Nghiên cứu phân lập, xác định cấu trúc và tính chất phổ của một số hợp chất tách từ keo ong không ngòi đốt (homotrigona apicalis) ở bình định

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC QUY NHƠN NGUYỄN ĐÀO HỮU TOÀN NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP, XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC VÀ TÍNH CHẤT PHỔ CỦA MỘT SỐ HỢP CHẤT TÁCH TỪ KEO ONG KHÔNG NGÒI ĐỐT (Homotrigona Apicalis) Ở B[.]

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC QUY NHƠN NGUYỄN ĐÀO HỮU TOÀN NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP, XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC VÀ TÍNH CHẤT PHỔ CỦA MỘT SỐ HỢP CHẤT TÁCH TỪ KEO ONG KHƠNG NGỊI ĐỐT (Homotrigona Apicalis) Ở BÌNH ĐỊNH Chun ngành: Hóa lí thuyết Hóa lí Mã số : 8440119 Ngƣời hƣớng dẫn: TS DIỆP THỊ LAN PHƢƠNG TS NGUYỄN LÊ TUẤN LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tôi, đƣợc thực dƣới hƣớng dẫn khoa học TS Diệp Thị Lan Phƣơng TS Nguyễn Lê Tuấn Các số liệu, kết luận nghiên cứu đƣợc trình bày luận văn trung thực chƣa cơng bố dƣới hình thức Tôi xin chịu trách nhiệm nghiên cứu Học viên Nguyễn Đào Hữu Tồn LỜI CẢM ƠN Luận văn hoàn thành Khoa Khoa học Tự nhiên - Trường Đại học Quy Nhơn Trong thời gian thực luận văn, em nhận nhiều giúp đỡ, đóng góp ý kiến bảo tâm huyết, nhiệt tình thầy cơ, gia đình bạn bè Đầu tiên, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến TS Diệp Thị Lan Phương, TS Nguyễn Lê Tuấn NCS Hồ Văn Ban tận tình hướng dẫn, giúp đỡ, tạo điều kiện cho em hoàn thành luận văn tốt nghiêp Em xin cảm ơn hỗ trợ kinh phí từ đề tài Khoa học Công nghệ cấp Bộ năm 2022, mã số B2022-DQN-08 Em xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô Khoa Khoa học tự nhiên, trường Đại học Quy Nhơn quan tâm, tạo điều kiện thuận lợi để em thực luận văn Xin gửi lời cảm ơn đến bạn, anh chị em tập thể lớp Cao học Hóa K23 trường ĐH Quy Nhơn ln hỗ trợ, động viên suốt thời gian qua Cuối em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè người thân ln quan tâm, động viên giúp đỡ em hoàn thành luận văn Mặc dù cố gắng thời gian thực luận văn, cịn hạn chế kiến thức thời gian, kinh nghiệm nghiên cứu nên khơng tránh khỏi thiếu sót Em mong nhận thơng cảm ý kiến đóng góp q báu từ q thầy để luận văn em hoàn thiện Em xin trân trọng cảm ơn! MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT i DANH MỤC CÁC HÌNH ii DANH MỤC CÁC BẢNG v MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu ong khơng ngịi đốt (Homotrigona Apicalis) 1.2 Giới thiệu keo ong khơng ngịi đốt 1.3 Công dụng keo ong ngƣời 1.4 Giới thiệu lớp chất có mẫu tự nhiên 1.4.1 Terpene Terpenoid 1.4.2 Steroid 10 1.4.3 Alkaloid 11 1.4.4 Flavonoid 12 1.4.5 Hợp chất phenol 13 1.5 Một số cơng trình nghiên cứu liên quan đến đề tài 14 CHƢƠNG PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU VÀ THỰC NGHIỆM 17 2.1 Phƣơng pháp nghiên cứu 17 2.1.1 Phƣơng pháp chiết 17 2.1.2 Phƣơng pháp hóa lý nghiên cứu yếu tố ảnh hƣởng đến hiệu suất thu cao chiết EtOH keo ong khơng ngịi đốt (Homotrigona Apicalis) 19 2.1.3 Phƣơng pháp định tính lớp chất có keo ong 20 2.1.4 Phƣơng pháp sắc ký 21 2.1.5 Phƣơng pháp xác định cấu trúc hợp chất phân lập 25 2.1.6 Phƣơng pháp thử hoạt tính kháng vi sinh vật nấm kiểm định 27 2.2 Hóa chất thiết bị 28 2.2.1 Hóa chất 28 2.2.2 Thiết bị 28 2.3 Thực nghiệm 29 2.3.1 Nguyên liệu 29 2.3.2 Tạo tro keo ong 29 2.3.3 Nghiên cứu phân lập hợp chất từ cao chiết EA 30 2.3.4 Khảo sát yếu tố ảnh hƣởng đến hiệu suất thu cao chiết EtOH31 2.3.5 Định tính lớp chất 33 2.3.6 Đánh giá thành phần cao chiết EtOH EA từ keo ong 34 2.3.7 Khảo sát hoạt tính kháng vi sinh vật nấm kiểm định 35 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 37 3.1 Nguyên liệu xử lý nguyên liệu 37 3.2 Hàm lƣợng tro keo ong Homotrigona Apicalis 37 3.3 Khảo sát yếu tố ảnh hƣởng đến hiệu suất thu cao chiết EtOH 38 3.3.1 Phƣơng pháp ngâm chiết 38 3.3.2 Phƣơng pháp chiết siêu âm 42 3.4 Định tính lớp chất có keo ong 47 3.4.1 Phát triterpenoid 47 3.4.2 Phát alkaloid 48 3.4.3 Phát hợp chất phenol 48 3.4.4 Phát steroid 49 3.4.5 Phát flavonoid 50 3.5 Đánh giá sơ thành phần hóa học từ cao chiết EtOH EA 50 3.6 Nghiên cứu phân lập hợp chất từ cao chiết EA 54 3.7 Xác định cấu trúc tính chất phổ chất rắn phân lập 55 3.7.1 Phổ 1H NMR hợp chất thu đƣợc 56 3.7.2 Phổ 13 C NMR HSQC hợp chất thu đƣợc 62 3.7.3 Phổ HMBC hợp chất thu đƣợc 64 3.7.4 Phổ MS chất rắn thu đƣợc 67 3.8 Kết thử nghiệm hoạt tính kháng vi sinh vật nấm kiểm định cao chiết EtOH 68 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 71 i DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu CC Tên tiếng Anh Tên tiếng Việt Column chromatography Sắc ký cột 13 C NMR Carbon-13 Nuclear Magnetic Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân Resonance COSY carbon 13 Correlated Phổ COSY Homonuclear Spectroscopy DEPT Distortionless Enhancement Kỹ thuật xác định số proton by Polarisation Transfer đính với carbon EA Ethyl acetate Ethyl acetate IC50 Inhibitory concentration 50% Nồng độ ức chế 50% cá thể HMBC Heteronuclear Multiple Bond Phổ tƣơng tác di hạt nhân qua Correlation H NMR Proton Nuclear nhiều liên kết Magnetic Resonance HSQC Heteronuclear Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân proton Single Phổ tƣơng tác trực tiếp H-C Quantum Coherence Hx Hexane Hexane MS Mass spectrum Phổ khối lƣợng EtOH Ethanol Ethanol TLC Thin Layer Chromatography Sắc ký mỏng ii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Ong khơng ngịi đốt Homotrigona Apicalis Hình 1.2 Hình dạng bên ngồi ong khơng ngịi đốt Homotrigona Apicalis Hình 1.3 Quá trình hình thành keo ong Hình 1.4 Keo ong (Stingless bee propolis) (a keo tổ; b keo sau thu hoạch) Hình 1.5 Một số chế phẩm thị trƣờng từ keo ong Hình 1.6 Một số terpene Hình 1.7 Một số terpenoid Hình 1.8 Bộ khung steroid 10 Hình 1.9 Một số alkaloid 11 Hình 1.10 Bộ khung flavonoid 12 Hình 2.1 Mẫu sắc ký mỏng 22 Hình 2.2 Mẫu keo ong Homotrigona Apicalis 29 Hình 2.3 Đốt tạo tro keo ong Homotrigona Apicalis 29 Hình 2.4 Sắc ký cột cao EA keo ong 30 Hình 2.5 Các chất phân đoạn đƣợc tẩm silica gel 30 Hình 2.6 Quy trình tách chiết hợp chất từ keo ong Homotrigona Apicalis 31 Hình 2.7 Khảo sát ảnh hƣởng tỉ lệ bột keo ong với thể tích EtOH 32 Hình 2.8 Thiết bị chiết siêu âm dùng thí nghiệm 33 Hình 3.1 Bột keo ong Homotrigona Apicalis 37 Hình 3.2 Đồ thị biễu diễn ảnh hƣởng tỉ lệ bột keo ong (g) : thể tích EtOH (mL) đến hàm lƣợng cao chiết EtOH ngâm chiết 40 Hình 3.3 Đồ thị biễu diễn ảnh hƣởng thời gian ngâm chiết đến hàm lƣợng cao chiết EtOH 41 iii Hình 3.4 Đồ thị biễu diễn ảnh hƣởng tỉ lệ bột keo ong (g) : thể tích EtOH (mL) đến hàm lƣợng cao chiết EtOH chiết siêu âm 43 Hình 3.5 Đồ thị biễu diễn ảnh hƣởng thời gian siêu âm đến hàm lƣợng cao chiết EtOH chiết siêu âm 45 Hình 3.6 Kết định tính triterpenoid thuốc thử Liebermann Burchard 47 Hình 3.7 Kết định tính alkaloid thuốc thử Wagner 48 Hình 3.8 Kết định tính hợp chất phenol thuốc thử FeCl3 49 Hình 3.9 Kết định tính Steroid phản ứng Salkowski 49 Hình 3.10 Kết định tính hợp chất Flavonoid 50 Hình 3.11 Dịch chiết EtOH keo ong 51 Hình 3.12 Cao chiết EtOH keo ong 51 Hình 3.13 Chiết keo ong với dung môi EA 51 Hình 3.14 Cao chiết EA keo ong 52 Hình 3.15 TLC cao chiết EtOH màu với Ce(SO4)2 53 Hình 3.16 TLC cao chiết EA màu với Ce(SO4)2 53 Hình 3.17 TLC phân đoạn cao chiết EA 55 Hình 3.18 TLC chất rắn 55 Hình 3.19 Quy ƣớc đánh số công thức Spathulenol công thức 3D 56 Hình 3.20 Phổ 1H NMR chất phân lập CDCl3 57 Hình 3.21 Phổ 1H NMR chất phân lập kéo giãn đoạn 2,45 – 1,75 ppm 58 Hình 3.22 Phổ 1H NMR chất phân lập kéo giãn đoạn 1,8 – 0,5 ppm 59 Hình 3.23 Phổ COSY chất phân lập 60 Hình 3.24 Phổ 13C NMR chất rắn phân lập CDCl3 62 Hình 3.25 Phổ HSQC chất phân lập 63 Hình 3.26 Phổ HMBC chất phân lập CDCl3 65 Hình 3.27 Phổ HMBC chất phân lập kéo giãn 2,4-0,6 ppm 66 iv Hình 3.28 Phổ MS chất phân lập 67 ... xác định cấu trúc tính chất phổ số hợp chất tách từ keo ong khơng ngịi đốt (Homotrigona Apicalis) Bình Định? ?? 2 Mục tiêu nghiên cứu Phân lập hợp chất, xác định cấu trúc tính chất phổ số hợp chất. .. Nhơn, Bình Định - Phạm vi nghiên cứu: Cấu trúc tính chất phổ số hợp chất đƣợc phân lập từ keo ong khơng ngịi đốt (Homotrigona Apicalis) Nội dung nghiên cứu - Tạo tro keo ong khơng ngịi đốt (Homotrigona. .. hợp chất tách từ keo ong khơng ngịi đốt (Homotrigona Apicalis) Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu - Đối tƣợng nghiên cứu: Một số hợp chất đƣợc phân lập từ keo ong khơng ngịi đốt (Homotrigona Apicalis)