Nghiên cứu đa dạng di truyền nguồn gen liên quan đến tính chịu mặn ở lúa việt nam

Tiểu luận ĐỀ TÀI: Nghiên cứu đa dạng di truyền nguồn gen liên quan đến tính chịu mặn lúa Việt Nam LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Nghiên cứu đa dạng di truyền nguồn gen liên quan đến tính chịu mặn lúa Việt Nam Lê Thị Thu Trang Trường Đại học Khoa hoc Tự nhiên; Khoa Sinh học Chuyên ngành: Di truyền học; Mã số: 60 42 70 Người hướng dẫn: TS Lã Tuấn Nghĩa Năm bảo vệ: 2011 Apstract Tổng quan giống lúa chịu mặn: Sự hình thành đặc tính đất mặn; Giới thiệu chung đặc điểm vùng lúa nhiễm mặn Việt Nam; Cơ sở di truyền tính chịu mặn lúa; Công tác chọn tạo giống lúa chịu mặn; Đa dạng di truyền; Chỉ thị đánh giá đa dạng di truyền; Thành tựu nghiên cứu đa dạng di truyền lúa Trình bày phương pháp nghiên cứu: Đánh giá khả chịu mặn giống/dòng lúa; Tách chiết ADN tổng số từ mẫu lúa; Nhận dạng di truyền giống/dòng lúa thị SSR; Phân tích số liệu Trình bày kết thảo luận: Kết đánh giá tính chịu mặn giống/dòng lúa; Kết tách chiết ADN tổng số; Kết phản ứng PCR phân tích đa hình gel polyacrylamide; Quan hệ di truyền liên quan đến tính chịu mặn giống/dòng lúa Keywords Di truyền học; Gen; Tính chịu mặn; Lúa; Việt Nam I MỞ ĐẦU Năng suất lúa thấp nguyên nhân mặn bất lợi đất tồn vùng ven biển Việt Nam Hơn thiếu khoáng chất độc tố muối đất ảnh hưởng lớn đến lúa, trồng chủ đạo nên nơng nghiệp nước ta (Hồng Ngọc Giao, 2006; Nguyễn Tuấn Hinh cs, 2006) Bên cạnh đó, tượng xâm thực nước biển vào nước tưới đất trồng lúa làm cho diện tích ngập mặn lên tới 200.000 (Nguyễn Ngọc Anh, 2005) Mặt khác tập quán nhu cầu mở rộng canh tác đổi ngành nghề ni trồng thuỷ sản vơ tình làm tăng thêm diện tích ngập mặn tăng thêm diện tích ngập mặn độ mặn tăng lên từ khoảng 0,3- 0,4% chí có nơi cao chục lần Nông dân thường chờ mưa để trồng lúa Tuy nhiên lượng mưa thất thường, lúa bị mặn gây hại giai đoạn mạ, giai đoạn trỗ đến chín Từ trước đến nay, công tác chọn tạo giống LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com lúa nước ta có nhiều thành quả, song phương pháp chọn tạo chủ yếu truyền thống thông qua lai tạo đột biến thực nghiệm nên nhiều hạn chế ảnh hưởng không nhỏ đến kết chọn tạo Với phát triển công nghệ sinh học, nhiều vấn đề cịn tồn trước cơng tác chọn giống truyền thống giải Trong đó, ứng dụng thị phân tử RAPD, SSR, RFLP, AFLP nghiên cứu phát triển trở thành cơng cụ mạnh mẽ để phân tích đa dạng di truyền xác định khác biệt mặt di truyền quần thể giống khởi đầu, từ xác định cặp lai có khoảng cách di truyền phù hợp cho ưu lai cao Việc tiếp cận mức độ phân tử cho phép đánh giá giống bố mẹ cách xác, không bị tác động điều kiện ngoại cảnh, rút ngắn thời gian nâng cao hiệu công tác lai tạo Vì vậy, chúng tơi tiến hành thực đề tài: “Nghiên cứu đa dạng di truyền nguồn gen liên quan đến tính chịu mặn lúa Việt Nam” với mục tiêu xây dựng sở liệu ADN tính chịu mặn giống/dịng lúa nghiên cứu nhằm góp phần quan trọng cho việc khai thác nguồn gen chịu mặn định hướng cho chọn tạo giống lúa chịu mặn Việt Nam II VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 1.1 Vật liệu - Bộ giống lúa gồm 40 mẫu giống/dòng lúa thu thập từ ven biển phía Bắc, miền Trung Việt Nam lưu giữ Ngân hàng gen trồng Quốc Gia số giống từ Viện nghiên cứu lúa Quốc tế (IRRI) Bảng Danh sách 40 giống/dòng lúa nghiên cứu Tên giống TT Nguồn gốc TT Tên giống Nguồn gốc Ỏn Nam Định 21 Mành gié Nếp cúc Ninh Bình 22 IR28 Hom râu Thái Bình 23 Hom râu Bầu Hải Phòng Hải Phòng 24 CM6 Nước mặn Thừa Thiên- Huế 25 Q5 Trung Quốc Háu trắng Thừa Thiên- Huế 26 P4 Viện CLT-CTP Lúa ven dạng Quảng Bình 27 P6 Viện CLT-CTP Quảng Bình IRRI Thái Bình Viện Di truyền NN LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Tẻ chăm Quảng Bình 28 AC5 Viện CLT-CTP Quảng Trắng Quảng Trị 29 Nghi hương - 10 Ven đỏ Quảng Trị 30 Tám dự - 11 Nước mặn dạng Quảng Trị 31 Khang dân18 Trung Quốc 12 Chành trụi Thanh Hoá 32 Lúa su dạng Quảng Bình 13 Lúa đỏ Thừa Thiên- Huế 33 Cườm dạng Nam Định 14 Lúa chăm Nam Hà 34 Lúa chăm biển Ninh Bình 15 Pokkali IRRI 35 Ngoi tía Nam Định 16 Cườm dạng Nam Định 36 Ré trắng Hải Phòng 17 Chiêm rong Nam Định 37 IR352 18 Tám thơm Nam Định 38 Chiêm cũ Quảng Bình 19 Lúa ngoi Thanh Hố 20 Nếp quắn Hải Phòng 39 40 Tẻ tép Nếp chẩn Nam Định Nghệ An IRRI - Sử dụng 20 cặp mồi SSR để nhận dạng phân tích đa dạng di truyền mẫu giống/dòng lúa (bảng2) Bảng 2: Danh sách cặp mồi SSR sử dụng nghiên cứu TT Locut RM5926 RM1233 RM527 RM5963 RM140 RM493 RM3412 RM10745 RM237 Trình tự (f): ATATACTGTAGGTCCATCCA-5’ (r): AGATAGTATAGCGTAGCAGC-3’ (f): GTGTAAATCATGGGCACGTG-5’ (r): AGATTGGCTCCTGAAGAAGG-3’ (f): GGCTCGATCTAGAAAATCCG-5’ (r): TTGCACAGGTTGCGATAGAG-3’ (f): CGAAAAGTGGGAAGCAAATG-5’ (r): GCGTACCCCTAGTGGCTGTA-3’ (f): TGCCTCTTCCCTGGCTCCCCTG-5’ (r): GGCATGCCGAATGAAATGCATG-3’ (f): TAGCTCCAACAGGATCGACC-5’ (r): GTACGTAAACGCGGAAGGTG-3’ (f): AAAGCAGGTTTTCCTCCTCC-5’ (r): CCCATGTGCAATGTGTCTTC-3’ (f):TGACGAATTGACACACCGAGTACG-5’ (r): ACTTCACCGTCGGCAACATGG-3’ (f): CAAATCCCGACTGCTCC-5’ (r): TGGGAAGAGAGCACTACAGC-3’ Tm KTSP (oC) (bp) 55 176 55 161 55 233 55 196 55 261 55 211 55 211 55 188 55 130 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 10 RM201 11 RM214 12 RM231 13 RM206 14 RM223 15 RM202 16 RM339 17 RM518 18 RM261 19 RM208 20 RM235 (f): CTCGTTTATTACCTACAGTACC-5’ (r): CTACCTCCTTTCTAGACCGATA-3’ (f): CTGATGATAGAAACCTCTTCTC-5’ (r): AAGAACAGCTGACTTCACAA-3’ (f): CCAGATTATTTCCTGAGGTC-5’ (r): CACTTGCATAGTTCTGCATTG-3’ (f): CCCATGCGTTTAACTATTCT-5’ (r): CGTTCCATCGATCCGTATGG-3’ (f): GAGTGAGCTTGGGCTGAAAC-5’ (r): GAAGGCAAGTCTTGGCACTG-3’ (f): CAGATTGGAGATGAAGTCCTCC-5’ (r): CCAGCAAGCATGTCAATGTA-3’ (f): GTAATCGATGCTGTGGGAAG-5’ (r): GAGTCATGTGATAGCCGATATG-3’ (f): CTCTTCACTCACTCACCATGG-5’ (r): ATCCATCTGGAGCAAGCAAC-3’ (f): CTACTTCTCCCCTTGTGTCG-5’ (r): TGTACCATCGCCAAATCTCC-3’ (f):TCTGCAAGCCTTGTCTGATG-5’ (r):TAAGTCGATCATTGTGTGGACC-3’ (f): AGAAGCTAGGGCTAACGAAC-5’ (r):TCACCTGGTCAGCCTCTTTC-3’ 55 158 55 112 55 182 55 147 55 165 55 189 55 148 55 171 55 125 55 173 55 124 1.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 1.2.1 Đánh giá khả chịu mặn giống/dòng lúa điều kiện phịng thí nghiệm Hạt lúa nảy mầm đặt vào xốp có đan lưới, đặt lọt khít vào bên chậu nhựa hình chữ nhật có chứa 10 lít nước Mỗi xốp gồm 20 ô, giống gieo 1ô, ô 20 hạt Sau 48 giờ, nước chậu thay dung dịch dinh dưỡng Yoshida có muối NaCl với nồng độ 0.3% 0.8% Dung dịch dinh dưỡng Yoshida thay ngày/lần điều chỉnh pH hàng ngày độ pH= 5.0 cách bổ sung thêm NaOH HCl Đánh giá mức độ chịu mặn ngày, 14 ngày 21 ngày sau gieo hạt theo tiêu chuẩn đánh giá SES (Standar Evaluating Score) IRRI, 1997 (bảng 1) để phân biệt từ mẫn cảm đến kháng, sở quan sát mắt với hai giống đối chứng Pokkali (giống chuẩn kháng) IR28 (giống chuẩn nhiễm) 1.2.2 Đánh giá khả chịu mặn giống/dòng lúa điều kiện nhà lƣới LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Thiết kế khay trồng lúa có kích thước 15 x 30 x 50cm Đất không bị nhiễm mặn phơi khô, băm nhuyễn vào khay dày khoảng 10cm (tương đương thể tích khoảng 0,015m3/khay) Hạt lúa nảy mầm gieo thành hàng (10hạt/hàng, hàng/giống) khay tưới nước ẩm cho hạt tiếp tục phát triển ngày đầu Thí nghiệm bố trí hồn tồn ngẫu nhiên, lần lặp lại với nghiệm thức: 0; 0.3%, 0.6 % muối NaCl (EC= 0; 6; 12dS/m) Đánh giá mức độ chống chịu mặn sau 10 ngày, 16 ngày 22 ngày sau xử lý mặn theo tiêu chuẩn đánh giá SES IRRI, 1997 (bảng 1) Bảng Tiêu chuẩn đánh giá (SES) giai đoạn tăng trưởng phát triển Điểm Quan sát Mức chống chịu Tăng trưởng bình thường, khơng có vết cháy Chống chịu tốt Tăng trưởng gần bình thường, đầu vài Chống chịu có vết trắng, cuộn lại Tăng trưởng chậm lại, hầu hết bị cuộn, có vái Chống chịu trung cịn mọc dài ra, bình Tăng trưởng bị ngưng hồn tồn, hầu hết bị khơ, Nhiễm mặn vài chồi bị chết Tất bị chết khô Rất nhiễm mặn 1.2.3 Tách chiết ADN tổng số từ mẫu lúa Tách chiết ADN lúa dung dịch đệm chứa CTAB dựa quy trình chuẩn Saghai Maroof (1994) 1.2.3 Nhận dạng di truyền giống/dòng lúa thị SSR 40 giống/dòng lúa nhận dạng di truyền 20 thị SSR Phản ứng PCR chuẩn bị bao gồm thành phần: 2µl Buffer 10X; 1,2µl MgCl2 (25mM); 1µl dNTP(2,5mM); 0,1µl Taq DNA polymerase (5U); 1µl primer forward (20pmol/µl), µl primer reverse (20pmol/µl)), 2µl ADN khn (20ng/µl) tổng thể tích phản ứng 20µl Chu kỳ nhân gen thiết kế sau: 94ºC phút; (94ºC phút, 56ºC 45 giây, 72ºC phút) lặp lại 35 lần; 72ºC phút; 4ºC 30 phút Sản phẩm PCR điện di gel polyacrylamid 12%, môi LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com trường đệm TAE 1X, 70V 20 phút Sau điện di, gel nhuộm dung dịch Ethidium bromide soi chụp ảnh máy soi UV Transiluminator 1.2.4 Phân tích số liệu Phân tích thống kê số tiêu sinh trưởng tiến hành đánh giá mặn mẫu giống/dòng lúa phần mềm IRRISTAR 5.0 Dữ liệu kiểu gen xử lý, phân tích phần mềm NTSYS pc 2.11X (Applied Biosatistics); số đánh giá đa dạng di truyền, tần số alen quần thể xử lý phần mềm POPGENEv1.32 III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 2.1 Kết đánh giá tính chịu mặn giống/dòng lúa 2.1.1 Kết đánh giá khả chịu mặn giống/dòng lúa điều kiện phịng thí nghiệm 2.1.1.1 Thời gian sống sót Kết ghi nhận thời gian sống sót giống/dịng lúa lọc mặn môi trường EC=16dS/m cho thấy khác biệt có ý nghĩa thống kê Thời gian sống sót lâu giống đối chứng Pokkali (21ngày) có giống lúa, Chành trụi (26 ngày), Nếp cúc (25 ngày) Có giống/dịng có thời gian sống sót tương đương với Pokkali (20-21 ngày) Hom râu 1, Bầu Hải Phòng, Cườm dạng 2, Hom râu 2, CM6, Cườm dạng Có giống có thời gian sống sót gần Pokkali (1519ngày) Ỏn, Nước mặn, Quảng trắng, Lúa ngoi, Mành gié, Lúa su dạng Lúa chăm biển, Ngoi tía, Chiêm cũ Các giống cịn lại có thời gian sống sót thấp, gồm 22 giống chiếm 55% Giống chuẩn nhiễm IR28 sống sót ngày môi trường muối 16dS/m Ghi nhận từ kết thực nghiệm thấy nồng độ muối cao thời gian sống sót giống/dịng lúa thấp ngược lại Ở môi trường EC= 0dS/m, 100% giống/dịng lúa sống sót sau 35 ngày, mơi trường dinh dưỡng có NaCl với EC=6dS/m, thời gian sống sót trung bình giống/dịng lúa 29.6 ngày mơi trường dinh dưỡng có NaCl với EC=16dS/m, thời gian sống sót trung bình giống/dòng 14.5 ngày 2.1.1.2 Chiều cao thân LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Kết phân tích phương sai cho thấy nồng độ muối khác dẫn đến chiều cao thân khác có ý nghĩa thống kê Ở mơi trường dinh dưỡng Yoshida có muối với nồng độ 0.3% (EC=6dS/m), kết ghi nhận cho thấy đa số giống có chiều cao khoảng 22- 26cm Chiều cao trung bình giống/dòng lúa 24.41cm Giống Cườm dạng có chiều cao thân cao (28.23cm) giống có chiều cao thân thấp IR28 (19.40cm) Ở mơi trường dinh dưỡng có muối với nồng độ 0.8% (EC= 16dS/m), đa số giống/dịng lúa thí nghiệm có chiều cao khoảng 17-21cm Chiều cao trung bình 19.64cm Các giống có chiều cao vượt trội, cao hẳn giống đối chứng Pokkali (21.67cm) có ý nghĩa khác biệt phân tích thống kê Tẻ chăm, Chành trụi, Cườm dạng 2, Lúa ngoi, Hom râu 2, Cườm dạng 1, Lúa chăm biển, Ré trắng Các dòng có chiều cao tương đương giống đối chứng Pokkali (khơng khác mặt thống kê) Quảng trắng, Lúa đỏ, Nghi hương, Chiêm cũ Có giống/dịng (Lúa ven dạng 1, Nước mặn dạng 1, Ngoi tía, IR352) có chiều cao thân khá, cao chiều cao thân trung bình Như vậy, chiều cao khả chịu mặn tỷ lệ nghịch với Nồng độ muối cao chiều cao giảm 2.1.1.3 Chiều dài rễ Chiều dài rễ trung bình 40 giống/dịng lúa mơi trường dinh dưỡng có muối với nồng độ 0.8% (EC=16dS/m) 8.37cm Giống đối chứng Pokkali có chiều dài rễ 9.77cm, có giống/dịng có chiều dài tương đương với giống đối chứng (khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê) Nếp cúc, Nước mặn dạng 1, CM6, Q5, Cườm dạng 1, Ngoi tía, ngồi giống Ỏn, Bầu Hải Phòng, Nước mặn, Lúa chăm biển, Hom râu 2, Tám dự, Lúa chăm biển, Ré trắng, Tẻ tép, Nếp chẩn có chiều dài rễ Tuy nhiên, dung dịch Yoshida có muối với nồng độ thấp (EC=6dS/m), giống/dịng lúa có chiều dài rễ trung bình 11.76cm Trong đó, Hom râu có chiều dài rễ dài 14.49cm giống có chiều dài rễ thấp Quảng trắng (9.76cm), giống Pokkali có chiều dài rễ tương đối cao 13.13cm 2.1.1.4 Trọng lượng khơ thân Khi phân tích phương sai kết ghi nhận trọng lượng khô thân giống nghiên cứu hai môi trường muối khác cho thấy khác biệt có ý nghĩa thống LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com kê Trọng lượng khơ thân trung bình giống/ dịng lúa đạt 116.22mg mơi trường dinh dưỡng có muối với độ dẫn điện EC=6dS/m Ghi nhận kết trọng lượng khơ thân 40 giống/dịng lúa thí nghiệm mơi trường có độ dẫn điện EC=16dS/m cho thấy, trọng lượng trung bình đạt 93.63 mg Giống chuẩn kháng Pokkali giống có trọng lượng thân cao (131.45mg), khác biệt có ý nghĩa với giống chuẩn nhiễm IR28 có trọng lượng khơ thân 59.34mg Một số giống có trọng lượng khơ thân tương đối cao, gần băng Pokkali Chiêm rong, Chành trụi, Ven đỏ, Nếp cúc 2.1.1.5 Trọng lượng khô rễ Kết ghi nhận trọng lượng khơ rễ giống/dịng lúa thí nghiệm cho thấy khác biệt phân tích thống kê Ở mơi trường dinh dưỡng có muối với EC=16dS/m, giống có trọng lượng khơ rễ trung bình 27.03 mg Giống Pokkali (chuẩn kháng) có trọng lượng khơ rễ cao (39.14mg), khác biệt có ý nghĩa với giống/dịng lúa cịn lại thí nghiệm, có giống Chành trụi có trọng lượng khơ rễ cao giống đối chứng 40.33mg Có giống Lúa su dạng 1, CM6, Lúa ven dạng có trọng lượng khô rễ tương đối cao, gần giống Pokkali Giống chuẩn nhiễm IR28 có trọng lượng khơ rễ 25.75mg giống có trọng lượng khơ rễ trung bình Hai giống Nếp quấn, Ven đỏ có trọng lượng khô rễ thấp 20,06mg Ghi nhận kết mơi trường dinh dưỡng có NaCl 0.3 đa số giống/dịng lúa có trọng lượng khơ rễ từ 26-31mg có trọng lượng khơ rễ trung bình đạt 29.56 mg 2.1.2.6 Đánh giá mức độ chống chịu mặn Kết ban đầu cho thấy, mạ môi trường dinh dưỡng có muối NaCl với nồng độ 6dS/m, sau ngày xử lý mặn có giống Khang dân AC5 ảnh hưởng cấp độ 3, đến 14 ngày sau xử lý mặn mạ bị ảnh hưởng chủ yếu cấp 3-5; sau 21 ngày đa số giống/dòng lúa bị ảnh hưởng chủ yếu cấp 5-7, giống/dòng lúa bị chết (cấp 9) chiếm 10% Khang dân, AC5, Q5, Ven đỏ Ở mơi trường trường dinh dưỡng có muối NaCl với độ dẫn điện EC=16dS/m, sau ngày xử lý mặn giống chuẩn nhiễm IR28 có biểu cấp 7, giống Pokkali có biểu cấp 3, đa số giống/dòng lúa khác bị nhiễm cấp 5-7 Vào 14 ngày sau xử lý mặn giống IR28 bị nhiễm cấp (chết), giống Pokkali biểu cấp với 13 giống/dịng lúa có biểu tương đương Nước mặn, Lúa su LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com dạng 1, Lúa ven, Quảng trắng, Hom râu 1, Hom râu 2, Cườm dạng 1, Chiêm rong, Lúa chăm biển, Mành ré, Chiêm cũ, Bầu Hải Phòng, Ỏn giống/dòng lúa sống sau 21 ngày xử lý mặn Ỏn, Bầu Hải Phòng, Lúa ven dạng 1, Pokkali, Mành gié, Hom râu 2, Lúa su dạng 1, Cườm dạng 1, Chiêm cũ giống lại vài bị nhiễm cấp 7(chiếm 22.5%), có Chành trụi, Cườm dạng 2, Nếp cúc nhẹ hơn, cấp (chiếm 7.5%) Hình 1: Đồ thị biểu diễn tỷ lệ % mức chống chịu mặn 40 giống/dòng lúa nghiên cứu dung dịch Yoshida có NaCl với EC=6dS/m EC=16dS/m Mạ sau 21 ngày xử lý mặn (EC=6dS/m) Mạ sau 21 ngày xử lý mặn (EC=6dS/m) Mạ sau 17 ngày xử lý mặn (EC=0dS/m) Mạ sau 17 ngày xử lý mặn (EC=16dS/m) Hình 2: Thí nghiệm lọc mặn giống/dịng lúa nghiên cứu điều kiện phịng thí nghiệm LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Thống kê 20 locut SSR, sản phẩm PCR băng có kích thước nằm khoảng từ 110-300bp, kích thước phổ biến alen thu giống lúa nghiên cứu biến thiên khoảng 120- 250bp Hình 8: Biến động kích thước alen locut SSR khảo sát Thống kê kết nhân gen 40 giống/dòng lúa 20 thị SSR thể hình Tổng số alen phát 20 locut 144 Số alen đa hình locut biến động từ đến 11, đạt trung bình 7,2 alen/locut Số lượng alen nhiều 11 (RM235), đạt 10 alen (RM140, RM201, RM493, RM1233) alen 9(RM202) Locut cho đa hình (3alen) RM5963 Bằng phần mềm POPGENE 3.1, tần số alen locut tính tốn dựa số liệu nhận dạng di truyền 40 giống/dòng lúa sở để xác định số đa dạng di truyền Trong số 20 thị SSR, có 12 thị cho nhận dạng đặc biệt (unique allele) Các băng kích thước nằm khoảng 100-250bp Tần số allen phổ biến dao động từ 15.79 % đến 85%, trung bình 40.07% (bảng 2) Hệ số đa dạng di truyền PIC (Polymorphism Information Content) coi thước đo tính đa hình alen locut SSR Số liệu bảng cho thấy giống/dòng lúa nghiên cứu đa dạng thành phần alen locut nghiên cứu Hệ số PIC thu locut SSR biến động từ 0,265 (locut RM5926) đến 0.889 (locut RM235) với giá trị trung bình 0.713, cho thấy mức độ đa dạng gen tồn 40 mẫu lúa nghiên cứu mức cao 13 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Hình 9: Kết phản ứng PCR 40 giống/dòng lúa với 20 cặp mồi SSR (ơ đen- có alen ghi nhận; ô trắng – alen ghi nhận) 14 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Bảng 2: Đa hình locut SSR giống lúa nghiên cứu TT Locut NST Sớ allen Kích thƣớc sản phẩm PCR (bp) Tầ n số allen Số allen phổ biế n đặc trƣng nhấ t PIC RM201 10 135-168 28.205 0.828 RM202 11 140-210 30.000 0.835 RM206 11 125-150 30.769 0.785 RM237 110-140 48.718 0.709 RM493 10 200-275 34.211 0.821 RM10745 170-200 33.333 0.750 RM214 110-150 65.000 0.549 RM3412 180-240 20.000 0.828 RM231 120-200 23.077 0.855 10 RM339 140-190 43.243 0.706 11 RM518 135-180 34.286 0.805 12 RM261 120-140 32.500 0.810 13 RM140 10 250-300 27.500 0.828 14 RM527 6 220-280 22.500 0.810 15 RM1233 11 10 150-170 30.769 0.822 16 RM223 110-200 85.000 0.270 17 RM5963 160-200 66.667 0.492 18 RM5926 11 170-240 78.571 0.265 19 RM208 160-185 51.282 0.599 20 RM235 12 11 120-170 15.789 0.889 Total 144 25 Mean 7.2 40.071 1.3 0.713 Min 15.789 0.265 Max 11 85.000 0.889 15 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 2.4 Quan hệ di truyền liên quan đến tính chịu mặn giống/dịng lúa Quan hệ di truyền 40giống/dòng lúa với 20 locut tương ứng với mồi SSR phân tích UPGMA phần mềm NTSYS pc 2.11X Sơ đồ hình giống nghiên cứu cho thấy hệ số tương đồng di truyền nhóm biến động từ 0,68 đến 0,91 (theo phương pháp SM, NTSYS) Tại giá trị tương đồng 0,825; 40 giống/dịng lúa chia thành 10 nhóm lớn với khả chịu mặn khác nhau: Nhóm I: Mức độ tương đồng di truyền thấp 0,836; gồm giống/dịng lúa Ỏn, Nếp cúc, Hom râu 1có khả chịu mặn tốt dung dịch Yoshida có NaCl với nồng độ 0.8% (EC= 16dS/m) đất có NaCl với nồng độ 0.6% (EC=12dS/m) Nhóm II: Mức độ tương đồng di truyền thấp 0,826; gồm giống/dòng lúa Bầu Hải Phòng, Háu trắng, Lúa đỏ, Nước mặn, Lúa chăm Nhóm giống/dịng lúa địa phương, có giống/dịng lúa Lúa đỏ, Nước mặn, Lúa chăm có nguồn gốc Thừa Thiên Huế Đặc biệt có giống Bầu Hải Phịng có khả chịu mặn , giống Háu trắng Nước mặn có khả chịu mặn trung bình thực nghiệm Nhóm III: Gồm giống/dịng lúa Lúa Ven dạng 1, Quảng trắng, Nước mặn dạng 1, Tẻ chăm, Ven đỏ có nguồn gốc từ ven biển miền Trung Việt Nam Nhóm có mức độ tương đồng thấp 0,852 Phần lớn giống/dòng lúa nhóm có khả chịu mặn cao Nhóm IV: Có mức độ tương đồng di truyền thấp 0,842, gồm giống/dòng lúa, đó, giống có nguồn gốc từ Nam Định Chiêm rong giống có nguồn gốc từ Thanh Hố Chành trụi có khả chịu mặn tốt điều kiện mơi trường có muối với nồng độ 0,8% Nhóm V: Có mức độ tương đồng thấp 0,825; gồm giống/dòng lúa Việt Nam (Cườm dạng 2, Tám thơm, CM6, Mành gié) IRRI (Pokkali IR28) Trong nhóm này, với giống chuẩn kháng mặn Pokkali, giống/dịng lúa Cườm dạng CM6 có khả chịu mặn mơi trường có muối với EC=16dS/m 16 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Nhóm VI: Mức độ tương đồng thấp 0,835; gồm giống/dòng lúa Q5, Tám dự , Nghi hương Nhóm có giống nhập nội có nguồn gốc từ Trung Quốc Q5 có khả chịu mặn kém, giống/dòng Tám dự Nghi hương chịu mặn tốt mơi trường có muối với nồng độ 12dS/m Nhóm VII: Gồm giống chịu mặn P4, P6, AC5 Nhóm có mức độ tương đồng di truyền thấp 0,862 có nguồn gốc từ Việt Nam Nhóm VIII: có mức tương đồng thấp 0,847; gồm giống/dòng lúa Việt Nam IRRI Lúa chăm biển, Ngoi tía, Ré trắng, IR352, Chiêm cũ, Tẻ tép, Nếp chẩn , có giống/dịng lúa có khả chịu mặn mức trung bình có nguồn gốc từ Nam Định Ngoi tía Tẻ tép Nhóm IX: có mức tương đồng di truyền thấp 0,829; gồm giống/dòng lúa Lúa ngoi, Nếp quắn , Hom râu giống địa phương Việt Nam, có Hom râu nguồn gốc từ Thái Bình có khả chịu mặn Nhóm X: Gồm giống/dịng lúa, có giống nhập nội có nguồn gốc từ Trung Quốc Khang dân; giống địa phương Việt Nam Cườm dạng Lúa su dạng có khả chịu mặn tốt theo thực nghiệm Hình 10: Sơ đồ phân loại 40 giống/dòng lúa phương pháp UPGMA 17 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Trong công tác tạo giống lúa lai, người ta nhận thấy cặp bố mẹ xa phương diện di truyền cho ưu lai cao Nếu khoảng cách di truyền cặp giống bố mẹ lớn (tương đồng di truyền nhỏ 0,4), lai thường khó sống sót bất thụ Nếu khoảng cách di truyền cặp giống bố mẹ nhỏ (tương đồng di truyền lớn 0,7) lai thường có ưu lai thấp không cho ưu lai Như mức độ tương đồng di truyền từ 0,4 đến 0,7 làm chuẩn để chọn bố mẹ tạo dòng lúa lai có khả cho ưu lai Trên sở phân tích di truyền dựa vào thị phân tử SSR, kết phân nhóm di truyền hệ số tương đồng di truyền giống/dòng lúa nghiên cứu, đề xuất số tổ hợp lai dự kiến có triển vọng sau: Hom râu Pokkali, Chành trụi P6, Pokkali Q5, Cườm dạng Khang dân IV KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận: Từ kết đạt đề tài, đưa kết luận sau: Đã đánh giá khả chịu mặn 40 giống/dòng lúa nghiên cứu điều kiện phòng thí nghiệm điều kiện nhà lưới, có giống biểu khả chịu mặn tốt Pokkali, Nếp cúc, Cườm dạng , Chành trụi Đã nhận dạng di truyền 40 giống/dòng lúa liên quan đến tính chịu mặn 20 thị SSR Ghi nhận tính đa alen cao 20 locut SSR nghiên cứu (từ 3-11 alen/locut) Tần số alen phổ biến dao động từ 15,79% đến 85%, trung bình đạt 40,07% Hệ số đa dạng di truyền PIC locut nghiên cứu cao với giá trị trung bình 0,713 Đánh giá đa dạng di truyền giống/dịng lúa liên quan đến tính chịu mặn thị SSR cho thấy mức độ đa dạng di truyền cao giống/dòng lúa; hệ số tương đồng di truyền ghi nhận từ 0,68 đến 0,91 Tại giá trị tương đồng 0,825 phân 40 giống/dòng lúa thành 10 nhóm 18 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Trên sở khoảng cách di truyền khả chịu mặn giống/dòng lúa nghiên cứu, đề suất số tổ hợp lai cơng tác chọn tạo giống lúa chịu mặn có triển vọng cho ưu lai cao sau: Hom râu Pokkali, Chành trụi P6, Pokkali Q5, Cườm dạng Khang dân18 Kiến nghị: Trên sở kết chúng tơi có số kiến nghị sau: Tiếp tục tiến hành xử lý mặn giống/dịng lúa xác định có khả chịu mặn tốt vùng đất mặn để đánh giá khả chống chịu giống/dòng lúa xác Cần có nghiên cứu sâu kiểm tra kiểu gen chống chịu mặn lúa Sử dụng số liệu mức độ tương đồng khoảng cách di truyền hỗ trợ lựa chọn giống/dịng lúa phù hợp cho cơng tác lai tạo giống lúa chịu mặn References Tiếng Việt Nguyễn Ngọc Anh (2005), “Chiến lược bảo vệ sử dụng hợp lý dịng chảy kiệt đồng sơng Cửu Long”, Báo cáo hội thảo Khai thác sử dụng hợp lý tài nguyên nước khu vực đồng sông Cửu Long, Cần Thơ, ngày 21/4/2005 Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn (2001), “Định hướng chuyển dịch cấu phát triển sản xuất nông nghiệp vùng Đồng sông Cửu Long thời kỳ 20012005”, Bộ Nông nghiệp Phát triển nơng thơn năm 2001 Bùi Chí Bửu, Nguyễn Duy Bảy, Phùng Bá Tạo, Đỗ Xuân Trường Nguyễn Thị Lang (2000), “Chọn tạo giống lúa cho vùng bị nhiễm mặn đồng sông Cửu Long”, OMon Rice 8:16-26 Bùi Chí Bửu, Nguyễn Thị Lang (1999), "Ứng dụng DNA marker đánh giá quỹ gen lúa", Báo cáo khoa học, Hội nghị Công nghệ sinh học toàn quốc, Hà Nội, – 10/12/1999, tr 1216 – 1273 19 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Bùi Chí Bửu Nguyễn Thị Lang (2003), Cơ sở di truyền tính chống chịu thiệt hạt môi trường lúa, NXB Nông Nghiệp TP Hồ Chí Minh Trần Văn Đạt (2005), Sản xuất lúa gạo giới: Hiện trạng khuynh hướng phát triển kỷ 21, NXB Nông nghiệp, TP Hồ Chí Minh Hồng Ngọc Giao (2006), Sổ tay pháp lý dành cho người dân vùng ven biển, NXB Chính trị Quốc Gia, trg.5-6 Nguyễn Tấn Hinh ctv, 2006, Báo cáo tổng kết khoa học kỹ thuật đề tài nghiên cứu chọn tạo giống lúa biện pháp kỹ thuật canh tác lúa cho vùng có điều kiện khó khăn, Viện Cây lương thực Cây thực phẩm Lã Tuấn Nghĩa cs (2000), “Đánh giá tính kháng QTL bệnh đạo ơn lúa”, Kết nghiên cứu khoa học 1999- 2000, Viện Di truyền Nông nghiệp, NXB Nông nghiệp, Hà Nội 10 Lã Tuấn Nghĩa, Vũ Đức Quang, Trần Duy Quý (2004), Cơ sở lý thuyết ứng dụng công nghệ gen chọn giống trồng, NXB Nông nghiệp 11 Lã Tuấn Nghĩa, Vũ Đức Quang, Trần Duy Quý (1997), “Sử dụng phương pháp đa hình độ dài phân cắt ADN (RFLP) nghiên cứu đa dạng quần thể nấm đạo ôn lúa” Kết nghiên cứu khoa học, NXB Nông nghiệp Việt Nam, tr 202-207 12 Lã Tuấn Nghĩa, Phạm Thị Thuy, Chu Thị Thanh Hà Lê Thị Thu Trang (2008) “Nghiên cứu lập đồ QTL tính kháng đạo ơn lúa” Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển nông thôn, 4(9), 50-56 13 Nguyễn Thị Quỳnh (2004), Đánh giá đa dạng di truyền tài nguyên giống lúa địa phương miền Bắc Việt Nam, Luận án Tiến sĩ Nông nghiệp, Viện Khoa học Kỹ thuật Nông nghiệp Việt Nam 14 Lê Sâm (2003), Xâm nhập mặn đồng sông Cửu Long, NXB Nông nghiệp 15 Trần Danh Sửu (2008), Đánh giá đa dạng di truyền tài nguyên lúa Tám đặc sản miền Bắc Việt Nam, Luận án Tiến sĩ Nông nghiệp, Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam 16 Trần Danh Sửu, Đỗ Đức Tuyến, Lưu Ngọc Trình, Nguyễn Thị Ngọc Huệ (2004), "Nghiên cứu đa dạng di truyền giống lúa nông dân đặt tên (Oryza sativa) 20 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com sở phân tích đẳng men", Bảo tồn nội vi tài nguyên trồng phát triển bền vững, NXB Nông nghiệp, Hà Nội, tr 54-60 17 Đặng Minh Tâm Nguyễn Thị Lang (2003), “Khai thác biến dị soma dòng lúa chống chịu mặn từ nuôi cấy in vitro”, Omon Rice 11:68-73 18 Lê Duy Thành (1999), “Kỹ thuật PCR ứng dụng chọn giống thực vật” Cơ sở di truyền chọn giống thực vật, Nxb Đại học Quốc gia Hà Nội, tr.156-158 19 Nguyễn Nghĩa Thìn (1997), “Đa dạng di truyền”, Cẩm nang nghiên cứu đa dạng sinh vật, tr.1-3 20 Ngơ Đình Thức (2006), Nghiên cứu phát triển giống lúa chống chịu mặn cho vùng đồng sông Cửu Long, Luận án tiến sĩ nông nghiệp, Trường đại học Nông Lâm TP HCM 21 Lưu Ngọc Trình (2006), Báo cáo kết thực đề tài nghiên cứu khai thác nguồn gen địa phương (Lúa, Đậu xanh, Khoai môn - Sọ, Bầu bí) phục vụ cải tiến giống đa dạng hoá trồng, Hà Nội 22 Viện Di truyền Nông nghiệp (1998), Kết nghiên cứu khoa học 1997-1998, NXB Nông nghiệp, Hà Nội 23 Võ Thị Minh Tuyền, Phạm Ngọc Lương, Đoàn Thanh Huyền (2007), “Nghiên cứu, ứng dụng thị phân tử chọn giống lúa lai” Tạp chí Khoa học cơng nghệ, tháng3/2007 24 Vương Đình Tuấn, Fukutu Y, Yano M Ban T (2000), “Lập đồ xác định vị trí gen di truyền số lượng ảnh hưởng đến tính chống chịu mặn o73ca6y lúa (Oryza satica)”, OMon Rice 8: 27-35 Tiếng Anh 25 Akbar M., Khush G.S and Hille Ris Lambers (1985), “Genetics of salt tolerance in rice” In: Rice genetis, IRRI Losbanos, Philippine, pp.399-409 26 Aslam, M., Qureshi R.H., and Ahmad (1993), Mechanisms of salinity tolerance in rice (Oryza sativva L.), Department of soil science and physiology, University of Agriculture, Pakistan 21 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 27 Cai H and Morishima H (2002), “QTL clusters reflect character associations in wild and cultivated rice”, Theor Appl Genet 104(8) 1270-1277 28 Chang T T., Somrith B (1979), "Genetic studies on the grain quality of rice", Proceedings of the workshop on chemical aspects of rice grain quality, IRRI, Los Banos, Philippines, pp 49-58 29 Collard BCY; and DJ Mackill (2008), “Marker-aided selection: an approach for precision plant breeding in the twenty first century”, Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci 363:557-572 30 Dereeper, A., Argout, X et al (2007), “SAT, a flexible and optimized Web application for SSR marker development”, BMC Bioinfomatics, 31 F.A.O (2001), Management practices selected for ongoing collaborative projects, Land and plant nutrition management service, F.A.O 2001 32 F.A.O., AGL (2000), Extent and causes of salt-affected soils in participating countries Global network on intergrated soil management for sustainable use of saltaffected soils Land and plant nutrition management service 33 Flowers,T.J and Yeo, A.R.(1988), Salinity and rice:A physiological approach to breeding for resistance, School of biological sciences, University of Sussex, Brighton, U.K., pp.993-959 34 Garcia, A.A.F., Benchimol, L.L et al (2004), “Comparison of RAPD, RFLP and SSR markers for diversity syudies in tropical maize inbred lines”, Genetics and Molecular Biology, 27 (4), 579-588 35 Garris J, Amanda, Thomas H, Tai, Jason Cburn, Steve Kresovich and Susan McCouch (2005), Genetic Structure and Diversity in Oryza satica L Genetics (169), pp 1631-1638 36 Giarrocco LE, Marassib MA and Salernoa GL (2007), “Assessment of the Genetic Diversity in Argentine Rice Cultivars with SSR Markers”, Crop Science, (47), pp 853-858 37 Glaszmann (1987), “Isozyme and Classification of Asian Rice Varieties”, Theor Appl Genet (74), pp 21-30 22 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 38 Gregorio GB, D Senadhira, RD Mendoza, NL Manigbas, JP Roxas, CQ Guerta (2002), Progress in breeding for salinity tolerance and associated abiotic stresses in rice, Field crop Research Elsevier Luận văn Thạc sĩ Khoa học 39 Gregorio L.B., Senadhira D., and Mendoza R.D (1997), “Screening rice for salinity tolerance”, IRRI discussion paper series No 22, IRRI PO Box 933, Manila 1099, Philippine 40 Henry, T Nguyen, Wu, X (2006), “Molecular marker systems for genetic mapping” in Meksem, K., Kahl, G., The handbook of plant genome mapping- Genetic and physical mapping, Wiley Press 41 Hillel D (2000), “Salinity Management for Subtainable Irrigation”, The World Bank, Washington, B.C 42 Holton, T.A (2001), “Plant genotyping by analysis of microsatellite” in Henry, R.J., Plant Genotyping: the DNA fingerprinting of plant, CAB International 43 Hugo R.Perales, Bruce F.Benz (2005), “Maize diversity and ethnolinguistic diversity in Chiapas, Mexico”, Proc Nalt Acad Sci, 103(2), 949-954 44 IAEA (2002), Mutant germplasm characterization using molecular markers, a manual, IAEA Vienna 45 Ismail AM; S Heuter; MJ Thomson and M Wissuwa (2007), “Geneticand genomic approaches to develop rice germplasm for problem soils”, Plant Molecular Biology 4: 547-570 46 Jaccard P (1908), Nouvells recherches surla distribution florale Bull Soc Vaud Sci Nat., 44, pp.233-270 47 Jalaluddin M, Nakai H and Yamamoto T (2007), “Genetic diversity and DNA ingerprinting of some modern Indica and Japonica rice”, Breed and Genet, SABRAO 39 (1), pp 43-52 48 Joshi, S.P, Ranjekar, P.K (1999), “Molecular markers in plant genome analysis”, Current science online 49 Kalyan Chakravarthi B and Rambabu Naravaneni (2006), “SSR marker based DNA fingerprinting and diversity study in rice (Oryza sativa L.)”, AJB (9), pp 684-688 23 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 50 Lee K.S (1995), Variability and genetics of salt tolerance in japonica rice, University of the Philippine, Los Banos, Philippine, pp 108-110 51 Lin H.X., Yanagihara S., Zhuang J.y., Senboku T., Zheng K.L and Yashima S (1998), Identification of QTL for salt tolerance in rice via molecular markers, Chinese J Rice Sci., 12 (2): 72-78 52 Lin H.X., Zhu M.Z, Yano M., Gao J.P., Liang Z.W., Su W.A., Hu X.H., Ren Z.H., Chao D.Y (2004), “QTLs for Na+and K+ uptake of the shoots and roots controlling rice salt tolerance” Theor Appl Genet 108:253- 260 53 Lu H, Redusm MA, Coburn JR, Rutger JN, McCouch SR, Tai TH (2005), “Population structure and breeding patterns of 145 U.S rice cultivars based on SSR marker analysis”, Crop Science (45), pp 66-76 54 M Shahid Masood M Shahid Masooda,1, Tomotaro Nishikawaa, Shu-ichi Fukuokaa, Peter K Njengaa, Takahiko Tsudzukib, Koh-ichi Kadowakia (2004), “The complete nucleotide sequence of wild rice (Oryza nivara) chloroplast genome: first genome wide comparative sequence analysis of wild and cultivated rice”, Gene 340, pp 133–139 55 Maguire, T.L (2001), “Producing and exploiting enriched microsatellite libraries” in Henry, R.J., Plant Genotyping: the DNA fingerprinting of plant, CAB International 56 Mahmoud M Saker, Sawsan S Youssef, Naglaa A Abdallah, Hany S Ashandy and AhmedM El Sharkawy (2005), "Genetic analysis of some Egyptian rice genotypes using RAPD, SSR and AFLP", African Journal of Biotechnology Vol (9), pp 882890 57 Mishra B., Akbar M., Seshu D.V (1990), Genetic studies on sanility tolerance in rice towards better productivity in salt affected soils, IRRI, Philippine, pp 1-25 58 Mohammadi – Nejad G., Arzani A, Rezai AM, Singth RK, Gregorio BG (2008), Assessment of rice genetypes for salt tolerance using microsatellite marker associated with the salt QTL, Afr J Biotechnol : 730-736 24 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 59 Mohammadi, S.A., Prasanna, B.M (2003), “Analysis of genetic diversity in crop plant- Salient statistical tool and considerations”, Crop Sci, 43, 1235- 1248 60 Muhammad SR, Rezwan MM, Samsul AM and Lutfur Radman (2009), “DNA fingerprinting of rice (Oryza sativa L.) cultivars using microsatellite markers”, AJCS (3), pp 122-128 61 Narayanan K.K., Krishnaraj S., Sree Rangaswamy S.R (1990), Genetic analysis for salt tolerance in rice, Paper presented during the Second International Rice Genetic Symposium May 14-18, 1990 IRRI, Manila, Philippine 62 Navraj KS, Yogesh Vikal, Kuldeep Singh, Monika AJ and Sharma RC (2009), “SSR marker-based DNA fingerprinting and cultivar identification of rice (Oryza sativa L.) in Punjab state of India”, Plant Genet Res CJO 17 Jul 2009, pp 1-3 63 Nguyen Thi Lang, S Yanagihara, Bui chi Buu (2001), QTL analysis for salt tolerance in rice (Oryza sativa L.), SABRAO 33(1): 11-20 64 Nguyen Van Tao, NT Lang, JL Pham, BC Bui (1999), "Isozyme analysis on some traditional varieties from South Vietnam", OMONRICE (7), pp 142-151 65 Niones, J.M (2004), Fine mapping of the salinity tolerance gene on chromosome of rice(Oryza sativa L.) using near isogenic lines, MS dissertation College, Laguna, Philippines: University of the Philippines Los Baños, Laguna 66 Oka H I (1958), Intervarietal variation and classification of cultivated rice, Ind J Genet Plant breed, (17), pp 79-89, 1958a 67 Olufowote, J.O., Xu Y., Chen X., Park W.D., Beachell H M., Dilday R.H., Goto M., and McCouch S.R (1997), “Comparative evaluation of within-cultivar variation of rice (Oryza sativa L.) using microsatellite and RFLP markers”, Genome (38), pp 11701176 68 Paterson A.H.S.D Tanksley and M E Sorrels (1991), DNA markers in plant improvement, Adv Agro., 46, pp 39-89 69 Pavy, N., Pelgas, B (2008), “Enhancing genetic mapping of complex genomes through the design of higly-multiplex SNP arrays: application to the large and unsequenced genomes of white spurce and black spruce”, BMC Genomics, 25 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 70 Ponnamperuma, F N (1984), Role of cultivar tolerance in increasing rice production on saline lands Strategies for crop improvement, John Wiley and sons, New York, 443p 71 Röder, M.S., Plaschke, J., König, U., Börner, A., Sorrells, M., Tanksley,S.D and Ganal, M.W (1995), “Abundance, variability and chromosomal location of microsatellites in wheat” Mol Gen Genet, 246, 327-333 72 Rohlf, F.J (2000), NTSYS-pc: Numerical Taxonomy and Multivariate Analysis System, Exeter Publications, 1, Version 2.1, New York, USA 73 S Fukuoka, N V Alpatyeva, K Ebana1, N T Luu and T Nagamine (2003), “Analysis of Vietnamese rice germplasm provides an insight into Japonica rice” Plant Breeding, (122), pp 497 - 502 74 Scott, K.D (2001), “Microsatellite derived from ESTs, and their comparison with those derived by other methods” in Henry, R.J., Plant Genotyping: the DNA fingerprinting of plant, CAB International 75 Second G (1982), “Origin of the genetic diversity of cultivated rice (Oryza spp.): Study of polymorphism scored at 40 isozyme loci”, Japan Journal Bot (10), pp 212258 76 Somasundaram, S.T, Kalaiselvam, M (2007), Molecular rool for assessing genetic diversity 77 Song Z.P., X Xu, B Wang, J K Chen, B.R.Lu (2003), “Genetic diversity in the northermost oryza rufipogon populations estimated by SSR marker”, Theor Appl Genet., 2003 Nov., 107 (8), pp 1492-1499 78 Tang, J., Baldwin, S J et al (2008), “Large-scale identification of polymorphic microsatellite using an in silico approach”, BMC Bioinfomatics, 79 Tautz, D (1993), “Notes on the difinition and nomenclature of tandemly repetitive DNA sequences”, in Pena, S.D.J, DNA fingerpinting: State od science, Birkhauser, Switzerland, 21-28 80 Teng S (1994), Gene tagging for salt tolerance in rice (Oryza sativa L.), The University of the Philippine, Los Banos, Laguna, Philippine, 118 p 26 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 81 Trojanowska, M.R, Bolibok, H (2004), “Characteristics and comparison of three classes of microsatellite- based marker and their application in plants”, Cellular & molecular biology letters, 9, 221-238 82 Virk P S., B V Fork-Lloyd, M T Jackson, H J Newbery (1995), “Use of RAPD for the study of diversity within plant germplasm collection”, Heredity (74), pp 170179 83 Weising, K., Nybom, H et al (2005), DNA Fingerprinting in plant: Principles, methods and application- second edition, CRC Press- Taylor & Francis group 84 Xu Y, B Henry, S R McCouch (2004), “A marker-based Approach to broading the genetic base of rice in the USA”, Crop Science, (44), pp 1947-1959 85 Yeo A.R and Flowers, T.J (1986), “Sanility resistance in rice and a pyramyding app.roach to breeding varieties for saline soils”, In: Plant growth, Drought, and sanility, ED By NC Tuner and JB Passioura CSIRO, Melbourn, Australia,161-173 86 Zeng, Da-li et al (2003), “Development of isogenic lines of morphological marker in Indica rice”, Acta Botanica Sinica, 45 (9), 1116-1120 87 www.gramene.org, 2006 27 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ... thực đề tài: ? ?Nghiên cứu đa dạng di truyền nguồn gen liên quan đến tính chịu mặn lúa Việt Nam? ?? với mục tiêu xây dựng sở liệu ADN tính chịu mặn giống/dịng lúa nghiên cứu nhằm góp phần quan trọng... polyacrylamide; Quan hệ di truyền liên quan đến tính chịu mặn giống/dòng lúa Keywords Di truyền học; Gen; Tính chịu mặn; Lúa; Việt Nam I MỞ ĐẦU Năng suất lúa thấp nguyên nhân mặn bất lợi đất... Tổng quan giống lúa chịu mặn: Sự hình thành đặc tính đất mặn; Giới thiệu chung đặc điểm vùng lúa nhiễm mặn Việt Nam; Cơ sở di truyền tính chịu mặn lúa; Công tác chọn tạo giống lúa chịu mặn; Đa dạng