TÔNG HỢP VÀ KHẢO SÁT TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA MỘT SÓ DẪN CHÁT HALOGEN CHALCON

TỔNG LIÊN ĐOÀN LAO ĐỘNG VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG TỔNG HỢP VÀ KHẢO SÁT TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA MỘT SỐ DẪN CHẤT HALOGEN CHALCON LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Ngành : Cơng nghệ hóa học Chuyên ngành : Tổng Hợp Hữu Cơ Mã số : SVTH : NGUYỄN VĂN THƯƠNG MSSV : 062045H GVHD : PGS TS TRẦN THÀNH ĐẠO THS ĐỖ TƯỜNG HẠ TP HỒ CHÍ MINH – 2011 TRƯỜNG ĐẠI HỌC TƠN ĐỨC THẮNG KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG CỘNG HOÀ Xà HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc NHIỆM VỤ LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP HỌ VÀ TÊN: MSSV BỘ MÔN: LỚP NGÀNH NĂM HỌC: Tên đề tài: Nhiệm vụ: Ngày giao nhiệm vụ luận án: Ngày hoàn thành nhiệm vụ: Họ tên người hướng dẫn: 1/ 2/ 3/ Phần hướng dẫn: Nội dung yêu cầu luận án thông qua mơn Ngày… tháng…….năm ……… CHỦ NHIỆM BỘ MƠN (Ký ghi rõ họ tên) Tp Hồ Chí Minh, ngày tháng năm TRƯỞNG KHOA KHƯD (Ký ghi rõ họ tên) ………………………………………… ………………………………………… ………………………………………… ………………………………………… ………………………………………… Ngày… tháng…….năm ……… NGƯỜI HƯỚNG DẪN CHÍNH (Ký ghi rõ họ tên) PHẦN GHI KẾT QUẢ LVTN Ngày bảo vệ:………………… Điểm tổng kết:……………… Nơi lưu trữ LVTN:………… ……………………………… ……………………………… LỜI CẢM ƠN Em xin gửi đến Thầy PGS.TS Trần Thành Đạo, Cô Th.S Đỗ Tường Hạ lịng kính trọng sâu sắc lời cảm ơn chân thành Thầy, Cơ tận tình hướng dẫn, quan tâm, động viên tạo điều kiện thuận lợi để em hồn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn Thầy, Cô phản biện dành thời gian quý báu để xem xét, góp ý nhận xét cho khóa luận em hoàn chỉnh Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Thầy, Cô Khoa Khoa Học Ứng Dụng Trường Đại Học Tơn Đức Thắng hết lịng giúp đỡ, truyền đạt kiến thức quý báu suốt thời gian em học trường Em chân thành cảm ơn Thầy, Cơ mơn Hóa Dược, Vi Sinh – Ký Sinh, Hóa Phân Tích – Kiểm Nghiệm, Ban Nghiên Cứu Khoa Học Khoa Dược Trường Đại Học Y Dược Thành Phố Hồ Chí Minh hết lịng giúp đỡ, tận tâm truyền đạt kiến thức, tạo điều kiện thuận lợi suốt thời gian em thực khóa luận Bộ mơn Xin chân thành cảm ơn anh Thái Sơn, bạn Anh Thư, bạn Mỹ Duyên giúp đỡ, động viên tinh thần sát cánh vượt qua lúc khó khăn Lịng biết ơn kính trọng xin gửi đến Cha, Mẹ Cha Mẹ sinh thành, nuôi nấng, dạy dỗ, động viên tạo điều kiện tốt cho sống MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT v DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH viii DANH MỤC CÁC ĐỒ THỊ ix DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ .x LỜI MỞ ĐẦU TỔNG QUAN 2.1 TỔNG QUAN VỀ FLAVONOID VÀ CHALCON 2.1.1 Tổng quan flavonoid .3 2.1.1.1 Định nghĩa flavonoid 2.1.1.2 Nguồn gốc flavonoid 2.1.1.3 Cấu trúc flavonoid 2.1.1.4 Phân bố tự nhiên flavonoid 2.1.1.5 Phân loại flavonoid 2.1.1.6 Tác dụng sinh học flavonoid 2.1.1.7 Ứng dụng flavonoid 2.1.2 Tổng quan chalcon 2.1.2.1 Định nghĩa chalcon 2.1.2.2 Cấu trúc chalcon .6 2.1.2.3 Phân bố tự nhiên chalcon i 2.1.2.4 Ứng dụng chalcon tổng hợp hóa học 2.1.2.5 Tác dụng sinh học chalcon .8 2.1.2.6 Các phản ứng tổng hợp chalcon 10 2.2 TỔNG QUAN VỂ CÁC PHƯƠNG PHÁP THỬ HOẠT TÍNH SINH HỌC 13 2.2.1 Phương pháp thử hoạt tính kháng vi sinh vật xác định MIC 13 2.2.1.1 Chuẩn bị vi sinh vật 13 2.2.1.2 Phương pháp khuếch tán .13 2.2.1.3 Phương pháp pha loãng 15 2.2.1.3 Một số yếu tố ảnh hưởng đến kết thử nghiệm .16 2.2.2 Phương pháp thử hoạt tính chống oxy hóa 16 2.2.2.1 Phương pháp đánh bắt gốc tự DPPH .16 2.2.2.2 Phương pháp peroxy hóa lipid – định lượng (MDA) 17 2.2.2.3 Phương pháp đánh giá khả kết hợp với ion sắt II 17 2.2.2.4 Phương pháp mơ hình beta – caroten – acid linoleic 17 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 3.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 19 3.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 3.2.1 Nguyên liệu 19 3.2.1.1 Nguyên liệu dùng để tổng hợp 19 3.2.1.2 Nguyên liệu dùng để tinh chế .20 3.2.1.3 Nguyên liệu dùng để kiểm nghiệm .21 3.2.1.4 Nguyên liệu dùng để khảo sát hoạt tính sinh học 21 3.2.2 Trang thiết bị 22 ii 3.2.2.1 Trang thiết bị dùng để tổng hợp 22 3.2.2.2 Trang thiết bị dùng để tinh chế .22 3.2.2.3 Trang thiết bị dùng để kiểm nghiệm 22 3.2.2.4 Trang thiết bị dùng để khảo sát hoạt tính sinh học 23 3.2.3 Phương pháp tổng hợp .23 3.2.3.1 Nguyên tắc tiến hành tổng hợp .23 3.2.3.2 Cách tiến hành tổng hợp .24 3.2.4 Phương pháp tinh chế .24 3.2.4.1 Phương pháp kết tinh lại .24 3.2.4.2 Phương pháp sắc ký cột 24 3.2.5 Phương pháp kiểm nghiệm 25 3.2.5.1 Tính chất vật lý .25 3.2.5.2 Nhiệt độ nóng chảy .25 3.2.5.3 Sắc ký lớp mỏng 25 3.2.5.4 Phương pháp quang phổ .25 3.2.6 Phương pháp khảo sát hoạt tính sinh học .27 3.2.6.1 Phương pháp khảo sát hoạt tính kháng khuẩn 27 3.2.6.2 Phương pháp khảo sát hoạt tính kháng nấm 31 3.2.6.3 Phương pháp khảo sát hoạt tính chống oxy hóa DPPH 34 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 38 4.1 KẾT QUẢ 38 4.1.1 Kết tổng hợp 38 4.1.2 Kết khảo sát hoạt tính sinh học 51 iii 4.2 BÀN LUẬN 64 4.2.1 Bàn luận phương pháp tổng hợp 64 4.2.2 Bàn luận kết khảo sát hoạt tính sinh học 64 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 66 5.1 KẾT LUẬN .66 5.1.1 Về tổng quan 66 5.1.2 Về thực nghiệm 66 5.2 KIẾN NGHỊ 68 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT TÀI LIỆU TIẾNG ANH PHỤ LỤC iv DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Chữ nguyên Nghĩa tiếng việt MeOH : Methanol : MeOH Et : Ethyl : Nhóm C2H5 DMSO : Dimethylsulfoxid : Dung môi DMSO DPPH : 1,1 – Diphenyl – – picrylhydrazyl : Gốc tự DPPH BHA : Tert – butyl hydroxy anisol : Chất chống oxy hóa IC50 : Inhibiton concentration 50% : Nồng độ ức chế 50% MDA : Malonyl dialdehyd : Phương pháp MDA MIC : Minimum Inhibitory Concentration : Nồng độ ức chế tối thiểu OD : Optical Density : Độ hấp thu MRSA : Methicillin Resistable Staphylococcuc aureus : Vi khuẩn MRSA MSSA : Methicillin Sensitive Staphylococcuc aureus : Vi khuẩn MSSA E coli : Escherichia coli : Vi khuẩn E coli S faecalis : Streptococcus faecalis : Vi khuẩn S faecalis P aeruginosa : Pseudomonas aeruginosa : Vi khuẩn P aeruginosa C albicans : Candida albicans : Vi nấm C albicans TSA : Tryptic Soy Agar : MT giữ gốc vi khuẩn TSB : Tryptic Soy Broth : MT hoạt hóa vi khuẩn MHA : Mueller – Hilton Agar : MT thử nghiệm SDA : Sabouraud Dextrose Agar : MT giữ gốc vi nấm SDB : Sabouraud Dextrose Broth : MT hoạt hóa vi nấm v IR : Infrared : Hồng ngoại UV : Ultra Violet : Tử ngoại NMR : Nuclear Magnetic Resonance : Cộng hưởng từ hạt nhân D : Doublet : Đỉnh doublet DD : Doublet doublet : Đỉnh doublet doublet M : Multiplet : Đỉnh multiplet S : Singlet : Đỉnh singlet T : Triplet : Đỉnh triplet vi DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1 Các hóa chất dùng để tổng hợp dẫn chất chalcon 20 Bảng 3.2 Một số đỉnh IR đặc trưng 26 Bảng 3.3 Các đỉnh chuyển dịch đặc trưng phổ (1H – NMR) 27 Bảng 4.1 Cấu trúc dẫn chất chalcon tổng hợp (Th1 – Th10) 38 Bảng 4.2 Đường kính vùng ức chế vi khuẩn chất tổng hợp (mm) 51 Bảng 4.3 Giá trị MIC (μg/ml) chất có hoạt tính kháng khuẩn 52 Bảng 4.4 Đường kính vùng ức chế vi nấm chất tổng hợp (mm) 53 Bảng 4.5 Giá trị MIC (μg/ml) chất có hoạt tính kháng nấm 53 Bảng 4.6 Kết khảo sát khả chống oxy hóa DPPH 54 Bảng 4.7 Các thông số để xác định IC50 mẫu Th1 59 Bảng 4.8 Các thông số để xác định IC50 mẫu Th2 60 Bảng 4.9 Các thông số để xác định IC50 mẫu Th3 61 Bảng 4.10 Các thông số để xác định IC50 mẫu Th4 62 Bảng 4.11 Các thông số để xác định IC50 BHA 63 Bảng 4.12 Kết xác định điểm IC50 64 vii Phụ lục 16: Phổ IR mẫu Th6 100.0 %T 90.0 80.0 70.0 H 2N Cl O CTPT: C15H 12NOCl PTL: 257,72 60.0 50.0 40.0 30.0 20.0 10.0 3217.0 3460.1 3342.4 636.5 709.8 665.4 746.4 867.9 842.8 528.5 943.1 1442.7 788.8 1020.3 1404.1 1132.1 979.8 1517.9 1290.3 599.8 1278.71087.8 505.3 1298.0 1311.5 1488.9 1645.2 1346.2 1228.6 1546.8 813.9 1178.4 1629.7 1604.7 1573.8 0.0 4000.0 3500.0 3000.0 2500.0 2000.0 1750.0 1500.0 1250.0 1000.0 750.0 TH6 BM Hoa Duoc Jan 20 2011c 500.0 1/cm Phụ lục 17: Phổ IR mẫu Th7 100.0 %T 90.0 80.0 70.0 Cl O CTPT: C15H 11OCl PTL: 242,70 60.0 50.0 40.0 30.0 20.0 10.0 3060.8 821.6 840.9 576.7 407 925.8 910.3 943.1 607.5 1120.6 864.1 655.8 559.3 667.3 1001.0 1161.1 790.8 1624.0 1055.0 1180.4 981.7 461.0 1471.6 1201.6 1579.6 960.5 1244.0 1353.9 1035.7 1292.2 1448.4 711.7 1213.1 1595.0 1434.91267.1 1647.1 1687.6 0.0 4000.0 3500.0 3000.0 2500.0 2000.0 1750.0 1500.0 1250.0 1000.0 TH7 BM Hoa Duoc Jan 20 2011c 688.5 752.2 750.0 500.0 1/cm Phụ lục 18: Phổ IR mẫu Th8 100.0 %T 90.0 80.0 70.0 Cl O CTPT: C15H 11OCl PTL: 242,70 1159.1 929.6 414 534.2 669.3 60.0 50.0 40.0 30.0 20.0 10.0 634.5 719.4 1180.4 1298.0 1278.71091.6 1446.5 495.7 1033.8 796.5 1404.1 1315.4 1564.2 777.3 1577.7 1490.9 688.5 985.6 1332.7 1012.6 825.5 1591.2 1218.9 1656.7 1604.7 0.0 4000.0 3500.0 3000.0 2500.0 2000.0 1750.0 1500.0 1250.0 1000.0 750.0 TH8 BM Hoa Duoc Jan 20 2011c 500.0 1/cm Phụ lục 19: Phổ IR mẫu Th9 110.0 %T 100.0 90.0 80.0 Cl Cl O CTPT: C15H 10OCl2 PTL: 277,15 70.0 60.0 50.0 40.0 30.0 2902.7 796.5 734.8 877.6 1325.0 1039.6 675.0 1157.2 1288.4 1373.2 1577.7 719.4 1184.2 1218.9 1357.8 777.3 1595.0 983.6 1249.8 1448.4 1425.3 1560.3 1234.4 20.0 10.0 1058.8 686.6 758.0 1666.4 1683.7 0.0 4000.0 3500.0 3000.0 2500.0 2000.0 1750.0 1500.0 1250.0 1000.0 TH9 BM Hoa Duoc Jan 20 2011c 750.0 500.0 1/cm Phụ lục 20: Phổ IR mẫu Th10 Br Cl 80.0 %T 70.0 O CTPT: C15H 10BrOCl PTL: 321,60 1363.6 1178.4 954.7 1276.8 60.0 1541.0 453.2 665.4 538.1 484.1 740.6 50.0 40.0 30.0 497.6 1406.0 1326.9 1070.4 833.2 796.5 1490.9 1217.0 1097.4 1033.8 1560.3 983.6 1006.8 1654.8 1583.4 1604.7 20.0 4000.0 3500.0 3000.0 2500.0 2000.0 1750.0 1500.0 1250.0 1000.0 TH10 BM Hoa Duoc Jan 20 2011c 815.8 750.0 500.0 1/cm Phụ lục 21: Phổ 1H – NMR mẫu Th1 Cl OH O CTPT: C15H11O 2Cl PTL: 258,70 Phụ lục 22: Phổ 1H – NMR mẫu Th2 Cl OH O CTPT: C15H 11O2Cl PTL: 258,70 Phụ lục 23: Phổ 1H – NMR mẫu Th3 Cl Cl OH O CTPT: C15H10O 2Cl PTL: 293,15 Phụ lục 24: Phổ 1H – NMR mẫu Th4 Cl OH Cl O CTPT: C15H10O 2Cl PTL: 293,15 Phụ lục 25: Phổ 1H – NMR mẫu Th5 Cl H 2N O CTPT: C15H 12NOCl PTL: 257,72 Phụ lục 26: Phổ 1H – NMR mẫu Th6 H 2N Cl O CTPT: C15H 12NOCl PTL: 257,72 Phụ lục 27: Phổ 1H – NMR mẫu Th7 Cl O CTPT: C15H 11OCl PTL: 242,70 Phụ lục 28: Phổ 1H – NMR mẫu Th8 Cl O CTPT: C15H 11OCl PTL: 242,70 Phụ lục 29: Phổ 1H – NMR mẫu Th9 Cl Cl O CTPT: C15H 10OCl2 PTL: 277,15 Phụ lục 30: Phổ 1H – NMR mẫu Th10 Br Cl O CTPT: C15H 10BrOCl PTL: 321,60 ... vị trí 2, gồm có: flavon, flavonol, flavanon, antocyanidin, chalcon… Š Isoflavonoid hợp chất có gốc aryl vị trí 3, gồm có: isoflavon, isoflavonol, isoflavanon Š Neoflavonoid hợp chất có gốc aryl... Liliaceae, Iridaceae Chalcon chất trung gian sinh tổng hợp dẫn chất thuộc họ flavonoid flavon, flavanon, flavonol, isoflavon, auron…[8] 2.1.2.4 Ứng dụng chalcon tổng hợp hóa học Trong lĩnh vực hóa