HOÀN THIỆN PHƢƠNG PHÁP và NGHIÊN cứu đa DẠNG DI TRUYỀN của cây mắm BIỂN (avicennia marina) ở KHU dự TRỮ SINH QUYỂN RỪNG NGẬP mặn cần GIỜ BẰNG kỹ THUẬT RAPD

i BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC  KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP HỒN THIỆN PHƢƠNG PHÁP VÀ NGHIÊN CỨU ĐA DẠNG DI TRUYỀN CỦA CÂY MẮM BIỂN (Avicennia marina) Ở KHU DỰ TRỮ SINH QUYỂN RỪNG NGẬP MẶN CẦN GIỜ BẰNG KỸ THUẬT RAPD NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC NIÊN KHÓA: 2003 – 2007 SINH VIÊN THỰC HIỆN: LÊ ĐỨC TUÂN Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 09/2007 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ii BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC  KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP HỒN THIỆN PHƢƠNG PHÁP VÀ NGHIÊN CỨU ĐA DẠNG DI TRUYỀN CỦA CÂY MẮM BIỂN (Avicennia marina) Ở KHU DỰ TRỮ SINH QUYỂN RỪNG NGẬP MẶN CẦN GIỜ BẰNG KỸ THUẬT RAPD GIÁO VIÊN HƢỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN TS BÙI MINH TRÍ LÊ ĐỨC TUÂN Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 09/2007 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ii LỜI CẢM ƠN Con xin cảm ơn ba mẹ gia đình ni đến ngày khơn lớn cho ăn học thành tài Em xin chân thành cảm ơn: Các Thầy Cô trƣờng Đại học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh tận tình truyền đạt kiến thức cho em suốt năm học Ban chủ nhiệm Thầy Cô Bộ Môn Công Nghệ Sinh Học động viên, giúp đỡ em thời gian thực khóa luận Thầy Bùi Minh Trí, tận tình dẫn em suốt trình thực khóa luận Các anh chị Trung tâm Phân tích Thí nghiệm Hóa Sinh động viên, giúp đỡ em q trình thực khóa luận Ban quản lý Rừng phòng hộ Cần Giờ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình thu thập mẫu Anh Bình, anh Kiệt anh, chị phòng Kỹ thuật thuộc Ban quản lý Rừng phòng hộ Cần Giờ tận tình giúp đỡ em trình thu thập mẫu Xin cám ơn bạn lớp Công Nghệ Sinh Học 29 chia sẻ niềm vui, nỗi buồn suốt năm đại học Xin chân thành cảm ơn! LÊ ĐỨC TUÂN LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com iii TÓM TẮT LÊ ĐỨC TUÂN, Đại Học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh Tháng 8/2007 “HỒN THIỆN PHƢƠNG PHÁP VÀ NGHIÊN CỨU SỰ ĐA DẠNG DI TRUYỀN CỦA CÂY MẮM BIỂN (Avicennia marina) Ở KHU DỰ TRỮ SINH QUYỂN RỪNG NGẬP MẶN CẦN GIỜ BẰNG KỸ THUẬT RAPD” Hội đồng hƣớng dẫn: TS BÙI MINH TRÍ Cây mắm biển (Avicennia marina) loài thực vật đặc trƣng sinh sống rừng ngập mặn đem lại giá trị kinh tế môi trƣờng cao.Tuy nhiên, thập niên trở lại lồi mắm biển có dấu hiệu lụi tàn Vì việc xây dựng chiến lƣợc phát triển lâu dài đem lại hiệu kinh tế môi trƣờng cao, vấn đề đánh giá tổng quát quỹ gene mức độ đa dạng quần thể mắm khu dự trữ sinh rừng ngập mặn Cần Giờ, TP Hồ Chí Minh đƣợc xem việc làm cấp thiết Sau thời gian thực tập Viện Nghiên cứu CNSH CNMT, Đại học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh, chúng tơi đạt đƣợc kết quả: - Thu thập đƣợc 52 mẫu mắm với đặc điểm hình thái khác - Xác định điều kiện tối ƣu để bảo quản mẫu mắm - Hồn thiện quy trình ly trích DNA từ mắm, ly trích tốt 47/52 mẫu - Bƣớc đầu xây dựng quy trình RAPD phù hợp cho mắm Qua thử nghiệm ba primer: primer primer RAH8 primer OPAC10 thấy primer OPAC10 cho sản phẩm thể đa dạng di truyền cao - Kết chạy RAPD với primer cho band đồng hình kích thƣớc 400 bp cho ba lồi mắm, giúp xác định đƣợc marker thị cho loài mắm (Avicenniaceae) - Kết chạy RAPD với primer OPAC10 cho trung bình band/mẫu Số lƣợng band/mẫu khơng cao nhƣng lại thể rõ đa hình mẫu Chúng LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com iv tơi thu đƣợc band đa hình chiếm tỷ lệ 90% band đồng hình chiếm tỷ lệ 10% Kết phân tích phần mềm NTSYS (Numercial Taxonomy System) phiên 2.1, mẫu mắm đƣợc khảo sát đƣợc chia làm nhóm với khoảng cách phân nhóm 0,40 Nhóm gồm mẫu: M8, M18, M25, M40 Các có hệ số đồng dạng di truyền cao từ 0,67 – 1,00 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com v MỤC LỤC Chƣơng Trang Trang tựa ii Lời cảm ơn iii Tóm tắt iv Mục lục v Danh sách chữ viết tắt viii Danh sách hình ix Dang sách bảng x Chƣơng LỜI MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích, yêu cầu 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu 1.2.3 Hạn chế đề tài Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Một số khái niệm đa dạng sinh học 2.1.1 Đa dạng sinh học 2.1.2 Đa dạng di truyền 2.1.3 Ý nghĩa việc nghiên cứu đa dạng di truyền 2.2 Giới thiệu khu dự trữ sinh rừng ngập mặn Cần Giờ 2.2.1 Khu dự trữ sinh rừng ngập mặn Cần Giờ 2.2.2 Cấu trúc khu dự trữ rừng ngập măn Cần Giờ 2.2.3 Công tác quản lý khu dự trữ sinh rừng ngập mặn Cần Giờ 2.3 Cây mắm biển 11 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com vi 2.3.1 Hình thái học 11 2.3.2 Nơi sống sinh thái 12 2.3.3 Phân bố 12 2.3.2 Quy trình ly trích DNA thực vật 13 2.4.1 Định lƣợng DNA phƣơng pháp quang phổ 14 2.4.2 Định tính DNA ly trích phƣơng pháp điện di 15 2.5 Các kỹ thuật đánh giá tính đa dạng di truyền 16 2.5.1 Giới thiệu chung tính đa dạng di truyền thị phân tử 16 2.5.1.1 Chỉ thị hình thái 17 2.5.1.2 Chỉ thị isozyme 17 2.5.1.3 Chỉ thị phân tử – thị DNA 18 2.5.2 Kỹ thuật PCR 18 2.5.2.1 Nguyên lý kỹ thuật PCR 18 2.5.2.2 Quy trình chuẩn phản ứng PCR 19 2.5.2.3 Tối ƣu hoá phản ứng PCR 21 2.5.3 Kỹ Thuật RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphisms) 22 2.5.4 Kỹ thuật RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) 22 2.5.4.1 Ƣu điểm kỹ thuật RAPD 25 2.5.4.2 Nhƣợc điểm kỹ thuật RAPD 25 2.5.4.3 Ứng dụng kỹ thuật RAPD 25 Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP TIẾN HÀNH 27 3.1 Thời gian địa điểm thực 27 3.1.1 Thời gian nghiên cứu 27 3.1.2 Địa điểm thực 27 3.2 Vật liệu thí nghiệm 27 3.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 27 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com vii 3.3.1 Vật liệu dùng ly trích DNA 27 3.3.2 Quy trình ly trích DNA 31 3.3.3 Kiểm tra kết ly trích DNA 33 3.3.4 Thực kỹ thuật RAPD 34 3.3.4.1 Dụng cụ hóa chất dung kỹ thuật RAPD 34 3.3.4.2 Bố trí thí nghiệm 35 3.4 Phân tích kết phần mềm NTSYS 38 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 40 4.1 Kết thu thập mẫu mắm rừng ngập mặn Cần Giờ 40 4.2 Bảo quản mẫu hồn thiện quy trình ly trích DNA 41 4.2.1 Bảo quản mẫu 41 4.2.2 Hồn thiện quy trình ly trích 41 4.3 Kết chạy RAPD 43 4.3.1 Thí nghiệm 1: Sử dụng primer RAH8 với chu kỳ nhiệt 43 4.3.2 Thí nghiệm 2: Sử dụng primer với chu kỳ Bảng 44 4.3.3 Thí nghiiệm 45 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 48 5.1.1 Kết luận 48 5.1.2 Đề nghị 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO 50 PHỤ LỤC 52 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com viii DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT bp: Base pair CNMT: Công Nghệ Môi Trƣờng CNSH: Công Nghệ Sinh Học DNA: Deoxyribonucleic acid dNTP: Deoxynucleotide triphosphate E: East EDTA: Ethylene diaminetetra acetic acid EtBt: Ethidium bromide N: North OD: Optical density PCR: Polymerase chain reaction RAPD: Random Amplified Polymorphism DNA RNA: Ribonucleic acid RNase: Ribonuclease Ta: Annealing temperature Tm: Melting temperature TE: Tris EDTA TAE: Tris Glacial Acetic Acid EDTA UNESCO: United Nations Educational Scientific, and Cultural Organization UV: Ultra Violet LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ix DANH SÁCH CÁC HÌNH HÌNH TRANG Hình 2.1: Bản đồ khu dự trữ sinh rừng ngập mặn Cần Giờ Hình 2.2: Cấu trúc cành, trái Mắm 11 Hình 2.3: Nguyên lý phản ứng PCR 21 Hình 2.4: Ngun lý phân tích thị RAPD nghiên cứu đa dạng di truyền 25 Hình 4.1: Trái mắm biển(A); Hoa(B) 41 Hình 4.2: Vị trí lấy mẫu đồ Cần Giờ 42 Hình 4.3: Kết ly trích theo quy trình 44 Hình 4.4: Sản phẩm DNA ly trích theo quy trình cải tiến (quy trình 2) 44 Hình 4.5: Kết PCR thí nghiệm 45 Hình 4.6: Sản phẩm PCR thí nghiệm 46 Hình 4.7: Sản phẩm PCR thí nghiệm 47 Hình 4.8 : Cây phân nhóm số mắm biển khu dự trữ sinh rừng Cần Giờ 48 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 45 Ở thí nghiệm 2, thực phản ứng PCR cho mẫu với khác đƣng, cóc trắng, đƣớc đôi, mắm đen, mắm biển mắm trắng, mẫu đƣợc chạy chu kỳ nồng độ giống Kết điện di cho thấy, mẫu: mắm đen; mắm biển mắm trắng cho band đồng hình có kích thƣớc khoảng 400 bp Do có band đồng hình nên kết thí nghiệm khơng có ý nghĩa việc nghiên cứu đa dạng di truyền Tuy nhiên band 400 bp band đặc trƣng cho họ mắm (Avicenniaceae) marker để phân biệt lồi mắm với lồi khác Do nên tách band để giải trình tự nhằm phục vụ cho công tác nghiên cứu đặc thù mắm rừng Cần Giờ 4.3.3 Thí nghiệm 3: Sử dụng primer OPAC10 với chu kỳ nhiệt bảng 3.5 Qua thí nghiệm 3, chúng tơi thu đƣợc kết hình 4.6 Kết điện di PCR tốt, cho độ đa hình cao Chúng tơi thực chạy RAPD với primer OPAC10 mẫu kết thu đƣợc trung bình band/mẫu Số lƣợng band/mẫu khơng cao nhƣng lại thể rõ LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 46 đa hình mẫu Chúng tơi thu đƣợc band đa hình chiếm tỷ lệ 90 % band đồng hình chiếm tỷ lệ 10 % (kích thƣớc cụ thể khơng xác định), kích cỡ band khoảng từ 300 bp – 1200 bp (hình 4.8) Band đồng hình có mặt tất mẫu cịn band đa hình có mẫu nhƣng khơng có mẫu Các band đa hình sở phân biệt mẫu có tính trạng khác từ làm tảng để phân chia xác định giống Tiểu khu 18 Tiểu khu 18 Tiểu khu 21 Tiểu khu 17 Hình 4.8 : Cây phân nhóm số mắm biển rừng Cần Giờ Từ kết thu đƣợc gel điện di chúng tơi mã hóa thành dạng nhị phân để phân tích mối tƣơng quan di truyền mẫu nghiên cứu phần mềm NTSYS phiên 2.1 Việc phân tích kết PCR phần mềm NTSYS cho kết nhƣ sau:  Năm mẫu mắm đƣợc khảo sát đƣợc chia làm nhóm với khoảng cách phân nhóm 0,40 Nhóm I gồm mẫu: M8, M18, M25, M40 Các có hệ số đồng dạng di truyền cao từ 0,67 – 1,00  Nhận xét M1, dựa vào phân sinh chúng tơi thấy M1 có LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 47 khác biệt mặt di truyền so Để giải thích khác biệt này, chúng tơi trở lại nguồn gốc M1 giống tái sinh tự nhiên, qua qúa trình hỗn giao điều kiện môi trƣờng làm cho M1 thay đổi tính trạng đột biến Điểm đặc biệt giống M1 sống bờ biển có số thay đổi mặt di truyền  Riêng M18 M40, sinh sống tiểu khu đƣợc trồng thời điểm thấy khác biệt mặt di truyền Càng sau hệ số đồng dạng di truyền mắm biển tăng Do đó, cần trồng xen giống mắm tiểu khu khác nhằm tạo đƣợc đa dạng sinh học cần thiết để tái tạo rừng  Giữa M8, M25 M40 có hệ số đồng dạng di truyền thấp dao động từ 0,9 đến 1,0 Hiện khó xác định đƣợc nguồn gốc này, nhiên, xét mặt vị trí địa lý M8 đƣợc trồng tiểu khu 18, M18 M40 đƣợc trồng tiểu khu 21  M25 giống đƣợc tái sinh tự nhiên sống chung với quần thể Mắm trắng, Mắm đen, có số biến đổi mặt hình thái  M1, M8, M18, M25, M40 có hệ số đồng dạng di truyền từ 0,4 đến 1,00 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 48 Chƣơng 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.2 Kết luận Từ kết thu đƣợc, rút số kết luận nhƣ sau:  Sử dụng mắm non để ly trích thu đƣợc lƣợng DNA mẫu tốt  Mẫu vừa nghiền xong nên ủ với dịch trích EB  Quy trình ly trích DNA mắm ổn định Ly trích đƣợc 47 mẫu (trên tổng số 52 mẫu) đạt DNA tiêu chuẩn dùng kỹ thuật sinh học phân tử  Quá trình bảo quản DNA mẫu quan trọng Một số mẫu DNA đƣợc ly trích bị dần lƣợng DNA bảo quản 4oC  Quy trình RAPD tƣơng đối hoàn thiện  Sử dụng primer OPAC10 cho số band khuyếch đại cao  Primer OPAC10 dùng kỹ thuật RAPD cho 10 band mẫu thí nghiệm, có band đồng hình band đa hình Primer OPAC10 có tính đa hình quần thể mắm biển (Avicennia marina) khu dự trữ sinh rừng ngập mặn Cần Giờ Độ đa hình dạng mẫu thấp ngoại trừ mẫu M1 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 49  Primer dùng kỹ thuật RAPD cho band đồng hình Primer dùng để làm marker thị phát giống mắm (Avicenniaceae) với giống khác rừng Cần  Với việc phân tích RAPD sử dụng primer OPAC10 quần thể mắm khu dự trữ sinh rừng ngập mặn Cần Giờ có hệ số đồng dạng di truyền phát sinh chủng loại dao động khoảng 0,40 – 1,00 5.3 Đề nghị  Tối ƣu hóa quy trình RAPD mắm biển  Tiếp tục sử dụng primer OPAC10 để đánh giá tính đa dạng di truyền với lƣợng mẫu lớn quần thể mắm  Khảo sát thêm primer khác nhằm có đƣợc kết đa dạng di truyền xác  Phải có sách làm giàu nguồn tài nguyên di truyền, nâng cao tính đa dạng bảo đảm phát triển bền vững khu dự trữ sinh rừng ngập mặn Cần Giờ nói chung quần thể mắm biển (Avicennia marina) nói riêng  Nghiên cứu thêm mắm biển có hình thái khác lạ khu dự trữ sinh rừng ngập mặn Cần Giờ LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT: Phạm Văn Bình, 2005 Đánh giá sơ mức độ đa dạng di truyền quần thể điều (Acanardium occidentale L.) trồng tỉnh Ninh Thuận kỹ thuật RAPD AFLP Khóa luận tốt nghiệp kỹ sƣ Công Nghệ Sinh Học Đại học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh Bùi Chí Bửu Nguyễn Thị Lang, 1999 Di truyền phân tử Nhà xuất Nông Nghiệp Phạm Thành Hổ, 1998 Di truyền học Nhà xuất Giáo Dục Tp HCM 612 trang Lê Văn Khôi ctv., 2006 Khôi phục phát triển hệ sinh thái rừng ngập mặn Cần Giờ Thành Phố Hồ Chí Minh Nhà xuất Nơng Nghiệp Nguyễn Thị Lang, 2002 Phương pháp nghiên cứu công nghệ sinh học Nhà xuất Nông Nghiệp Nguyễn Thị Lang Bùi Chí Bửu, 2005 Sinh học phân tử giới thiệu phương pháp ứng dụng Nhà xuất Nông Nghiệp LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 51 Lê Đình Lƣơng, 2001 Nguyên lý kỹ thuật di truyền Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật Lâm Vỹ Nguyên, 2006 Nghiên cứu đa dạng di truyền đôi (Rhizophora apiculata Blume) khu dự trữ sinh rừng ngập mặn Cần Giờ kỹ thuật RAPD Khóa luận tốt nghiệp kỹ sƣ Công Nghệ Sinh Học Đại học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh Richard B Primack, 1999 Cơ sở sinh học bảo tồn Nhà xuất Khoa Học Kỹ Thuật 10 Nguyễn Đức Thành, 2004 Một số kỹ thuật thị phân tử Nhà xuất Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam – Viện Công Nghệ Sinh Học Hà Nội 11 Lê Duy Thành, 2000 Cơ sở di truyền chọn giống thực vật Nhà xuất khoa học kỹ thuật, Hà Nội, trang 139 – 154 12 Nguyễn Văn Uyển Nguyễn Tiến Thắng, 2000 Những kiến thức Công nghệ sinh học Nhà xuất Giáo Dục Tp HCM 244 trang TÀI LIỆU NƢỚC NGOÀI: 13 Akira Komiyama, 1998 Mortality and growth of cut pieces of viviparous mangrove (Rhizophora apiculata and R mucronata) seedlings in the field condition Forest Ecology and Management, 112: 227 – 231 14 Brown T A., 1997 Gene cloning an introduction Third edition UMIST, Manchester, UK Chapman and Hall 334 pages 15 Mukkamala L., 2002 Molecular phylogeny of mangroves IX molecular marker assisted intra-specific variation and species relationships in the Indian mangrove tribe Rhizophoreae Aquatic Botany, 74: 201 – 217 16 Tanksley S D., Ahn N., Cause M., Coffman R., Fulton T., McCouch S R., Sencond G., Tai T., Wang Z., Wu K., Yu Z 1991 RFLP mapping of rice genome Rice genetic, 2: 435 - 449 Intenational Rice Research Institute TÀI LIỆU TỪ INTERNET: LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 52 17.http://www.hochiminhcity.gov.vn/home/left/gioi_thieu/gioi_thieu_chung/ton g_quan/ 18 http://www.nea.gov.vn/SachdoVietNam/LoaiCTTV.aspx?id=548 19 http://www.dulichvn.org.vn/thongtinquanly/dautudulich/kdl_cangio.htm 20 http://www.clst.ac.vn/AP/tapchitrongnuoc/hdkh/2000/so02/6.htm 21 http://vi.wikipedia.org/wiki/M%E1%BA%AFm_(c%C3%A2y) 22.http://www.mekonginfo.org/mrc_en/contact.nsf/0/8902a71a698a3de1802566 860066e546/ LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 53 PHỤ LỤC TÊN MẪU TIỂU KHU TỌA ĐỘ PHÚT GIÂY ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI 18 N 100 26’ 47.2’’ E 1060 54’ 20.7’’ Cây mọc tốt, nhiều nhánh 18 N 100 26’ 47.4’’ E 1060 54’ 22.5’’ Cây thấp, bị sâu ăn AM3 18 N 100 26’ 47.4’’ E 1060 54’ 43.0’’ Cây trung bình, gốc bi sạt lỡ AM4 18 N 100 26’ 43.7’’ E 1060 54’ 49.1’’ Cao m, nhiều nhánh 18 N 100 26’ 33.2’’ E 1060 55’ 15.2’’ Cây cao m, thân yếu ớt 18 N 100 26’ 33.5’’ E 1060 55’ 50.0’’ Cây mọc khỏe, nhiều nhánh 18 N 100 28’ 36.5’’ E 1060 55’ 53.4’’ Cao m, nhiều nhánh, xanh tốt, có hoa trái 18 N 100 28’ 30.5’’ E 1060 55’ 31.9’’ Cao 3m, thân yếu ớt,lá bị sâu ăn AM9 18 N 100 28’ 52.7’’ E 1060 54’ 57.4’’ Cao 6m, nhiều nhánh AM10 17 N 100 23’ 45.0’’ E 1060 54’ 48.4’’ Cây mọc yếu, thân bị mối ăn 17 N 100 24’ 11.8’’ E 1060 53’ 59.8’’ Cao m, thân bị mối ăn 17 N 100 25’ 28.1’’ E 1060 53’ 32.7’’ Cao 6m, bị sâu ăn AM13 17 N 100 26’ 33.6’’ E 1060 53’ 17.2’’ Cây mọc tốt, nhiều nhánh AM14 17 N 100 24’ 27.9’’ Cao 7m, gốc bị sạt lỡ AM1 AM2 AM5 AM6 AM7 AM8 AM11 AM12 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 54 E 1060 53’ 53.2’’ AM15 21 N 100 25’ 26.5’’ E 1060 53’ 33.2’’ AM16 21 N 100 26’ 02.7’’ E 1060 53’ 15.2’’ 21 N 100 26’ 45.1’’ E 1060 53’ 17.8’’ AM17 Cây cao, xanh tốt, có hoa trái Cây mọc yếu ớt Cây phát triển kém, bị cháy LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 55 Thống kê trạng rừng – đất 24 tiểu khu thuộc Khu Bảo tồn thiên nhiên rừng ngập mặn Cần Giờ Tiểu Rừng Rừng tự Đất Đất Tổng diện khu trồng (ha) nhiên (ha) trống khác tích (ha) 890,41 309,14 29,65 1.229,20 1.236,41 355,04 232,16 1.857,64 719,09 449,85 81,22 1.250,16 1.200,39 369,20 34,14 137,50 1.741,23 772,17 252,15 21,21 99,42 1.144,95 980,40 397,79 29,45 125,25 1.532,89 624,71 230,83 265,68 1.121,22 960,49 133,17 157,84 268,72 1.520,22 923,34 440,43 86,06 129,97 1.579,80 10 1.236,58 298,89 5,63 62,53 1.603,63 11 667,28 314,47 5,55 249,52 1.236,82 12 775,53 141,59 261,52 1.178,64 13 898,42 243,55 373,61 1.515,58 14 740,17 299,43 486,33 1.525,93 15 1.024,04 539,97 212,09 414,16 2.190,26 16 782,36 325,82 13,80 492,33 1.614,31 17 1.252,85 569,35 172,77 1.994,97 18 746,54 468,82 466,85 1.682,21 19 518,49 354,16 421,15 1.293,80 34,03 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 56 20 762,90 618,33 80,04 448,73 1.910,00 21 722,62 322,85 5,90 778,16 1.829,53 22 300,83 246,09 2,80 229,93 779,65 23 1.434,00 416,86 1.093,18 2.944,04 24 1.257,42 860,28 57,56 212,04 3.387,30 Tổng 21.427,44 8.958,06 746,10 7.532,38 38.663,98 (Nguồn: Ban quản lý Khu Bảo tồn thiên nhiên rừng ngập mặn Cần Giờ) LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 57 Bảng ma trận tương đồng số mắm biển ỏ rừng Cần Giờ M1 M8 M18 M25 M40 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 58 Mẫu OD260nm OD280nm OD260nm/OD280nm Nồng độ DNA Bảng mã hóa số di truyền mẫu chạy RAPD primer OPAC10 M1 M8 M18 M25 M1 1,00 M8 0,30 1,00 M18 0,40 0,90 1,00 M25 0,50 0,60 0,70 1,00 M40 0,40 0,90 1,00 0,70 M40 1,00 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 59 AM1 0.091194 0.052121 1.749659 385.9747 AM2 0.021316 0.012636 1.686926 88.58804 AM3 0.071687 0.042125 1.701769 299.2612 AM4 0.033725 0.022381 1.506858 131.5587 AM5 0.04484 0.019294 2.324039 212.5852 AM6 0.03186 0.015387 2.070579 145.0062 AM7 0.0408 0.020084 2.031463 184.329 AM8 0.0846 0.043811 1.931022 374.4144 AM9 0.099372 0.055977 1.775229 423.5327 AM10 0.087193 0.048581 1.794796 373.5524 AM11 0.080778 0.041681 1.938005 358.042 AM12 0.054111 0.028858 1.875078 236.4694 AM13 0.060632 0.043957 1.379348 223.1301 AM14 0.028961 0.017237 1.680165 120.1115 AM15 0.032535 0.022489 1.446707 123.6848 AM16 0.032067 0.019065 1.681983 133.0674 AM17 0.054854 0.038525 1.423855 206.3417 AM18 0.036523 0.024599 1.484735 141.1733 AM19 0.037981 0.022475 1.689922 157.9905 AM20 0.024727 0.013502 1.831358 106.9256 AM21 0.048591 0.025885 1.877188 212.4514 AM25 0.09906 0.055315 1.790834 423.9534 AM26 0.030023 0.014881 2.017539 135.2731 AM27 0.02886 0.015387 1.875609 126.1362 AM40 0.022709 0.011084 2.048809 102.9372 AM52 0.024727 0.013502 1.831358 106.9256 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ... Minh Tháng 8/2007 “HỒN THIỆN PHƢƠNG PHÁP VÀ NGHIÊN CỨU SỰ ĐA DẠNG DI TRUYỀN CỦA CÂY MẮM BIỂN (Avicennia marina) Ở KHU DỰ TRỮ SINH QUYỂN RỪNG NGẬP MẶN CẦN GIỜ BẰNG KỸ THUẬT RAPD? ?? Hội đồng hƣớng... mặn Cần Giờ 2.2.1 Khu dự trữ sinh rừng ngập mặn Cần Giờ 2.2.2 Cấu trúc khu dự trữ rừng ngập măn Cần Giờ 2.2.3 Công tác quản lý khu dự trữ sinh rừng ngập mặn Cần Giờ 2.3 Cây mắm biển. .. niệm đa dạng sinh học 2.1.1 Đa dạng sinh học 2.1.2 Đa dạng di truyền 2.1.3 Ý nghĩa việc nghiên cứu đa dạng di truyền 2.2 Giới thiệu khu dự trữ sinh rừng ngập mặn