Xác định hàm lượng dihydromyricetin trong cao chiết bạch liễm thu được bằng phương pháp chiết xuất vi sóng và ứng dụng bào chế trà hòa tan hỗ trợ điều trị chứng đau dạ dày

KHOA HỌC CÔNG NGHỆ XAE ĐỊNH HAM LUỌNG DIHYOROMYRIEETIN TRONG CAO CHIÉT BẠCH LIẺM THU ĐUỌC BẰNG PHUONG PHÁP CHIÉT XUẤT VI SĨNG VÀ ÚNG DỤNG BÀO CHÉ TRÀ HỊA TAN Hỗ TRỌ ĐIỂU TRỊ CHÚNG ĐAU DẠ DÀY Nguyễn Thị Thanh Mai1, Nguyễn Viết Toan1 2, Nguyễn Thị Hồng Hạnh3’ * TÓM TẮT Trong nghiên cứu này, cao chiết Bạch liễm chiết xuất phưong pháp vi sóng Cao chiết sử đụng để xác định hàm lượng Dihydromyricetin - họp chất flavonoid Bạch liễm có tác dụng làm giảm tổn thưong tê bào thể gốc tự gây ra, giảm trinh oxy hóa, kháng khuẩn, kháng nấm, hỗ trợ trị bệnh đau dày Kết cho thấy, mẫu cao chiết có chứa hàm lượng Dihydromyricetin tương đối cao, khoảng 38,11% Mẫu trà hòa tan bào chế từ Bạch liêm thành phần Khương hồng, Bồ cơng anh có hàm lượng Dihydromyricetin khoảng 29,69%; tiêu độ ẩm, độ tro hàm lượng kim loại nặng đạt quy định theo Quy chuẩn Việt Nam Từ khóa: Bạch liễm, dihydromyricetin, Érà hịa tan 1.ĐĂTVÀNĐÉ Bạch liễm có tên khoa học Ampelopsis cantoniensis Planch., loài thuộc chi Ampelopsis họ Nho (Vitaceae) [1, 6], Bạch liềm có chứa flavonoid, tanin, đường, caroten, sterol acid hữu [13] Theo y học cổ truyền, chiết xuất dạng cao khô Bạch liễm dùng chữa bệnh loét dày - tá tràng [1, 2], Bạch liễm có khả gây độc tính tế bào ung thư vú MCF7 [9], có tác dụng giảm đau [19], kháng viêm, chống oxi hóa [5,11] Dihydromyricetin họp chất Bạch liêm, loại họp chất flavonoid, có cấu trúc khung flavonol, tan nước lạnh, tan tốt nước nóng cồn Dihydromyricetin nghiên cứu số tác dụng sinh học tính kháng khuẩn, chóng oxi hóa, chóng viêm tăng cường hệ miễn dịch, độc tính, độ an tồn cao; thường dùng thêm vào thực phẩm, đồ uống dùng dược phẩm [9, 12, 13, 14, 17, 21], Dihydromyricetin có tác dụng ức chế phát triển 14 chủng vi khuẩn, chủ yếu chủng Staphylococcus aureusNÒ số vi khuẩn Bacillus [13, 14], Ngoài ra, họp chất cịn có hoạt tính chống oxy hóa in VÍVONÍÂ dạng oxy hoạt hóa Khoa Cơng nghệ Hóa, Trường Đại học Cơng nghiệp Hà Nội Viện Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Khoa Tài nguyên Môi trường, Học viện Nông nghiệp Việt Nam ♦Email: nthhanh@vnua.edu.vn 66 hình thành loại đại thực hoạt động GalN [12] hiệu chống xâm lấn di khối u ác tính in vivo in vitro [3], có khả kháng virut SARS-CoV-2 với nồng độ ức chế IC50 1,716 ± 0,419 ụM, đồng thời làm giảm tình trạng viêm phổi cách ức chế xâm nhập tế bào viêm [17] Phương pháp phân lập có hỗ trợ vi sóng chứng minh phương pháp tối ưu để chiết xuất họp chất thuộc nhóm flavonoid Với việc sử dụng hệ dung môi cồn-nước, việc chiết xuất flavonoid tinh khiết trở nên dẽ dàng hiệu Đối với họp chất flavonoid phân cực hơn, việc kết họp sử dụng dung mơi khác có hỗ trợ vi sóng đem lại thành còng định [20] Với ưu điểm hiệu suất chiết xuất cao, thời gian chiết ngán, an toàn, thân thiện với mơi trường, phương pháp phân lập có hỗ trợ vi sóng ngày trở thành phương pháp phổ biến việc chiết xuất họp chất có dược liệu Hiện có nghiên cứu nước việc sử dụng Bạch liễm để sản xuẩt thuốc điều trị loét dày, hành tá tràng [7] Kết cho thấy tác dụng tốt trinh điều trị cải thiện triệu chứng lâm sàng bệnh loét dày - hành tá tràng Tuy nhiên, sản phẩm nghiên cứu Bạch liễm thuốc điều trị, chưa có sản phẩm dạng thực phẩm bổ sung hỗ trợ điều trị triệu chứng đau dày Vì vậy, nghiên cứu trinh bày kết xác định hàm lượng Dihydromyricetin từ cao chiết NÔNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIÊN nông thôn - KỲ - THÁNG 6/2022 KHOA HỌC CÔNG NGHỆ Bạch liễm thu phưong pháp chiết xuất vi sóng kết bào chế trà hòa tan VẬT UỆU VÀ PHUONG 'HÁP NGHIÊN cúu 2.1 Nguyên liệu Cây Bạch liềm thu hái vào tháng năm 2021 xã Hồng Ca, huyện Trấn Yên, tỉnh Yên Bái, bao gồm lá, thân r 2( g cao Bạch liẽm thành phẩm Hiệu suất tri ih chiết xuất đạt - 6,23% (tính theo nguyên liệu Bạch liềm khô) 2.2.2 Phưong pháp định lượng Dihydromyricetin cao chiết Bạch liềm - Chuẩn bị dung dịch chuẩn Dihydromyricetin: Cân xác 20 mg Dihydromyricetin pha binh định mức 10 mL dung môi methanol thu dung dịch chuẩn gốc có nồng độ 2.000 pg/mL Từ dung dịch chuẩn gốc nồng độ 2.000 pg/mL, hến hành pha dãy nồng độ chuẩn 1.000, 500, 250, 125 pg/mL - Chuẩn bị mẫu dung dịch thử: Cân xác 27,6 mg cao chiết pha bình định mức 10 mL dung môi methanol, lọc qua màng lọc 0,45 pm, thu dung dịch thử có nồng độ 2.760 pg cao/mL - Phương pháp phân tích: Các mẫu dung dịch chuẩn mẫu thử tiến hành phân tích hàm lượng Dihydromyricetin hệ thống HPLC điều kiện [4]: + Máy HPLC Agilent 1290 + Cột Agilent Proshell 120 SB-C18 (3,0 mm X 50 mm, cỡ hạt 2,7 pm) + Pha động: actonitrile/nước - 20/80 + Tốc độ dịng: 0,5 mL/phút + Thể tích tiêm mẫu: 5,0 pL + Detector: uv bước sóng 330 nm 2.2.3 Quy trình bào chế trà hịa tan Hình Quy trình bào chế trà hịa tan Bạch liễm Khương hồng sau tách nhựa, thái mỏng; Bồ công anh làm sạch, hong khô Từng loại nguyên liệu chuyển vào buồng sấy chân khơng riêng rẽ, vói chế độ bơm áp suất 10 mbar, nhiệt độ 45°c, sấy hàm lượng ẩm đạt dưói 10% Tiếp đến, mẫu đưa qua máy nghiền búa có sàng 60 Mesh, trộn vói tỉ lệ trình bày bảng theo quy tắc phối ngũ Bạch liẽm xử lý [8, 15] Sau phối trộn, hỗn họp dược liệu trích ly nước tương tự quy trình tạo cao chiết Bạch liêm sấy thăng hoa máy đông khô Lyovapor L300 (BUCHI, BUCHI Labortechnik AG, Thụy Sĩ) đến hàm lượng ẩm không 5%, tạo hạt đóng gói, bảo quản trình sử dụng theo hình STT Bảng Thành phần trà hòa tan Nguyên liệu Đơn vị Khối lượng Bạch liềm 350 g Khương hoàng 30 g Bồ công anh 30 g Nguồn: Trần Văn Kỳ (2013) [8]; Hồng Văn Vinh (2001) [15] NƠNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIÊN NÔNG THÔN - KỲ - THÁNG 6/2022 67 KHOA HỌC CƠNG NGHỆ 2.2.4 Phương pháp phân tích tiêu chất lượng trà hòa tan từ Bạch liễm Độ ẩm xác định phương pháp sấy đến khối lượng không đổi Hàm lượng tro xác định theo TCVN 5611-1991 Hàm lượng kim loại nặng xác định phương pháp quang phổ hấp phụ nguyên tử AAS KẾT QUÀ NGHIÊN cúu VÀ THÀO LUẬN 3.1 Xây dựng đường chuẩn xác định hàm lượng Dihydromyricetin phương pháp HPLC Hình Phổ hấp thụ uv họp chất chuẩn Dihydromyricetin Họp chất chuẩn Dihydromyricetin có nồng độ 500 pg/mL Tiến hành phân tích phương pháp HPLC để xác định bước sóng hấp thụ cực đại Dihydromyricetin Từ phổ hấp thụ uv Dihydromyricetin chuẩn, cho thấy họp chất có bước sóng hấp thụ cực đại 207 330 nm Để giảm thiểu sai số, phép phân tích tiến hành bước sóng 330 nm Do đó, dung dịch chứa họp chất chuẩn Dihydromyricetin nồng độ phân tích phương pháp HPLC bước sóng 330 nm X102 DAD1 - C:Sig=330,4 ReMCSOO.d Các mẫu Dihydromyricetin chuẩn pha methanol với nồng độ 2.000, 1.000, 500, 250, 125 pg/mL, tiến hành phàn tích hệ thống HPLC bước sóng 330 nm Trên hệ thống HPLC, peak tín hiệu Dihydromyricetin phát cách ổn định thòi gian lưu Rt 5,100 5,133 đối vói chất tham chiếu dùng thang định lượng Đường chuẩn xây dựng tính tốn dựa diện tích peak uv 330 nm thời gian lưu 5,100 - 5,133 (Hình 3, bảng 2) Kết mối tương quan diện tích peak nồng độ họp chất chuẩn Dihydromyricetin thể hình Hình Đồ thị đường chuẩn thể mối quan hệ diện tích peak nồng độ Dihydromyricetin 5.133 3- 2.5- Bảng Đường chuẩn xác định hàm lượng Dihydromyricetm _ Chất tham chiếu Phương trình Hệ số tương đường chuẩn quan Dihydromyricetin y = 10,538x + 0,998 1340,7 1.5 1- 0.5 ■0.5- 0.5 1.5 2.5 35 4.5 5.5 6.5 Response vs Acquisition Time (min) 7.5 8.5 9.5 Hình Phổ hấp thụ uv mẫu Dihydromyricetin chuẩn nồng độ 500 pg/1 68 Bảng Giá trị diện tích peak sắc đồ ion nồng độ chất chuẩn Dihydromyricetin Nồng độ Thịi gian Diện tích Stt (pg/mL) lưu (phút) peak 2.000 5,100 22150 1.000 5,107 12351 500 5,133 6881 250 5,133 3863 125 2294 5,107 Đường chuẩn định lượng có dạng y = ax + b xây dựng dựa mối quan hệ diện tích peak uv bước sóng 330 nm (y) vói nồng độ tương ứng chất tham chiếu (x) Đường chuẩn định NƠNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIEN nịng thơn - KỲ - THÁNG 6/2022 KHOA HỌC CÔNG NGHỆ lượng thu đạt độ tuyến tính cao với hệ số tưong quan R2 > 0,998 định hàm 3.2 Kết xác Dihydromyricetin cao chiết Bạch liễm lượng Hàm lượng Dihydromyricetin cao chiết Bạch liễm phân tí± hệ thống HPLC điều kiện vói mẫu chuẩn, sắc ký đồ mẫu Dihydromyricetin thể hình xiofc DAD1 ■ C:Sig=33O,4 Ref=off Sam27_2.d 0.5 1.5 2.5 3.5 4.5 5.5 6.5 Response vs Acquisition Time (min) 7.5 8.5 9.5 Hình Sắc đồ HPLC cao chiết nồng độ 2.760 ịig/mL Hàm lượng Dihyrdromyricetin mẫu cao chiết bạch liễm trình bày bảng Bảng Hàm lượng Dihydromyricetin cao _ chiết Bạch liễm (%) Trung SD RSD Cao chiết bạch liêm (%) (%) Mầu Mầu Mẫu bình (%) 0,02 0,05 38,09 38,13 38,11 38,11 Kết phân tích hàm lượng Dihydromyricetin cao chiết Bạch liềm thu phưong pháp trích ly dung mơi nước có hỗ trợ vi sóng tưong đối cao, đạt 38,11% Hiệu suất thu cao hon nghiên cứu công bố trước 19,56% 20,39% hàm lượng flavonoid tồn phần có Bạch liễm Cao Bằng Sapa [18] Nhiều nghiên cứu nước đặc tính vượt trội họp chất Dihydromyricetin cao chiết Bạch liễm, sử dụng làm thuốc, phòng hỗ trợ điều trị bệnh đau dày, có hoạt tính kháng khuẩn tốt [13, 21], Nghiên bào chế trà hòa tan từ cao cứu tiếp tục tiến hành ] chiết Bạch liềm cá