Nghiên cứu tuyển chọn một số chủng vi khuẩn bacillus có hoạt tính enzyme proteaza kiềm

Đề tài: " Nghiên cứu tuyển chọn số chủng vi khuẩn Bacillus có hoạt tính enzyme proteaza kiềm" LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com i LỜI CẢM ƠN Sau gần tháng thực tập phòng Vi sinh vật – Viện Sinh học Nông Nghiệp, trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội, hướng dẫn PGS – TS Lương Đức Phẩm nên tơi hồn thành luận văn Qua xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS – TS Lương Đức Phẩm người định hướng nghiên cứu, quan tâm tận tình bảo cho tơi suốt q trình thực tập, anh chị phịng Vi sinh vật, người tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành tốt nhiệm vụ Tơi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo trường Đại học Nha Trang, toàn thể thầy cô giáo Viện Công nghệ sinh học tận tình bảo truyền đạt kiến thức quý báu cho năm học vừa qua Tôi xin chân thành cảm ơn anh, chị công tác Viện Sinh học Nông Nghiệp, trường Đại học Nông Nghiệp Hà Nội bạn thực tập giúp đỡ suốt thời gian thực tập Cuối xin gửi lời cảm ơn tới gia đình tồn thể bạn bè thân thiết, người động viên, giúp đỡ suốt thời gian học tập, nghiên cứu Hà Nội, tháng – 2009 Sinh viên Nguyễn Thị Phương Như LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ii MỤC LỤC Trang Phần I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đại cương Bacillus .4 1.2 Protease 10 1.2.1 Tính chất, đặc điểm protease 10 1.2.2 Ứng dụng protease 12 1.2.3 Tình hình nghiên cứu ứng dụng protease sản xuất Việt Nam 15 Phần II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Đối tượng – Vật liệu .17 2.1.1 Đối tượng 17 2.1.2 Vật liệu 17 2.1.2.1.Thiết bị 17 2.1.3 Môi trường nuôi cấy vi sinh vật 18 2.1.3.1 Môi trường NA (dùng để phân lập, giữ giống nuôi cấy) (g/l): 18 2.1.3.2 Môi trường thử hoạt tính amylase, protease 18 2.1.3.3 Cách chuẩn bị môi trường 19 2.2 Các phương pháp nghiên cứu 19 2.2.1 Phương pháp phân lập 19 2.2.2 Phương pháp giữ giống cấy chuyển 19 2.2.3 Một số phương pháp nghiên cứu đặc điểm sinh học vi khuẩn .20 2.2.3.1 Phương pháp quan sát đặc điểm khuẩn lạc 20 2.2.3.2 Phương pháp làm tiêu tế bào sống .20 2.2.3.3 Phương pháp nhuộm Gram .21 2.2.3.4 Phương pháp xác định hình thành bào tử .22 2.2.4 Phương pháp xác định hoạt tính Catalase 22 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com iii 2.2.5 Xác định mật độ tế bào phương pháp đo mật độ quang (OD620nm ) .22 2.2.6 Nghiên cứu khả thủy phân tinh bột, protein 23 2.2.7 Nghiên cứu ảnh hưởng nguồn nguyên liệu khác lên khả sinh trưởng sinh tổng hợp enzyme chủng Bs, Bm, BM 24 2.2.8 Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ oxy hòa tan lên khả sinh trưởng chủng Bs, Bm, BM .25 Phần III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 26 3.1 Phân lập chủng Bacillus 27 3.2 Đặc điểm hình thái khuẩn lạc .27 3.3 Đặc điểm hình thái tế bào 28 3.4 Nghiên cứu hoạt tính Catalase .30 3.5 Nghiên cứu khả sinh enzym thuỷ phân tinh bột, protein ba chủng Bs, Bm BM 31 3.6 Nghiên cứu trình sinh trưởng chủng Bs, Bm BM mơi trường khơng có chất cảm ứng 33 3.7 Nghiên cứu trình sinh trưởng sinh enzmy amylaza chủng vi khuẩn Bs, Bm BM mơi trường có chất cảm ứng tinh bột tan 34 3.7.1 Nghiên cứu trình sinh trưởng chủng vi khuẩn Bs, Bm BM môi trường có chất cảm ứng tinh bột tan 34 3.7.2 Nghiên cứu trình sinh enzyme chủng vi khuẩn Bs, Bm BM mơi trường có chất cảm ứng tinh bột tan 35 3.8 Nghiên cứu trình sinh trưởng sinh enzmy proteaza chủng vi khuẩn Bs, Bm BM mơi trường có chất cảm ứng cazein .37 3.8.1 Nghiên cứu trình sinh trưởng chủng vi khuẩn Bs, Bm BM mơi trường có chất cảm ứng cazein 37 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com iv 3.8.2 Nghiên cứu trình sinh enzyme proteaza chủng vi khuẩn Bs, Bm BM mơi trường có chất cảm ứng cazein 39 3.9 Nghiên cứu trình sinh trưởng sinh enzyme chủng Bs, Bm, BM mơi trường có bổ sung CaCO3 41 3.9.1 Nghiên cứu nuôi vi khuẩn mơi trường có CaCO3 thu amylaza 41 3.9.2 Nghiên cứu nuôi vi khuẩn môi trường có CaCO3 thu proteaza 44 3.10 Ảnh hưởng nồng độ oxy hòa tan .47 3.11 Nghiên cứu ảnh hưởng pH tới sinh trưởng phát triển ba chủng nghiên cứu 50 3.12 Nghiên cứu sử dụng bột đậu tương làm nguồn nguyên liệu thay 51 3.13 Nghiên cứu đồ thị tổng hợp động học trình lên men 54 Phần IV KẾT LUẬN .56 TÀI LIỆU THAM KHẢO .58 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com v DANH MỤC HÌNH Trang Hình 1: Phân lập khuẩn lạc chủng Bs 27 Hình 2: Phân lập khuẩn lạc chủng Bm 28 Hình 3: Phân lập khuẩn lạc chủng BM .28 Hình 4: Hình thái tế bào chủng Bs 29 Hình 5: Hình thái tế bào chủng BM .29 Hình 6: Hình thái tế bào chủng Bm 30 Hình 7: Thử hoạt tính phân giải protease amylase chủng Bs, Bm BM 32 Hình 8: Hoạt tính enzyme amylase chủng Bs mơi trường có chất cảm ứng tinh bột tan 36 Hình 9: Hoạt tính enzyme amylase chủng Bm mơi trường có chất cảm ứng tinh bột tan 36 Hình 10: Hoạt tính enzyme amylase chủng BM mơi trường có chất cảm ứng tinh bột tan 37 Hình 11: Hoạt tính enzyme proteaza chủng Bs mơi trường có chất cảm ứng cazein 39 Hình 12: Hoạt tính enzyme proteaza chủng Bm mơi trường có chất cảm ứng cazein 40 Hình 13: Hoạt tính enzyme proteaza chủng BM mơi trường có chất cảm ứng cazein 40 Hình 14: Ảnh hưởng CaCO3 đến sinh enzyme mơi trường có tinh bột tan chủng Bs 42 Hình 15: Ảnh hưởng CaCO3 đến sinh enzyme mơi trường có tinh bột tan chủng Bm 42 Hình 16: Ảnh hưởng CaCO3 đến sinh enzyme mơi trường có tinh bột tan chủng BM 43 Hình 17: Ảnh hưởng CaCO3 đến sinh enzyme mơi trường có cazein chủng Bs 44 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com vi Hình 18: Ảnh hưởng CaCO3 đến sinh enzyme mơi trường có cazein chủng Bm 45 Hình 19: Ảnh hưởng CaCO3 đến sinh enzyme môi trường có cazein chủng BM 45 Hình 20: Ảnh hưởng độ hiếu khí lên hoạt tính enzyme amylaza chủng Bs, Bm BM mơi trường có bổ sung CaCO3 .49 Hình 21: Ảnh hưởng độ hiếu khí lên hoạt tính enzyme proteaza chủng Bs, Bm BM mơi trường có bổ sung CaCO3 .50 Hình 22: Ảnh hưởng pH đến sinh trưởng phát triển chủng Bs, Bm BM .51 Hình 23: Đồ thị biến đổi pH, hoạt độ enzyme proteaza mật độ tế bào Bs mơi trường bột đậu tương có CaCO3 55 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com vii DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 3.1: Đường kính phân giải enzym chủng sinh ra: .31 Bảng 3.2: Sự sinh trưởng chủng Bs, Bm, BM mơi trường khơng có chất cảm ứng .33 Bảng 3.3 Sự sinh trưởng chủng Bs mơi trường có tinh bột tan 34 Bảng 3.4 Sự sinh trưởng chủng Bm môi trường có tinh bột tan 34 Bảng 3.5 Sự sinh trưởng chủng BM mơi trường có tinh bột tan 35 Bảng 3.6 Sự sinh trưởng chủng Bs mơi trường có cazein 38 Bảng 3.7 Sự sinh trưởng chủng Bm môi trường có cazein 38 Bảng 3.8 Sự sinh trưởng chủng BM mơi trường có cazein 38 Bảng 3.9: Ảnh hưởng CaCO3 đến sinh trưởng mơi 43 trường có tinh bột chủng Bs, Bm BM 43 Bảng 3.10: Ảnh hưởng CaCO3 đến sinh trưởng mơi trường có cazein chủng Bs, Bm BM .46 Bảng 3.11: Ảnh hưởng độ hiếu khí lên khả sinh trưởng chủng Bs, Bm, BM 48 Bảng 3.12: Ảnh hưởng độ hiếu khí tới khả sinh trưởng chủng Bs, Bm, BM mơi trường có bổ sung CaCO3 .48 Bảng 3.13: Ảnh hưởng bột đậu tương lên khả sinh proteaza, amylaza ba chủng Bs, Bm, BM 52 Bảng 3.14: Ảnh hưởng nồng độ CaCO3 đến khả sinh amylaza, proteaza mơi trường có bột đậu tương 53 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com MỞ ĐẦU Vi sinh vật tự nhiên phong phú đa dạng Chúng xung quanh ta: đất, nước, khơng khí chí thể người Chúng gây cho ta bất lợi khôn lường bệnh lao, dịch hạch, dịch tả, đại dịch cúm người gia cầm, lở mồm, long móng bị lợn chúng đem lại cho nguồn lợi vô to lớn ta biết, hiểu chúng biết sử dụng chúng vào mục đích giúp cho sống người tốt đẹp Từ thời xa xưa, người biết ứng dụng hoạt tính có lợi vi sinh vật phục vụ cho đời sống tạo loại rượu quý nhờ trình lên men vi sinh vật, thuốc chữa bệnh từ vi sinh vật Ngày sống kỷ 21, kỷ khoa học kỹ thuật cơng nghệ sinh học đặc biệt công nghệ vi sinh chứng tỏ ưu Hiện có nhiều chất có hoạt tính sinh học khác tổng hợp từ vi sinh vật đưa vào sản xuất mức độ công nghiệp để phục vụ cho nghiên cứu, công - nông nghiệp, y học đời sống người Các chủng vi khuẩn như: Bacillus, Lactobacillus… sử dụng chế phẩm sinh học để phục vụ cho ngành sản xuất như: rượu, bia, công nghiệp dệt, thuộc da, y học, bổ sung vào thức ăn gia súc, thức ăn nuôi trồng thủy sản, phân hủy thức ăn thừa tôm, phế thải hữu làm môi trường nuôi trồng thủy sản nhờ khả sinh enzyme thủy phân amylaza, proteaza, xenlulaza chúng LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Xuất phát từ thực tế chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài: ”Nghiên cứu tuyển chọn số chủng vi khuẩn Bacillus có hoạt tính enzyme proteaza kiềm” Với nội dung sau: Phân lập từ đất vườn qua trung gian cỏ khô khoai tây để chọn chủng Bacillus Nghiên cứu đặc điểm hình thái tế bào khuẩn lạc, nghiên cứu số đặc điểm sinh lý, sinh hóa chủng tuyển chọn Nghiên cứu điều kiện nuôi cấy để thu sinh khối có hoạt tính cao Đề tài thực phòng Vi sinh vật Viện Sinh học Nông nghiệp thuộc trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 50 Hình 21: Ảnh hưởng độ hiếu khí lên hoạt tính enzyme proteaza chủng Bs, Bm BM mơi trường có bổ sung CaCO3 Từ hai hình 3.20 3.21 chúng tơi nhận thấy hoạt tính enzyme thể cao độ hiếu khí lớn Vậy độ hiếu khí thích hợp để ni cấy chủng 10 – 20% 3.11 Nghiên cứu ảnh hưởng pH tới sinh trưởng phát triển ba chủng nghiên cứu Ba chủng vi khuẩn Bs, Bm BM sau 24 nhân giống môi trường sở đươc cấy vào mơi trường có pH thay đổi 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 với tốc độ lắc 125 vòng/phút nhiệt độ phòng Sau 36 kiểm tra đánh giá khả phát triển chúng cách đo OD620nm Kết thu h́nh sau: LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 51 Hình 22: Ảnh hưởng pH đến sinh trưởng phát triển chủng Bs, Bm BM Từ hình 22 cho thấy pH dao động từ – chủng phát triển yếu: OD620nm thấp, đạt 0,34 Bm; 0,41 chủng Bs 0,45 chủng BM Khi pH tăng từ – đặc biệt khoảng – chủng bắt đầu phát triển mạnh, mật độ tế bào đạt giá trị cao pH = với OD620nm 0,80 0,81 chủng Bs BM, pH = OD620nm 0,80 chủng Bm Ba chủng phát triển có phần ổn đinh pH = 9, tới 10 yếu dần OD620nm dao động từ 0,41 tới 0,47 Như pH ban đầu thích hợp cho sinh trưởng phát triển ba chủng từ – 3.12 Nghiên cứu sử dụng bột đậu tương làm nguồn nguyên liệu thay  Từ môi trường sở bổ sung bột đậu tương nồng độ: 1, 2, 3, 4% cấy 1-2% chủng vi khuẩn đưa lắc vận tốc 125 vòng/phút, nhiệt độ phòng, với thời gian 36 Tiến hành đục lỗ LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 52 thạch quan sát đo vòng phân giải hai enzyme thu kết sau: Bảng 3.13: Ảnh hưởng bột đậu tương lên khả sinh proteaza, amylaza ba chủng Bs, Bm, BM Chủng vi khuẩn Bs Bm BM Nồng độ bột đậu tương (%) Hoạt tính enzyme (D-d)mm Proteaza Amylaza 21,5 13 20 13 26 14 21 13,5 6 16 12 11 13 12 14 8,5 10 7,5 Từ bảng nhận thấy nồng độ bột đậu tương mà chủng nghiên cứu cho hoạt tính enzyme cao 3% tức 30 g/lít mơi trường  Trên môi trường sở thay glucose bột đậu tương 3% sau đo cho thêm CaCO3 nồng độ khác nhau: 1, 2, 4% làm chất điều chỉnh pH Giống tiếp với tỉ lệ 1-2%, đưa lắc 125 vòng/phút 36 Sau tiến hành đục lỗ thạch quan sát đo vịng phân giải hai enzyme chúng tơi thu kết sau: LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 53 Bảng 3.14: Ảnh hưởng nồng độ CaCO3 đến khả sinh amylaza, proteaza mơi trường có bột đậu tương Chủng vi khuẩn Bs Bm BM Nồng độ CaCO3 (%) Hoạt tính enzyme (D-d)mm Protease Amylase 26 14 18 16 26 15 25 19 20 14 16 12 18 10 18 10 22 14 11 11 14 8,5 23 25 21 12 18 7,5 Qua bảng 3.13 3.14 nhận thấy nồng độ CaCO3 2% thích hợp cho sinh proteaza chủng Bs BM, nồng độ CaCO3 3% thích hợp cho sinh trưởng chủng Bm Hoạt tính amylaza đạt cực đại nồng độ CaCO3 3% chủng Bs, Bm BM Hoạt tính enzyme thể cao môi trường có bột đậu tương Tuy CaCO3 nồng độ cao ức chế trình sinh enzyme chủng Cũng qua bảng nhận thấy chủng vi khuẩn Bs có hoạt tính mạnh nhất, thích hợp với bột đậu tương LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 54 Bột đậu tương có hàm lượng protein chiếm khoảng 30 – 35% có khoảng 40% tinh bột Vì bột đậu tương đóng vai trị chất cảm ứng hai enzyme amylaza proteaza Kết thí nghiệm cho thấy mơi trường có bột đậu tương sinh trưởng biểu hoạt tính enzyme amylaza proteaza lớn Nuôi Bs, Bm BM môi trường (thành phần cho lít mơi trường) thu hai enzyme amylaza proteaza Trong thực tế sản xuất cơng nghiệp dùng bột đậu tương làm nguồn nguyên liệu để sản xuất enzyme Bột đậu tương 30 g Peptone 5g Cao men 2,5 g CaCO3 2% pH = – 3.13 Nghiên cứu đồ thị tổng hợp động học trình lên men Từ nghiên cứu trên, tổng hợp sinh trưởng, sinh enzyme proteaza thay đổi pH chủng Bs mơi trường bột đậu tương có bổ sung CaCO3 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 55 Enzyme OD (mm) 620nm 30 2.0 8.0 1.9 7.8 1.8 7.6 1.7 7.4 1.6 7.2 1.5 7.0 1.4 6.8 1.3 6.6 1.2 6.4 1.1 6.2 1.0 6.0 25 20 15 10 pH Sau 24h sau 30h sau 36h : Hoạt tính enzyme ( D- d) mm : Sự sinh trưởng OD620nm : pH Hình 23: Đồ thị biến đổi pH, hoạt độ enzyme proteaza mật độ tế bào Bs mơi trường bột đậu tương có CaCO3 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 56 Phần IV KẾT LUẬN LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 57 Qua thời gian thực tập tốt nghiệp, hoàn thành nội dung đề tài giao Kết cụ thể sau: Từ đất vườn phân lập qua trung gian cỏ khô khoai tây phân lập khuẩn lạc có hoạt tính enzyme amylase protease Nghiên cứu hình thái tế bào, khuẩn lạc vài đặc điểm sinh học thấy chủng là: + Trực khuẩn, sinh bào tử, Gram dương, hiếu khí, nhiệt độ thích hợp cho sinh trưởng sinh enzyme ngoại bào 25 – 370C Chủng Bs – trực khuẩn cỏ khô Bacillus subtilis Chủng Bm – trực khuẩn cỏ khơ Bacillus megaterium Chủng BM –trực khuẩn khoai tây Bacillus mensentericus Nghiên cứu nuôi cấy chủng với chất cảm ứng khác thấy: - Tinh bột bột đậu tương chất cảm ứng cho chủng sinh amylase - Cazein bột đậu tương chất cảm ứng cho chủng sinh protease Trong môi trường có bổ sung CaCO3 thấy khả sinh protease chủng cao so với không bổ sung CaCO3 Như CaCO3 đóng vai trị điều chỉnh pH môi trường - Protease thu chủng Bs, Bm BM thấy hoạt động vùng pH kiềm (9 -11) Với kết thu hoàn toàn làm sở cho việc nghiên cứu sâu phân loại sinh tổng hợp enzyme ba chủng để áp dụng vào sản xuất enzyme, sản xuất bột giặt, thủy phân bột cá, công nghiệp dày da hay bảo vệ môi trường LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO  Tài liệu Tiếng Việt Nguyễn Thành Đạt, thực hành vi sinh, 1990, NXB Nông Nghiệp 2.Lương Đức Phẩm Chế phẩm sinh học dung chăn nuôi nuôi trồng thủy sản, 2007 NXB Nông nghiệp 3.Nguyễn Lân Dũng (Dịch) Thực hành vi sinh vật học, 1983 NXB Đại Học trung học chuyên nghiệp, Hà Nội 4.Nguyễn Văn Mùi, Thực hành hóa sinh học, NXB Khoa học kỹ thuật, 2001] 5.Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty, Vi sinh vật học, NXB Giáo Dục, 2000 Lê Ngọc Tú, Lê Văn Chứ, Phạm Trân Châu Châu, Nguyễn Lân Dũng, enzyme vi sinh vật, NXB Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội 7.Nguyễn Trọng Cẩn ( chủ biên), Nguyễn Thị Hiền, Đỗ Thị Giang, Trần Thị Luyến, Công nghệ enzyme, NXB Nông nghiệp – Thành phố Hồ Chí Minh, 1998] Lê Ngọc Tú (chủ biên), Lê Văn Chứ, Đặng Thị Thu, Nguyễn Thị Thịnh, Bùi Đức Hợi, Lưu Duẩn, Lê Dỗn Diên, Hóa sinh công nghiệp, NXB Khoa học Kỹ thuật Hà Nội, 2002 Lương Đức Phẩm, Công nghệ vi sinh vật, NXB Nông nghiệp  Tài liệu tiếng Anh 10 Priest, F.G and Grigorova, R (1991) Method for studying the ecology of endospore – forming bacteria Method in microbiology 22, 565 – 591 Todar , K Ph D (2008) Bacillus and related endospore – forming bacteria Todar’s online textbook ò bacteriology LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 59 11 Rosovitz, M J., Voskuil, M I., Chambliss, G H (1998) Bacillus In: A Balows and B I Duerden (Eds), Systematic Bacteriology Arnold Press, London: 709 – 720 12 Schallemey, M., Singh, A and Ward, O P (2004) Developments in the use of Bacillus species for industrial production Can J Microbiol 50, 17  Trang web điện tử 13 http://en.wikipedia.org/wiki/Bacillus 14 www.epa.gov/opptintra/biotech/fra/fra009htm 15 http://cynosura.org/index.php) 16 http://vietsciences.org LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com PHỤ LỤC LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Hình thể hoạt tính amylase Bm môi trường bột đậu tương + CaCO3 36h Hình thể hoạt tính protease Bm môi trường bột đậu tương + CaCO3 36h LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Hình thể hoạt tính amylase BM mơi trường bột đậu tương + CaCO3 36h Hình thể hoạt tính protease BM mơi trường bột đậu tương + CaCO3 36h LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Hình thể hoạt tính amylase Bs môi trường bột đậu tương + CaCO3 36h Hình thể hoạt tính amylase Bs môi trường bột đậu tương + CaCO3 36h LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Hình giữ giống chủng Bs, Bm BM LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ... cứu tuyển chọn số chủng vi khuẩn Bacillus có hoạt tính enzyme proteaza kiềm? ?? Với nội dung sau: Phân lập từ đất vườn qua trung gian cỏ khô khoai tây để chọn chủng Bacillus Nghiên cứu đặc điểm hình... 3.7.2 Nghiên cứu trình sinh enzyme chủng vi khuẩn Bs, Bm BM mơi trường có chất cảm ứng tinh bột tan 35 3.8 Nghiên cứu trình sinh trưởng sinh enzmy proteaza chủng vi khuẩn Bs, Bm BM môi trường có. .. hình thái tế bào khuẩn lạc, nghiên cứu số đặc điểm sinh lý, sinh hóa chủng tuyển chọn Nghiên cứu điều kiện nuôi cấy để thu sinh khối có hoạt tính cao Đề tài thực phòng Vi sinh vật Vi? ??n Sinh học