KHOA HỌC CONG NGHẸ 1 ■ ị NGHIÊM cúu NHÂN GIỐNG //V VITRO CÂY CHÈ TÍM [Camellia sinensi^ị NHẬP NỘI I Nguyễn Hồng Chiên1’ *, Nguyễn Thị Thu Hà1, Nguyễn Thị Kim Linh1, Nguyễn Hải Yến1, Phạm Huy Quang1 TÓ[.]
KHOA HỌC CONG NGHẸ - ■ ị NGHIÊM cúu NHÂN GIỐNG //V VITRO CÂY CHÈ TÍM [Camellia sinensi^ị NHẬP NỘI Nguyễn Hồng Chiên1’ *, Nguyễn Thị Thu Hà1, I Nguyễn Thị Kim Linh1, Nguyễn Hải Yến1, Phạm Huy Quang1 TÓM TẮT I Cây chè tím loại giàu anthocyanin, nguyên liệu để sản xuất loại chè có màu sắc hương thom độc đáo loại trà có tác dụng dược phẩm Trong nghiên cứu này, đoạn cành mang mắt ngủ chè tím nháp nội sử đụng làm vật liệu ban đầu nhằm xây dựng quy trình nhân nhanh in vitro Kết nghiên cứu cho thấy việc lựa chọn chiều dài đoạn cành mang mắt ngủ thích hợp để sử dụng làm vật liệu khử trùng quan trọng TDZ không phù hợp sử dụng để nhân nhanh chồi in vitro dẫn đến kích thích hình thành mơ sẹo BAP lại có hiệu việc nhân nhanh chồi in vitro Mơi trường nghèo dinh dưỡng có ảnh hưởng tích cực đến hình thành rễ cùa chồi chè tim in vitro Ở giai đoạn ngồi vườn ưom, hỗn hợp giá thể có ảnh hưởng rõ rệt đến tỉ lệ sống Các kết nghiên cứu áp dụng cho mục đích nhân nhanh bảo tồn chè tím lồi Camellia Từ khóa: Camellia, chè tím, mơi trường MS, nhân nhanh in vitro 1.ĐẶTVẤNĐÉ Cây chè tím giống loại giàu anthocyanin, nguyên liệu để sản xuất loại chè có màu sắc hưong thom độc đáo loại trà có tác dụng dược phẩm Bởi vậy, giống chè tím số nước giới lai tạo, phát triển sử dụng loại thlảo dược vi có hàm lượng chất chống xy hóa anthocyanin polyphenol cao hon chè thơng thường Chè tím chứa hàm lượng catechin epigallocatechin gallate (ỊEGCG) đặc biệt cao Những chất có liên quan đến việc giảm mờ thể chống lại bệnh ung thư, tim mạch đái tháo đường Chè tím có cỊhứa hàm lượng anthocyanin cao hon 15 lần so với việt quất (1,5% so vói 0,1%) Các anthocyanin chè tím có chức sinh học khác liên quan đến sức khỏe, chất chống oxy hóa chất clịống vi sinh vật gây hại [7], giảm mỡ máu [19] ngăn ngừa ung thư đại trực tràng [8], khắc phục tinh trạng tắc nghẽn mạch máu não [18], Ngoài ra, anthocyanin chất chuyển hóa thư cấp, góp phần bảo vệ chống lại cãng thẳng vô sinh hữu sinh khác nhau, stress lạnh [2], mặn [5] hàm lượng phosphate thấp [11] Ị -1 Viện Khoa học Kỹ thuật Nơng lâm nghiệp miền núi phía Bắc Email: donanvnvn@yahoo.com Cây chè tím loại trồng có giá trị kinh tế cao Theo báo cáo Kenya [16], trồng chè tím có lợi nhuận cao gấp 10 lần so với giống chè truyền thống Nông dân vùng trồng chè Kenya theo đuổi việc trồng giống chè tím số lý lọi ích sức khỏe chè tím đối vói người tiêu dùng, giá trị thị trường quốc tế cao khả nàng chịu hạn tốt so với loại chè xanh đen truyền thống Vói ưu điểm vậy, màu tim sử dụng thơng số chất lưọng chương trình chọn giống chè Việt Nam, chè Trung Du búp tím biết đến loại chè dược liệu có tác dụng ngăn ngừa, kim hãm ung thư có giá trị kinh tế cao Tuy nhiên, diện tích trồng chè Trung Du búp tím Phú Thọ cịn lại ít, chiếm chưa đến 1% diện tích chè Trung Du 0,2%-0,3% diện tích trồng chè nói chung tỉnh Phú Thọ Nguyên nhân cho chè búp tím chủ yếu trồng hạt nên suất chất lưọng chưa ổn định Cây chè tím có nguồn gốc Nhật Bản thu thập để phục vụ lai tạo giống chè mói từ năm 2013 Cày chè mói nhân giống giâm hom, đến giữ nguyên đặc tính di truyền màu tím vốn có Tuy nhiên, số 10 chè tím thu thập năm 2013, có sống, sinh trưởng phát triển tốt Nhân giống giâm hom giống chè tím khó, tỉ lệ sống, tỉ lệ tạo rễ phát triển thành thấp nên số NÔNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIẼN nịng thơn - KỲ - THÁNG 4/2022 KHOA HỌC CÔNG NGHỆ lượng giống Một phương pháp nhân giống in vitro thích họp loại bỏ vấn đề liên quan đến tạo rễ hom thân gỗ Các nghiên cứu nhân giống in vitro số loài thuộc chi Camellia Camellia japonica, C sinensis c reticulate thực [4], [15] Vi vậy, áp dụng công nghệ nuôi cấy mô tế bào nhân chè búp tím có sức sống khỏe hơn, đáp ứng yêu cầu tri phát triển giống chè tím mới, góp phần đa dạng sản phẩm nâng cao giá trị sản phẩm chè ĐOI TUỌNG, VẬT LỆU VÀ PHUONG PHÁP NGHẼN cúu 2.1 Đối tượng vật liệu nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu: Cây chè tím {Camellia sinensis) có nguồn gốc Nhật Bản Vật liệu nghiên cứu: Các đoạn cành bánh tẻ mang mắt ngủ chè tím thu thập vườn ươm Bộ mơn Cơng nghệ sinh học Bảo vệ thực vật, Viện Khoa học Kỹ thuật Nơng lâm nghiệp miền núi phía Bắc 2.2 Phương pháp nghiên cứu Khử trùng mẫu: Mẫu cấy rửa vòi nước, ngâm dung dịch xà phòng nồng độ 0,01% 30 phút rửa nước Các mẫu sau lắc hóa chất khử trùng HgCl2 0,1% thời gian từ 10 phút đến 30 phút cuối rửa lại nước cất vô trùng lần, lần phút Các mầu cấy khử trùng bề mặt cắt thành đoạn có độ dài 1,0 cm, đoạn có chứa mầm ngủ, sau cấy vào ống nghiệm chứa 15 ml môi trường vào mẫu: MS + 0,5 mg/1 BAP + 20 mg/1 Ascorbic + 30 g/1 đường + 5,5 g/1 agar, pH = 5,5 Sau tuần - tuần, mẫu cấy vô trùng chuyển sang môi trường tạo chồi MS có bổ sung chất điều hòa sinh trưởng nồng độ khác Tỉ lệ mẫu nhiễm (%) tính số mẫu nhiêm sau tháng chia cho tổng số mẫu cấy sau khử trùng Tương tự, tỉ lệ mẫu sạch/mẫu bật chồi (%) tính số mẫu sạch/số mẫu bật chồi sau tháng chia cho tổng số mẫu cấy sau khử trùng Nhân nhanh chồi in vitrơ Các chồi có chiều cao từ cm - 2,5 cm cắt thành đoạn dài cm 1,5 cm có - lá, chuyển vào mơi trường MS có bổ sung chất điều hịa sinh trưởng nồng độ khác để nhân nhanh số lượng chồi Hệ số nhân chồi (lần) tính cách đếm số chồi quan sát sau tháng ni cấy mẫu cấy, tính số chồi trung bình tất mẫu cấy nghiệm thức lơ thí nghiệm Tạo hồn chỉnh: chồi đủ tiêu chuẩn có chiều cao từ cm, có từ đến cấy chuyển sang mơi trường có thành phần MS thay đổi (MS, đ MS, MS), bổ sung a-NAA kết họp IBA bổ sung IBA nồng độ khác để kích thích tạo rễ Sau cấy chuyển chồi in vitro vào mơi trường tạo rễ, bình đặt điều kiện tối 10 ngày trước chuyển sang điều kiện sáng Tỉ lệ rễ (%) tính số chồi in vitro có rễ chia cho tổng số chồi in vitro thí nghiêm nghiệm thức lơ thí nghiêm Ra vườn ươm: Cây in vitro hoàn chỉnh, khỏe mạnh, có chiều cao từ cm rửa agar trồng loại giá thể khác (loại : đất, phân chuồng ủ hoai cát (tỉ lệ : : 1); loại : đất đá Vermiculite (1:1); loại 3: đất, phân chuồng ủ hoai đá Vermiculite (1:1:1); loại : vụn xơ dừa, mùn cưa, phân hữu ủ hoai, đất (3 : : : 2)) Mỗi loại giá thể đóng vào khay nhựa 50 lỗ có kích thước 54 cm X 28 cm Cây trồng khay nhựa đặt nhà lưới, che phủ nylon lưới che râm Tưới nước giữ ẩm (dạng phun mù) cho lần/ngày tháng đầu lần/ngày từ tháng thứ Bổ sung dinh dưỡng cho dung dịch MS pha lỗng, định kì tưới 10 ngày/lần Điều kiện nuôi cấy ỉn vitrơ Điều kiện phịng thí nghiệm vói nhiệt độ 25 ± 2°c, quang chu kỳ 10 giờ/ngày - 12 giờ/ngày, cường độ chiếu sáng 40 45 pmol.m-2.s-l - 45 pmol.m-2.s-l ánh sáng huỳnh quang độ ẩm trung bình 60% - 65% Xử lý số liệu: Mỗi thí nghiệm lặp lại lần, lần từ 20 mẫu đến 50 mẫu Tất số liệu sau thu thập ứng với tiêu theo dõi, xử lý Microsoft Excel 2010 phân tích thống kê thực phần mềm R [9], Để xác định liệu cơng thức thí nghiệm có khác mặt thống kê, so sánh Tukey (P