Nghiên cứu phân tích đồng phân quang học của hoạt chất Lansoprazol bằng phương pháp HPLC sử dụng pha động chứa tác nhân đối quang

CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc Đơn vị chủ trì: Trường Đại học Nguyễn Tất Thành BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐÈ TÀI NCKH DÀNH CHO CÁN Bộ - GIẢNG VIÊN 2020 Tên đề tài: NGHIÊN CỨU PHÂN TÍCH ĐỊNG PHÂN QUANG HỌC CỦA HOẠT CHẤT LANSOPRAZOL BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC sử DỤNG PHA ĐỘNG CHỨA TÁC NHÂN ĐÓI QUANG Số hợp đồng: 2020.01.79 Chủ nhiệm đề tài: NGUYỄN THẢO HẠNH NGÂN Đơn vị công tác: Khoa Dược - Đại học Nguyền Tất Thành Thời gian thực hiện: 3/2020 - 11/2020 TP Hồ Chỉ Minh, thảng 11 năm 2020 MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC BẢNG V DANH MỤC HÌNH ẢNH vi MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỐNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỒNG QUAN VÈ LANSOPRAZOL 1.2 ĐẠI CƯƠNG VÈ ĐỒNG PHÂN ĐÓI QUANG 1.3 SẤC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 1.3 PHA ĐỘNG ĐỐI QUANG TRONG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NÀNG CAO (CHIRAL ADDITIVE MOBILE PHASE) 14 1.3 MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG DEXLANSOPRAZOL 16 CHƯƠNG ĐÓI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cúư 18 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN cứu 18 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 20 2.3 PHƯƠNG PHÁP CHUẮN BỊ MẦU 20 CHƯƠNG KÉT QUẢ VÀ THAO LUẬN 22 3.1 KHẢO SÁT CỘT SẮC KÝ 22 3.2 KHAO SÁT TÁC NHÂN ĐỐI QUANG 24 3.3 KHẢO SÁT PHA ĐỘNG 27 CHƯƠNG KÉT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO 38 iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TÁT Từ viết tắt Tên tiếng Anh CAN Acetonitril CE Capillary electrophoresis CM-//-CD Carboxymethyl-beta-cyclodextrin CSPs Chiral stationary phases Tên tiếng Việt Pha tĩnh bất đối Đối chiếu ĐC EMEA European Medicines Evaluation Agency FDA Food and Drug Administration HPLC High performance liquid Sắc ký lòng hiệu cao chromatography HP-//-CD Hydroxypropyl-beta-cyclodextrin IR Infrared Phố hồng ngoại LOD Limit of detection Giới hạn phát LOQ Limit of quantification Giới hạn định lượng M-//-CD Methyl-beta-cyclodextrin MeOH Methanol MS Mass spectrometry RP-HPLC Reversed phase- High performance Sắc ký lỏng hiệu cao liquid chromatography SBE-//-CD pha đào Sulfo butylether- beta-cyclodextrin Sắc ký đo SKĐ iv DANH MỤC BANG Bảng 2.1 Danh mục chất đối chiếu 18 Bảng 2.2 Danh mục hóa chất thuốc thử 19 Bảng 2.3 Danh mục trang thiết bị 19 V DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo lansoprazol Hình 1.2 Công thức cấu tạo dexlansoprazol Hình 3.1 SKĐ khảo sát thay đổi loại cột sắc ký khác 23 Hình 3.2 Đồ thị ảnh huởng cột sắc ký HPLC lên phân tách đồng phân lansoprazol 23 Hình 3.3 SKĐ khảo sát thay đoi tác nhân đối quang khác 24 Hĩnh 3.4 SKĐ khảo sát thay đổi nồng độ tác nhân đối quang 26 Hình 3.5 Đồ thị ảnh huởng nồng độ tác nhân đối quang SBE-/2-CD lên phân tách đồng phân lansoprazol 26 Hình 3.6 SKĐ khảo sát tách đong phân thay đổi pH pha động 28 Hình 3.7 Đo thị ảnh huởng pH pha động lên phân tách đồng phân lansoprazoL 28 Hình 3.8 SKĐ khảo sát tách đồng phân thay đổi nồng độ đệm NaH2PO4 29 Hình 3.9 Đồ thị ảnh hưởng nồng độ đệm NaHiPOi lên phân tách đồng phân lansoprazol 30 Hình 3.10 SKĐ khảo sát tách đồng phân thay đổi tỷ lệ pha động 31 Hình 3.11 Đồ thị ảnh hưởng tỷ lệ pha động lên phân tách đồng phân lansoprazol 32 VI TÓM TẤT KÉT QUẢ NGHIÊN cứu Ket quà đạt Công việc thực STT Khảo sát cột sắc ký Cột sắc ký phù hợp tiêu chí lựa chọn Khảo sát tác nhân đối quang Tác nhân đối quang phù hợp tiêu chí lựa chọn Khảo sát pha động Pha động phù hợp tiêu chí lựa chọn Xây dựng quy trình phân tích Quy trình phân tích đồng phân đồng phân lansoprazol sử dụng lansoprazol xây dựng pha động có chứa tác nhân đối quang STT Sản phẩm đăng ký 01 quy trình phân tích đồng phân 01 quy trình phân tích đồng phân lansoprazol sử dụng pha động lansoprazol sử dụng pha động chứa chứa tác nhân đối quang tác nhân đối quang 01 báo khoa học đăng tạp 01 báo khoa học đăng tạp chí Sản phẩm đạt chí Thời gian đăng ký : từ tháng 3/2020 đến tháng 11/2020 Thời gian nộp báo cáo: ngày 24/11/2020 vii NTTƯ-KHCN-05-TMĐT MỞ ĐẦU Ngày nay, bên cạnh việc nghiên cứu tổng họp hợp chất việc phân tách họp chất đối quang từ hỗn họp racemic quan tâm Các hợp chất đối quang khơng khác tính chất vật lý hóa học khác cấu trúc khơng gian dẫn đến khác biệt tác dụng sinh học Vì vậy, quan quản lý Thuốc Thực phâm Hoa Kỳ (FDA) khuyến cáo việc sản xuất chế phẩm thuốc dạng đong phân riêng lẻ Với phát triển phương pháp phân tích đồng phân quang học xuất không ngừng chế phẩm thuốc với dạng đồng phân riêng lẻ thị trường, địi hỏi phải có quy trình kiểm tra độ tinh khiết đồng phân thuốc thành phẩm Nhóm thuốc ức chế bơm proton (PPI) sử dụng điều trị loét dày- tá tràng có nhiều thành tựu bên cạnh nhóm thuốc kháng acid, thuốc bao phủ niêm mạc dày, thuốc kháng thụ the histamin H2 kháng sinh diệt vi khuẩn Helicobacter pylori Nhừng năm gần đây, nhóm thuốc có hoạt chất biết đến nhiều như: omeprazol, pantoprazol, lansoprazol, rabeprazol, Nhóm thuốc ngồi định cho bệnh lt dày- tá tràng cịn sử dụng cho bệnh nhân mắc bệnh trào ngược dày thực quản (GERD), hội chứng Zollinger-Ellison Bên cạnh việc nghiên cứu hoạt chất mới, nhóm thuốc tập trung vào tổng hợp dạng đối quang hoạt chất có esomeprazol, dexlansoprazol, dexrabeprazol, ưu điểm liều dùng giảm, tác dụng chuyên biệt receptor, độc tính giảm so với dạng thuốc racemic Hiện nay, chế phẩm thuốc đối quang nhóm PPI (esomeprazol, dexlansoprazol, dexrabeprazol) chưa sản xuất nhiều Việt Nam, thành phẩm nhập khấu có giá thành lại đắt Với nhu cầu thị trường ngày lớn, công ty dược Việt Nam nghiên cứu sản xuất che phẩm thuốc đối quang ke Vì vậy, cần phải xây dựng quy trình tách đồng phân đối quang hoạt chất để từ kiểm độ tinh khiết đồng phân Trong nhóm thuốc PPI, lansoprazol dạng đồng phân đối quang dexlansoprazol phát minh sau nên tạp chí ngồi nước có số lượng nghiên cứu NTTƯ-KHCN-05-TMĐT chúng cịn hạn chế Hai phương pháp phân tích đồng phân quang học thường sử dụng phương pháp điện di mao quản (CE) phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC) với điếm thuận lợi khó khăn khác Vì lẽ đó, với mong muốn có the xây dựng quy trình phân tích lansoprazol với nhiều khả ứng dụng vào thực tiền, đề tài “Nghiên cứu phân tích đồng phân quang học lansoprazol sử dụng kỳ thuật sắc kí lỏng hiệu cao” thực với mục tiêu sau: Xây dựng quy trình phân tích đồng phân quang học lansoprazol kỳ thuật sắc ký lỏng hiệu cao Thẩm định quy trình phân tích đồng phân quang học lansoprazol kỳ thuật sắc kí lỏng hiệu cao xây dựng ứng dụng quy trình thẩm định để kiểm tra độ tinh khiết đồng phân chế phẩm lưu hành thị trường so sánh, đối chiếu kết kỳ thuật sắc ký lỏng hiệu cao với pha động chứa tác nhân đoi quang kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu cao sử dụng cột bất đối NTTƯ-KHCN-05-TMĐT CHƯƠNG TỐNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TÓNG QUAN VỀ LANSOPRAZOL Lansoprazol có tên khoa học đầy đủ 2-[3-Methyl-4-(2,2,2-trifluoroethoxy)-2- pyridinyl]methylthio-lH-benzimidazole (C16H14F3N3OS) với khối lượng phân tử 353,363 g/mol Công thức cấu tạo lansoprazol sau: Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo lansoprazol Nhận xét cấu trúc: VỊ trí nguyên tử lưu huỳnh (S) trung tâm tạo nên nhóm sulfoxid vị trí xác định nên hai đồng phân lập the (R) (S) Chúng có cơng thức phân tử cơng thức cấu tạo hồn toàn giống phân bố mặt phang không gian lại khác nhau, dần đen khác biệt tác dụng dược lý Dexlansoprazol đong phân (R) lansoprazol, có cơng thức cấu tạo sau: Hình 1.2 Cơng thức cấu tạo dexlansoprazol NTTU-KHCN-05-TMĐT 1.1.1 Tính chất vật lý [1] Bột kết tinh màu trắng hay nâu nhạt, không mùi Dễ tan ethyl acetat, ethanol tuyệt đối, tan ether, acetonitril khơng tan hexan nước 1.1.2 Tính chất hóa học [1] Nhân thom : Hấp thụ uv Nhóm chức este: Các phản ứng thủy phân Nhóm -NH2: Tính khử tính base Nhân dihydropyridin: Tính base tính khử 1.1.3 Tác dụng dược lý Năm 1999, lansoprazol tổng hợp lần thương mại hóa rộng rài Lansoprazol nằm nhóm ức che bơm proton (PPI) với chế gây bất hoạt bơm H+/K+-ATPase Các thuốc PPI có diem chung bào chế dạng tiền dược base yếu khơng có hoạt tính Trong mơi trường acid tế bào thành tiết ra, PPI chuyến sang dạng có hoạt tính q trình ion hóa gồm bước sau: Bước 1: PPI proton hóa lần đầu vịng pyridin tích lũy tiểu quản chế tiết Tình trạng yếu tố quan trọng định đến khả tác dụng thuốc phụ thuộc vào nồng độ PPI máu Bước 2: Các PPI proton hóa lần vịng benzymidazol tạo thành dần xuất sulfonamid acid sulfenic Các phức hợp ưa lưu huỳnh có tính phản ứng cao nên kết hợp với nhóm SH acid amin cystein enzym để tạo nên cầu nối dísulíĩd tương đối ổn định, trạng thái bơm H+, KVATPase bị bất hoạt khơng cịn khả vận chuyển ion H+ Dexlansoprazol đồng phân quang học dạng (R)-lansoprazol, nghiên cửu có tác dụng dược lý so với đong phân (S)-lansoprazol tác dụng làm lành vết loét có ảnh hưởng quan trọng lên cytocrom CYP2C19 Dexlansoprazol bị NTTƯ-KHCN-05-TMĐT thấp, nhóm amin lansoprazol bị proton hóa tạo thành cation tương tác mạnh với nhóm sulfat SBE-/7-CD mức độ phân ly bị ảnh hưởng đáng ke độ pH cùa dung dịch nước Tuy nhiên, dung dịch nước với pH thấp có the có ảnh hưởng bất lợi cột hệ thống sắc ký sử dụng Trong nghiên cứu này, giá trị pH chọn 2,5 cho công việc phân tích - Nồng độ đệm NakbPCU: Natri dihydrophosphat ảnh hưởng đến hình thành tạo phức tác nhân đối quang lansoprazol, ảnh hưởng đến độ phân giải thời gian phân tích Ảnh hưởng đệm NaH2PƠ4 khảo sát với nhiều nồng độ khác nhau, kết nong độ 10,0 IĨ1M tốt nhất, tạo độ phân giải thời gian phân tích hợp lý - Tỷ lệ pha động: ảnh hưởng tỷ lệ pha động lên phân tách đồng phân tương tự ảnh hưởng cùa nong độ tác nhân đoi quang Tỷ lệ pha động ACN: dung dịch đệm SBE-/?- CD (30:70, tt/tt) (25:75, tt/tt) không tách đong phân lansoprazol nồng độ tác nhân SBE-/7-CD thấp, không đủ để tạo phân tách phức bao SBE-/?-CD-ỴS>- lansoprazol SBE-/?-CD-dexlansoprazol Ba tỷ lệ lại phân biệt hai dạng đồng phân Trong tỷ lệ pha động pha động ACN: dung dịch đệm SBE-/7-CD (20:80, tt/tt) có thời gian lưu hợp lý độ phân giải cao nên lựa chọn Chủ nhiệm đề tài (Ký ghi rõ họ tên) Nguyễn Thảo Hạnh Ngân 37 NTTU-KHCN-05-TMĐT TÀI LIỆU THAM KHẢO Hua He, Chuông Pham Huy Lien Ai Nguyen, (2006) "Chiral Drugs: An Overview," International journal of Biomedical science, vol 2, pp 85-100 Rumiko Shimazawa, (2007), "Recent state of new chiral drugs development and review," Journal of Health Science, vol 54, pp 23-29 Liu RH Liu JT, (2002), "Enantiomeric composition of abused amine drugs: chromatographic methods of analysis and data interpretation," Journal of Biochemical and Biophysical Methods, vol 54, pp 115-146 Food and Drug Administration, (1992), "FDA's policy statement for the development of new stereoisomeric drugs," US Food and Drug Administration regulatory guidance Health Canada, (2000), "Stereochemical issues in chiral drug development," Health Canada guidance document European Medecines Agency, (1997), "Investigation of chiral active substances European Union guidelines" Jos Hoogmartens, Ann Van Schepdael, Pham Thi Thanh Ha, (2006), "Recent advances in pharmaceutical applications of chiral capillary electrophoresis," Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, vol 41, pp 1-11 Ana R Ribeiro et al., (2014), "Enantioseparation of chiral pharmaceuticals in biomedical and environmental analyses: An overvew," Journal of Chromatography B Bộ Y Te, (2018), Dược điển Việt Nam V Hà Nội: Nhà xuất Y học 10 Bộ Y Tế, (2012), Dược thư quốc gia Việt Nam Hà Nội: Nhà xuất Y học 11 Sean c Sweetman, Ed., (2012), Martindale, 36th ed USA: Pharmaceutical Press 12 Challener CA, (2001), "Overview of chirality," in Chiral drugs Aidershot , England: Ashgate Publisher, pp 3-14 38 NTTƯ-KHCN-05-TMĐT 13 Đặng Như Tại, (2012), Hóa học hữu cơ- Tập Hà Nội: Nhà xuất Y học 14 Bezhan Chankvetadze, (1997), Capillary Electrophorensis in Chiral Analysis.: Wiley 39 NTTU-KHCN-05-TMĐT PHỤ LỤC 3: MINH CHỦNG ĐI KÈM XÂY DỤNG QUY TRÌNH PHÂN TÍCH ĐỊNG PHÂN QUANG HỌC LANSOPRAZOL sử DỤNG PHA ĐỘNG CHÚA TÁC NHÂN NHÓM p- CYCLODEXTRIN Nguyễn Thảo Hạnh Ngân2*, Lê Thị Thu Cúc1 ' Viện Kiếm nghiệm thuốc TP Hồ Chỉ Minh Khoa Dược, Trường Đại học Nguyễn Tất Thành * nthngan@ntt edu Tóm tắt Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) triển khai để nghiên cứu phân tách đồng phân quang học lansoprazol Hai đồng phân phân tách hoàn toàn sử dụng pha động chứa tác nhân bất đối sulfobutyl ether /?-cyclodextrin Pha động sử dụng acetonitril - dung dịch đệm NaH2PƠ4 lOmM có chứa 10,0mM SBE-yổ-CD, pH 2,5 (20:80, tt/tt), phát đầu dị ƯV bước sóng 285nm Từ khóa: HPLC, phân tích đồng phân, sắc ký lỏng, lansoprazol, dexlansoprazol Đặt vấn đề Lansoprazol dần chat benzimidazol có tác dụng chống tiết acid dày, ức chế bơm proton [1], [2], [7], [10] Do cấu trúc lansoprazol có carbon bất đối nên chúng có hai đồng phân đối quang, dạng (S) dạng có hoạt tính Mặt khác, diện dạng (R) gây tác dụng phụ Các biệt dược lansoprazol thị trường phần lớn dạng racemic Tuy nhiên, dạng đong phân (S) có hoạt tính mạnh dạng racemic, nên xuất chế phẩm dạng đồng phân riêng lẻ thị trường Tiếp theo công trình nghiên cứu lĩnh vực tách đong phân quang học, báo này, giới thiệu kết phân tích đồng phân quang học dexlansoprazol phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 40 NTTƯ-KHCN-05-TMĐT Nguyên liệu phương pháp Chất đối chiếu, trang thiết bị, dung mơi hóa chất Chất đoi chiếu Bảng Các chất đoi chiếu Hàm lượng (%) Chất đối chiếu tính chế phẩm Số lơ Nguồn gốc ngun trạng Lansoprazol 98,80 ỌT161 080718 VKN thuốc TP.HCM Dexlansoprazol 98,00 L175015 Toronto Trang thiết bị - Máy sắc ký lỏng hiệu cao SHIMADZU UFLC 20A, đầu dò PDA - Cột Germini NX c 18 (150 X 4,6 mm; 5pm) - Cân phân tích điện tử Mettler Toledo AT200, be siêu âm Hwashin, bình định mức, pipet xác, ống đong, cốc có mỏ, Các thiết bị phân tích dụng cụ phân tích hiệu chuẩn đạt quy định theo GLP ISO/IEC 17025 Dung môi hóa chất /7-hexan, 2-propanol (IPA), methanol, acetonitril (ACN), ethanol, acid formic (FA), acid phosphoric: dùng cho HPLC (J.T.Baker) Sulfobutyl ether p-cyclodextrin (SBE-p-CD), methyl hydroxypropyl p-cyclodextrin (HP p-CD), p-cyclodextrin Đối tượng nghiên cứu - Viên nén nang lansoprazol 30 mg - Viên nang Dexilant (dexlansoprazol) 60 mg Phương pháp nghiên cứu 41 p-cyclodextrin (M p-CD), NTTƯ-KHCN-05-TMĐT Thay đổi tác nhân đối quang pha động, nhằm chọn điều kiện phân tích đáp ứng u cầu với thơng số: hai pic đồng phân phải tách hoàn toàn với độ phân giải Rs > 1,5; đáp ứng đầu dò cao, hệ số bất đối As cùa pic nằm khoảng 0,8-1,5 [7], [9] Chuẩn bị mau - Dung dịch mẫu chuẩn lansoprazol (1200 pg/ml)' Cân xác khoảng 30 mg lansoprazol chuấn, cho vào bình định mức 25 ml, thêm khoảng 15 ml methanol, siêu âm 10 phút, lắc đều, để nguội, thêm methanol đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc PTFE 0,45 pm - Dung dịch mầu chuẩn dexlansoprazol (600 pg/mỉ): Cân xác khoảng 30 mg dexlansoprazol chuấn, cho vào bình định mức 50 ml, thêm khoảng 35 ml methanol, siêu âm 10 phút, lắc đều, để nguội, thêm methanol đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc PTFE 0,45 pm - Dung dịch mầu thứ dexlansoprazol: Cân 20 viên nang dexlansoprazol, xác định khối lượng trung bình thuốc nang Cân lượng thuốc nghiền mịn tương ứng với khoảng 30 mg dexlansoprazol, cho vào bình định mức 50 ml, thêm khoảng 35 ml methanol, siêu âm 10 phút, lắc đều, để nguội, thêm methanol vừa đủ đen vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc PTFE 0,45 pm - Dung dịch mẫu thử lansoprazol: Cân 20 viên nang lansoprazol, xác định khối lượng trung bình thuốc nang Cân lượng thuốc nghiền mịn tương ứng với khoảng 30 mg metoprolol, cho vào bình định mức 25 ml, thêm khoảng 15 ml methanol, siêu âm 10 phút, lắc đều, đế nguội, thêm methanol vừa đủ đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc PTFE 0,45 pm - Dung dịch mẫu placebo: chuẩn bị dung dịch mầu thử thay lượng bột thuốc lượng tá dược tương ứng mẫu thử - Dung dịch mẫu trắng: Dung mơi hịa tan mầu methanol Ket bàn luận Khảo sát tác nhân đối quang 42 NTTƯ-KHCN-05-TMĐT Bang Các tác nhân đổi quang khảo sát [4], [4], [5] Tác nhân đôi quang Điều kiện /7-cyclodextrin Ự?-CD) Điều kiện Methyl-/?-cyclodextrin (M-/2-CD) Điều kiện Hydroxylpropyl-/?-cyclodextrin (HP-//-CD) Điều kiện Sulfobutyl ether jff-cyclodextrin (SBE-/7-CD) Tl.lcd uV 1000000- 500000- 0 25 Methyl-yổ-cyclodextrin (M-/7-CD) yổ-cyclodextrin (yổ-CD) T3.1cd uV 1000000- 500000- 25 Hydroxylpropyl-/?-cyclodextrin (HP-yỔ-CD) Sulfobutyl ether ổ-cyclodextrin (SBE-/?CD) Hình Minh họa sắc ký đồ khảo sát tách đồng phân thay đồi tác nhân đối quang Nhận xét: - Điều kiện 1, 2, 3: không phân biệt đưoc dạng dồng phân 43 NTTƯ-KHCN-05-TMĐT - Điều kiện 4: hai pic đồng phân tách hoàn toàn với Rs = 1,7 Trên cột Germini NX c 18 (150 X 4,6 mm; 5pm) với tác nhân khảo sát, có tác nhân sulfobutyl ether- yổ-cyclodextrin phù họp đế tách đồng phân quang học lansoprazol Do đó, tác nhân lựa chọn sulfobutyl ether-/?-cyclodextrin Khảo sát nồng độ tác nhân đối quang Bảng Các nồng độ tác nhân đoi quang khảo sát [4], [5] Nồng độ tác nhân đối quang Điều kiện 2,5 mM SBE-/ACD Điều kiện 5,0 mM SBE-/7-CD Điều kiện 7,5 mM SBE-/7-CD Điều kiện 10,0 mM SBE-//-CD Điều kiện 15,0 mM SBE-yỔ-CD SBE-yỔ-CD 5,0 mM SBE-^-CD 2,5 mM 44 NTTƯ-KHCN-05-TMĐT SBE-^-CD 7,5 mM SBE-/7-CD 10,0 mM SBE-/7-CD 15,0 mM Hình Minh họa sắc ký đồ khảo sát tách đồng phân thay đổi nồng độ tác nhân đối quang Nhận xét: - Điều kiện 1, 2, 3: không phân biệt dạng dồng phân - Điều kiện 4, 5: hai pic đồng phân tách hoàn toàn với Rs 1,8 1,9 Nồng độ sulfobutyl ether-/?-cyclodextrin (SBE-/7-CD) khảo sát tăng dần từ 2,5 mM đến 15,0 mM cho thấy khả phân tách đồng phân tăng dần Đong thời, thời gian lưu tăng dần từ 18 phút lên 25 phút Hai pic đồng phân tách hoàn toàn tăng từ 10,0 mM lên 15,0 mM Đồng thời thấy thời gian phân tích tăng đáng kể (gần phút) 45 NTTƯ-KHCN-05-TMĐT xuất hiện tượng dồn pic Vì vậy, chọn nồng độ SBE-/7-CD 10,0 IÌ1M đế tiếp tục khảo sát quy trình phân tích Khảo sát pH pha động Bảng Các pH pha động khảo sát [4], [5] pH pha động Điều kiện pH 2,5 Điều kiện pH 3,0 Điều kiện pH 4,0 Điều kiện pH 5,0 pH 2,5 pH 5,0 pH 3,0 pH 4,0 46 NTTƯ-KHCN-05-TMĐT Hình Minh họa sắc ký đồ khảo sát tách đồng phân thay đôi pH pha động Nhận xét: - Điều kiện 1, 2: hai pic đồng phân tách hoàn toàn với Rs 1,8 1,9 - Điều kiện 3, 4: không phân biệt dạng dồng phân pH dung dịch từ 2,2 đến 3,0 cho độ phân giải lớn 1,5 pH 4,0 5,0 khơng có phân tách pic đồng phân Tuy nhiên nồng độ pH 2,5 thời gian phân tích ngắn Vì vậy, tác nhân sulfobutyl ether-yổ-cyclodextrin với nong độ pH 2,5 phù hợp với quy trình phân tích Khảo sát tỷ lệ pha động Bảng Các tỳ lệ pha động khảo sát [4], [5] Tỷ lệ pha động Điêu kiện Acetonitril: dung dịch đệm SBE-/7-CD (30:70) Điêu kiện Acetonitril: dung dịch đệm SBE-/7-CD (25:75) Điêu kiện Acetonitril: dung dịch đệm SBE-y?-CD (20:80) Điêu kiện Acetonitril: dung dịch đệm SBE-yỔ-CD (15:85) Điêu kiện Acetonitril: dung dịch đệm SBE-yỔ-CD (10:90) ACN: dung dịch đệm SBE-yổ-CD ACN: dung dịch đệm SBE-/7-CD (30:70, tt/tt) (25:75, tt 47 NTTƯ-KHCN-05-TMĐT ACN: dung dịch đệm SBE-/7-CD ACN: dung dịch đệm SBE-/7-CD (20:80, tt/tt) (15:85, tt/tt) ACN: dung dịch đệm SBE-/7-CD (10:90, tt/tt) Hình Minh họa sac ký đồ khảo sát tách đồng phân thay đối tỷ lệ pha động Nhận xét: - Điều kiện 1, 2: hai pic đồng phân không tách hoàn toàn - Điều kiện 3, 4, 5: hai pic đồng phân tách hoàn toàn với Rs> 1,5 Tỷ lệ pha động ACN: dung dịch đệm SBE-yổ-CD (20:80, tt/tt) có thịi gian luu ngắn độ phân giải hợp lý Do đó, tỷ lệ pha động đuạc lựa chọn acetonitril: dung dịch đệm SBE-/ACD (20:80, tt/tt) Điều kiện sắc ký lựa chọn là: 48 NTTƯ-KHCN-05-TMĐT - Cột sắc ký Germini NX c 18 (150 X 4,6 mm; 5pm) - Pha động acetonitril - dung dịch đệm NaHLPCXi lOmM có chứa 10,0mM SBE-/7-CD, pH 2,5 (20:80, tt/tt) - Tốc độ dòng Iml/phút - Nhiệt độ 30°C - Thể tích tiêm mầu lOpl - Bước sóng phát 285nm Ket luận Bằng phương pháp HPLC sử dụng pha tĩnh bất đối, tiến hành xây dựng quy trình phân tích đồng phân quang học lansoprazol, với điều kiện sau: cột sắc ký Germini NX C18, chiều dài 150 mm, đường kính 4,6 mm, kích thước hạt pm Pha động hệ acetonitril - dung dịch đệm NaH?PO4 lOmM có chứa 10,0mM SBE-/7-CD, pH 2,5 (20:80, tt/tt), tốc độ dòng ml/phút, nhiệt độ 30 °C, thể tích tiêm mầu 20 pl, bước sóng phát 285 nm Bàn luận Đe tài có the mở rộng cách nghiên cứu ứng dụng quy trình phân tích đồng phân lên loại cột pha tĩnh bất đối khác đe phù hợp với điều kiện sở vật chất sẵn có đơn vị nghiên cứu Đe tài tiến hành thêm hướng phân tích đồng phân lansoprazol bang phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao sử dụng pha động chứa tác nhân đoi quang khác phương pháp điện di cột mao quản phủ silica Từ phương pháp phân tích khác có so sánh ưu, nhược điểm phương pháp để vận dụng cơng tác kiểm tra quản lý chất lượng thuốc Mồi phương pháp có điều kiện phân tích khác với độ nhạy, giới hạn phát hiện, giới hạn phân tích, khoảng tuyến tính khác Tùy theo loại mẫu phân tích khác lựa chọn phương pháp phù hợp Lời cảm ơn 49 NTTƯ-KHCN-05-TMĐT Nghiên cứu tài trợ Quỳ Phát triển khóa học cơng nghệ Đại học Nguyền Tất Thành đề tài mã số 2020.01.079 /HĐ-KHCN 50 NTTƯ-KHCN-05-TMĐT Tài liệu tham khảo Bộ Y Te (2017), “Lansoprazol”, Dược điển Việt Nam V, Nhà xuất Y học, Hà Nội Trương Thế Kỷ (2006), Hóa hữu cơ- Hợp chất hữu đơn chất đa chức, Nhà xuất Y học, Hà Nội ICH Harmonised tripartite guideline (2005), “Validation of analytical procedures: text and methodology”, pp.1-13 Morante-Zarcero s, Sierra I (2012),’’Comparative HPLC methods for p-blockers separation using different types of chiral stationary phases in normal phase and polar organic phase elution modes”, JPAgrffl Biomed Anal., pp.33-41 Radu Cristian Moldovan, Gabriel Som Dascal, Valentin Mire, Ede Bodoki, Radu oprean (2015),’’Chiral separation of 16 beta blockers on immobilized polysaccharide chiral stationary phases”, Farmacia, Vol.63, pp.909-912 Caner H., Groner E., Levy L., Agranat I (2004), “Trends in the development of chiral drugs”, Drug Discov Today, 9(3), 105 Alberto Cavazzini, Luisa Pasti, Alessandro Massi, Nicola Marchetti, Francesco Dondi (2011), “Recent applications in chiral high performance liquid chromatography: A review”, Analytica Chimica Acta, 706, pp.205-222 p, Balamurugan et al, (2015), A simple RP-HPLC method for simultaneous estimation of organic impurities and assay of dexlansoprazole, International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 7(9), 347-352 Miura M et al, (2004), Simultaneous determination of lansoprazole enantiomers and their metabolites in plasma by liquid chromatography with solid-phase extraction, J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci, ;804(2):389-95 Summary A high performance liquid chromatographic (HPLC) method was developed for the chiral separation of lansoprazol The two enantiomers were separated on a Germini NX C18 (150 X 4,6 mm; 5pm) column The mobile phase was acetonitril - lOmMphosphate buffer pH 2,5 containing 10,0mM SBE-f-CD as background etrolyte, (20:80, tt/tt) (v/v/v) uv detection was at 285 nm Keywords: HPLC, dexlansoprazol, chiral separation, enantiomers ... lansoprazol sử dụng lansoprazol xây dựng pha động có chứa tác nhân đối quang STT Sản phẩm đăng ký 01 quy trình phân tích đồng phân 01 quy trình phân tích đồng phân lansoprazol sử dụng pha động lansoprazol. .. thường Sự phân tách đong phân đối quang tối ưu hóa chất chọn lọc đối quang dẫn tới tạo thành phức chất đối quang pha động, phức chất đồng phân quang học không đối quang chất chọn lọc đoi quang sè... MOBILE PHASE) 1.4.1 Khái niệm Sự phân tách trực tiếp hai đồng phân đối quang có the tối ưu hóa cách thêm vào pha động tác nhân đối quang, gọi pha động đối quang Cơ chế nhận biết đồng phân đối quang