ĐÁNH GIÁ sơ bộ mức độ đa DẠNG DI TRUYỀN của QUẦN THỂ điều (acanardium occidentale l ) HIỆN được TRỒNG tại TỈNH BÌNH ĐỊNH BẰNG kỹ THUẬT RAPD

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Đ Á N H G I Á SƠ B Ộ M Ứ C Đ Ộ Đ A D Ạ N G D I T R U Y Ề N C Ủ A QUẦN THỂ ĐI ỀU (Acanardium occidentale L.) HI ỆN ĐƯỢC TRỒ NG TẠI TỈNH BÌ NH ĐỊ NH B ẰNG K Ỹ T H UẬT RA P D Ngành học: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Niên khóa: 2002 – 2006 Sinh viên thực hiện: PHAN HỮU XUÂN Giáo viên hướng dẫn: TS BÙI MINH TRÍ Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 8/2006 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP Đ Á N H G I Á SƠ B Ộ M Ứ C Đ Ộ Đ A D Ạ N G D I T R U Y Ề N C Ủ A QUẦN THỂ ĐIỀU ( Acanardium occidentale L.) HIỆN ĐƯ Ợ C T RỒ NG T ẠI T Ỉ NH B Ì NH ĐỊ NH B ẰNG K Ỹ T H UẬT RAP D VÀ AF L P Ngành học: CƠNG NGHỆ SINH HỌC Niên khóa: 2002 – 2006 Giáo viên hướng dẫn: TS BÙI MINH TRÍ Sinh viên thực hiện: PHAN HỮU XUÂN Thành phố Hồ Chí Minh Tháng3/2006 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐÁNH GIÁ SƠ BỘ MỨC ĐỘ ĐA DẠNG DI TRUYỀN CỦA QUẦN THỂ ĐIỀU (Acanardium occidentale L.) HIỆNĐƯỢC TRỒNG TẠI TỈNH BÌNH ĐỊNH BẰNG KỸ THUẬT RAPD VÀ AFLP Ngành học: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Niên khóa: 2002 – 2006 Giáo viên hướng dẫn: Sinh viên thực hiện: TS BÙI MINH TRÍ PHAN HỮU XUÂN Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 8/2006 i LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LỜI CẢM ƠN Tất có ngày hơm có tương lai bắt nguồn từ công lao sinh thành, dưỡng dục cha mẹ Con khắc ghi trọn đời công ơn cha mẹ hy sinh bao điều tốt đẹp ngày hôm Em xin chân thành gửi lòng biết ơn đến: Ban Giám Hiệu Trường Đại học Nơng Lâm Tp.HCM Ban Giám Đốc Trung tâm Phân tích Thí nghiệm Hố – Sinh, Trường Đại học Nơng Lâm Tp HCM Ban Chủ nhiệm Thầy – Cô thuộc Bộ môn Công Nghệ Sinh Học Đã chăm lo tạo điều kiện tốt cho em q trình học tập thời gian hồn thành đề tài Em xin trân trọng biết ơn đến: Thầy TS Bùi Minh Trí – giáo viên hướng dẫn đề tài Chị: Phan Đặng Thái Phương, chị Liên, chị Huệ, chị Hưng, anh Thế, anh chị TT Phân tích Thí nghiệm Hố Sinh – Trường ĐH Nơng Lâm Tp.HCM Đã tận tình hướng dẫn giúp đỡ em suốt q trình thực khố luận tốt nghiệp Tôi xin gửi lời cảm ơn đến người nơng dân tỉnh Bình Định tận tình giúp đỡ thời gian thực điều tra thu thập mẫu điều Cuối xin chân thành cảm ơn người bạn lớp với giúp đỡ suốt thời gian học tập Trường thời gian làm đề tài tốt nghiệp Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 8/2006 Phan Hữu Xuân ii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com TÓ M T ẮT PHAN HỮU XUÂN, Đại học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh, tháng 8/2005, “BƯỚC ĐẦU ĐÁNH GIÁ MỨC ĐỘ ĐA DẠNG DI TRUYỀN CỦA QUẦN THỂ ĐIỀU (Anacardium occidental L.) TẠI TỈNH BÌNH ĐỊNH BẰNG KỸ THUẬT RAPD” Giảng viên hướng dẫn: TS BÙI MINH TRÍ Thời gian thực từ tháng 3/2006 đến tháng 6/2006 tỉnh Bình Định Trung tâm Phân tích Thí nghiệm Hố Sinh, trường Đại Học Nơng Lâm Tp HCM Đề tài thực đối tượng điều trồng tỉnh Bình Định Cây điều loại công nghiệp quan trọng Việt Nam Để đề chiến lược phát triển điều lâu dài đem lại lợi ích kinh tế cao, phải có chương trình bảo tồn, phổ biến giống điều tốt, thích nghi diện rộng lai tạo giống điều có chất lượng ưu việt so với giống có Muốn trước hết phải đánh giá mức độ đa dạng di truyền quần thể điều có Do đó, chúng tơi sử dụng kỹ thuật RAPD Các kết đạt được:  Thu thập 50 mẫu điều có đặc điểm bật (về suất, đặc điểm thực vật học,…) địa huyện tỉnh  Thực tách chiết DNA 50 mẫu lá, kết thu 50 mẫu DNA có chất lượng đạt yêu cầu để thực kỹ thuật RAPD  Thực phản ứng PCR – RAPD sử dụng primer 11 với 50 mẫu DNA, kết có 50 mẫu thực thành cơng Nhận diện band, có band đồng hình band đa hình Những band đa hình có độ dài khoản650 base pairs,850 base pairs band đặc trưng điều thực phản ứng PCR – RAPD sử dụng primer 11 Những band đồng hình có độ dài khoảng 200 base pairs, 400 base pairs, 600 base pairs, 700 base pairs, 750 base pairs, 800 base pairs, 900 base pairs, band đặc trưng điều thực phản ứng PCR – RAPD Những band đa iii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com hình có độ dài khoảng 650 base pairs, 850 base pairs đặc biệt, nghiên cứu thêm sử dụng thị phân tử tính trạng đáng quan tâm Qua kỹ thuật RAPD đánh giá tính đa dạng di truyền quần thể điều tỉnh Bình Định mức trung bình iv LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com MỤC LỤC Đề mục .Trang Trang tựa i Lời cảm ơn ii Tóm tắt iii Mục lục V Chương I: Giới thiệu 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích yêu cầu 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu 1.3 Hạn chế đề tài 1.4 Giới hạn khóa luận Chương II: Tổng quan tài liệu 2.1 Giới thiệu điều 2.1.1 Nguồn gốc 2.1.2 Đặc điểm hình thái 2.1.2.1 Thân cành 2.1.2.2 Rễ 2.1.2.3 Lá tán 2.1.2.4 Hoa 2.1.2.5 Hạt điều 2.1.3 Đặc điểm sinh thái 2.1.3.1 Điều kiện khí hậu 2.1.3.2 Điều kiện đất đai 2.1.4 Sự phân bố 2.1.4.1 Vùng trồng điều ưu tiên I 10 2.1.4.2 Vùng trồng điều ưu tiên II 10 2.1.4.3 Vùng trồng điều ưu tiên III 10 2.1.5 Đa dạng sinh học điều 10 i LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 2.1.5.1 Xét hình dạng 10 2.1.5.2 Xét màu sắc 11 2.1.5.3 Xét hoa 11 2.1.5.4 Xét trái 11 2.1.5.5 Xét hạt suất hạt 11 2.1.5.6 Xét di truyền 12 2.2 Công dụng 12 2.2.1 Sản phẩm 12 2.2.2 Sản phẩm phụ 13 2.3 Tình hình sản xuất điều giới 13 2.4Tình hình sản xuất điều Việt Nam 14 2.5 Đa dạng sinh học 19 2.5.1 Định nghĩa đa dạng sinh học 19 2.5.2 Tầm quan trọng đa dạng sinh học 19 2.5.3 Phân loại đa dạng sinh học 19 2.5.4 Hiện trạng đa dạng sinh học Việt Nam 20 2.6 Thông tin di truyền phương pháp nghiên cứu tính đa dạng di truyền 20 2.6.1 Thông tin di truyền 20 2.6.2 Phương pháp chiết tách DNA .21 2.6.3 Các thị dùng nghiên cứu đa dạng di truyền 22 2.6.3.1 RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) 23 2.6.3.2 SSCP (Single - Strand Conformation Polymorphism) 23 2.6.3.3 Microsatellite ( SSR: Simple Sequence Repeat) 24 2.6.3.4 AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism) 25 2.6.3.5 RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) 29 Chương III: Vật liệu phương pháp nghiên cứu 36 3.1 Thời gian địa điểm 36 3.1.1 Thời gian 36 3.1.2 Địa điểm 36 3.2 Phương pháp chọn mẫu 36 ii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 3.3.Vật liệu 37 3.3.1 Các mẫu điều thí nghiệm 37 3.3.2Phương pháp nghiên cứu 37 3.3.2.1 Hóa chất thí nghiệm kiểm tra DNA 37 3.3.2.2 Hóa chất dùng kiểm tra định lượng DNA 38 3.3.3 Phương pháp ly trích DN 38 3.3.3.1 Quy trình ly trích mẫu tươi (Doyle Doyle (1988)) 38 3.3.3.2 Định tính DNA phương pháp điện di 39 3.3.3.3 Định lượng DNA quang phổ kế 40 3.3.3.4 Hóa chất quy trình chạy RAPD – PCR 40 3.3.3.5 Phân tích kết phần mềm NTSYS 41 3.3.4 Thiết bị dụng cụ thí nghiệm 42 3.3.4.1.Thiết bị dụng cụ thí nghiệm cần cho tách chiết kiểm tra DNA 42 3.3.4.2 Thiết bị dụng cụ thí nghiệm cần cho kỹ thuật PCR – RAPD 42 Chương IV: Kết thảo luận 44 4.1 Thu thập mẫu vùng trồng điều thuộc tỉnh Bình Định 44 4.2 Một số vấn đề tách chiết DNA điều 45 4.3 Kết thực RAPD – PCR đánh giá đa dạng di truyền .48 4.3.1 Đánh giá mức độ đa dạng di truyền số cá thể điều trồng Bình Định với primer11 48 4.3.2 Đánh giá quy trình phản ứng RAPD-PCR 50 4.3.3 Phân tích kết phản ứng RAPD-PCR phần nềm NTSYS 51 4.3.4 Đánh giá đa dạng di truyền 51 4.3.5.Hạn chế kết đánh giá đa dạng di truyền kĩ thuật RAPD-PCR 56 4.3.6 Một vài điểm lưu ý thực phản ứng RAPD-PCR 56 Chương V: Kết luận đề nghị 57 5.1Kết luận 57 iii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 5.2Đề nghị 57 5.2.1Đề nghị phương pháp nghiên cứu 57 5.2.2 Về phương hướng phát triển canh tác điều Bình Định 57 Tài liệu tham khảo 59 Một vài hình ảnh điều 61 Phụ lục I Phục lục II Phục lục III iv LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Ladd AL07 HA03 HA04 HA19 HH08 HH16 HH18 HH23 HH19 3H05 3H11 Hình 4.3: Kết điện di sản phẩm RAPD-PCR gel thực với primer11 4.3.2 Đánh giá quy trình phản ứng RAPD-PCR Quy trình thực phản ứng RAPD-PCR ổn định cho nhiều band, có độ phân giải độ sáng tốt, song số vấn đề: Khả nhân qua phản ứng RAPD-PCR cao, nhiên khả làm phát sinh thị phân tử lại thấp, thể mức độ giống số lượng độ dài band tổng số mẫu thực RAPD-PCR thành công Như vậy, hiệu phát thị phân tử kỹ thuật RAPD-PCR có hạn chế Một số mẫu không kết tốt: nhận thấy điều mẫu kết không tốt mẫu trưởng thành cịn nền, có nồng độ DNA ly trích thấp (chỉ khoảng 20-30ng/ μl) hàm lượng tạp chất trình ly trích Với mẫu thực lại cho nhiều 1μl DNA mẫu vào hỗn hợp phản ứng Một số band khơng rõ: q trình điện di, band có độ dài gần nên khó tách rõ ràng Chúng sử dụng nồng độ 2% agarose điện di 50V cho độ phân tách cao xong gặp số khó khăn, điển hình band di chuyển khơng đều, điện cực bị cong hay hiệu ứng thành máy điện di ảnh hưởng đến di chuyển DNA Những mẫu nên thực lại phản ứng RAPD-PCR hay chạy điện di lại, cho lượng mẫu nhiều chỉnh sửa máy điện di cho kết tốt 51 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 4.3.3 Phân tích kết phản ứng RAPD-PCR phần nềm NTSYS Từ kết điện di chúng tơi mã hóa thành dạng nhị phân ( xem chi tiết bảng 4.3 phần phục lục ii) để phân tích mối tương quan di truyền mẫu nghiên cứu phần mềm NTSYS2.1 4.3.4 Đánh giá đa dạng di truyền Đánh giá đa dạng di truyền thông qua di truyền dụa yếu tố: Hệ số tương đồng di truyền Mức độ phân nhánh di truyền  Tại Bình Định nơi có diện tích trồng điều không tập trung nên việc thu thập mẫu gặp nhiều khó khăn Chính tơi thu thập mẫu huyện có diện tích đồi núi lớn Vì từ năm 1995 tỉnh có chương trình trồng điều để phủ xanh đồi núi trọc với dự án xóa đói giảm nghèo tỉnh, ba huyện Hồi Nhơn, Hồi Ân, An Lão nơi có diện tích đồi núi nhiều Vì chúng tơi chủ yếu thu thập mẫu huyện Khi đánh giá đa dạng di truyền chúng tơi có kết sau:  Đa dạng di truyền huyện An Lão có mẫu có kết qủa RAPD-PCR, kết đánh giá đa dạng di truyền hiển thị theo dạng bảng dạng di truyền (hình 4.4 -4.5) 52 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Hình 4.4 Cây di truyền số điều tiêu biểu huyện An Lão Hình 4.5 Kết đánh giá đa dạng di truyền dạng số liệu NTSYS mẫu điều huyện An Lão  Kết phân tích huyện An Lão ta thấy hệ số di truyền dao động từ 0,5-1,00 mẫu phân tích có hệ số di truyền gần Qua bảng số liệu di truyền ta thấy có mẫu Al04 nằm riêng biệt nhánh Theo kết điều tra mẫu có tính trạng hình thái thấp,ít cánh, trái vàng chát, 53 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com hạt lớn bị lép hạt Trên kết điện di thây mẫu khơng có vạch 850bp so với mẫu khác Có thể vạch 850 bp vạch có gen quy định tính trạng hạt lớn trịn căng Đây thị làm tiền đề cho nghiên cứu sau cho công tác tuyển chọn giống  Đa dạng di truyền điều huyện Hồi Ân Có 19 mẫu có kết RAPD-PCR kết đánh giá đa dạng di truyền hiển thị theo dạng bảng dạng di truyền hình 4.6 Hình 4.6 Cây di truyền số điều tiêu biểu huyện Hoài Ân  Kết phân tích huyện Hồi Ân ta thấy hệ số di truyền dao động từ 0,73-1,00 Như mẫu phân tích có quan hệ di truyền gần mặt di truyền Có thể giống điều có tạp giao với đồng việc tuyển chọn giống huyện.Qua bảng điều tra nông dân nhận thấy đồng tính trạng như: thấp đến cao trung bình, hạt lớn trịn căng v.v  Đa dạng di truyền điều huyện Hoài Nhơn có 22 mẫu có kết RAPD-PCR, kết đánh giá đa dạng di truyền hiển thị theo dạng bảng dạng di truyền( hình 4.7) 54 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Hình 4.7 Cây di truyền số điều tiêu biểu huyện Hồi Nhơn  Kết phân tích huyện Hồi Nhơn ta thấy hệ số di truyền dao động từ 0,375- 1,00 mẫu phân tích có quan hệ di truyền xa Cây di truyền chia thành 11 nhánh Riêng mẫu HH14 tạo thành nhánh riêng di truyền hyện Hoài Nhơn Trong phiếu điều tra tơi nhận thấy có tính trạng cao tán rộng, trái vàng hạt lớn suất cao ổn định Trên hình điện di tơi thấy có xuất vạch khoảng 650 bp, qua bảng so sánh thấy vạch có mẫu khơng có mẫu khác thị phân tử để làm tiền đề cho nghiên cứu cho công tác tuyển chọn giống  Đa dạng di truyền điều Bình Định có 50 mẫu có kết RAPD-PCR, kết đánh giá đa dạng di truyền hiển thị theo dạng bảng dạng di truyền (hình 4.8) 55 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Hình 4.8 Cây di truyền số điều tiêu biểu Bình Định  Theo di truyền, cá thể điều Bình Định chia thành 10 nhánh trung bình nhánh mẫu, có mức độ tương đồng di truyền từ 37,5%100% Theo đánh giá thông qua kĩ thuật RAPD-PCR, điều trồng Bình Định có tính đa dạng di truyền mức từ trung bình đến trung bình Chúng nhận thấy giống điều trồng huyện Hồi Ân, An Lão có mức độ phân bố rộng nhất, đồng thời có mức độ tương đồng di truyền cao, thể có nhiều mẫu có số vạch giống phân bố nhánh di truyền Các điều trồng huyện Hồi Nhơn có mức đa dạng di truyền cao, đơng thời có chất di truyền giống với điều trồng Hoài Ân An Lão Điều thật dễ hiểu theo kết điều tra điều Hồi Nhơn có độ tuổi cao Có thể giống điều Hồi Nhơn đem trồng huyện khác 56 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 4.3.5.Hạn chế kết đánh giá đa dạng di truyền kĩ thuật RAPD-PCR Từ q trình thực tơi rút số kết luận Số lượng mẫu thu thập chưa đủ để thực thực tế, chưa mang tính đại diện cao Do hạn chế kĩ thuật điện di agarose không cho độ phân tách cao, độ dài band khơng khơng thể phân biệt mắt thường nên nhận định sai lệch band điện di 4.3.6 Một vài điểm lƣu ý thực phản ứng RAPD-PCR  Không dùng giấy dán vào thành eppendorf để đánh dấu mẫu chạy RAPD-PCR  RAPD-PCR nhạy cảm với thành phần hóa chất, cần có thay đổi yếu tố sản phẩm thu khác Do cần kiểm tra lại tồn quy trình có thay đổi yếu tố  Khi thay đổi nhiệt độ bắc cặp primer thường biến thiên 20C, thay đổi 10C có khác biệt  Máy PCR khác cho kết khác  Khi gặp trở ngại việc điện di nguyên nhân do:  Kỹ thuật đổ gel: agarose chưa tan dều agarose nguội đổ  Điện trường máy điện di: điện không ổn định điện cực bị cong v.v  Dung dịch điện di: cần thay dung dịch điện di khác  Dung dịch nhuộm gel ảnh hưởng, tốt nên sử dụng dung dịch pha dùng cho nhuộm gel RAPD-PCR 57 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com CHƢƠNG V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1Kết luận Từ kết thu được, rút số kết luận sau: Quy trình tách chiết DNA ổn định Ly trích 50 mẫu DNA đạt tiêu chuẩn dùng kĩ thuật sinh học phân tử  Primer 11dùng kĩ thuật RAPD-PCR cho band mẫu thí nghiệm, có band đồng hình, band đa hình Primer 11 có tính đa hình cao cá thể điều Kết thu 217 band tổng số 50 mẫu thu thập Bình Định  Việc phân tích RAPD-PCR sử dụng primer11 cá thể điều trồng Bình Định có hệ số di truyền cấy phát sinh chủng loại dao động khoảng 0,375-1,00  Cây phát sinh nhiều nhánh chứng tỏ cá thể điều trồng Bình Định có tạp giao giống điều 5.2Đề nghị 5.2.1Đề nghị phƣơng pháp nghiên cứu  Khảo sát thêm primer khác dùng kĩ thuật RAPD  Khảo sát thêm maker phân tử AFLP,SSR…để phân tích đa dạng di truyền cách sác  Cần xác định đa dạng di truyền cá thể diện rộng, số lượng mẫu lớn  Các band có trọng lượng 850 bp 650 band tao nên khác biệt Có thể sử dụng làm thị phân tử cho nghiên cứu sau 5.2.2 Về phƣơng hƣớng phát triển canh tác điều Bình Định  Tránh tình trạng phát triển điều cách tự phát  Tiến hành điều tra nghiên cứu đa dạng di truyền giống điều có Chọn lọc cá thể có tính trạng tốt, tiến hành nghiên cứu sâu cá thể 58 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com  Định hướng phát triển chiến lược lâu dài cụ thể cải thiện giống kĩ thuật canh tác 59 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Tài liệu tham khảo Tài liệu nƣớc Châu Văn Quang.2005 Điều tra tượng canh tác bước đầu xác định tính đa dạng di truyền số giống điều trồng tỉnh Bình Phước nhờ kĩ thuật PCR LVTN kỹ sư nông học trường Đại Học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh 2Phạm Văn Bình 2005 Đánh giá sơ đa dạng di truyền quần thể điều(Anacardium occidentale L) trồng tỉnh Ninh Thuận kĩ thuật RAPD AFLP LVTN công nghệ sinh học trường Đại Học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh 3Nguyễn Thị Huyền 2005 Bước đầu xây dựng ngân hàng gen điều số huyện tỉnh đồng nai Luận văn tốt nghiệp kỹ sư nông học Trường Đại Học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh Nguyễn Thị Thanh Bình, Hồng Thi Hằng, Nơng Văn Hải 2005 nghiên cứu đa hình số giống tằm dâu kỹ thuật rapd Tạp chí di truyền học ứng dụng Nguyễn Việt Chƣơng 2000 Kinh nghiệm trồng điều theo phương pháp Nhà xuất Thanh Niên Phạm Đình Thanh 2003 Hạt Điều: sản xuất chế biến nhà xuất Khoa Học Kĩ Thuật Hà Nội (trang 9-12; 28-36) Khuất Hữu Thanh 2003 Cơ sở di truyền phân tử kỹ thuật gen Nhà xuất Nông Nghiệp Tp Hồ Chí Minh ( trang 221) Phạm Thành Hổ, 1998 Di truyền học Nhà xuất giáo dục (trang 612) Hồ Thị Thùy Dƣơng, 2002 Sinh học phân tử Nhà xuất giáo dục Trang 2430; 122-124) 10 Bùi Chí Bửu Nguyễn Thị Lang 1999 Di truyền phân tử: nguyên tắc cở chọn giống trồng Nhà xuất Nôi Nghiệp Tp Hồ Chí Minh (trang 275) 11 Nguyễn Đức Thành, 2004 Một số kỹ thuật thị phân tử Nhà xuất viên khoa học công nghệ Niềm Nam- Viện Công Nghệ Sinh Học Hà Nội 12 Lê Duy Thành, 2001 Cơ sở di truyền chọn giống thực vật Nhà xuất khoa học kỹ thuật Hà Nội (trang 159) 60 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 13 Nguyễn Văn Uyển 1996 Những phương pháp công nghệ sinh học thực vật- tập II Nhà xuất Nông Nghiệp Tp Hồ Chí Minh (trang 56) 14 Nguyễn Thị Lang 2001 Phương pháp nghiên cứu công nghệ sinh học Nhà xuất Nông Nghiệp Tài liệu nƣớc 15 Kazutoshi Okuno and Shuichi Fukuoka, 1998 Manual for DNA extraction in plants Janpan international cooperatoin agency 16 Sunil Archak, Arbika B Gaikwad, Diksha Gautam, E.V.V.B Rao, K.R.M Swamy and J.L.Karihaloo 2003 DNA fingerprinting of indian cashew (Anacardium occidentale L) varieties using RAPD and ISSR techniques Euphytica 230: p 397-404 17 Samal S, Rout G.R, Lenka P.C 2003 Analysis of genetic relationships between polulations of cashew (Anacardium occidentale L) by using morphological characterisation and RAPD markers Plant soil environ 49: p176-182 61 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com MỘT VÀI HÌNH ẢNH CÂY ĐIỀU 62 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 63 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 64 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 65 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ... NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐÁNH GIÁ SƠ BỘ MỨC ĐỘ ĐA DẠNG DI TRUYỀN CỦA QUẦN THỂ ĐIỀU (Acanardium occidentale L. ) HIỆNĐƯỢC TRỒNG TẠI TỈNH BÌNH ĐỊNH BẰNG KỸ THUẬT RAPD VÀ AFLP Ngành học: CƠNG... có chất l? ?ợng tốt từ mẫu thu (được bảo quản l? ??nh) l? ?m nguyên liệu cho kỹ thuật RAPD  Thực thành cơng kỹ thuật RAPD từ đánh giá sơ mức độ đa dạng di truyền quần thể điều tỉnh Bình Định  L? ?m tiền... Tp Hồ Chí Minh, tháng 8/2005, “BƯỚC ĐẦU ĐÁNH GIÁ MỨC ĐỘ ĐA DẠNG DI TRUYỀN CỦA QUẦN THỂ ĐIỀU (Anacardium occidental L. ) TẠI TỈNH BÌNH ĐỊNH BẰNG KỸ THUẬT RAPD? ?? Giảng viên hướng dẫn: TS BÙI MINH