Nghiên cứu hoàn thiện quy trình nuôi cấy tạo rễ in vitro và chuyển cây Bình vôi (Stephania glabra (Roxb). Miers) ra vườn ươm

NTTU-NCKH-04 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH BÁO CÁO TÒNG KÉT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP co SỞ NĂM 2019 - 2020 Tên đề tài: Nghiên cứu hồn thiện quy trình ni cấy tạo rễ in vitro chuyển Bình vôi (Stephania glabra (Roxb.) Miers) vườn ưưm Số hợp đồng: 2020.01.98/HĐ-KHCN Chủ nhiệm đề tài: Mai Thị Phương Hoa Đơn vị công tác: Đại Học Nguyễn Tất Thành Thời gian thực hiện: 03/2020 - 11/2020 TP Hồ Chí Minh, ngày 24 tháng 11 năm 2020 MỤC LỤC MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Mục đích 10 Chương TĨNG QUAN 1.1 Giới thiệu Bình Vôi 11 1.1.1 Đặc điểm hình thái phân bố 11 1.1.2 Giá trị kinh tế 12 1.1.3 Thành phần dược liệu 12 1.1.4 Tình hình nghiên cứu nước giới 13 1.1.4.1 Tình hình nghiên cứu nước 13 1.1.4.2 Tình hình nghiên cứu giới 14 1.2 Cơ sở khoa học nhân giống phương pháp nuôi cấy mô te bào 15 1.2.1 Cơ sở việc nghiên cứu điều kiện khử trùng tạo mầu ni cấy mơ từ chồi ngủ 15 1.2.2 Tính tồn (Totipotence) tế bào 16 1.2.3 Nghiên cứu điều kiện khử trùng tạo mẫu nuôi cấy mô từ choi ngủ 16 1.2.4 Cơ sở việc nghiên cứu khả tạo chồi từ chồi ngủ nuôi cấy mô 17 1.2.4.1 Cơ sở việc nghiên cứu khả phát triển từ chồi nuôi cấy mơ 17 1.2.4.2 Tạo hồn chỉnh 17 1.2.5 Một số yếu tố ảnh hưởng đến q trình ni cấy mơ tế bào thực vật 18 1.2.5.1 Vật liệu nuôi cấy 18 1.2.5.2 Điều kiện nuôi cấy 19 1.2.5.3 Môi trường nuôi cấy mô te bào thực vật 19 2.1 Thời gian, địa điếm vật liệu nghiên cứu 28 2.2 Phương pháp nghiên cứu 28 2.2.1 Nội dung 1: Nghiên cứu tạo rễ Bình Vôi in vitro 28 2.2.1.1 Công việc 1.1: Khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ NAA/IAA NAA/IBA đến trình tạo rề Bình Vôi in vitro 28 2.2.1.2 Công việc 1.2: Khảo sát ảnh hưởng than hoạt tính đến q trình tạo rề Bình Vơi in vitro 28 2.2.1.3 Công việc 1.3: Khảo sát ảnh hưởng thành phần hữu đến q trình rề Bình Vơi 29 2.2.2 Nội dung 2: Nghiên cứu ảnh hưởng thành phần giá thể đến tỷ lệ sống Bình Vơi chuyến vườn ươm 29 2.3 Phương pháp thu thập xử lý số liệu 30 2.3.1 Phương pháp thu thập số liệu .30 2.3.2 Xử lý kết 30 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Ket công việc 1: Vô mẫu tạo ngun liệu Bình Vơi in vitro 33 3.1 Ket nội dung 1: Nghiên cứu tạo rễ Bình Vơi in vitro 31 3.1.1 Ket công việc 1.1: Khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ NAA/IAA NAA/IBA đến q trình tạo rễ Bình Vơi in vitro 31 3.1.2 Ket công việc 1.2: Khảo sát ảnh hưởng than hoạt tính đến q trình tạo rễ Bình Vơi in vitro 34 3.1.3 Ket công việc 1.3: Khảo sát ảnh hưởng thành phần hữu đến trình rễ Bỉnh Vôi in vitro 36 3.2 Ket nội dung 2: Nghiên cứu ảnh hưởng thành phần giá thể đến tỷ lệ sống Bình Vơi chuyển vườn ươm 38 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .40 TÀI LIỆU THAM KHẢO 41 PHỤ LỤC 1: QUY TRÌNH NI CÁY TẠO RỀ IN VITRO NẰ CHUYẾN CÂY BÌNH VỊI RA VƯỜN ƯƠM 43 PHỤ LỤC 2: xử LÝ số LIỆU 45 DANH SÁCH CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẤT BA: 6-Benzylaminopurine B5: môi trường Gamborg 1968 CTV: cộng tác viên IBA: indolebutyric acid IAA: Indole-3-acetic acid LV: môi trường Litvay 1985 MS: mơi trường Murashige-Skoog 1962 Mơi trường thạch: mơi trường có bố sung agar g/1 NAA: a-Naphthalene acetic acid NT: nghiệm thức NAA: a-Naphthalene acetic acid TN: thí nghiệm WPM: môi trường Loyd & McCown 1980 DANH SÁCH BẢNG BẢNG TRANG Bảng 3.1 Ket khảo sát ảnh hưởng nong độ IAA, IBA NAA đến q trình ni cấy tạo rễ Bình vơi 32 Bảng 3.2 Ket khảo sát ảnh hưởng than đến q trình ni cấy tạo rễ Bình vơi in vitro 35 Bảng 3.3 Ket khảo sát ảnh hưởng B1 glycine đến trình ni cấy tạo rề Bình vơi 37 Bảng 3.4 Ket khảo sát ảnh hưởng cùa tỷ lệ phối trộn giá thể đến tỷ lệ sống Bình Vơi chuyển vườn ươm 39 DANH SÁCH HÌNH TRANG HÌNH Hinh 1.1 Cây Bình vơi 11 Hình 3.1 Choi rề bình vơi 45 ngày ni cấy mơi trường có bo sung IB A 0,5 mg/1 kết hợp NAA mg/1 Hình 3.2 Chồi bình vơi mơi trường có bo sung than g/1 32 35 Hình 3.3 Chồi bình vơi mơi trường có bổ sung BI 10 mg/1: Mầu ban đầu (A) sau 45 ngày nuôi cay (B; c D) 37 TÓM TẤT KÉT QUẢ NGHIÊN cứu STT Kết quà đạt Công việc thực Nội dung 1: Nghiên cứu tạo rễ Bình Vơi in vitro - Cơng việc 1.1: Khảo sát ảnh Để tạo rễ binh vôi in vitro cẩn bố hưởng tỷ lệ NAA/IAA sung NAA (1 mg/1) kết họp với IBA NAA/IBA đến trình tạo rễ (0,5 mg/1) mơi trường MS Bình Vơi in vitro - Công việc 1.2: Khảo sát ảnh Nồng độ than (1 g/1) thích hợp cho hưởng than hoạt tính đến q q trình ni cấy tạo rề Bình Vơi trình tạo rễ Bình Vơi in vitro in vitro - Công việc 1.3: Khảo sát ảnh Mơi trường thích họp cho q trình hưởng thành phần hữu đến ni cấy tạo bình vơi in vitro hồn q trình rề Bình Vơi chỉnh MS có bổ sung NAA (1 mg/1) + IBA (0,5 mg/1) + sucrose (30 g/1) + than (1 g/1) + B1 (10 mg/1) Nội dung 2: Nghiên cứu ảnh Thành phần giá thể thích họp cho giai hưởng thành phần giá the đến đoạn ươm bình vơi hậu ni cấy tỷ lệ sống Bình Vơi mơ là: phân bị khơ 10% mụn dừa chuyển vườn ươm Sản phẩm đăng ký STT 90% Sản phẩm đạt 01 Bài báo khoa học đăng tạp 01 báo đăng tạp chí đại học chí/ kỷ yếu khoa học nước/ Nguyễn Tất Thành Tạp chí trường Đại học Nguyễn Tất Thành 01 khóa luận tốt nghiệp sinh viên Hướng dần 01 sinh viên ngành công đại học nghệ sinh học làm khóa luận tốt nghiệp (báo cáo tốt nghiệp vào tháng 4/2020) 01 Quy trình ni cấy tạo rễ in Quy trình ni cấy tạo rễ in vitro vitro chun Bình vơi vườn ươm Thời gian đăng ký : từ ngày Thời gian nộp báo cáo: ngày đến ngày chuyến Bình vơi vườn ươm MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Theo cục quản lý y dược cổ truyền, hàng năm ngành dược Việt Nam sử dụng khoảng 60.000 dược liệu Trong có khoảng 80 - 85% nhập (chủ yếu từ Trung Quốc) Nguồn dược liệu nước chủ yếu khai thác tự nhiên (70%), gieo trồng chiếm khoảng 30% với phát triển nhỏ lẽ, thiếu quy hoạch đồng Bên cạnh đó, tình trạng nguồn gốc, chất lượng giống không đảm bảo làm cho việc nuôi trồng sản xuất dược liệu gặp nhiều khó khăn Ngày nhiều quốc gia giới quan tâm nhiêu sản phẩm dược liệu có nguồn gốc từ thiên nhiên Có nhiều sản phấm đời đáp ứng nhu cầu ngày cao thị trường, đem lại doanh thu lợi nhuận cao cho công ty dược Song song với nhu cầu nguyên liệu dược liệu ngày tăng, nguồn cung tự nhiên ngày khan Xuất phát từ vấn đề nước ta quy hoạch vùng tập chung loại dược liệu mạnh nước ta Tuy nhiên, đế mang lại hiệu cao q trình nuôi trồng sản xuất dược liệu cần phải có chiến lược tuyển chọn, bảo ton nhân giống dược liệu cách khoa học hợp lý Tại Việt Nam, Rotundin từ Bình Vơi đà chứng minh tác dụng an thần, giảm đau, gây ngủ, tác dụng hạ sốt, bảo vệ thần kinh, chống động kinh, hạ huyết áp, giãn trơn Học viện Quân Y nghiên cứu tổng hợp thành công Rotundin sunfat từ Rotundin chiết xuất từ củ Bình Vơi để sản xuất thuốc tiêm Hiện nay, thị trường dược liệu có nhiều sản phấm có chứa Rotundin Rotundin sunfat sản phẩm viên Rotunda, Sen vông, Roxen, Nightqueen Việc sừ dụng Rotundin nguồn gốc tự nhiên cho thấy ưu điểm bật độc tính thấp, dung nạp thuốc tốt, mang lại giấc ngủ sinh lý Sau ngủ không bị mệt mỏi, nhức đầu, hoa mắt, buồn nôn, khô miệng, vụng về, giảm tập trung, khơng bị lệ thuộc thuốc, giảm trí nhớ sử dụng kẻo dài loại thuốc tong họp từ hoá chat (Seduxen, Valium, Stinox, Xanax, Temesta ) Các nghiên cứu gần cho thấy Rotundin sử dụng với liều thấp cịn có tác dụng làm giảm ảnh hưởng gây nghiện cocain Với đặc tính dược liệu ưu việt trên, Bình vơi đưa vào danh mục 54 dược liệu ưu tiên phát triển giai đoạn 2015 - 2020 y tế Theo kết khảo sát cửa hàng kinh doanh sản phẩm dược liệu địa bàn Thành phố Hồ Chí Minh Trung tâm Tư vấn Hồ trợ Nông nghiệp thuộc sở Nông nghiệp Phát triển Nông thôn Thành phố Ho Chí Minh (2018), Bình Vơi loại dược liệu có lượng tiêu thụ lớn với khoảng 640 kg/tháng/200 cửa hàng với giá trung bình 415.000 Đ/kg Nguồn cung Cây Bình vơi nước ta chủ yếu người dân khai thác ngồi tự nhiên nên khơng đảm bảo số lượng thường phải nhập khấu Chi Stephania có khoảng 50 lồi, Việt Nam có khoảng 14-16 lồi Các lồi Bình vơi nước ta phân bố rộng miền Bắc, Trung, Nam, thường gặp vùng núi đá vơi: Tun Ọuang, Hồ Bình, Cao Bằng, Thanh Hố, Lâm Đồng, Bà Rịa - Vũng Tàu Thành phần hóa học Bình vơi alkaloid, hoạt chất có tác dụng L-tetrahydropalmatin (rotunđin), stepharin, roemerin, cycleanin, cepharanthin với hàm lượng khác loài Nhu cầu củ Bình Vơi thị trường ngày tăng với giá thành ngày tăng cao dần đến tình trang khai thác q mức, khơng có qui hoạch làm cho loài ngày cạng kiệt tự nhiên Cùng với đó, hàm lượng dược chất có lồi bình vơi khác nhau, phương thức nhân giong truyền thống không đảm bảo số lượng, chất lượng giống gây ảnh hưởng lớn đến việc quy hoạch trồng lồi Vì việc khảo sát đe tìm kiếm lồi Bình vơi có hàm luợng dược chất cao, đe xây dựng kế hoạch bảo tồn nhân giống, trồng bình vơi hồn toàn cần thiết Xuất phát từ lý nhân thấy cần thiết phải thực đề tài “Nghiên cứu hồn thiện quy trình ni cấy tạo rễ in vitro chuyển Bình vơi (Stephania glabra (Roxb.) Miers) vườn ươm ” Mục tiêu đề tài - Xác định môi trường nuôi cấy tạo rễ Bình Vơi in vitro - Xác định thành phần gíá thể thích hợp để chuyển Bình Vơi từ điều kiện nuôi cay in vitro vườn ươm KÉT LUẬN VÀ KIÉN NGHỊ Kết luận Đe tài đà thành công việc xác định môi trường ni cấy tạo rễ Bình Vơi in vitro, xác định thành phần gíá thể thích hợp để chuyển Bình Vơi từ điều kiện ni cấy in vitro vườn ươm với kết sau: Đe tạo rề bình vơi in vitro cần bổ sung NA A (1 mg/1) kết hợp với IB A (0,5 mg/1) mơi trường MS Mơi trường thích hợp cho q trình ni cấy tạo bình vơi in vitro hồn chỉnh MS có bổ sung NAA (1 mg/1) + IB A (0,5 mg/1) + sucrose (30 g/1) + than (1 g/1) + BI (10 mg/1) Thành phần giá the thích họp cho giai đoạn ươm bình vơi hậu ni cấy mơ là: phân bị khơ 10% mụn dừa 90% Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu kỹ thuật chăm sóc Bình Vơi giai đoạn vườn ươm Chủ nhiệm đề tài ThS Mai Thị Phương Hoa TÀI LIỆU • THAM KHẢO Đồ Tất Lợi (1991), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nxb Khoa học Kỳ Thuật Đồ Tất Lợi (2009), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Hà Nội, Nxb Y học Litvay, J.D., D.c Verma, and M.A Johnson Influence of a loblolly pine (Pinus taeda L.) Culture medium and its components on growth and somatic embryogenesis of the wild carrot (Daucus carota L.) Plant Cell Reports 1985;4(6):325-328 Lloyd G & B McCown, 1981 Commercially feasible micropropagation of mountain laurel, Kalmia latifolia, by use of shoot -tip culture In: Comb Proc Inti Plant Prop Soc., 30:421-426 Murashige Ta, Skoog; F A revised medium for rapid growth and bio assays with tobacco tissue cultures Physiologiaplantarum 1962;15(3):473-497 Nguyền Đức Lượng, Lê Thị Thủy Tiên, 2006 Công nghệ tế bào Nhà xuất Đại Học Quốc Gia TP Hồ Chí Minh, Hồ Chí Minh, Việt Nam, 248-272 Ngơ Xn Bình, Bùi Bảo Hồn, Nguyễn Thị Thúy Hà (2003), Giáo trình cơng nghệ sinh học, Nxb Nơng Nghiệp, Hà Nội Nguyền thị Mỳ Duyên (2014), “Sự ảnh hưởng auxin cytokinin đến khả tạo nhân chồi Bình vơi (Stephania rotunda Lour.)”, Tạp chí khoa học, Quyến 2(1), 48-54 Nguyền Như Khanh, Nguyễn Văn Đính (2011), Giáo trình chất điều hịa sinh trưởng thực vật, Nxb Giáo dục Việt Nam 10 Nguyễn Thị Liễu, Nguyễn Trung Thành, Nguyễn Văn Ket (2011), “Nghiên cứu khả tạo rề bất đinh sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) nuôi cay in vitro”, tạp chí khoa học ĐHQGHN, Khoa học Tự nhiên Cơng nghệ 27: 30 -36 11 Trịnh Đình Đạt (2007), Công nghệ Sinh học - T4, Nxb Giáo dục 12 Trần Hùng Ngô Vân Thu, “Khảo sát mang tên Bình Vơi ”, Tạp chí Dươẹ hoc , Tâp 26, số 1, 1986, 6-8 13 Trần Hùng Ngô Vân Thu , “Bqớc đầu nghiên cớ| u Bình Vơi Biển”, Thơng tin Dươẹ hoc , số 5, 1988, 65 - 67 14 Trần Thị Lệ, Trương Thị Bích Phượng, Trần Thị Triêu Hà (2008), Giáo trình Cơng nghệ sinh học thực vật, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 15 Trần Văn Minh, 2013 Công nghệ sinh học thực vật Giáo trình cao học - nghiên cứu sinh Trường Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh, 751 trang PHỤ LỤC XỬ LÝ SÓ LIỆU BV1 CHIEU CAO Class T The ANOVA Procedure Class Level Information Levels Values VI V2 V3 V4 V5 V6 V7 Number of observations 21 BV1 CHIEU CAO The ANOVA Procedure Dependent Variable: N > Mean Square F Value Pr F Model < 0001 Error Corrected Total 14 R-Square 0.835219 Source > Sum of Squares DF Source 11.86232381 1.97705397 2.34033333 0.16716667 20 14.20265714 Coeff Var Root MSE N Mean 5.156795 0.408860 7.928571 DF Anova ss Mean Square F Value 11.83 Pr F T < 0001 11.86232381 1.97705397 BV1 CHIEU CAO The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for N Alpha0.01 Error Degrees of Freedom 14 Error Mean Square 0.167167 Critical Value of t 2.97684 Least Significant Difference 0.9938 t Grouping T Mean N A 9.0900 V3 A A B 8.5500 V5 B A A B 8.4533 V4 B B c 7.7033 V6 B c B c 7.6367 V2 c c c c 7.3533 V7 6.7133 VI BV1 SO RE The ANOVA Procedure Class Level Information 11.83 Class T Levels Values VI V2 V3 V4 V5 V6 V7 Number of observations 21 BV1 SO RE The ANOVA Procedure Sum of Squares DF Source Mean Square F Value Pr > F Model 42.03836190 7.00639365 103.33 F T 42.03836190 7.00639365 103.33 F Model 17329.38840 2888.23140 F Model 3.10990667 0.77747667 12.08 0.0008 10 14 Error Corrected Total R-Square 0.828548 Source 0.64353333 0.06435333 3.75344000 Coeff Var Root MSE N Mean 2.806811 0.253680 9.038000 DF Anova ss Mean Square F Value Pr > F T 3.10990667 0.77747667 0.0008 BV2 CHIEU CAO The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for N Alpha Error Degrees of Freedom Error Mean Square 0.01 10 0.064353 12.08 Critical Value of t Least Significant Difference t Grouping N Mean A 9.6133 A A 9.5600 B 8.7700 B B 8.7167 B B 8.5300 3.16927 0.6564 T V4 V3 V5 V2 VI BV2 SO RE The ANOVA Procedure Class Level Information Class T Levels Values VI V2 V3 V4 V5 Number of observations 15 BV2 SO RE The ANOVA Procedure Sum of Squares DF Source Mean Square F Value Pr > F Model 3.47642667 0.86910667 15.91 0.0002 Error Corrected Total 10 14 R-Square 0.864204 Source 0.54626667 0.05462667 4.02269333 Coeff Var Root MSE N Mean 4.537733 0.233723 5.150667 DF Anova ss Mean Square F Value Pr > F T 3.47642667 0.86910667 0.0002 BV2 SO RE The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for N Alpha 0.01 Error Degrees of Freedom 10 Error Mean Square 0.054627 Critical Value of t 3.16927 Least Significant Difference 0.6048 t Grouping Mean N T A V4 5.6233 A A 5.4900 V5 A A 5.4833 V3 B 4.7433 V2 B B 4.4133 VI 15.91 BV2 TY LE RE The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels Values T VI V2 V3 V4 V5 Number of observations 15 BV2 TY LE RE The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for N Alpha Error Degrees of Freedom Error Mean Square Critical Value of t Least Significant Difference t Grouping A A A A A B B B Class T Source 0.01 10 5.91408 3.16927 6.293 Mean 100.000 N T V5 100.000 V4 100.000 91.110 3 V3 V2 88.890 VI BV3 Chieu cao The ANOVA Procedure Class Level Information Levels Values VI V2 V3 V4 V5 V6 V7 Number of observations 21 BV3 Chieu cao The ANOVA Procedure Sum of DF Squares Mean Square F Value Pr > F Model 3.59478095 0.59913016 3.94 0.0162 14 20 Error Corrected Total R-Square 0.627955 Source 2.12980000 0.15212857 5.72458095 Coeff Var Root MSE N Mean 4.122594 0.390037 9.460952 DF Anova ss Mean Square F Value Pr > F T 3.59478095 0.0162 The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for N 0.59913016 3.94 Alpha 0.01 14 Error Degrees of Freedom Error Mean Square 0.152129 2.97684 Critical Value of t Least Significant Difference 0.948 T t Grouping Mean N A 10.1033 V4 A A 10.0333 V3 A B A 9.5233 V7 B A B A 9.2733 V2 B A B A 9.2200 V6 B B 9.0567 V5 B B 9.0167 VI Class T BV3 so re The ANOVA Procedure Class Level Information Levels Values VI V2 V3 V4 V5 V6 V7 Number of observations 21 BV3 so re The ANOVA Procedure Sum of DF Squares Mean Square Source F Value Pr > F Model 2.78912381 0.46485397 4.03 0.0149 14 20 Error Corrected Total R-Square 0.633193 Source 1.61573333 0.11540952 4.40485714 Coeff Var Root MSE N Mean 6.387425 0.339720 5.318571 DF Anova ss Mean Square F Value Pr > F T 2.78912381 0.46485397 0.0149 BV3 so re The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for N Alpha 0.01 Error Degrees of Freedom 14 Error Mean Square 0.11541 Critical Value of t 2.97684 Least Significant Difference 0.8257 4.03 t Grouping A A B A B A B A c B A c B A c B c B c B c B c c c Source Mean 5.9233 N T V4 5.8300 V3 5.2633 V2 5.1667 V7 5.0333 V6 5.0200 VI 4.9933 V5 BV4 CHIEU CAO The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels Values T VI V2 V3 V4 Number of observations 12 BV4 CHIEU CAO The ANOVA Procedure Sum of DF Squares Mean Square F Value Pr > F Model 2.17240833 6.51722500 43.49 F T 2.17240833 6.51722500 F Model 1.41842500 0.47280833 4.91 0.0320 Error Corrected Total 11 R-Square 0.647892 Source 0.77086667 0.09635833 2.18929167 Coeff Var Root MSE N Mean 7.129180 0.310416 4.354167 DF Anova ss Mean Square F Value Pr > F T 0.47280833 1.41842500 4.91 0.0320 BV4 SO LA The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for N Alpha 0.01 Error Degrees of Freedom Error Mean Square 096358 Critical Value of t 35539 0.8504 Least Significant Difference T t Grouping Mean N A 4.6867 V4 A B A 4.6133 V3 B A B A 4.3033 V2 B B 3.8133 VI BV4 TY LE SONG The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels Values T Source VI V2 V3 V4 Number of observations 12 BV4 TY LE SONG The ANOVA Procedure Sum of DF Squares Mean Square F Value Pr > F Model 2674.695492 891.565164 0.0001 11 Error Corrected Total R-Square 247.012400 2921.707892 Coeff Var Root MSE 30.876550 N Mean 28.88 0.915456 Source 8.109456 5.556667 68.52083 DF Anova ss Mean Square F Value Pr > F T 2674.695492 891.565164 0.0001 BV4 TY LE SONG The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for N Alpha 0.01 Error Degrees of Freedom Error Mean Square 30.87655 Critical Value of t 3.35539 Least Significant Difference 15.223 t Grouping Mean N T A V4 85.187 A A 81.483 V3 B 55.560 V2 B B 51.853 VI 28.88 PHỤ LỤC 2: MINH CHỨNG ĐI KÈM CÂY BÌNH VƠI QUY TRÌNH NI CẤY TẠO RỄ ỈN VITRO VÀ CHUN CÂY BÌNH VƠI RA VƯỜN ƯƠM MƠ TẢ QUY TRÌNH Tạo rễ Choi Bình vơi vơ trùng cắt thành đoạn có chiều dài - cm, có Sau đó, cấy vào bình mơi trường MS có bo sung NAA (1 mg/1) + IB A (0,5 mg/1) + sucrose (30 g/1) + than (1 g/1) + BI (10 mg/1) agar (g/1) (5 chồi/bình) Theo dõi sinh trưởng phát triển mẫu nuôi cấy, sau rễ phát triển hoàn chỉnh tiến hành hóa chuyển vườn ươm Tập thích nghi Choi Bình vơi sau 45 ngày ni cấy mơi trường tạo hồn chỉnh, thân rễ phát trien tốt sè chuyển từ phịng ni sang khu vực ni có ánh sáng nhiệt độ tự nhiên nuôi 15-20 ngày trước Uơm Giá thể ươm cầy phối trộn theo tỷ lệ mụn dừa 90% phân bị khơ 10% Cây sau thích nghi tốt với ánh sáng nhiệt độ tự nhiên sè lấy khỏi môi trường nuôi cấy, rửa agar, phun thuốc nấm tiến hành cấy vào bầu giá the chuẩn bị sằn Điều kiện ươm cây: trồng nơi có ánh sáng nhẹ, thoáng mát, độ ấm cao ... trồng bình vơi hồn tồn cần thiết Xuất phát từ lý nhân thấy cần thiết phải thực đề tài ? ?Nghiên cứu hồn thiện quy trình ni cấy tạo rễ in vitro chuyển Bình vôi (Stephania glabra (Roxb.) Miers) vườn ươm. .. đến quá trình ni cấy tạo rề Bình Vơi trình tạo rễ Bình Vơi in vitro in vitro - Cơng việc 1.3: Khảo sát ảnh Mơi trường thích họp cho q trình hưởng thành phần hữu đến ni cấy tạo bình vơi in vitro. .. nghiệp sinh viên Hướng dần 01 sinh viên ngành công đại học nghệ sinh học làm khóa luận tốt nghiệp (báo cáo tốt nghiệp vào tháng 4/2020) 01 Quy trình ni cấy tạo rễ in Quy trình ni cấy tạo rễ in vitro