủng chủng T8, KSL 103,
CAF 258 với hai đối chứng (một đối chứng tiêm nước muối sinh lý và một đối
chứng không tiêm). Nồng độ vi khuẩn gây cảm nhiễm là liều gây chết 50%
tương ứng với từng chủng vi khuẩn, thời điểm thu mẫu được được định là thu
trước khi thí nghiệm,; thu lần 1 sau khi gây cảm nhiễm và lần 2 được thu sau
12 ngày cảm nhiễm. Hồng cầu được phân tích theo phương pháp của Natt and
Herrick, (1952), bạch cầu được phân tích theo phương pháp của Humason,
(1979), số liệu thống kê được sử lý bằng trương trình SPSS 16.0 (sử dụng
phép thử phép thử Ducan và phép thử LSD). Sau khi phân tích nhậ thấy: sự
biến động về số lượng tế bào hồng cầu giữa 3 chủng T8, KSL 103, CAF 258 là
giống nhau; Chủng T8 có tỷ lệ giảm số lượng TBC, lympho, tiểu cầu ít hơn,
BCĐN thì cao hơn chủng KSL 103 và CAF 258; Khả năng phục hồi TBC ở
chủng T8 nhanh hơn, còn BCTT và BCĐN thì chủng CAF 258 nhanh hơn.
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com
iii
MỤC LỤC
Trang
Phần 1:ĐẶT VẤN ĐỀ 1
PHẦN 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3
2.1 Tình hình dịch bệnh trong nuôi thâm canh cá tra ở Đồng Bằng Sông Cửu
Long 3
2.2 Một số nghiên cứu về tác nhân gây bệnh mủ gan trên cá tra 3
2.2.1 Sơ lược về lịch sử bệnh do E.ictaluri gây ra trên cá trơn 3
2.2.2 Đặc điểm về hình thái, sinh lý và sinh hóa 4
2.2.3 Dấu hiệu bệnh lý 4
2.3 Các chỉ tiêu huyết học 5
2.3.1 Hồng cầu 6
2.3.2 Tế bào lympho 6
2.3.3 Tiểu cầu 6
2.3.4 Bạch cầu đơn nhân 6
2.3.5. Bạch cầu trung tính 6
2.3.6 Một số nghiên cứu về huyết học trên cá 8
2.4 Một số kết quả gây cảm nhiễm vi khuẩn Edwardsiella ictaluri trong phòng
thí nghiệm 9
PHẦN 3 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 11
3.1 Thời gian và địa điểm 11
3.2 Vật liệu nghiên cứu 12
3.2.1 Đối tượng thí nghiệm 12
3.2.2 Dụng cụ và thiết bị 12
3.2.3 Hóa chất và môi trường nuôi cấy vi khuẩn 12
3.3 Phương pháp nghiên cứu 12
3.3.1 Chuẩn bị hệ thống bể 12
3.3.2 Cách chuẩn bị dung dịch vi khuẩn 12
3.3.3 Chuẩn bị dụng cụ và mẫu cá 13
3.3.4 Bố trí thí nghiệm gây cảm nhiễm 14
3.3.5 Thời gian thu mẫu 14
3.4 Phương pháp phân tích mẫu 14
3.4.1 Phương pháp đếm hồng cầu (Natt and Herrick, 1952) 15
3.4.2 Định lượng và định loại các tế bào bạch cầu (Humason, 1979) 16
3.5 Tái phân lập và tái định danh vi khuẩn Edwardsiella ictaluri theo phương
pháp truyền thống 17
3.6 Xử lý số liệu 17
PHẦN 4 KẾT QUẢ THẢO LUẬN 18
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com
iv
4.1 Đặc điểm cá thí nghiệm 18
4.1.2 Đặc điểm bên ngoài 18
4.1.3 Đặc điểm bên trong 18
4.2 Kết quả tái phân lập và định danh vi khuẩn E. ictaluri 19
4.3 Kết quả phân tích huyết học 21
4.3.1 Hồng cầu 22
4.3.1.1 Hình tái hồng cầu 22
4.3.1.2 Số lượng hồng cầu 23
4.3.2 Bạch cầu 25
4.3.2.1 Tổng bạch cầu 25
4.3.2.2 Các loại tế bào bạch cầu 28
4.4 Mức độ biến động về huyết học giữa các chủng vi khuẩn 31
PHẦN 5 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 33
5.1 Kết luận 33
5.2 Đề xuất 33
TÀI LIỆU THAM KHẢO 34
Phụ lục 35
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com
v
DANH SÁCH HÌNH
Trang
Hình 2.3 5. Tế bào máu 8
Hình 3.1: Sơ đồ chuẩn bị vi khuẩn thí nghiệm 14
Hình 3.4 Thao tác lấy mẫu máu và trải mẫu 16
Hình 3.4.1 Buồng đếm hồng cầu 17
Hình 4.1 Hệ thống các bể bố trí thí nghiệm 18
Hình 4.1.3 Nội tạng cá tra bị nhiễm E. Ictaluri 19
Hình 4.2.1 Gram vi khuẩn Edwardsiella ictaluri 19
Hình 4.2.2 Kết quả test sinh hóa vi khuẩn E. Ictaluri 20
Hình 4.3.1.1a Hồng cầu cá khỏe 23
Hình 4.3.1.1bHồng cầu cá bệnh 23
Hình 4.3.1.2 Sự biến động số lượng hồng cầu qua các lần thu mẫu trong từng
chủng E.ictaluri 25
Hình 4.3.2.1 Sự biến động số lượng TBC qua các lần thu mẫu trong từng
chủng E.ictaluri 28
Hình 4.3.2.2 Hình thái các tế bào bạch cầu 31
DANH SÁCH BẢNG
Trang
Bảng 3.2.1 Các chủng vi khuẩn sử dụng gây cảm nhiễm 11
Bảng 4.2 Kết quả tái định danh vi khuẩn sau khi gây cảm nhiễm 21
Bảng 4.3.1.2 Sự biến động số lượng hồng cầu (tế bào x 10
5
/mm
3
) qua các lần
thu mẫu trong từng chủng E.ictaluri 23
Bảng 4.3.2.1 Sự biến động số lượng TBC (tế bào x 10
4
/mm
3
) qua các lần thu
mẫu trong từng chủng E.ictaluri 26
Bảng 4.3.2.2a Sự biến động số lượng lympho (tế bào x 10
3
/mm
3
) qua các lần
thu mẫu trong từng chủng E.ictaluri 29
Bảng 4.3.2.2b Sự biến động số lượng tiểu cầu (tế bào x 10
3
/mm
3
) qua các lần
thu mẫu trong từng chủng E.ictaluri 29
Bảng 4.3.2.2c Sự biến động số lượng bạch cầu trung tính (tế bào x 10
3
/mm
3
)
qua các lần thu mẫu trong từng chủng E.ictaluri 30
Bảng 4.3.2.2d Sự biến động số lượng bạch cầu đơn nhân (tế bào x 10
3
/mm
3
)
qua các lần thu mẫu trong từng chủng E.ictaluric 30
Bảng 4.4a Sự biến động (%) của các tế bào hồng cầu và bạch cầu giữa các
chủng vi khuẩn E.ictaluri ở đợt thu mẫu lần 1 31
Bảng 4.4a Sự biến động (%) của các tế bào hồng cầu và bạch cầu giữa các
chủng vi khuẩn E.ictaluri ở đợt thu mẫu lần 2 32
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com
vi
TỪ VIẾT TẮT
ĐBSCL: Đồng Bằng Sông Cửu Long
TGTM: Trắng gan, trắng mang
Tb: tế bào
BCTT: Bạch cầu trung tính
BCĐN: Bạch cầu đơn nhân
TBC: Tổng bạch cầu
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com
1
PHẦN 1
ĐẶT VẤN ĐỀ
1.1 Gới thiệu
Hiện nay nuôi trồng thủy sản được xem là một trong những ngành kinh
tế mũi nhọn của cả nước, sản lượng, diện tích ngày càng tăng. Riêng Đồng
Bằng Sông Cửu Long, tính đến năm 2008 đã hơn 1,2 triệu ha diện tích mặt
nước có khả năng nuôi trồng thủy sản, chiếm gần bằng 60% của cả nước,
trong đó diện tích có khả năng nuôi thuỷ sản nước ngọt trên 500.000 ha và
được xác định là có điều kiện rất thuận lợi. Giá trị xuất khẩu cũng rất lớn, năm
2007 tổng kim ngạch xuất khẩu thủy sản ở Đồng Bằng Sông Cửu Long đạt
2,328 tỷ USD, năm 2008 tăng lên 2,5 tỷ USD, chiếm hơn 60% tổng kim ngạch
xuất khẩu thuỷ sản của cả nước.
Trong đó cá tra là một trong những đối tượng thủy sản được xuất khẩu
nhiều nhất, năm 2008 Đồng Bằng Sông Cửu Long có 5.102ha diện tích ao
nuôi (tăng 11% so năm 2007), với sản lượng cá trên 1 triệu tấn, xuất khẩu trên
535 ngàn tấn qua 117 quốc gia (http://seafoodno4.com/chitiettt.php?id=143). Để
đảm bảo sản lượng xuất khẩu nên bên cạnh việc tăng diện tích nuôi người dân
còn đẩy mạnh việc nuôi cá với mật độ cao, dẫn đến nhiều yếu tố bất lợi như ô
nhiễm nguồn nước, dịch bệnh thường xuyên xảy ra… gây nhiều tổn thất cho
người nuôi. Vì vậy, nhiều nghiên cứu nhằm tìm hiểu và phòng chống dịch
bệnh trên thủy sản đựơc thực hiện là đều tất yếu. Kết quả điều tra của Lý Thị
Thanh Loan (2008 ) về tình hình dịch bệnh năm 2007 ở đồng bằng sông Cửu
Long thì tần suất xuất hiện bệnh mủ gan là 52,80%; xuất huyết: 42,50%; phù
đầu, phù mắt: 20,70% và vàng da: 21,60%,trong đó bệnh mủ gan gây nhiều
tổn thất nghiêm trọng cho người nuôi. Bệnh này xuất hiện lần đầu tiên trên cá
tra nuôi ở đồng bằng sông Cửu Long vào cuối năm 1998 (Ferguson et al ,
2001). Về tác nhân gây bệnh mủ gan trên cá tra đã được Từ Thanh Dung
(2005) xác định là do vi khuẩn Edwardsiella ictaluri gây ra, khi cá nhiễm
bệnh, tỷ lệ chết tăng cao 10-90% có thể lên tới 100% tùy thuộc vào cách quản
lý và cỡ cá nuôi. Khi bệnh cá bơi lờ đờ, bỏ ăn, thân, vi và hậu môn bị huyết,
đồng thời trên gan, thận và tụy tạng xuất hiện nhiều đốm trắng đường kính 1-3
mm bên trong chứa dịch màu trắng đục.
Cùng với việc xác định được tác nhân gây bệnh, từ trước đến nay đã có
nhiều chủng vi khuẩn được phân lập từ các ao nuôi cá bị bệnh mủ và gây cảm
nhiễm trở lại trong phòng thí nghiệm nhằm tìm hiểu khả năng gây bệnh, đặc
điểm sinh hóa, tìm hiểu độc lực…Tuy nhiên, vẫn chưa có chủng vi khuẩn nào
đã phân lập, được tìm hiểu về huyết học. Vì vậy đề tài “Sự biến đổi các chỉ
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com
2
tiêu huyết học của cá tra (Pangasianodon hypophthalmus) giống gây cảm
nhiễm với các chủng vi khuẩn Edwardsiella ictaluri có độc lực
khác nhau”
được thực hiện.
1.2 Mục tiêu
Xác định sự biến động các chỉ tiêu huyết học của cá tra giống khi cảm
nhiễm với các chủng vi khuẩn Edwardsiella ictaluri có LD
50
khác nhau
1.3 Nội dung thưc hiện
• Gây cảm nhiễm cho cá tra giống với các chủng vi khuẩn Edwardsiella
ictaluri có LD
50
khác nhau.
• Định loại và định lượng các tế bào máu trên cá tra cảm nhiễm.
• Tái phân lập và định danh vi khuẩn Edwardsiella ictaluri
PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com
[...]... nhân gây bệnh để chắc chắn rằng chủng vi khuẩn phân lập được là chủng vi khuẩn ban đầu đem gây cảm nhiễm Bởi vì khi cá có dấu hiệu nhiễm bệnh thì tác nhân gây ra chưa hẳn là do chủng vi khuẩn gây cảm nhiễm, mà nó còn có thể là kết quả của vấn đề môi trường xấu hoặc do vi khuẩn khác gây ra Hơn nữa tác nhân gây bệnh phải luôn tìm thấy trên sinh vật nhiễm bệnh và tác nhân gây bệnh phải được xác định từ... có kích thước biến đổi, phát triển tốt ở 280C và phát triển yếu ở 370C Điều này lý giải tại sao E .ictaluri cho tới nay chỉ phát hiện trên cá mà chưa tìm thấy trên các động vật máu nóng khác Theo Lương Trần Thục Đoan (2006), khi kiểm tra đặc điểm sinh hóa của vi khuẩn E .ictaluri 224 phân lập trên cá tra ở Vi t Nam thì chỉ tiêu citrate cho kết quả dương tính, đây là điểm khác biệt so với vi khuẩn E .ictaluri. .. Về hình thái các tế bào bạch cầu thì không có gì biến đổi giữa cá khỏe với các lần thu mẫu và giữa các chủng vi khuẩn với nhau nhưng có sự biến động rất lớn về số lượng tế bào lympho, tiểu cầu giữa cá trước TN với các đợt thu mẫu, còn bạch cầu trung tính, bạch cầu đơn nhân nhìn chung ít biến động Lympho: Theo Hibiya (1982) tế bào lympho chiếm 70-90% TBC của cá, kết quả định lượng lympho ở chủng T8 là156,1x103... so với cá trước TN, sau 12 ngày gây cảm nhiễm cá có dấu hiệu phục hồi, số lượng hồng cầu của cá thu ở lần 2 tăng lên so với lần 1 nhưng vẫn còn thấp hơn so với cá trước TN Kết quả phân tích số lượng hồng cầu ở cá đối chứng có giảm hơn so với cá trước TN nhưng không có ý nghĩa thống kê (p>0,05) Riêng đối chứng ở chủng T8, có số lượng hồng cầu giảm nhiều so với cá trước TN nhưng kết quả vi sinh ở các. .. 2.3.6 Một số yếu tố ảnh hưởng đến các thông số huyết học trên cá Nhiều nghiên cứu cho thấy, các chỉ tiêu huyết học của cá chịu ảnh hưởng bởi nhiều yếu tố: Ảnh hưởng của hàm lượng kẽm, nghiên cứu của KoriSiakpere et al (2008) trên đối tượng Heteroclarias sp, khi cho cá tiếp xúc với môi trường nước có lượng kẽm 5mg/l trong 15 ngày Sau đó kiểm tra các chỉ tiêu huyết học về chỉ tiêu haematocrit, haemoglobin,... Nội tạng cá tra bị nhiễm E Ictaluri 4.2 Kết quả tái phân lập và định danh vi khuẩn E ictaluri Sau khi gây cảm nhiễm, vi khuẩn được phân lập từ gan, thận và tỳ tạng của cá bệnh, sau đó vi khuẩn đã tái phân lập được tiến hành tái định danh vi khuẩn trở lại Vi c tái phân lập và định danh vi khuẩn là hết sức cần thiết đối với lĩnh vực nghiên cứu và ứng dụng Nó giúp xác định chính xác tác nhân gây bệnh... Kết quả sau khi gây cảm nhiễm tất cả các vi khuẩn thu được phát triển chậm, sau 24-48 giờ ở 28-300C tạo thành những khuẩn lạc có kích thước rất nhỏ, tròn có màu trắng, không có nhân, rìa có dạng không đồng nhất Đặc điểm này giống với đặc điểm của vi khuẩn E ictaluri do (Crumlish ctv, 2002; Từ Thanh Dung và ctv, 2004) mô tả Hình 4.2.2 Kết quả test sinh hóa vi khuẩn E Ictaluri (A) O/F; (B) Các lọai đường... danh vi khuẩn Edwardsiella ictaluri theo phương pháp truyền thống Sự tái định danh của vi khuẩn sẽ được thực hiện thông qua phương pháp định danh truyền thống được mô tả theo phương pháp chung của phòng thí nghiệm Bệnh học thủy sản, Khoa Thủy sản, Đại học Cần thơ v Các bước thực hiện • Ghi nhận các dấu hiệu bên ngoài của cá • Giải phẩu cá ghi nhận biểu hiện của các cơ quan nội tạng • Phân lập vi khuẩn. .. cảm nhiễm là vi c làm rất quan trọng và không thể thiếu trong nghiêu cứu bệnh học thủy sản vì “tác nhân gây bệnh phải có khả năng gây bệnh khi gây nhiễm vào con vật mẫn cảm Tùy vào mục đích nghiên cứu mà lựa chon phương pháp gây cảm nhiễm khác nhau, riêng đối với vi khuẩn nói chung và vi khuẩn E Ictaluri nói riêng thì thường dùng phương pháp tiêm và phương pháp ngâm để gây cảm nhiễm cho cá Lương Trần... đều có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê (p . “Sự biến đổi các chỉ tiêu huyết học của cá tra (Pangasianodon
hypophthalmus) giống gây cảm nhiễm với các chủng vi khuẩn Edwardsiella
ictaluri có độc lực
. lực
khác nhau” nhằm xách sự biến động các chỉ tiêu huyết học
của cá tra giống khi cảm nhiễm với các chủng vi khuẩn Edwardsiella ictaluri
có LD
50
khác
Ngày đăng: 20/03/2014, 02:20
Xem thêm: LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP: "SỰ BIẾN ĐỔI CÁC CHỈ HUYẾT HỌC CỦA CÁ TRA (Pangasianodon hypophthalmus) GIỐNG GÂY CẢM NHIỄM VỚI CÁC CHỦNG VI KHUẨN Edwardsiella ictaluri CÓ ĐỘC LỰC KHÁC NHAU" potx, LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP: "SỰ BIẾN ĐỔI CÁC CHỈ HUYẾT HỌC CỦA CÁ TRA (Pangasianodon hypophthalmus) GIỐNG GÂY CẢM NHIỄM VỚI CÁC CHỦNG VI KHUẨN Edwardsiella ictaluri CÓ ĐỘC LỰC KHÁC NHAU" potx